Способ получения l-фукозоспецифичного лектина

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик.4g ф л

//а.-— .=.

Ф. (61) Дополнительное к авт. сеид-ву(22) Заявлено 20 ° 04.81 (21) 3279476/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 231082. Бюллетень ¹t39

Дата опубликования описания 23 .10,82

35/78

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий.45:61 5.

8) .4Р

Ц Ni r„

KgPpi;g „(:, : ( (72) Авторы изобретения д Луцик H В A Антонюк гд т»

Ь

Львовский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L -ФУКОЗОСПЕЦИФИЧНОГО

ЛЕК ТИНА

Изобретение относится к получению эолом с последующим удалением пребиологически активных веществ, в час- ципитирующего агента с помощью ионотности к способам получения Ь -фуказо- обменных смол и диалиэа против специфичного лектина, который может 5 0,9%-ного NaC1 для удаления L -фукоиспользоваться для проведения иссле- зы. Выход продукта составляет 450мг дований в биохимии и медицине, нап- из 1 кг семян (1). ример для определения групп крови К недостаткам известного способа челов ека и животных, генетическ их, .ва относится то, что используемые цито- и гистохимических исследований, 10 для получения фукозоспецифичного а также для получения и выделения лектина растения в СССР не произрасгликопротеидов, содержащих в своем тают или же их использование являетсоставе L -фукозу. ся труднодоступньм.

Наиболее близким к изобретению по Целью изобретения является расшитехнической сущности и достигаемому рение сырьевой базы, а также повыэффекту является способ получения t5 шение чистоты целевого продукта.

Ь -фукоэоспецифичного лектина, преду- Поставленная цель достигается тем, сматривающий экстракцию растительно- что согласно способу получения го сырья 0,9%-ным растворсм хлорис- L -фукозоспецифичного лектина, претого натрия, фракционирование экстрак- дусматривающему экстракцию раститель- та сульфатом аммония и гель-храмато- >О ного сырья 0,9%-ным раствором хлографию в декстранавом геле. ристого натрия, фракционирование экстCoraëàсно известному способу фу- ракта сульфатом аммония и гель-хромакозоспецифичный лектин экстрагируют тографию в декстрановом геле, в качеиз семян 0,85%-ныл NaC1 при рН 6,8 с стве растительного сырья используют последующим высаливанием сульфатам 25 кору растения золотой дождь (Laburnum аммония в пределах 30-60% насыщения. anaqyro1des Medik), фракционирование

Окончательную очистку L -фукозоспе— сульфатом. аммония осуществляют в прецифичного лектина производят преци- делах 0,3-0,9 насыщения, после чего питацией 1,3,5-три-(n- сс.-L -фукозил- полученный осадок обрабатывают этило оксифенилаэо)-2,4,6- тригидроксибен- 30 вым спиртам до 603-ной конечной кон967484

Формула изобретения

Составитель С. Каспаров

Редактор Л.Лукач, Техред Т.Маточка Корректор В. Бутяга

Заказ 7941/10

Тираж 714 - Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент",", г.ужгород, ул. Проектная, 4 центрации, а гель-хроматографию проводят в декстрановом геле с интер4 алом фракционирования по белкам с олекулярной массой 4000-100000 в

1 М NaCl при рН 6,8.

Сущность предлагаемого способа за- 5 ключается в том, что золотой дождь представляет собой многолетний кустарник, произрастающий на территории южных областей СССР. В большинстве слу-. чаев его высаживают как декоративное

I растение, но имеются и дикорастущие кустарники. Кора, срезанная со средних и старых веток, может храниться в течение года.

Очистку лектина производят путем 15 экстракции сырья 0,9Ъ-ныл NaC1, фракционирования белков сульфатом аммония, этиловым спиртом и.гель-хроматографией на геле-сефадекс G — 100.

П р и .м е р. Кору Laburnum ападуго;щ

ides Nedik, собранную во время сокодвижения весной либо осенью после.созревания семян, высушивают и размалывают в порошок. 200 г пороьжа заливают- 1000 мл 0,9Ъ-ного NaC1, 15 мин перемешивают, жидкость отжимают и объединяют с предыдущей порцией.

Полученный экстракт (около 1,2 л) подкисляют 2 н.НС1 до рН 4,2 и центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. 30

Осадок отбрасывают, рН доводят до

6,5 — 7,0 10Ъ-ным раствором NaOH добавляют сульфат аммония, доводя степень насыщения до 0,9 (430 г/л) .

Осадок, содержащий лектин, собирают центрифугированием или фильтрованием, 35 растворяют в пятикратном объеме дистиллированной воды и добавляют 1,5 объема(от объема раствора лектина) 96 -ного этилового спирта при Π— +25 С. Полученный осадок собирают центрифугирова-40 нием, растворяют в 2 - 3-кратном объиюе 0,9Ъ-ного NaC1 и диализируют 1015 ч против 0,9Ъ-ного раствора NaCl.

Затем наносят на колонку 800 к 60 мм, заполненную декстрановым гелем — се- 45 дафекс G - 100 и уравновешенную 0,1 М

1фосфатным буфером, рН 6,8 с 1 М

NaC1. Выявление фракций, содержащих лектин, производят под контролем реакции гемагглютинации с человеческими эритроцитами 1(О) группы крови. Фракции, содержащие лектин, собирают, белок высаливают сульфатом аммония при

0,9 насыщения (660 г/л), осадок собирают центрифугированием, растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды, обессоливают диализином в течение 48 ч и лиофилизируют. Выход

1г-фукозоспецифичного лектина 40 — 45 с 200 г воздушно-сухой коры (или

200 — 250 мг из 1 кг).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет расширить сырьевую базу для получения L-фукозоспецифичного лектина и получить фукозоспецифйч ый лектин из доступных источников в сптимальных количествах.

Способ получения L -фукозоспецифичного лектина путем экстракции растительного сырья 0,9%-ным раствором хпористого натрия, фракционирования экстракта сульфатом аммония и гельхроматографии в декстрановом геле,,отличающийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы и повышения чистоты целевого продукта, в качестве источника сырья ° используют кору растения золотой дождь (Laburnum anagyroides МейЖ), фракционирование осуществляют в

-пределах О, 3 - О, 9 насыщения, далее полученный осадок обрабатывают этиловым спиртом до 60%-ной конечной концентрации, а гель-хроматографию проводят в декстрановом геле с интервалом фракционирования по белкам с молекулярной массой 4000

100000 в 1 M NaC1 при рН 6,8.

Источник и информации, принятые вр., внимание при экспертизе

1. Тагаев Х. et. al. isolation of

an L Fucose Binging Protein from

Lotus tetragonolobus seed Naturi, 1967, vol. 215, Р 5103, р. 890- 891.