Способ получения производных андростан-17-она

 

ОП ИСАИИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (ii)980628

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительный к,патенту

3 (51) М. Кл.

С 07 т 1/00

//A 61 К 31/565 (22) Заявлено 15, р 7, /7 (21) 2502698/23-04 (23) Приоритет — (32) 16. 07. 76 (31) Р 2632677.2 (33) ФРГ

Гоаударствекный комитет

СССР.

Опубликовано 07. 12 .82. Бюллетень Ле 45 по делам кзоеретений и открытий (») УДК 547.689. .6.07 (088,8) Дата опубликования описания 07.12.82

Иностранцы

Альфред Вебер, Марио Кеннеске и Хельмут Даль, . (ФРГ) А;О:б<;gg p р т ч; 1т1Н "с

Иностранная фирма Т - 1тн ВС КА к. "Шеринг АГ" "1(ИИОТЕк (72) Авторы р изобретения (71) Заявитель (фРГ) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

АНДРОСТАН-17-ОНА

4ель изобретения — расширение ар

5 сенала новцх производных авдрастан-17"она, являющихся промежуто мыми продуктами в синтезе фармакологически активных стероидов.

Поставленная цель достигается тем, что производное стерина общей формулы

,() (1 1 й1,) „О где --- — простая или двойная связь;

n = 1или2;

 — водород;

R — низший алкил или в том слу2 т5 чае, когда и = 2, также водород, являющихся новыми промежуточными продуктами для синтеза многочисленных фармакологически активных стероидов. ю

Использование известного микробиологического метода определения

17-алкильной цепи у 17-алкилзамещенных стероидов с помощью микроорганизмов вида МусоЬасteг!ин t1) позволяет

a>O(Ca R,) „0

Изобретение относится к получению новых производных андростан-17-она общей формулы

2 получать новые промежуточные продукты общей формулы (!). где ---, Е, R и и имеют указанные значения, а В,Š— водород, этил, или метил, ферментируют культурой микроорганизма Hycobacterium spec NRRL3805, способной к отщеплению боковой

3 98062 цепи от стерина с последующим выделением целевого продукта.

Процесс проводят в таких растворителях, как низший спирт, монометиловый эфир гликопя, диметилформамид или диметилсульфоксид, целевой продукт имеет высокий выход.

Пример 1.

А. В колбу Эрленмейера емкостью

750 мл помещают 200 мл стерильного питательного раствора, содержащего

14 дрожжевого экстракта, 0,45. гидро. фосфата натрия, 0,344 дегидрофосфата калия и 0,2/ "Тагата (к) 02" и доводя1 рН до 6,7, производят прививку декан- татом сухой культуры Mycobacterium

spec NRRI-В-3805 и в течение 3 дней производят перемешивание при 30 С со скоростью вращения 190 об./мин.

В, В ферментер емкостью 50 л с

40 л стерильного питательного раствора, содержащего. 1,233 дрожжевого экстракта (653-ного), 0,68 дигидрофосфата калия и 0,23 "Тагата(0,2", и доведенного до рн 6,0, вводят

200 мл выращенной культуры Mycobacterium spec и Форкультуру при 30 С инкубируют при продувании воздуха (2 м /ч ) в течение 48 ч.

С. 400 г холестерина растворяют в 6 л формальдегиддиметилацеталя, перемешивая при комнатной температуре смешивают с 400 г кизельгура и порциями прибавляют 200 г пятиокиси фосфора, после чего массу перемешивают в течение„2 ч. при комнатной температуре. Раствор отделяют фильтрованием от нерастворенных компонентов, которые промывают затем формальдегиддиметилацеталем, после чего растворитель отгоняют в вакууме. После добавления

40 раствора кислого углекислого натрия твердый неочищенный продукт отфильтровывают, промывают водой и после сушки получают 440 r 3 -метоксиметок- си-5-холестена. Перекристаллиэован45 ное из ацетона соединение имеет т.пл.

79-80 С. 400 г полученного указанным образом Зр-метоксиметокси-5-холестена эмульгируют со 120 г "Тегина

10 л полностью обессоленной воды и

40 мл 1 н.раствора гидроокиси натрия при 95 С в течение 30 мин с помощью

"Диспакс()" реактора DR-3-6-6 (фирмы "Джанке и Кункель", ФРГ). Затем эмульсию стерилиэуют в течение 20 мин 5 при 120 С.

Д. Ферментер емкостью 50 л заполйяют 40 л стерильного питательного

4 раствора, содержащего 2,04 Cornsteep

liquor 0,3i диаммонийгидрофосфата и 0,251 "Тагата(02" и доведенного до рН 6,5, затем производят прививку

2 л форкультуры Mycobacterium spec, продувают воздухом(0,5 м /ч ), перемешивают (250 об/мин) и производят инкубирование в течение 24 ч при 30 С.

Затем к культуре прибавляют эмульсию

Зр-метоксиметокси-5-холестена, (полученную в соответствии с разделом С), после чего в течение 120 ч производят ферментацию. После завершения ферментации культуру три раза экстрагируют хлористым этиленом, каждый раз используя по 5 л последнего, этиленхлоридный экстракт Фильтруют и упаривают в вакууме. Полученный остаток (156 г ) хроматографируют на колонке, заполненной силикагелем, продукт перекристаллизовывают иэ этилового эфира уксусной кислоты, в результате чего получают 86 г Зр-метоксиметокси-5-андростен-17-она с т.пл. 129/131132 С.

Пример 2.

А. В колбе Эрленмейера емкостью

2 л с 500 мл стерильной питательной среды в условиях, описанных в примере 1А, выращивают Mycobacterium spec

XRRi e-3805.

В. Аналогично примеру 1С вводят во взаимодействие 10 r ситостерина и получают.11 г 24-этил-3- р -метоксиметокси-5-холестена. Перекристаллизаванное из ацетона соединение имеет т. пл. 70-71 С. 10 г полученного указанным способом 24-этил-3-/ -метоксиме токси-5-холестена эмульгируют в течение 10 мин с 4 r "Тегина(1" и 300 мл воды при 95ОС с помощью "Ультра-Турракс(R) (фирмы "Джанке и Кункель", ФРГ). Эмульсию стерилизуют в течение

20 мин при 120 С.

С. В каждую из 20 колб Эрленмейера, причем каждая с 85 мл стерильной питательной среды, содержащей 2,03

Cornsteep liquor, 0,33 диаммонийгидрофосфата, 0,253 "Тагата (" ) 0,2". и доведенной до рН 6,5, вводят по

5 мл выращенной культуры Mycobacterium spec и в течение 24 ч при 30ОС производят перемешивание со скоростью 220 об/мин;

Затем к каждой культуре прибавляют l4 мп суспензии 24-этил-Зр-метоксиметокси-5-холестена (что соответствует 0,5 г 24-этил-31 -метоксиметокси-5-холестена) и в течение 120 ч пои

5 98062

30 С производят ферментацию на приборе для встряхивания. После обработки, проведенной аналогично примеру 1

1Д, получают, 2,1 г 3(ъ-метоксиметокси-5-андростен-17-она с т. пл. 130. 132 С.

Пример 3.

А ° В условиях примера 1С вводят во взаимодействие 10,5 г стигмастерина и получают 10,75 r 24-этил-3р-ме- 1о токсиметокси-5,22-холестадиена. Перекристаллизованное из ацетона соединение имеет т. пл. 103-104 С.

В. В условиях, описанных в примере 2В, эмульгируют 10 r 24-этил-ЗР-метоксиметокси-5,22-холестадиена.

С. В условиях, описанных в примерах 2А и С, получают 85 мл культуры

Mycobacterium spec hRRL В-3805 и производят смешение с 14 мл суспен-. 2o зии 24-этил-3р-метоксиметокси-5,22-холестадиена (что соответствует

0 5 r,, 24-этил-Зр-метоксиметокси-5,22

-холестадиена).

После проведения инкубации в те- rs чение последующих 120 ч при 30 С на приборе для встряхивания производят обработку в соответствии с примером

1Д. В результате получают 2,3 г Зр-метоксиметокси-5-андростен-17-она с т. пл. 130-132ОС.

Пример

A. 20 г холестерина растворяют в 300 мл формальдегидэтилацеталя, перемешивая при комнатной температуре производят смешение с 30 г кизельгура и (порциями по 15 r) пятиокиси фосфора, в течение 24 ч массу перемешивают при комнатной температуре.

Раствор отделяют фильтрованием от нерастворенной фракции, промывают ее формальдегиддиэтилацеталем; от раствора отгоняют в вакууме растворитель. Остаток кристаллизуют при 0 С. о

После добавления раствора кислого углекислого натрия отфильтровывают неочищенный продукт, который промывают водой, в результате чего после сушки получают 22,6 г 3 -этоксиметокси-5-холестена. Перекристаллизованное из этилового эфира уксусной кислот соединение имеет т. пл. 64-66 С.

В. Аналогично примеру 2В эмульгируют 10 г 3 -этоксиметокси-5-холестена.

С. В условиях примеров 2А и С получают 85 мл культуры "ИусоЬастег i um

spec NRRL В-3805 и смешенйе с 14 мл суспензии 3 -этоксиметокси-5-холесте8 6 на (это соответствует 0,5 г Зр-этоксиметокси-5-холестена) . После проведения инкубации в течение последующих

120 ч при 30 С на приборе для встряхивания производят обработку по аналогии с примером 1Д. В результате получают l,5 г Зр-этоксиметокси-5-андро стен-17-она с т. пл. 121-123 С.

Пример 5.

А. 38,67 r холестерина растворяют в 250 мл хлористого метилена и

164,2 г монометилового эфира формал ьде гид-бис- гли кол ьацеталя и при перемешивании и комнатной температуре перемешивают с 60 r кизельгура и

30 г пятиокиси фосфора, после чего реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре.

Раствор отделяют фильтрованием от нерастворенной фракции, промывают последнюю хлористым метиленом и производят нейтрализацию метанольным раствором гидроокиси калия. После отгонки растворителя в вакууме продукт растворяют в метиловом спирте, производят фильтрование и вещество кристаллизуют посредством медленного испарения растворителя. В результате получают 25 г Зр-(2,5-диоксагексилоко си)-5-холестена с т. пл. 41-42 С.

В. В условиях, описанных в примере 2В эмульгируют 10 г Зр-(2,5-диоксагексилокси)-5-холестена.

С. В условиях, описанных в примерах 2А и С, получают 25 мл культуры

Myccbacterium sðåñ NRRL В-3805 и производят смешение с 14 мл суспензии Зр-(2,5-диоксагексилокси)-5-холестена, что соответствует 0,5 г

ЗР-(2,5-диоксагексилокси)-5-холестена.

После осуществления инкубации в течение последующих 120 ч при 30 С на приборе для встряхивания производят обработку аналогично примеру 1Д.

В результате получают 1,75 г Зр-(2,5диоксагексилокси)-5-андростен-17-она с т. пл. 65-67ОС

Пример 6. А. 12 г холестерина суспендируют в 100 мл ацетальдегиддиметилацеталя, при перемешивании и комнатной температуре производят смешивание с 25 r кизельгура и порциями с 12 г пятиокиси фосфора, после чего в течение

45 мин реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре. Раствор отделяют фильтрованием от нерастворимой фракции, последнюю промывают хло98062 ристым меiÿëåèoè и раствор нейтрализуют метанольным раствором гидроокиси натрия; После отгонки растворителя в вакууме полученный неочищенный продукт перекристаллизовывают из ацетона при добавлении активированного угля..В результате получают 10,2 r ,3Р-(1-метоксиэтокси)-5-холестена с т. пл. 94-95 С.

В. Аналогично примеру 2В эмульги- о руют 10 г 3Р-(1-метоксиэтокси)-5-холестена.

С. При соблюдении условий, описанных в примерах 2А (и С), получают

85 мл культуры Mycobacterium spec

NRRL В-3805, и производят смешение с 14 мл суспензии 3Р-(1-метоксиэтокси

5-холестена (это соответствует 0,5 r, Зр-(1-метоксиэтокси-5-холестена).

После инкубирования в течение последующих 120 ч при 30О С на приборе для встряхивания производят обработку по аналогии с примером 1Д. В результате получают 1,89 г 3р-(1-метоксиэтокси)-5-андростен-17-она с т. пл.

111-1 l8 С.

Пример 7.

А. 19 33 г холестерина смешивают в 20 мл хлористого метилена с 23,6 мл винилэтилового эфира и 85 мг паратолуолсульфокислоты (безводной) и реакционную смесь перемешивают в течение l,5 ч при комнатной температуре.

После нейтрализации раствором кислого углекислого натрия производят экст рагирование раствором хлористого натрия, сушку над сернокислым натрием, после чего растворитель отгоняют в вакууме, Маслообразный неочищенный продукт хроматографируют на силикагеле при использовании в качестве элюирующего средства смеси гексана и этилового эфира уксусной кислоты. В результате получают 18,4 г 3р-(1-этоксиэтокси)-5-холестена в виде бесцвет- 45 ного воскообразного вещества.

В. В условиях, описанных в примере 2В, эмульгируют 10 г Зр-(1-этоксиэтокси)-5-холестена.

C При соблюдении условий, описанных в примерах ?A .и С получают 85 мл культуры Mycobacterium spec NRRL

В-3805 и производят смешение с 14 мл суспензии 3 -(1-этоксиэтокси)-5-холестена, что соответствует 0,5 r

S5

3Р- (1-этоксиэтокси) -5-холестена. lloc ле этого инкубируют в течение последующих 120 ч на приборе для встряхиВания при 30ОС. Обьединенные культуры

8 8 экстрагируют хлористым этиленом,.экст ракт упаривают в вакууме, остаток смешивают с 70 мл метилового спирта, 12 мл воды и 6 мп концентрированного раствора НС, после чего в течение

1 ч смесь нагревают-при температуре кипения с обратным холодильником.

После охлаждения до 12 С продукт реакции осаждают прибавлением 100 мл воды и затем отфильтровывают. После перекристаллизации из ацетона получают 0,62 г 5-андростен-3р-ол-17-она с т. пл. 138/148-149 С.

Пример 8.

А. 38,7 г холестерина растворяют в 500 мп хлористого метилена, при

0 С, приоготовленный раствор смешивают с 25 мл окиси этилена и 0,5 мп эфирата трехфтористого бора. Реакционную смесь выдерживают в течение ночи при комнатной температуре, затем производят экстрагирование водой, сушку над сернокислым натрием и отгонку растворителя в вакууме. Неочищенный продукт (50 г) хроматографируют на силикагеле при использовании в качестве элюирующего средства смеси гексана и этилового эфира уксусной кислоты. В результате получают 10 r

3Р-(2-оксиэтокси) -5-холестена, с т. пл. 91-95ОС.

В. При соблюдении условий, описанных в примерах 2А (и С) получают

85 мл культуры МусоЬасterium spec

NRRL В-3805 и производят смешение с

14 мл суспензии 3Д-(2-оксиэтокси)-5-холестена, что соответствует

0,5 r 3p-(2-оксиэтокси) -5-холестена.

После проведения культивации в течение 120 ч при 30ОС на приборе для встряхивания производят обработку по аналогии с примером 1Д. В результате получают 2,1 r 3д-(2-оксиэтокси)-5-андростен-17-она с т. пл. l73/175-

177ОС.

Пример 9.

А. Согласно примеру 1С, вводят во взаимодействие 20 r 5 -холестан-3p-ола с формальдегиддиметилацеталем, в результате чего получают

21,5 г 3 -метоксиметокси-5Ы-холеста- на. Перекристаллизованное из ацетона соединение имеет т. пл.-65-68 С.

В. При соблюдении условий, описанных в примере 2В, эмульгируют

10 r 3р-метоксиметокси-5eL-холестана.

C. При соблюдении условий, описанных в примере 2А (и С) получают 85 мл культуры Mycobacterium spec NRRL ен, ем

Формула изобретения.

R29(CH® i) n где ---, Rq, R g и и имеют указанные значения, а R - водород, метил или этил, ферментируют культурой микро- . организма Mycobacter1um spec ййМ

В-3805, способной к отщеплению боковой цепи от стерина, с последующим выделением целевого продукта. . Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США к 3684657, кл. 195.51, опублик. 1972.

1. Способ получения производных 15 адростан-17-она общей Формулы

О

20 мгам(6ня,) „о где --- - простая. или двойная связь;

n — 1 или 2;

Rq — водород;

Составитель И. Федосеева

Редактор И. Ковальчук Техред C.Мигунова Корректор 0. Билак.

Тираж 445 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 9397/51

Филиал Rflll "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

9 980628

В-3805 и производят смешение с 14 мл R — низший алкил или в том слу2 суспензии 3Р-метоксиметокси 5ohгхоле- чае, когда и 2", также стана (это соответствует 0,5 г Зрводород, -метоксиметокси-5 а-холестана). Пос- отличающийся тем, что ле проведения инкубации в течение 5 производное стерина общей формулы

120 ч при 30оС на аппарате для встряхивания .производят обработку согласно примера 1Д. В результате получают

М

2,05 г 3Р-метоксиметокси-5-андростан-17-она с т. пл. 97-98 С. lO