Способ культивирования вsснеriснiq coli нв 1100 ry-13, продуцента рестриктазы

 

(72) Авторы изобретения

В.А.Амбросов и Е.И.Попов

Всесоюзный научно-исследовательский инежахул . » прикладной микробиологии (7I) Заявитель (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ESCHERI CHIA

C0Li НВ 1100 RY-13, ПРОДУЦЕНТА

РЕСТРИКтАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способу .культивирования микроорганизмов, продуцентов биологических веществ, 5

Известен периодический способ выращивания Escherichia соl1 НВ 1100

RY-13 на питательной среде, содержащей бактотриптон и бактодрожжевой экстракт 1 1.

1О

Недостатком этого способа является дороговизна питательной среды, вследствие чего ее можно использовать только в лабораторных исследованиях, Известен способ добавления субстрата при культивировании субстрата продуцента по сигналу датчика рН (2 ) или рО (3 ), которые помещены в ферментер, Сигнал от датчика управляет работой клапана, с помощью которого осуществляется подпитка f2) и j3), Недостатком данного способа. является ограничение роста культуры изза возникновения лимита по какомулибо компоненту питательной среды, Известен способ культивирования

E„ coll М 17 с подпиткой в процессе выращивания. Подпитку осуществляют одним компонентом питательной среды глюкозой по заранее вычисленной программе f 4).

Недостатком такого способа является то, что в процессе культивирова ния может возникнуть лимит по какому.. то другому компоненту питательной среды, и рост микроорганизмов прекратится, После того, как "это произойдет, подпитка становится,уже неэффек-, тивной.

Наиболее. близким к предлагаемому является способ культивирования Escherichia coll НВ 1100 RY-13, продуцента рестриктазы; предусматривающий посев продуцента и выращивание его на сбалансированной по удельным ростовым свойствам компонентов питатель

988866 формула изобретения

3 ной среды одного и того же состава (5), После проведения балансировки исходной питательной среды установлено, что для штамма Е,col i НВ 1100 RY-13 компоненты питательной среды должны находиться вследующих соотношениях:

ЙН : глюкоза: MgSOg:Na HPO,КН2РО,= l:6,7:0,3:10,8:3,2 (1), Полученное соотношение между компонентами является однозначным для данной культу. рые

Недостатком этого способа является то, что сбалансированная среда используется недостаточно эффективно и не позволяет получить высокого выхода продуцента, Цель изобретения - увеличение выхода биомассы.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу культивирования

Escherichia со1! HB 1100 RY-13, продуцента рестриктазы, предусматривающему посев продуцента и выоащивание его на сбалансированной по . удельным ростовым свойствам компонен. тов питательной среды одного и того же состава, посев продуцента осуществляют в 1/10 часть питательной среды, а при достижении в процессе выращивания уровня растворимого кислорода 60-703 от насыщения проводят подпитку среды равными порциями оставшейся части последней.

Пример 1,. Выращивание Е. coli

НВ 1100 RY-13 проводят на несбалансированной питательной среде в ферментере с рабочим объемом 350 мл, оснащенном рН и рО датчиком при о

37 С. Величину рН в процессе роста продуцента поддерживают автоматичесао ки на уровне 7,2 добавлением 0,1 NaOH, Азрация составляет 1 объем воздуха на 1 объем культуральной жидкости в минуту. Число оборотов выбирают таким, чтобы кислород не был лимитирующим фактором роста микроорганизма. В опыте это значение находится в пределах 400-700 об/мин. Рост биомассы оценивают по измерению оптической плотности на фотокалориметре ФЭК-56И с последующим пересчетом на сухой аес по калибровочной кривой. Подпитку проводят раствором глюкозы с концентрацией 140 г/л при достижении концентрации растворенного кислорода 704 от насыщения. Величина подпитки составляет 5 мл. Выход биомассы при таком способе куль4 тивирования составляет 7,2 г/л по сухому весу при суммарном pacxgge глюкозы 15 г/л. п р и м е р 2. Выращивание E. со21

HB 1100 проводят в тех we условиях, что и в примере 1, но в качестве питательной среды и субстрата исполь" эуют сбалансированную питательную среду, компоненты которой удовлетворяют соотношению (1) .. Перед посевом 8 ферментер вносят такую часть среды, чтобы концентрация компонентов была, г/л: гидролизат рыбной муки МН 0,75; глюкоза 4; MgSOg-7Н О

0ю23, N HPO@ 8, КН РО, 2,4, Подпитку как и в. предыдущем примере проводят при достижении уровня растворенного кислорода 704 от насыщения, Количество концентрата питательной среды, вносимого эа один раз при подпитке, равно 2 мл. Выход биомассы составляет 11,0 г/л по сухому весу при суммарном расходе глюкозы 48 г/л, т.е. выход биомассы увеличен в 1,7 .раза.

Дополнительные эксперименты показывают, что предел, до которого можно проводить разбавлейие исходной питательной среды, равен 1/25.

Использование изобретения позволяет повысить выход биомассы, а так= же снизить количество неутилизированных компонентов в сточных водах за счет. использования сбалансированной питательной среды.

Способ культивирования Еscherichia coli НВ. 1100 RY-13, продуцента рестриктаэы, предусматривающий rio: сев продуцента и выращивание его на сбалансированной по удельным ростовым свойствам компонентов питательной среды одного и того же состава,. отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода биомассы, посев продуцента осуществляют в 1/10 часть питательной среды, а при достижении в процессе выращивания уровня растворимого кислорода 60703 от насыщения проводят подпитку среды равными порциями оставшейся части последней.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Greene Р.J, et al The Е, coll, restriction endonyc1ease, Metnods

Составитель И.Привалова

Редактор Е.Лазуренко Техред Т.фанта

Корректор С. Ше кмар ираж 21

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, I-35, Рауаская наб., д. 4/5 одписное аказ атент, г. жгород. ул. роектная, лиал

5 . 988866 6

in neolecul.ar biology v. 7 DNA ripli. 4. Гуревич 10,Л,. и др. Зависиcation, 1974. р. 87-111. мость .экономического коэффицщвита

2, Nishio N. et а),, Abed-batch ет концентрации оубстрата в- перЪодиculture of methanol-utilizing bacte- ческой культуре микроорганизмов, Ди»

ria with ph-в аt. J;Ferm Fechnol, s нимика биологических систем, Горь1977е 55 р 151 155 . кий, 1977,, с. 52-55.

3, Чапо Т. et al Fedbatch culture з, Васильев k.k. и др. Иоделироваof methand-utilizing bacteruem with ние процессов микробиологического син

DO-stat, 1.Геап. Fechnoi,. 1978, 58, теза. Н., "Лесная промьииленность", р, 416-420. 1в 1975 (прототип).