Способ получения целлюлолитических ферментов

 

< pygmy ri

О, Н. Окунев, Е. Л. Головлев, И.Д.Свистова Я Д жалФЙФ

Б@др °,, м изобретения (7I) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ

ФЕРМЕ НТОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения целлюлолитических ферментов, используемых в процессе осахаривания целлюлозы.

Известен способ получения целлюлолитических ферментов, предусматриваюших культивирование гриба Дьрег р 00us

4erreus 17 P на измельченных до раз- меров 1-60 мкм целлюлозосодержащих субстратах. В качестве субстрата используют солому и гузапаю $1) .

Известен способ получения целлюлоаитических ферментов, предусматривающий купьтивирование грибов вида ЛярегсрРRus terrevs на питательной среде, содержащий органический источник азота,минеральные соли и древесные опилки в качестве источника углерода. Исполу зуют штамм Asperge _#_us terreus17 P.

С.1 и С - активности составляют при этом 0,2 и 2,4 мг глюкозы / мл-ч (2) .

Недостатком данного способа является невысокая активность целлюлолитических ферментов.

Цель изобретения — увеличение актив ности ферментов.

Указанная цель достигается тем, что согласно спссобу получения целлюлолитических ферментов, предусматривающему культивирование грибов вида Аяре арИць

hsperq; EBus terreus ВКМ F 222О Д, древесные опилки измельчать до размера частиц 0,2-1,0 мм.

Штамм Asperqi0Pus Rrreus ВКМ

IF-2220 Д выделен из лесной почвы Серпуховского района Московской области.

Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов.

Штамм Asperge &us terreusBKN F22 2ОД имеет следующую характеристику.

3 99455

Культуральные признаки. Среда Чапвка На 9 сут при 26 С колония дос"гке гает в диаметре 7 см; край колоний ровный, поверхность бархатистая, центральная часть сморщенно-приподнятая; цвет колонии светло-коричневый, обратная сторона коричневого цвета, пигмент в среду не диффундирует.

Сусло-агар. Рост культуры на суслоагаре отличается от роста на среде щ

Чапека наличием скудного эксудата, центр колонии приподнят в месте укола, обратная сторона цвета среды.

Морфологические признаки. Среда Чапека. Конидиальные головки длинные, д колончато-компактные 30-50 80-150 >М,, конидиеносцы отходят от субстрата гладкие, бесцветные 5-8 110 140 И:; вер- хушечный пузырь полусферический 1418,и. в диаметре, покрыт стеригмами щ на 2/3 своей поверхности; стеригмы двурядные, первичные стеригмы 2-2,5 х 7-8, вторичиь :е — 2-2,5 7,5-8,5р; конидии эллиптические, гладкие 1,62,2,о. в диаметре.

Сусло-агар. На сусло-агаре наблюдаются отличия и размерах некоторых .структур: конидиальная головка 30-50 х к80-200и,; конидиеносец 5-8 110180,и.; диаметр верхушечного пузыря

10-16,ц., первичные стеригмы 2-2,5 х х 5,5-7 и,, вторичные — 2-2,5 6-8óÀ; диаметр конидий 1,6-2,2/ .

Гриб Psperq;ie vs 1еггем ВКМ

Р-2220 Д способен расти на средах с 3S минеральными источниками азота, используя древесные опилки в качестве единственного источника углерода, Штамм не нуждается в витаминах и других биологически-активных веществах. При: использовании органических добавок активность целлюлаз в культуральной срьде увеличивается. Измельчение опилок до размеров 0,1-1,0 мм оказывает стимулирующее действие на синтез цел- 4$ люлаз.

Пример 1. Гриб RSperrp30us terxus

ВКМ F-2220 Д выращивают на среде, содержащей, г/л: измельченные на шаровой мельнице до размеров 0,2-1,0 мм 50 березовые опилки 20,0; Йа МОз 2,5;

КН РО, 2,0) СаС 0,3; +ST 7Н О

0,3; дрожжевой автолизат — 0,5; рН

5,5-6,0. Посевной материал выращивают предварительно в течение 2 сут при

40 С в колбах íà 750 мл с объемом среды 100 мл на качалке при 180 об/мин на среде, содержащей, г/л: лактоза

5 4

10вО» HONoy 2,5; РО 2 0; СОС02 0,3;

+SO@ 7Н б 0,3; дрожжевой автолизат 0,5g рН 5,5-6,0. Посевной материал в количестве 10% добавляют в среду ферментации и инкубируют при 40 С на качалке при 180 об/мин в колбах на

750 мл с объемом среды 100 мл в течение 3 сут.

Культуральная среда, отделенная от био. массы гриба и неиспользованного субстрата центрифугированием {5000 об/мин, 15 мин), содержит активный комплекс целлюлаз С, и Сх - активность культуральной жидкости составляет соответственно 1,5 и 40 мг глюкозы / мл ч (активность.измеряют по методу Ммпдееэ еФ

М.,В1оФесйпоО. се4 Э оепа",, 5 пр, 6, 21-33, 1976; редуцируюшие сахара определяли по методу Somo y>1 М. J. Bi o P .

СЪет. 195, 19-23, 1952). Эндоглюканазная и целлобиазная активность культуральной жидкости составляет соответственно 1,0 и 0,05 мкмоль/мл мин (активность измеряют по методу А. A. Кле . сова и сотр.Биоорг. химия, 6, N. 8, 1980, 1225-1242).

Пример 2.Гриб Жрег ЙЬ& terreus

ВКМ F -222ОД выращивают на среде, содержащей, г/л: измельченные на шаровой мельнице до размеров 0,2-1,0 мм березовые опилки 20,0; HaNO> 2,5;

К,"дРО 2,0; белково-витаминный концентрат 5,0. Посевной материал выращивают и добавляют в среду ферментации аналогично примеру 1.

Культуральная среда, отделенная через 2 сут вырашнвания, содержит более активный комплекс целлюлаз: С и С активности составляют соответственно

3,5 и 100 мг глюкозы/мл ч, эндоглюканазная и целлобиазная активность 4,0 и 0,1 мкмоль/мл мин.

Таким образом, описанный способ поз воляет повысить выход целлюлаз при использовании древесных опилок в качестве источника углерода в 10-20 раз по С1 -активности и в 15-40 раз по

С -активности.

Формула изобретения

Способ получения целлюлолитических ферментов, предусматривающий культивирование грибов вида Aspe i 9 Bus

Verveus aa питательной среде, содержащей органический источник азота, минеральные соли и древесные опилки в качестве источника углерода, о т л и ч а ю ш и й5 994555 6 с я тем, что, с целью .повышения актив- 1. Авторское свидетельство СССР ности ферментов, в качестве продуцента % 772220, кл. С 12 A 9/42, используют щтамм AspercpCOvs 4errevs 2. Зелтинь P. П. Витола Г. А» . ЭдВ --2

КМ-р-2 20 Д; при этом древесные жинь И..М. Биосинтез целлюлолнтичесопилки измельчают до размера частиц s ких ферментов грибом ФзуеирИов Иггем

17 P при культтированйи его в нолуИсточники информации, производственных условиях. - В кн Фер принятие во внимание при экспертизе ментация, Рига, ЗиМатие, 1974,с.5 10. !

Составитель: Т. Мелентьева

Редактор Х. Дылын Техред С.Мигунова Корректор Н. Король

Заказ 565/7

Тираж 52 1 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4