Способ определения фолиевой кислоты в кормах

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОЛИЕВОЙ КИСЛОТЫ В КОРМАХ, включающий экстракцию раствором едкого натра, центрифугирование , очистку полученного экстракта, обработку его раствором перманганата калия, флуориметрию, О. тличающийся тем, что, с целью повышения точности, очистку экстракта .проводят путем осаждения раствором смеси желатина и бензойной кислоты при соотношении (г/л) 5:1-7:1. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ .

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(51) 3 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3451350/30-15 (22) 08 ° 04.82 (46) 07.01.84. Бюл. Р 1 (72) A.Ä.Ïåëåâèí и С.К.Алехина (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности (53) 577.164.17(088.8) (56) 1. О Donne Р I.Е. etaP., I.CPin, Rat8oe., 1977, 30, Р 12, 1175-1178.

2. И1ЕЕ s R. B ° H. е а1, 1 . Chom at og r

Sci. 1977, 15, 9 7,262-266.

3. Kas.I. etaf., I ° Chomatogr.

1976, 124, 9 1, 53-59.

4. Патент Японии Р 55-45383, кл. С 12 Q 1/06, 1980.

5. Hta-РеО, Aang-Than-Bafu

Clin.chim. acta, 1969,. 24 Ф 3, 381-387. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОЛИЕВОЙ

КИСЛОТИ В КОРМАХ, включающий экстракцию раствором едкого натра, цеитрифугирование, очистку полученного экстракта, обработку его раствором перманганата калия, флуориметрию, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, очистку экстракта, проводят путем осаждения раствором смеси желатина и бензойной кислоты при соотношении (г/л) 5:1-7:1..1065779

Изобретение относится к технике количественного определения фолиевой кислоты (витамина.В, птеуоылглутаминовой кислоты, Я (-4- ((2амино-4-окси-б-птеридил) -метил=а-мино) -бенэоил-(,(+)-глутаминовой кисло ты),широко применяемой при контроле качества продукции в комбикормовой промышленности.

Фолиевая кислота является одним из биологически активных веществ премиксов, применяемых для обогащения комбикормов и белково-витаминных добавок ° В премиксы ее вводят в количестве до 50 г/т, как составную часть ряда ферментов, катализирующих биосинтез некоторых аминокислот и белков в организме животных. Поэтому важным моментом при контроле качества готовой продукции является количественное определение фолиевой кислоты, для чего требуется надежный, точный и чувствительный метод. .Известно большое количество способов определения фолиевой кислоты в биологических материалах и кормах радиоиэотопных (1); гаэожидкостной и жидкостной хроматографии высокого давления (23, гель"фильтрации на сефадексе (3), микробиологических (4) .

Вышеприведенные способы определения фолиевой кислоты и ее производных трудоемки и длительны. Большая часть их предполагает применение аппаратуры, приборов и .материалов, выпускаемых эа рубежом и небезопасных для человека, сложных в эксплуатации, неприемлемых в практической работе на предприятиях отрасли.

Известен способ хроматографического выделения,и флуорометрического определения фолиевой кислоты на колонках с активированной окисью алюминия t5j .

Известный способ определения фолиевой кислоты неточен и отличается низкой чувствительностью, при проверке в условиях лаборатории института не получено воспроизводимых результатов (данные по содержанию витамина В завышены), ввиду несовершенства приема очистки от мешающих примесей.

Цель изобретения — повышение точности» ,Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения фолиевой кислоты в кормах, включающем экстракцию раствором. едкого натра, центрифугирование, очистку полученного экстракта, обработку его раствором перманганата калия, флуориметрию, очистку экстракта проводят путем осаждения раствором смеси желатина и бенэойиой кислоты при соотношении (г/л)

5:1-7:1.

Пример . Навеску премикса массой 2 r помещают.в мерную колбу вместимостью 100 мл, приливают около 50 мл O,l Н раствора едкого натрия и встряхивают на шуттельаппарате в течение 5 мин. Затем доводят в ней объем до метки 0,1 Н

1О раствором едкого натрия, перемешивают и центрифугируют при 700 об/мин

10 мин.

Берут 50 мл центрифугата в мерную колбу вместимостью 100 мл, 15 приливают около 20 мл дистиллированной воды, 18 мл 1б%-ного раствора соляной кислоты и 1 мл осаждающего раствора (последний готовят так:

0,5 r желатина медицинского и 0,1 r

gp бензойной кислоты растворяют при нагревании в 60-70 мл дистиллированной воды в.мерной колбе вместимостью 100 мп и доводят объем до метки водой), после чего доводят

25 в колбе объем до .метки водой, перемешивRI0T и фильтруют через бумажный фильтр с синей полосой.

В два стеклянных стакана вмес, тимостью 50 мл помещают по 20 мл фильтрата и доводят рН до 3,9-4,1.

К содержимому одного из стаканов добавляют по каплям 4%-ный раствор перманганата калия при перемешивании до неисчезающей розовой окраски и выдерживают в течение 10 мину избыток перманганата калия удаляют добавлением нескольких капель

ЗВ-ного раствора перекиси водорода, доводят рН содержимого стакана до (3,9-4,1 растворами соляной кислоты

40 и объем раствора до 25 мл дистиллированной водой рН 4,0.

К фильтрату, находящемуся во-втором стакане, добавляют дистиллированную воду при рН 4,0 до объема

45 25 мл. Содержимое обоих стаканов фильтруют через бумажный фильтр с синей лентой во флуорометрические пробирки.

Вышеуказанным способом готовят

5р стандартный раствор фолиевой кислоты (окисленный и неокисленный) с концентрацией 2,5 мкг/мл в 0,1 Н раствора едкого натрия.

Интенсивность флуоресцении растворов (до и после окисления) измеряют на флуорометре со светофильтрами ФК-1 и ФК-2. . Содержание фолиевой кислоты (Х, г/т) расчитывают по формуле

A " С ° 100 - 100 10

60 Х й" Ъ

r- rn. 106 У1 v2 где, A — разность показателей флуорометра для окисленной и неокисленной форм испытуемого раствора:

1065779 разность показаний флуорометра для окисленной и неокисленной форм стандартного раствора фолиевой кислоты;

С - содержание фолиевой кислоты в 20 мл стандартного раствора, взятое на анализ, МКГ1 1 - масса навески пробы, rg

Ча - объем центрифугата, взятый на анализ (50), мя!

Vg - объем фильтрата (20)ф млй 50 7

100- объемы разведений, мп;

10 - коэффициенты пересчета мкг в,г (знаменатель) и r в т 115 (числитель). для оценки предлагаемого и из- . 50,0 вестного способов были проведены анализы по определению содержания фолиевой кислоты в премиксе. 49,4

Данные приведены в таблице (введено фолиевой кислоты в пре- . 51 2 микс 50 г/т) .

Результаты таблицы показывают, что содержание фолиевой кйслоты в 2g, 48 ° 0 премиксах, определяемое предлагае-. мым способом, составляет 50,4 г/т, при анализе известным способом составляет 70,9 г/т с отклонением в большую сторону почти на 42%, т.е. точность повышается в 1,5 раза.

Следовательно, предлагаемый спо. соб определения фолиевой кислоты является наиболее точным и может служить для объективной оценки качествй продукции на предприятиях комбикормовой промышленности.

Фолиевая кислота, мг/г, по способу

Предлагаемому Известному

76,3

60,8

71,4

79,8

73,0

66,4

69,2

55,0 70,9+ 1,8

Заказ 11035/46 Тираж -828 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент ; r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Составитель А.Макаров

Редактор A.Âëàñåíêî Техред Т,Маточка корректор Л.Патай