Способ определения аскорбиновой кислоты в лейкоцитах

 

Изобретение относится к медицине , а именно к аналитической биохимии . Цель изобретения - упрощение способа путем исключения дополнительной очистки метанольного экстракта хроматографическим способом. Для этого исследуемую пробу обраба- : тьтают 60%-ным раствором метанола, добавляют этилендиаминтетрацетат в концентрации 0,15-0,40 мг/мл и разделяют метанольный экстракт на две пробы, одну из которых доводят до рН 3,2-3,3, а другую - до рН 7,8- 8,0. Затем спектрофотометрируют одну по отношению к другой при длинах волн 240 и 270 нм соответственно и по разнице оптических плотностей , определяют концентрацию аскорбиновой кислоты.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„Я0„„1282371 А1 и 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ,Ф СОИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3859397/28-14 (22) 29.11.84 (46) 07.01.87. Бюл. Ф 1 (71) Латвийский государственный университет им.П.Стучки

{72) И.M.Êàðëñoí, И.В.Скардс, Е.П.Райпулис и П.С.Цауне (53) 612.015.6 (088.8) (56) I,Liebes et al. Proc, natl.

Асад.Sci USA vol 78, Ф 10, 1981, рр.6481 †64. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АСКОРБИНОВОИ КИСЛОТЫ В ЛЕИКОЦИТАХ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к аналитической биохимии. Цель изобретения — упрощение способа путем исключения дополнительной очистки метанольного экстракта хроматографическим способом.

Для этого исследуемую пробу обраба: TbIBaIoT 60X-ным раствором метанола, добавляют этилендиаминтетрацетат в концентрации 0,15-0,40 мг/мл и разделяют метанольный экстракт на две пробы, одну из которых доводят до рН 3,2-3,3, а другую — до рН 7,88,0. Затем спектрофотометрируют одну по отношению к другой при длинах волн 240 и 270 нм соответственно и по разнице оптических плотностей ,определяют концентрацию аскорбиновой кислоты.

128

Составитель M.Ïoçíÿê

Редактор Г.Гербер Техред И.Попович Корректор 0.Луговая

Заказ 7291/60 Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãoðoä, ул. Проектная,4

Изобретение относится к медицине, а именно к аналитической биохимии.

Цель изобретения - упрощение способа за счет устранения дополнительной очистки метанольного экстракта.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробу обрабатывают 60Х-ным раствором метанола, добавляют этилендиаминтетраацетат (ЭДТА ) в концентрации 0 15-0,40 мг на мг лейкоцитов и разделяют метанольный экстракт на две пробы, одну иэ которых доводят до рН 3,2-3,3, а другую — до рН 7,88,0, затем спектрофотометрируют одну по отношению к другой при длинах волн 240 и 270 нм соответственно и по разнице оптических плотностей определяют концентрацию аскорбиновой кислоты.

П р и N е р„ К 5 мг выделенных сырых лейкоцитов добавляют 4 мл

60Х-ного метанола, содержащего

0,01 мл 1Х-ной соляной кислоты и

0,15-0,40 мг на мг лейкоцитов ЭДТА, взбалтывают и центрифугируют. Определяют верхний жидкий прозрачный

1 слой и разделяют на две пробы. К одной пробе добавляют 0,02 мл 1Х-но—

ro раствора соляной кислоты до рН 3,2, а к другой добавляют

0,02 мл 1Х-ный раствор едкого натра для доведения до рН = 7,8. Образцы помещают в кюветы толщиной 1 см и спектрофотометрируют одну к другой . в диапазоне 220-290 нм. Потом измеряют оптическую плотность при длинах волн 240 и 270 нм, определяют их

2371 2 разницу, которая составляет 0,0243.

Стандартный раствор аскорбиновой кислоты 0,01 мг/мл при рН 3,2-3,3 и

7,8-8,0 и длинах волн 240 и 270 нм дает разницу оптической плотности

0,97. Содержание аскорбиновой кисло. ты в данном образце 20,04 мг/100 r лейкоцитов.

10 Использование предлагаемого способа определения аскорбиновой кислоты в лейкоцитах йо сравнению с известным упрощает определение, так как исключается очистка экстракта хроматографическим способом. Время анализа 30 мин (по известному 90 мин) °

Ф о р м у л а и э о б р е т ения

20 Способ определения аскорбиновой кислоты в лейкоцитах, путем экстрагирования метанолом с последующим фотометрированием, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью упрощения способа эа счет устранения дополнительной очистки метанольного экстракта, в метанол добавляют эти» лендиаминтетраацетат в концентрации

0,15-0,40 мг на мг лейкоцитов метанольный экстракт разделяют на две пробы, рН одной пробы доводят до 3,2-3,3, рН другой пробы — до

7,8-8,0 и проводят спектрофотомет рирование одной пробы против другой

35 при 240 и 270 нм и по разнице оптических плотностей при 240 и 270 нм определяют концентрацию аскорбиновой кислоты.