Способ получения производных цефалоспорина

 

Изобретение касается производных цефапоспорина (ЦС), в частности способа получения соединений общей формулы N-C-C-0(0)NH J-J-5-1 H,M-C-S-C NORL.N-G J-CHi-NC®J |«/J4 r 7 C(0)0 CHi где R - CH j, С Hg, изо-СдН , аллил, которые проявляют антибактериальную активность и могут быть использованы в медицине. Дня изыскания веществ указанного класса с лучшими свойствами были получены новые производные ЦС. Синтез ведут из бензгидрилОБОго эфира 7-амино-3-хлорметил-3-цефем- -4-карбоновой кислоты и бис-(триметилсилил)ацетамида, которые подвергают реакции с (Z)-2-(R-oкcииминo)- -2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)уксусной кислотой. Продукт конденсации затем обрабатывают NaJ и далее N-метилпирролидином в среде органического растворителя при комнатной температуре с последующим удалением защитных групп кислым гидролизом и выделением целевого продукта. Испытания ЦС показывают , что они более активны, чем цефантоксим и цефтазидим, в отношении всех групп грамположительных микробов . 1 ил., 6 табл. (У) с со о со § со см

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ВСЕСОКВЮ Я

13 „" . " 1В

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н flATEHTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3909203/23-04 (62) 3560801/23-04 (22) 14.06.85 (23) 03.03.83 (31) 354851 (32) 04.03.82 (33} US (46) 07..04.87. Бюл. У 13 (71) Бристоль-Иейерз Компани (US) (72) Симпеи Абураки, Хадзиме Камати, . Юкио Нарита, Юн Окумура и Такаюки

Наито (JP) (53) 547.869.1.07(088 8) (56) Bucourt В., Heymes R. etc.

Cephalosporines à chaines аш по-2-thiàão1ó1-4-acetyles. — Tetrahedron

34, 2233 (1978).

Выложенная заявка ФРГ У 3037102, кл. С 07 D 501/46, 1981.

Европейский патент У 0045937, кл. С 07 D 501/46, 1982. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

ЦЕФАЛОСПОРИНА (57) Изобретение касается производных цефалоспорина (ЦС), в частности способа получения соединений общей формулы

„„80„„1303029 А 3 (50 4 С 07 0 501/46//А 61 К 3I/545 н - с-с-С,(о)ын - S — ц 11 I

Г 1 i(s1 и I+C g-С нала М вЂ” С tH -N -i

C(0)0 СИ где R — - СН, С Н-, изо-С Н, аллил, которые проявляют антибактериальную активность и могут быть использованы в медицине. Для изыскания веществ указанного класса с лучшими свойствами были получены новые производные

ЦС. Синтез ведут из бензгидрилового эфира 7-амино-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты и бис-(триметилсилил)ацетамида, которые подвергают реакции с (Е)-2-(R-оксиимино)-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)уксусной кислотой. Продукт конденсации затем обрабатывают NaJ и далее N-метилпирролидином в среде органического растворителя при комнатной температуре с последующим удалением защитных групп кислым гидролизом и выделением целевого продукта. Испытания ЦС показывают, что они более активны, чем цефантоксим и цефтазидим, в отношении всех групп грамположительных микробов. 1 ил., 6 табл.

1303029 2 проявляющих высокую антибактериальную активность, которые могут быть использованы в медицине.

Целью изобретения является создание на основе известных методов способа получения новых соединений общей формулы 1, обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Способ осуществляют согласно сле- дующей схеме: с — соос н

0В с — соом тгн Г„ м2

СН>С1 соосн(рь, S я с — ссьн

/ N o iN сн2с1 соосм(гь, Mal ж с — cow туна $У1%, Ои

ОК

2. Йе БлОкиРОЦАние

S я с — c0NH е

„,УА -р3 oR соо сн

Изобретение относится к области производных цефалоспорина, в частности к способам получения новых производных цефалоспорина общей формулы S

Е

С-СОКИ (Е)

ЩЯ Д О 7 )

08 СБ 3 — метил зтил, изопропил или м с — соосм т ны-

2

КХ сН1 Ч1 сооск(гь)

НЗС

С-СООСН, л

Т1 HN 5

ОЯ2, 40

Реакцию соединения VII c N-метилпирролидином проводят в неводном органическом растворителе, таком как метиленхлорид, хлороформ, диэтиловый эфир, гексан, этилацетат, тетрагидро- 5 фуран, ацетонитрил и т.п., или смеси таких растворителей, при температуре от -10 до +50 С, предпочтительно при комнатной температуре. На один моль соединения VII следует использовать 10 не менее одного моля N-метилпирролидина; предпочтительно использовать

50-100Х-ный избыток N-метилпирролидина.

Карбоксил-защитные группы, при- 15 годные для использования в указанной реакции, включают аралкильные группы, такие как бензил, п-метоксибензил, п-нитробензил и дифенилметил (бензгидрил); алкильные группы, такие как 20 трет-бутил; галоалкильные группы, такие как 2,2,2-трихлорэтил, и другие карбоксил-защитные группы. Все они легко удаляются при обработке кислотой. Особенно предпочтительными карбоксил-защитными группами являются бензгидрил и трет-бутил.

Амино-защитные группы, пригодные для использования в реакции, включают тритил и ацильные группы, такие как хлорацил. Предпочтительны амино-защитные группы, которые легко удаляются при обработке кислотой, например, тритил.

Синтез 1:

29 4

ЯМР: 8 (CDC1 ), ; 1,32 (зн, т);

3,98 (ЗН, с); 3,30 (2Н, кв); 6,42 (1H, с); 7,2 (1Н, м); 7,25 (15H, с).

Соединения IIIb, IIIc u IIId получают по той же общей методике, но с заменой метилиодида подходящим иодидом. Их показатели приведены в табл. 1.

Синтез 2: (- — СООК 1V

11 т1НЫ q

08 (Z)-2-Метоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил) уксусная кислота (IVa).

Сложный этиловый эфир IIIa полученный в синтезе 1 (6,00 г, 12,7 ммоль) в этаноле (120 мл), обрабатывают 2н. NaÎH (12,7 мл) при комнатной температуре в течение ночи.

Реакционную смесь доводят до рН 8 добавлением порошкового сухого льда, и растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде (100 мл), и раствор подкисляют добавлением 1н. HCf до рН 2, а затем экстрагируют этилацетатом (3"50 мл).

Скомбинированные экстракты промывают насыщенным раствором NaC1, осушают и упаривают. Остаток кристаллизуют из этилацетата — гексана с получением 5,56 r (выход 98K) целевого продукта. Т.пл. 138-143 С (с разл.)..

ЯМР: о(CDC1 ), млн : 3,89 (ЗН, с);

6,52 (1H, с); 7,2 (15H, с).

Соединения IVb IVc u IVd получают по этой же общей методике. Их характеристика дана в табл. 2.

Этиловый эфир (Z)-2-метоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил) уксусной кислоты (III а). 45

Смесь этилового эфира (Z)-2-гидрок сиимино-2-(2-тритиламино-тиазол-4-ил) уксусной кислоты (II) (5,00 r, 10,9 ммоль), СНэЛ (2,04 мл, 32,8ммол ) и К СО. (4,54 r, 32,8 ммоль) в сухом 50

Я диметилсульфоксиде (DMCO) (100 мл) перемешивают при комнатной температуре на протяжении ночи, а затем выливают в воду (250 мл). Образующийся осадок собирают фильтрованием, промывают водой и сушат с получением целевого соединения (5,15 г, количественный выход). Т.пл. 115 С (с разл.).

Синтез 3.

Бензгидриловый эфир 3-гидроксиметил-7-фенилацетамидо-3-цефем-4-карбоновой кислоты (VIII).

К перемешиваемой суспензии фосфатного буфера (pH 7, 162,5 мл) и пшеничных отрубей (20 г сухого вещества) при комнатной температуре добавляют натриевую соль 7-фенилацетамидоцефалоспорановой кислоты (5 г, 12,1 ммоль) в виде одной порции. Протекание реакции контролируют с помощью жидкостной хроматографии высокого давления до окончания гидролиза (5 ч).

Суспензию фильтруют для удаления пшеничных отрубей, и фильтрат ох5 1ЗОЗО лаждают до 5-10 С для проведения экстрактивной этерификации. К охлаждаемому раствору добавляют метиленхлорид (32 мл) с последующим добавлением

0,5 Г1 раствора дифенилдиазометана в метиленхлориде (24 мл). Затем рН доводят до 3,0 добавлением 28%-ной фосфорной кислоты. Спустя 1 ч реакционной смеси дают возможность прогреться до 20 С. Медленно добавляют 10 гептан (56 мл), и целевой кристаллический продукт выделяют фильтрованием. Выход целевого продукта 3,0 r (50%).

Синтез 4.

Бензгидриловый эфир 7-амино-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (V).

К суспензии PCE (7,3 г, 40 ммоль)

5 в СН СГ (100 мл) добавляют пиридин и (3,2 г, 40 ммоль), и смесь перемешивают 20 мин при 20 С. К смеси добавляют бензгидриловый эфир 3-гидроксиметил-7-фенилацетамидо-5-цефем-4-карбоновой кислоты, полученный по методике синтеза 3 (5,1 r, 10 ммоль), при перемешивании при -40 С в виде одной порции. Смесь перемешивают при

-10 С 15 мин и оставляют на 7 ч при (-10) — (-15) С. К охлажденному раствору (-20 С) добавляют пропан-1,3-диол (10 мл), и смесь оставляют на

16 ч при -20 С, а затем перемешивают

20 мин при комнатной температуре.

Полученный раствор промывают льдомводой (2 "20 мл) и насыщенным водным раствором NaCl (10 мл), сушат над

MgS0» и концентрируют в вакууме. Ре- 40 зиноподобный остаток (12 r) растворяют в смеси CHCK и н-гексана з (2:1) и хроматографируют с использованием колонки с силикагелем (200 г) и тем же растворителем в 45 качестве элюента. Содержащие целевое соединение фракции упаривают в вакууме, и остаток растирают с н-гексаном, получая целевой продукт (2,1 г, 51%). Т. пл. 110 С (с разл.) 50

ИК-спектр: 1, KBr: 3400, 2800, 1785, 1725 см °

E 10к

УФ-спектр: М 265 нм; Е =160. макс 1см с1 .+ сОсГ з

ЯМР 8 (ПМСО -1 ) млн 55

3 69 (2Н, с); 4 43 (2Н, с); 5 09 (1Н, д, Т=4,5 Гц); 5,24 (1Н, д, I=4,5 Гц);

6,87 (1Н,. с); 7,3 (10, м).

29 6

Пример 1, 7-f(Z)-2-Метоксиимино-2(2-аминотиазол-4-ил)ацетамидо-3-(1-метил-1-пирролидиний)метил)-3-цефем-4-карбоксилат (Ia).

А. Бензгидриловый эфир 3-хлорметил-7-((Z)-2-метоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)ацетамидо) -3-цефем-4-карбоновой кислоты (.1Ia), Бензгидриловый эфир 7-амино-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты, полученный по методике синтеза 4 (2,29 г, 5,52 ммоль), в

СН CN (57 мл) обрабатывают бис- (триз метилсилил) -ацетамидом (БСА, 4,00 мл, 16,6 ммоль) при комнатной температуре в течение 50 мин, получая прозрачный раствор. К этому раствору добавляют раствор хлорангидрида кислоты, который получают из (Z)-2-метоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)-уксусной кислоты (IVa) (2,04 г, 4,60 ммоль) и PCE (1,15 г, 5,52 ммоль) в метиленхлориде (20мл).

Смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин, выливают в холодную воду (200 мл) и экстрагируют этилацетатом (3"100 мл). Скомбинированные экстракты промывают водным NaC1 сушат и упаривают. Остаточный сироп (4 r) хроматографируют на силикагеле (150 r) в колонке элюированием смесями 10:1 и 3:1 толуола и этилацетата, последовательно. Фракции, содержащие требуемое соединение, комбинируют и упаривают с получением 2,61 r (68%) соединения VI в виде аморфного порошка.

ЯМР: Ь (CDCI ), млн : 3,50 (2Н, с); 4,02 (3H, с); 4,33 (2Н, с); 4,98 (1Н, д); 5,87 (1H, кв); 6,65 (1Н, с);

6,90 (1Н, с)", 7,3 (25H, м).

В. Бензгидриловый эфир 3-иодометил-7- ((Е)-2-метоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)ацетамидо)-3-цефем-4-карбоновой кислоты (VIIa).

Смесь 3-хпорметилового производного VIa (1,50 г, 1,79 ммоль) и

NaJ (1,34 r, 8,93 ммоль) в метилэтилкетоне (30 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение часа.

После отгонки растворителя остаток растворяют в этилацетате (100 мл) и промывают водой, водным Na S О и

z з водным NaC1, сушат и упаривают с получением названного целевого соединения VIIa (1,47 r, 89%) в виде аморфного порошка.

7 13О3О

ЯМР: 6 (СВС1 ), млн : 3,55 (2Н, АВкв); 4,00 (ЗЦ, с); 4,25 (2Н, с);

4,97 (1H, д); 5,80 (1Н, кв); 6,65 (IН, с); 6,90 (IН, с); 7,3 (25H, м).

С, 7-((Е)-2-Метоксиимино-2-(2-аминотиазол-4-ил)ацетамидо)-3 †(1—

-метил-1-пирролидиний)метил)-3-цефем-4-карбоксилат (la).

Смесь соединения VIIa (4,5 г, 4,83 ммоль) и N-метилпирролидина 10 (0,65 мл, 6,28 ммоль) в СН Сl (45 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин. К смеси добавляют эфир (300 мл) для выделения четвертичной соли заблокиро- 15 ванного цефалоспорина, который собирают фильтрованием и обрабатывают

90Х.-ной трифторуксусной кислотой (ТФК) (40 мл) при комнатной температуре в течение часа. Затем смесь упа- 20 ривают при пониженном давлении и температуре ниже 20 С. Остаток растирают с эфиром, получая соль ТФК соединений

Ia (2,40 г), которую растворяют в метаноле (5 мл) и обрабатывают IM 25 раствором натрий-2-этилгексоата (НЗГ) в этилацетате (8 мл) при комнатной температуре в течение 30 мин. После добавления этилацетата (100 мл) образующийся осадок (1,94 г) собирают 30 фильтрованием. Анализ с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД) показывает, что сырой продукт имеет чистоту 77. при соотноз 2 шении между а -изомером и а -изомером 35

1:8. Очистку продукта с помощью ЖХВД повторяют трижды ("Лихросорб BP-18", 8"300 мл), элюирование — 57.-ным водным СН ОН или 0,01 M аммоний-фосфатным буфером (рН 7,2), содержащим 40

57 СН ОН, с получением 35 мл (1,57) целевого продукта в виде бесцветного порошка. Оцениваемая чистота (ЖХВД)

907.. Т.пл. 150 С (с разл.).

ИК-спектр: 4"„" „,, см : 1770, 45

1660, 1620, УФ-спектр: „ „, (фосфатный буфер, рН 7), нм, (Е): 235 (16200), 258 (15400).

ЯМР: о (D О), млн : 2,31 (4Н, м);

3,08 (ЗН, с); 3,63 (4Н, м); 4,09 (ЗН, с); 5,43 (1Н, д, 1=4,8 Гц);

5,93 (IH, д); 7,08 (IH, с).

П р и и е р 2, 7-t(Z)-2-Метоксиимино-2-(2-аминотиазол-4-ил)-ацетамидо) -3- t(1 †ìåò-1-пирролидиний)метил) -3-цефем-4-карбоксилат (lа).

29 8

К перемешиваемому раствору 20,4 г (21,9 ммоль) соединения VIIa в 150 мл сухого метиленхлорида добавляют

2,42 г (28,5 ммоль) 1-метилпирролидина в виде одной порции при комнат1 ной температуре. Смесь перемешивают

5 мин и выливают в 1000 мл эфира при интенсивном перемешивании с образованием осадка, который отфильтровывают, промывают эфиром (5 30 мл) и сушат в вакууме с получением 19,3 r блокированного продукта в виде бледно-желтого порошка.

ИК спектр 4, cM 3400

1780 (с), 1740, 1675, 1530.

ТСХ: растворитель — этанол/CHCI3

1:3, К =0,30 (К =0,95 для соединения VIIa) .

Твердое вещество растворяют в

185 мл смеси трифторуксусной кислоты и воды (99:l) перемешивают в течение часа при комнатной температуре и концентрируют до 30 мл при температуре ниже 10 С. Концентрат выливают в 1000 мл эфира при энергичном перемешивании с образованием осадка, который отфильтровывают, промывают эфиром (5 40 мл) и сушат в вакууме с получением 10,6 г бледно-желтого порошка. Порошок растворяют в 20 мл метанола и раствор фильтруют. К фильтрату добавляют 45 мл 0,8 М НЗГ в этилацетате. Результирующую суспензию выпивают в 400 мл этилацетата и фильтруют с получением 8,08 г твердого вещества, которое является смесью целевого соединения и соответствующего

А -изомера (a /а =1:8) по данным

ЖХВД-анализа ("Лихросорб RP-18", 1015Х метанола, в 0,01 М фосфатном буфере, рН 7). Второй опыт на 28,9 г (31,0 ммоль) соединения VIIa дает

3 9

16,0 г сырого продукта (a /a =l:8).

Выделение целевого а -изомера из скомбинированного сырого продукта (24,08 r) с использованием препаративной ЖХВД (" Система 500", фирма

"Уотерс Ассошиэйтс", "ПрепПАК 500/С, ", 5-10Х СН ОН) дает 769 мг соединения з

1а.

Пример 3. 7- C(Z)-2-Метоксиимино-2-(2-(2-аминотиазол-4-ил)ацетамидо)-3- C(1-метил-1-пирралидиний)метил)-3-цефем-4-карбоксилат (1а).

Проводят серию экспериментов для определения влияния растворителя, количества растворителя и времени реакции на выход соединения 1а и от9 )303О ношения ь /л в продукте реакции. Об3 2 щая методика-сводится к следующему.

К суспензии 3-иодометилового производного VIIa (45 мг, 0,048 ммоль) в указанном количестве указанного растворителя добавляют раствор N-метилпирролидина (0,0) мл, 0,097 ммоль) в эфире (0,1 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в те.чение указанного периода, Реакцион- 10 ную смесь разбавляют эфиром (5 мл) и результирующий осадок собирают фильтрованием и смешивают с 90% ТФК.

Смесь перемешивают в течение часа и упаривают до сухого остатка при пониженном давлении и температуре ниже 20 С, получая целевой продукт.

Отношение ts /a для продукта опреде3 2 ляют с помощью ЖХВД ("Лихросорб RP-18", подвижная фаза — 0,01 М аммоний-фос- 20 фатный буфер (рН 7,2), содержащий

15% СН ОН; время удерживания, 6,60 мин, Ь вЂ” 5,56 мин). Выход npo l дукта и отношение изомеров и /6 для каждого эксперимента приведены в табл. 3.

П р н м е р 4. ?- ((Z)-2-Этоксиимино-2-(2-аминотиазол-4-ил)ацетамидо 1-3- ((1-метил-1-пирролидиний)метил)-30

-3-цефем-4-карбоксилат (1).

А. Бензгидриловый эфир 3-хлорметил-7-((Е)-2-этоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)ацетамидо)-335

-цефем-4-карбоновой кислоты (VI).

К раствору (Z)-2-этоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)-уксусной кислоты (ЕЧ) (1,095 г, 2,4 ммоль) в дихлорметане (20 мл) добавляют пяти- 40 хлористый фосфор (500 мг). После перемешивания в течение часа при комнатной температуре смесь в виде одной порции добавляют к охлаждаемому на льде раствору бензгидрилового эфира

7-амино-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (1,083 .r, 2,4 ммоль) и БСА (1 мл) в дихлорметане (20 мл).

После перемешивания в течение получаса реакционную смесь выливают в

l0X-ный водный NaHCÎ (200 мл) и экстрагируют с помощью CHCI (!00 мл).

Экстракт промывают водой, сушат над

MgS0 и упаривают при пониженном дав1 ленни. 55

Остаток хроматографируют в колонке иа силикагеле. Элюирование CHCf дает названное соединение VIb в виде аморфного порошка, 1,76 r (86%).

29 !О

ЯМР: о (CDC1 з), млн <: ),40 (3Н, т, СН 2СН ); 3,53 (2Н, АВкв., 2-СН );

4,37 (2H, с, -СН С); 4,60 (2Н, кв., -СН СН ); 4,90 (IН, д, 6-Н); 5,89 (IH, д 7-Н); 6,88 ()Н, с, Н тиазола);

6,91 (IH с, СН бензгидрила).

В. Дифенилметиловый эфир 7-((Z)—

-2-этоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)ацетамидо)-3-йодометил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (VII).

Смесь соединения VIb примера 4А (1,07 r, 1,25 ммоль) и NaJ (562 мг, 2,75 ммоль) в ацетоне (20 мл) перемешивают в течение часа. Смесь фильтруют, фильтрат выливают в воду и экстрагируют этилацетатом.

Органический слой последовательно промывают 5%-ным водным Ха 8 Од, водой и насыщенным водным NaCI, сушат над MgSO < и упаривают с получением

1,04 г (89X) соединения VII.

ЯМР: о (СЮС1 ), млн : 3,55 (2Н, кв., 2-СН); 4,27 (2Н, с, СН вЂ” 1);

5,02 (IН, д, 6-Н); 5,87 (IH, д, 7-Н);

6,68 (IН, с, Н тиазольного кольца);

6,93 (IН, с, СН бензгидрила).

С. 7-((Z)-2-Этоксиимино-2-(2-аминотиазол-4-нл)ацетамидо) -3-((1-метил-1-пирролидиний)метил)-3-цефем-4-карбоксилат (1Ъ).

Смесь соединений VIIb примера 4В (333 мг, 0,35 ммоль) и М-метилпирролидина (60 мг, 0,7 ммоль) в СН СЙ

2 (5 мл) перемешивают в течение получаса при комнатной температуре, а затем упаривают в вакууме. Остаток про мывают эфиром и растворяют в 90%-ной водной ТФК. После стояния в течение получаса при комнатной температуре смесь концентрируют при пониженном давлении. К концентрату добавляют эфир для отделения четвертичного продукта, который собирают фильтрованием и растворяют в небольшом количестве метанола. Раствор хроматографи- . руют в колонне "HP-2" (40 мл). Элюирование 30Х.-ным водным СН ОН с пос3 ледующей лиофилизацией дает 0,062 r смеси изомеров А и лз(л /а =5:1) .

Смесь очищают с помощью ЖХВД (Лихросорб RP-18", 8 300 мм, 15% метанол), и .целевой л -изомер (IЬ) выделяют в виде бледно-желтого порошка

4,9 мг (2,7X).

УФ-спектр: 1 макс (фосфатный буфер, РН 7), нм, (Я ): 235 () 5000) 258 (14000).

Смесь (Z)-2-(2-пропоксиимино)-2-(2-триэтиламинотиазол-4-ил)-уксусной кислоты (500 мг, 0,55 ммоль) и йодида натрия (248 мг, I 66 ммоль) в ацетоне (10 мл) перемешивают при комнатной температуре 50 мин. После упаривания остаток промывают водным тиосульфатом натрия (10 мл), водой

l (10 мл) и водным NaC1 (10 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают с

1! 1ЗОЗО

ЯМР: 6 (D О), млн : I 43 (ЗН, т);

2,33 (4Н, м,); 3,10 (ÇH, с); 3,64 (4H, м); 4,36 (2H, кв); 5,44 (IH, д);

5,95 (IH д); 7,08 (IН, с).

Пример 5. 7-L(Z>-2-(2-Пропоксиимино)-2-(2-аминотиазол-4-ил)ацетамидо)-3-((I-метил-1-пирролидиний)метил)-3-цефем-4-карбоксилат (lc), А. Дифенилметиловый эфир 3-хлорметил-7-t.(Z)-2-(2-пропоксиимино)-2- 10

-(2-тритиламинотиазол-4-ил)ацетамидо13-цефем-4-карбоновой кислоты (VI).

Смесь (Z)-2-(2-пропоксиимино)-2-(2-триэтиламинотиазол-4-ил}уксусной кислоты (IVc) (707 мг, 1,5 ммоль) и 15 пятихлористого фосфора (344 мг, 1,65 ммоль) в дихлорметане (14 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение часа и выливают в раствор бензилового эфира 7 амино-3-хлор- 20 метил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (677 мг, 1,5 ммоль) и БСА (1,1 мл, 4,5 ммоль) в дихлорметане (15 мл).

Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение получаса, разбавляют этилацетатом (200 мл) и водой (3"100 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают с получением 1,4 г (100X) названного соединения. 30

ИК-спектр: KBr см : 3360, 3020, 3060, 2960, 1785, 1725, 1680, 1520, 1500, 1450, 1375, 1300, 1250, 1160, 1090, .!060, 1010, 990, 840, 740, 700.

УФ-спектр: Л (EtOH), нм (Е): 240 35 (24600), 260 (20700).

ЯМР: 3, CDC1, млн ": 1,35 (6Н, д, I = Гц); 3 50 (2Н, с); 4,35 (2Н, с); 4 58 (IH, м, 1 = 6Н); 5 00 (1Н, I = 4,5 Н); 5,91 (IH, д-д 1 = 4,5 и 40

9Н; q для 0 О I = 4,5 Н); 6,68 (IН, с); 6 88 (IH, с); 7 25 (25H, с) °

В. Дифенилметиловый эфир 3-йодометил-7- C(Z)-2-(2-пропоксиимино)-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)-ацетамн- 45 до)3-цефем-4-карбоновой кислоты (VII ) °

29 12 получением 494 мг (90Х) названного целевого соединения. !

ИК-спектр: „„ KBr см : 3360, 3040, 3020, 2960, 1785, 1?20, 1680, 1600, 1520, 1500, 1450, 1370, 1300, 1230, 1150, 1115, 1080, 990, 900, 840, 750, 700.

УФ-спектр: k (Et OH), нм (Е): 240 (24900), 260 (19400) .

ЯМР: 8 (СЭС1 }, млн : 1,30 (6Н, д, 1 = 6Н); 3,37 и 3,70 (IН, каждый, д, 1 = 16H); 4,22 (2H» 4,55 (IH, м, I = 6H); 4,95 (IH, д, I = 4,5 Гц)!

5,83 (IН, д-д, I = 4,5 F 9 Гц, q для

D О), 6.,66 (IН, с); 6,87 (IH, с);

7,25 (25Hi с).

С. 7-((Z)-2-(2-Пропоксиимино)-2-(2-аминотиазол-4-ил)ацетамидо) -3— ((1-метил-1-пирролидиний)метил1-3-цефем-4-карбоксилат (fc).

Смесь соединения примера 5В (545 мг, 0,55 моль) и 1-метилпирролидина (70 мг, 0,82 ммоль) в дихлорметане (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение получаса и разбавляют эфиром (100 мл).

Результирующий остаток собирают фильтрованием. Раствор осадка в 90Х ТФК (4,5 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение получаса и упаривают в вакууме. Остаток растирают с эфиром с получением 317 мг сырого продукта, который хроматографируют в колонке "HP, — 20" (50 мл), элюируют водой (500 мл) и ÇOX-ным СНзОН (500 мл). Элюат в ЗОХ-ном СН ОН конз центрируют и лиофилизуют с получением 109 мг смеси изомеров а и а з (/a =6/I), 100 мг которой очищают с помощью ЖХВД ("Лихросорб RP 18, I5X Me0H), получая 5 мг (ЗХ) целевого соединения 1с

УФ-спектр: Л,чо,„, (буфер) нм (с):

236 (15100), 252 (14600) .

ЯМР: Ь (П 0),млн : 1,42 (6Н, д, I = 6 Гц); 2,33 (4Н, с); 3,10 (ЗН, с); 3,65 (4Н, с); 3,83 и 4,23 (1Н, каждый, д, 1 = 17 Гц); 5,45 (IН, д, I = 4,5 Гц); 5,95 (IН, д, .I 4,5 Гц);

7,05 (IН, с).

Пример 6. 7-((Z)-2-Аллнлоксиимино-2-(2-аминотиазол-4-ил-)ацетамидо)-3-(1-метил-1-пирролидиний)-метил-3-цефем-4-карбоксилат (Id).

А. Бенэгидриловый эфир 7-t(Z)-2-аллилоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)ацетамидо-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (7Ы).

13 !303

К суспензии бензилового эфира 7-

-амино-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (1,35 г, 3 ммоль) в метиленхлориде (20 мл) добавляют БСА (1.,1 мл, 4,5 ммоль), и смесь перемешивают в течение получаса при комнатной температуре с образованием прозрачного раствора. Смесь (Z)-2-аллилоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)уксусной кислоты (IVd) (1,40 г, 10 3,0 ммоль) и пятихлористого фосфора (690 мг, 3,3 ммоль) в метиленхлориде (20 мл) перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре и выливают в виде одной порции в раствор триметилсилированного соединения V. Смесь перемешивают 20 мин при комнатной температуре и разбавляют этилацетатом (200 мл), промывают водным бикарбонатом натрия и водой, осушают и от- 0 гоняют при пониженном давлении. Nacлоподобный остаток очищают на силикагеле методом хроматографии.вколонке (" Вако-гель", С-200, 30 r). Колонку элюируют хлороформом и комбинируют фракции, содержащие целевой продукт.

Отгонка при пониженном давлении дает целевой продукт (VId) в виде аморфного порошка, выход 2,32 r (85%).

Т.пл. 100-115 С (разл.).

ИК-спектр: КВг, см : 3990, 1790, 1730, 1680, 1530, 1380, 1250, 1160, ЯМР . о (CDC1 ), млн : 3„50 (2Н, 2-н);. 4,32 (2Н, с, 3-СН ); 4,6-6 1 (7Н, м, СН СН=СН, 6,7-Н); 6,70 (1H, с, Н тиазола); 6,90 (1Н, с, Ph CH)1;

7,1-7,6-(ЗОН и протоны фенила) °

Рассчитано, % С 64,05; Н 4,45;

N 7,73; S 7,08; Cf, 7,82.

С4ЯH N 0 S C1 1/3

Найдено, %: CE 64,13: Н 4,61", 63,99; 4,64", N 7,50; S 6,85; Cf 7,55

В. Бензгидриловый эфир 7- Е(Е)-2-аллилоксиимино-2-(тритиламинотиазол-4-ил}ацетамидо"1-3-йодометил-3-цефем-карбоновой кислоты VIId.

Смесь соединения (ЧЫ) примера

6А (2,30 r, 2,65 ммоль) и йодида натрия (2 r, 13,3 ммоль) в ацетоне (15 мл) перемешивают в течение часа при комнатной температуре, а затем упаривают при пониженном давлении.

Раствор маслоподобного остатка в этилацетате (200 мл} промывают 10%-ным тиосульфатом натрия и водой, упари35

14

029 вают при пониженном давлении с получением названного соединения в виде аморфного порошка, который используют на следующей стадии без дальнейшей очистки. Выход 2,52 r (99%).

С. 7-1.(Е)-2-Аллилоксиимино-2-(2-аминотиазол-4-ил)ацетамидо)-3- !(1-метил-1-пирролидиний)метил) -3-цефем-4-карбоксилат (Id).

Смесь соединения примера 6В (4,8 мг, 0,5 ммоль) и N-метилпирролидина (0,05 мл, 0,5 ммоль) в метиленхлориде (5 мл) перемешивают 20 мин при комнатной температуре и разбавляют эфиром (50 мл) для осаждения четвертичного продукта (выход 500 мг) .

Смесь четвертичного продукта и ТФК (2 мл) оставляют стоять при комнатной температуре в течение полутора часов и разбавляют эфиром для осаждения сырой соли ТФК продукта (выход

265 мг), которую хроматографируют на колонке "HP-20" (1,8"18 см). Колонку элюируют водой и 30%-ным водным метанолом. Метанольный элюат упаривают при пониженном давлении и остаток лиофилизуют с получением аморфного порошка (выход 124 мг), который содержит целевой продукт (17%) и соответствующий и -изомер (83%). Смесь

2 очищают с помощью ЖХВД ("Лихросорб

R0-18", 0,01 N NR Н PO (рН:СН ОН=

=85:15), Элюэт подкисляют до рН 3 разбавленной HCf. и хроматографируют на колонке "HP-20" (1,8 i!0 см). Колонку элюируют водой, а затем 30%-ным водным метанолом. Иетанольный элюат упаривают при пониженном давлении, и остаток лиофилизуют с получением целевого соединения (Id) в виде аморфного порошка (выход 13 мг, 5,1%)

Т.пл. !55ОС (разл.).

ИК-спектр "„ „, KBr, см : 36002800, !770, 1670, 1610, 1530, 1200.

УФ-спектр,k „« (pH 7 буфер), нм, (Я): 235 (16600), 253 (15600) .

SINP 8 (D О), mac : 2,1-2,5 (4H, и, Н пирролидина), 3,10 (38, с, СН );

3,4-3,8 (4Н, м, пирролидина); 5,95 (1Н q 4H Z).

Соединения формулы 1 проявляют высокую антибактериальную активность в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий и пригодНы для лечения бактериальных инфекций животных, а также человека. Соединения формулы 1 могут быть использованы для приготовления препаративных

15 . 13030 форм, предназначенных для употребления парентерально, обычным путем с применением известных фармацевтических носителей и экспиентов, и употребляться в виде единичных или многократных доз. Композиции могут быть представлены в виде растворов, суспензий или эмульсий в масляных или водных разбавителях с применением обычных диспергирующих, суспендирую- 10 щих и стабилизирующих веществ; в виде сухого порошка, разбавляемого перед употреблением, например, стерильной водой, не содержащей пирогенных веществ; в виде свечей, с ис- 15 пользованием обычных для этой цели основ, например масла, какао или других глицеридов. При необходимости предлагаемые соединения могут быть предписаны в сочетании с другими ан- 20 тибиотиками, такими как пенициллины или другие цефалоспорины. Единичная доза содержит 50-1500 мг активного ингредиента формулы 1. Для лечения взрослых людей дозировка составляет

N Тс сонно Г3 О ос, О+

СНХ-ж

СОО

I н,с-с-сн

СООН

Абсорбцию соединения Та и известных соединений (цефотаксим и цефтазидим) определяют на мьппах после однократной внутримьппечной инъекции испытуемого соединения (растворенного в р.lM-фосфатном буфере; РН 7) при дозировке 20 мг/кг. Пробы крови собирают из орбитальных синусов в обработанные гепарином капиллярные

55 тРУбки и высевают на среду МюллераХинтона с использованием Morganella

Morganii А9695 в качестве испытуемого организма. Уровни содержания соединений в крови в различные промежути цефтазидим формулы

5 — 7-(Н2Х Ж О

Все испытуемые соединения более активны, чем цефотаксим, в отношении групп (G )-ЕЕ и (G )-III, причем наиболее предпочтительное соединение Та является явно более активным. Все испытуемые соединения более активны, чем цефтазидим в отношении групп (G )-Ia и (G )-Ib, причем наиболее предпочтительное соединение 1а явно активнее цефтазидима в отношении всех групп испытуемых организмов, за исключением (G )-III, которые несколько более чувствительны к цефтазидиму.

29 !6

500-5000 мг в сутки, в зависимости от частоты и способа приема. При внутримышечном или внутривенном введении взрослому человеку полная доза в норме обычно составляет 750-3000 мг в сутки в виде отдельных дозировок, хотя может потребоваться и более вы1 сокая суточная доза в случае инфекций бактериями рода Pseudomonas.

Предпочтительными являются соединения формулы I в которых R — меЭ и тил или этил. Наиболее предпочтительны соединения, где R --метил. Минимальную ингибируннцую концентрацию (MHK) предлагаемых и двух известных соединений (цефотаксима и цефтазидима) определяют методом двухкратного разбавления агара с использованием агара Мюллера-Хинтона для 32 штаммов испытуемых организмов, разделенных на шесть групп ° Геометрические средние значения MHK определенные в этом эксперименте, приведены в табл. 4 и

5. Для сравнения используют известные цефотаксим формулы

1303029 том, что 3 организма резистентны к соединению Ia, 15 — к цефтазидиму и

18 — к цефотаксиму. Оно активнее цефтазидима в отношении всех групп грамположительных испытуемых организмов, исключая (С )III Ps. aeruginosa, которые несколько чувствительнее к цефтазидиму. ки времени, величина полупериодов (t 1/2) и площадь под кривыми (ППК), представлены в табл. 6.

Проводят также испытания для выявления организмов, резистентных к соединению формулы Ia, цефотаксиму и цефтазидиму. Значения MHK для этих трех соединений в отношении 240 штаммов Eutегоbacteriaceae определяют в среде Мюллера-Хинтона, и значение Ю

МНК, равное или превышающее 8 для не менее одного из испытуемых соединений, произвольно принимают за свидетельство резистентности организма.

Из 240 штаммов 27 оказались резис- 15 Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я тентными не менее, чем к одному из испытуемых соединений. Результаты, Способ получения производных цеприведенные в табл. 4, говорят о фалосп-.рина общей формулы

Таким образом, предлагаемым способом можно получать соединения общей формулы 1, обладающие ценными фармакологическими свойствами.

0Б со" СН, 3i дукта, Т а б л и ц а 1

Выход, X Т.пл., С Т.пл., С (лит, данные) Соедине- К т ние

IIIa Метил 100 115 (разл.) 120 (разл.) IIIb Этил 67 97-98

III Изопро- 26 51-55 пил

I I Id Аллил — Сложный эфир подвергали гидролизу без выделения. где R — метил, этил, изопропил или аллил, заключающийся в том, что смесь бензгидрилового эфира 7-амино-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты и бис-(триметилсилил)ацетамида подвергают взаимодействию с (Z)-2-(R-оксиимино)-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил) уксусной кислотой, где К имеет указанное значение, продукт конденсации обрабатывают йодистым натрием, полученное 3-йод-метильное производное подвергают взаимодействию с N-ме тилпирролидином в органическом раст30 ворителе или смеси органических растворителей при комнатной тем— пературе с последующим удалением защитных групп кислотным гидролизом и выделением целевого про20

1303029

Таблица 2

Т.пл., С, (с разл.) Выход, 7.

Соединение

IVa Метил

IVb Этил

IVc Изопропил

66 170-178 "170

I I IG Аллил

Таблица 3

Эксперимент

Растворитель Отношение

Отношение соединения примера 1В г, к растворителю, мл

1 СН СГ

1:20

1/8

2 СН СЗд/эфир 1:100 (1/10) 4/1

3 Этилацетат/ 1:100

/эфир (1/10) 4/1

27

1:100

2/1

6/1

1:100

31

1:100 60

3/1

1:60

3,5/1

55

1:60

82

Таблица 4

Организм

Число штамеометрическое среднее значение МИК, кг/мл мов

la Цефтазидим Цефотаксим

Escherichia

coli

0,25

Escherichia

coli

0 5

4 То же

5 Эфир о .пл., С, с разл.) лит.данные

138-143 140

140-145 Не сообщ.

166-169 170

Время Выход, Ж реакции, мин

1303029

0,13

0,25

13

0,13

0,5

)63

1,6

>63

>63

>63

>32

0 35

0,03

>63

0,06

0,06

16

2,8

16

>63

>63

18

Klebgiella

pneumaniae

Entегоbacter

acrogenes

Entегоbacter

acrogenes

Entегоbacter

cloacoe

Citrobacter

freuntlii

Citrobacter

species

Proteus vu3.—

garis

Morganella

morganii

Serratia шагcescens

Serratia marcescens

Общее число реэистентных штаммов

Продолжение табл.4

1303029

Таблица 5

Геометрическое среднее значение МИК, мкг/м (G )-Ib (6 штаммов) Соединение (G )-Ib (5 штаммов) С+)-Ia

5 штаммов) (G )-Ia (5 штаммов) (G )-III (6 штаммов) Ia (R -метил)

Ib (R -этил)

1,2

3,1

2,8

0,025

0,087

0,13

0,33

1,4

3,1

0,32

5 6

1,0

Ic (R -изопро2 пил) 1,4

3,6

0,35

1,3

3,2

Ы (R -аллил) 2

Цефотаксим (а) 1,8

3,6

0,53

2,4

1,0

2,2

0,015

0,070

0 35

4,1

Цефтазидим (а) 5,1

I 8

1,7

2,6

П р и м е ч а н и е: (G )-Ia: (5 штаммов, чувствительных к пенициллину); (G )-Ib: (5 штаммов, чувствительных к пенициллину); (G )-Ia: (2 штамма) + (1 штамм) и (2 штамма, чувствительных к цефалотину); (С )-ХЬ: (3 штамма) и 3 штамма, резистентные к цефалотину; (G )-II (1 штамм, (2 штамма) и (2 штамма); (G )-III:(6 штаммов); (а) — среднее значение по пяти экспериментам.

Таблица 6

Уровень содержания соединения в крови, t 11//22, ППК, мкг/мл, через время, мин, после введения мин мкг.ч/мл

Соединение

10 20 30 45 60 90

Ia (R -метил) 2

207 196 136 88 4 09

27,8 19 3 13 9,1 4,6 1,2

13,5

Цефотаксим

Цефтазидим"

14,9

4,4 0,8

13 8

21,5 18,4 14,9 8,7

"Среднее значение для 2 испытаний;

1 испытание;

Среднее значение для 3 испытаний.

Составитель Н. Нарышкова

Редактор Н. Егорова Техред И.Попович Корректор М.Самборская

Заказ 1227/57 Тираж 372 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4