Способ получения производных цефалоспорина

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ае (п) А3

ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

0Ц О:)0 СН3

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbfTN4 (21) 3560801/23-04 (22) 03.03.83 (31) 354851, 357534 .(32). 04.03.82, 12.03.82 (33) VS ,(46) 07.08.86. Бюл. В 29 (7 1) Бристоль-Мейерз Компани (08) (72) Симпен Абураки, Хадэиме Камати, Юкио Нарита, Юн Окумура и Такаюки

Наито (JP) (53) 547.869.1.07 (088.8) (56) Выложенная заявка ФРГВ 3037102, «л. С 07 9 501/46, опублик. 1981.

Европейский патент И 0045937, кл. С 07 D 501/46, опублик. 17.02.82. (54).(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ.ПРОИЗВОД НИХ ЦЕФАЛОСПОРИНА общей формулы. где R - прямой илн разветвленный . .

C -С -алкнл, аллил, 2-бутенил, 3-бу тенил или 2-карбокснпропил, о T л ич а ю шийся тем, что соединение общей формулы ав4С 07 0 501 46 /А 61 К.31 45

ВЕРНЯ 0 94

ОЯ, где R - прямой ипи разветвленный л

С -С -алкил, аллил, 2-бутенил, 3-бутенил или 2-карбоксипропил, в котором 2-карбокси-группа защищена в виде сложного эфира, такого, как трет-бутиловый;

В„ - группа, защищающая аминогруппу,,такая, как третил, В, rpyrma, образующая сложный и эфир, такой ° как дифенилметнловый или бензгидриловый, подвергают взаимодействию с N-метилпирролидином в среде растворителя при комнатной температуре, в образующемся.продукте удаляют защитные группы кислотным.гидролиэом и выделяют целевой продукт.

П р. и о р и т е т по п р и э н а к а м.

О4.03.82 при R. прямой или разветвленный С -С+-алкил, аллил, 2-бутенил или 3-бутенил;

12.03.82 при К - 2-карбоксипропил.

Изобретение относится к способу получения новых производных цефалоспорина, которые являются антибиотиками и могут найти применение в медицинской практике.

Пель изобретения — создание новых антибиотиков цефалоспоринового ряда, обладающих повышенной активностью и низкой токсичностью. !

П р н и е р 1. 7- t(Z)-2-метоксиимино-2-(2-аминотиазол-4-ил)ацетами- до-3-(1-метил-1-пирролидиний)метил)-3-цефем-4-карбоксилат (1а ) .

A. Бензгидриловый эфир 3-хлор" метил-7- )(Z) -2-метокгиимино-2- (2-тритиламннотиазол-4-ил)ацетамидо)—

-3-цефем-4-карбоновой кислоты.

Бензгидриловый эфир 3-хлорметил-7-амнно-3-цефем-4-карбоновой кислоты (2,29 r, 5,52 ммолв) в СН СЯ (57 мл) обрабатывают бис-(триметилсилил)ацетамидом (SCA,4,09 мл, 1б,б ммоль) при комйатной температуре в течение 50 мин, получая прозрачный раствор. К раствору добавляют раствор хлорангидрида кислоты, полученный из (Е)-2-метоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)уксусной кислоты (2,04 r, 4,60 ммоль), и

PCl (1, 15 r, 5,52 ммоль) в метиленхлориде (20 мл), смесь,перемешивают при комнатной температуре 30 мин, выливают в холодную воду (200 мл)

Ф и экстрагируют .этилацетатом (3 100 мл), объединенные экстракты промывают водным НаС1, сушат и упаривают. Оставшийся сироп (4 r) хроматографируют на силикагеле (! 50 r) в колонке элюированием смесями 10 1 и 3:! толуола и этилацетата последовательно. Фракции, содержащие тре- буемое соединение, комбинируют и . упаривают с получением 2,61 r (68Х) соединения ЧР в виде аморфного порошка.

ЯИР, Ю Q)C1» млн": 3,50 (2Н, с);

4,0". (ЗН, с); 4,33 (2Н, с); 4,98 (1Н, д); 5,87 (1Н, кв); 6,65 (1Н, с)

690 {1Н, c); 7э3 (25Hэ м)

В. Бензгидриловый эфир 3"иодометнл-7- t(Z) -2-метоксиимино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)ацетамидо) -3-цефем-4-карбоновой:кислоты.

Смесь 3-хлорметилового. производного по примеру 1А (1,50 г,1,79ммоль) и Na3 (1,34 .r, 8,93 ммоль) в метилэтилкетоне (30 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ч.

1 ! 250173 3

После отгонки растворителя остаток растворяют .в этилацетате (100 мл) и промывают, водой, водным Ма S 0 и водным NaC1 сушат и упаривают с

5 получением целевого соединения (.1,47 r, 89X) в виде аморфного порошка.

ЯИР. 8 CDCl ° млн ": 3, 55 (2H;

АВкв.), 4,00 (ЗН, с); 4,25 (2Н, с); ! в 4,97 (!Н, д); 5,80 (1Н, кв); 6,65 (1Н c), 6,90 (1Н, с); 7,3 (25H, и).

С. 7- 1(Е)-2-метоксиимино-2-(2-аминотиазол-4-,ил)ацетамидо)-3-((1-метил-1-пирролидиний)метил,1-3-цефем15 -4-карбоксилат (la).

Смесь соединения по примеру 1В (4,5 г, 4,93 ммоль) и N-метилпирролидина (0,65 мл, 6,20 MMoJlb) в СН С1; (45 мп) перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин. К сме" си добавляют эфир (300 мл) для выделения четвертичной соли заблокиро ванного цефалоспорина, который собирают Фильтрованием и обрабатывают

90Х-ной трифторуксусной кислотой (ТФК) (40 мл) при комнатной. температуре в течение ч. Затем смесь упаривают при пониженном давлении и тем30 пературе ниже 20 С. Остаток растирают с эфиром, получая соль ТФК сое" динения 1а (2,40 r), которую растворяют в метаноле (5 мл) и обрабатывают 1Х-ным раствором натрий-2-этилгексоата (НЗГ) в этилацетате (8 мл) при комнатной температуре в течение

30 мин. После добавления этилацетата (100 мл) образующийся осадок (1,94 г) собирают фильтрованием. Анализ с помощью жидкостной хроматографии высо4б кого давления (ЖХВД) показывает, .что сырой продукт имеет чистоту 1Х при соотношении между а -изомером и в «

2 изомером, равном 1:8..Очистку продукта с помощью ЖХВД повторяют трижды ("Лихросорб RP-18" ° 3.300 мм), элюируют 5Х-ным водным СН ОН нли .

0,01 И аммоний-фосфатным буфером (рН 7,2), содержащим 5Х СНЗОН, с получением 35 мг (1,5X) целевого про5б дукта в виде бесцветного порошка.

Оцениваемая чистота (ЖХВД) 90Х.Т.пл.

150 С (c разложением).

ИК-спектр 3(КВг) см ": 1?70; 1660;

1620.

55. УФ-спектр, )„,„„, фосфатный буфер, рН 7) нм (3): 235 (16200) 258 (15400),, ЯИР ° 8 9 О, млн: 2 ° 31 (4Н, м);

3,08 (ЗН, с); 3,63 (4Н, M) 4,09

1250173 4

90%-ной ТФК. Смесь перемешивают в течение 1 ч и упаривают до сухого . остатка при пониженном давлейни при температуре ниже 20 С, получая продукт. Отношение а /а для продукта определяют с помощью ЖХВД ("Лихро,сорб RP=18",,подвижная фаза 0,1 М. аммоний-фосфатный буфер,. рН 7,2 содегжащий. 15% .СНЗОН, время удерживания аЗ 6,60 мйн, а 5,56 мнн).

З0 Выход продукта и отношение иэоме-. ров 4 / а для. каждого эксперимента приведены в табл. 1. (ЗН, с); 5,43 (1Н,д, Д = 4,8 Гц), 5,93 (1Н, д), 7,08 (1Н, с).

П р и..м е р 2. 7-((Z)-2-метокси.имино-2- (2-аминотиаэ ол-4-ил) ацетамидо1-3-((1-метил-1-пирролидиний)ме; " тил)-3-цефем-4-карбоксилат (3a).

К перемешиваемоиу раствору 20,4 г (2 1,9 ммоль) соединения ло прииеру

fB в 150 мл сухого метиленхлорида добавляют 2,42 г. (28,5 имоль) .1-метилпирролидина .в виде одной порции при комнатной температуры. Смесь перемешивают 5 иин и выливают в 1000 мл эфира лри интенсивном перемешивании с образованиеи осадка, который от-. .. фильтровывают, промывают эфиром (5 х х 30 мп) и сушат в вакууме с получением 19,3 r блокированного продукта в виде бледно-желтого порошка.

ИК-спектр, (KBr), 3„.,„, см

3400; 1780 (с), 1740; 1675; 1530.

ТСХ: растворитель - этанол/СНС1 (1:3), К 0,30, (К 0,95,для соединенйя VII а ).

Твердое вещество растворяют в

185 мл. ТФК/воды (99:1), перемешивают в течение ч лри комнатной температуре.и концентрируют до 30 мл при температуре ниже 10 С. Концентрат выливают в 1000 мл эфира при . энергичном. перемешивании с обра.зованием осадка, который отфильтровывают, промывают эфиром (5 х 40 мл) и сушат в вакууме с получением

10,6 г бледно-желтого порошка. Порошок растворяют в 20 мл метанола и раствор фильтруют. К фильтрату добавляют 45 мл 0,8 М НЭГ в этилацетате. Результирующую суслензию выливают в 400 мл этилацетата и фильтруют с получением 8,08 г твер" догр вещества, которое является смесь» целевого соединения и соответствующего bü-изомера (а / а 1:8) по данным ЖХВД-анализа-("Лихросорб

RP-18", 10-15% метанола в О,Ш M . фосфатном буфере, рН.7). Второй опыт на 28,9 г (31,0 ммоль) соединения

VII a" дает 16,0 г сырого продукта (а1/а 1:8). Выделение целевого а>-нзомера из скомбинированного сырого продукта (24,08 г) с использованием преларативной ЖХВД (" Система

500", фирма "Уотерс Ассошиейтс", "ПропНАК 500/С„ ", 5-10ц СН ОН) да- SS ет 769 мг соединения 1а.

П р н и е р 3. 7-((Е)-2-метоксиимино-2-(2-амннотнаэол-4-ил)ацетамндо)-3-((1-метил-1-лнрролидиннй)метил 1-3-цефем-4-карбоксилат (T o) .

Проводят серию экспериментов для определения влияния количества растворителя и времени реакций íà .выход соединения fcs, и отношения а / а s з продукте реакции. Общая методика сводится к следующему.

К суслензии 3-иодоыетилового производного по примеру 1В (45 иг, 0,048 ммоль) в указанном количестве указанного растворителя добавляют раствор Я-метилпирролидина (0,01 мл, 0,097=смоль) в эфлре (О, 1 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение указанного периода..

Реакционную смесь разбавляют эфиром (5 мл) и результирующий осадок собирают фильтрованием и смешивают с

Н р и м е р 4. 7- ((Z)-2-этоксиииино-2-(2-аиинотиазол-4-ил)ацетаиидо)-3-((1-метил-1-пнрролиднний)ме- тил)-3-цефеи-4-карбоксилат (1).

А. Бенэгидриловый эфир 3-хл рметил-7- ((Z)-2-этоксинмино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил) ацетамидо) -3-цефеи-4-карбоновой кислоты.

К раствору (Z) 2-этокснимино-2«.(2-тритнламинотиазол-4-ил)уксусной кислоты (1,095 r, 2,4 ммоль) в дихлорметане (20 мл) добавляют пятихлористый фосфор (500 мг). После перемешивания в течение ч лрн комнатной теилературе смесь в виде одной порции добавляют к охлаждаемому на льду раствору бензгидрилового эфира 7-амико-3-хлорметнл-3-цефеи-4-карбоновой кислоты (1,083 r, 2 ° 4 ммоль) и БСА (1 мл) в днхлорметане (20 мл)., После перемешнвання в течение получаса реакционную смесь выливают в 10%-ный водный УНСО (200 мл) и экстрагируют с помощью

СНС1з,(100 .мл). Экстракт промывают

5 1 250173 d водой, осушают над И8504 и упаривают . (1 Ь) выделяют в виде бледно-желтого при пониженном давлении. порошка 4,9 мг (2,7 ), Остаток хроматографируют в колон- УФ-спектр, )) „ (фосфорный буфер,, ке на силикагеле. Элюирование СНС1> рН 7), нм (g): 235 (15000)4 258 дает указанное соединение в виде 5 (14000). аморфного порошка, 1,76 г (86X) )IMP, d D О, млн : 1,43 (ЗН, т);

ЯИР, 8 (CDC13 }, млн : 1,40 (ЗН, 2,33 (4Н, и); 3 10 (3Н, c); 3,64 т. СН СН3); 3,55 (2Н, АВкв, 2-СН ); (4Н, м); 4,36 (2Н, кв); 5,44 (1Н, 4,57 (28, с, -CH О); 4 ° 50 (285р кв, Д); 5р55 (18, д); 7,08 (1H, e)

-CH CH ); 4,90 (1Н, g8 6-Н) 8 5889 10 П р и м e p 5° . 7- ((Z)-2-(2-про(1Н, g, 7-Н); 6, 88 (1Н, с, Н тиазола) поксиимино)-2-(2-аминотиазол-4-ил)

6,91 (1Н, с, СН бензгидрила) . " ацетамидо) -3-((1-метил-1-пирролидиВ. Дифенилметиловый эфир 7- ((Z) ний)метил-3-цефем-4-карбоксилат (fc)

-2-зтоксиимино-2-(2-тритиламинотиа- . А. Дифенилметиловый эфир 3-хлорзол-4-ил}ацетаиидо-3-иодометил-3- 15 метил-7- ((Е)-:2-(2-пропокснимино)-2-цефем-4-карбоновой кислоты. -(2-тритиламинотиазол-4-ил)ацетамиСмесь соединения по примеру 4А до)-3-цефем-4-карбоновой кислоты. (1,07 r, 1,25 ммоль) и NaJ (562 мг, Смесь (Z)-2-(2-пропоксиимино)-22,75 ммоль) в ацетоне (20 мл) пере- : -(2-триэтиламино-тиазол-4-ил)уксусмешивают в течение 1 ч. Смесь фнльт-,2О ной кислоты (707 мг, 1,5 ммоль) и руют, фильтрат выливают в воду и эк-. пятихлористого фосфора (344 мг, страгируют этилацетатом. Органичес- 1,65 ммоль) в дихлорметане (14 мл) . кий слой последовательно промывают перемешивают при комнатной темпера5 . — ным водным Na 8 0, водой и насы- туре в течение 1 ч и выпивают в щенным водным NaC1, осушают над . 25 раствор бензилового эфира 7-аыиноMgS0 и упаривают с получением 1,04 г -З-хлорметил.-З-цефем-4-карбоновой

8 4 (89 ), указанное соединение. кислоты (67I мг, 1,5 ммоль) и БСА

ЯИР, 8 CDCl., млн ": 3,55 (2Н, (1,1 .мл, 4,5 ммоль) в дихлорметане

«в, 2-СН), 4,27 (28, с, СН -I) 5,02, (15 мп). Реекцнсннум смесь переме(1Н, д, 6-Н); 5,87 (1Н, д, 7-Н); 30 шивают при комнатной температуре

6,68,(1Н, с, Н тиазольного кольца), в течение получаса, разбавляют этил6 ° 93 (1Н, с. CI3 бензгидрила) ° ацетатом (200 мл) и водой (3 х

1 ,х 100 мл), осушают над сульфатом

С. 7- Я)-2-этоксиимино-2- 2С. 7- (Я) т Г. натрия и упаривают с получением

35 1,4 г (100K) указанного соединения. -.аминотиазол-4-ил)ацетамидо„"-3-((1-метил- 1-пирролидиний)метил)-3-це- 35 .фем-4-карбоксииат (5 Ь) ° ; ИК-спектр, (KBr) ст 4:ç .3360; 3020, Смесь соединения по примеру 4В 3060 2960; 1785; 1725, 1680; 1529. (333 мг, 0,33 ммоль) и М-метилнирро- чрданс. ° 1500Й 14508 1375 и 1300 лидина (60 мг, 0,7 ммоль в СН С1 1250; 1160; 1090; 1060; 1010; 990; (5 мл) перемешивают в течение полу- ) 840; 740; 700. часа при комнатной температуре, а УФ-спектр, 7) ЕВОН, нм: 240 аа«М Упаривают в. вакууме °, 0<>aToK (24600), 260 (20700). промывают. эфиром и. растворяют в ЯМР, 8 С1)С1, млн : 1,35.(6Н, д, 90 -ной водной ТФК. После стояния в = 6 рц)- 3 450 (2Н ) 4 35 (2Н. течение получаса при комнатной ТеМ с); 4,58 (1Н, м, I - 6 I p); 5,00 пературе смесь концентрируют при по» (1Н Z вв 4 5 гц) 5 ° 91 .(1H @-8 ниженном давлении. К концентрату . y 4,5 и 9 I"g,. g д „ D.0 у4 5 I+) .добавляют эфир для отделения чет- : 6,68 (.1Н с) 6 88 (1Н с) ° 7 25 вертичного продукта, который соби- (25Н, с), Рают фильтрованием и растворяют в . В. Дифенилметиловыд эфир 3-иоф50 небольшом количестве метанола, Раст- метил-7-((Z) 2-(2-пропоксинмино)2 вор хроматографируют в колонке HP-2 -(2-трнтиламинотиазол-4«нлацетами - (40 мл). Элюирование ЗОХ-ww водным доj-3-цефем-4-карбоновой кислоты.

СН30Н с последующей лиофилизацией Смесь (Z)-2-(2-пропоксиимино)" дает 0,062 г смеси изоиеров 4 и b> 55 -2-(2-тризтиламинотиазол-4-ил)уксус(b 5:1). Смесь очищают с помощью ной.кислоты (500 мг, 0,55 ммоль) жтВД ("Лихросорб ЕР-18", 8 х 300 мм, . и иодида.натрия (248 мг, 1 ° 66 54е(Ноль)

15 метанола), и целевой b5 -изомер в ацетоне (10 мл) перемешивают урн

7 . 1250173 8 комнатной температуре в течение П р и и е р 6. 7 (7)-2-аллилоксн.

5 мин. После упаривания остаток имино-2-(2-аминотиазол-4-ил)ацетаиирастворяют в этилацетате (15 мл), до)-3-(1-метил-1-пирролидипий)метилпоследовательно промывают 10Х-ным .. -3-цефем-4-карбоксилат (с1). водным тиосульфатом натрия (10 мл), 5 А. Бензгидрнловый эфир 7-j(Z) -2" .. водой (10 мл) и водным NaC1 (10 мл), -аллилоксиимино-2-(2-трнтиламинотиаосушают над сульфатом натрия и упа- зол-4-ил)ацетамидо) -3-хлорметил-3- . ривают с получением 494 г (90X) ука« - . -цефем-4-карбоновой кислоты. занного целевого соединения. В суспеиэии бензилового эфира-7ИК-спектр, (KBr), Ч ще с, ст " и 10 -амино-3-хлорметил-3-цефем-4-карбо3360; 3040; 3020; 2960; 1785; 1720; новой кислоты (1,35 r, 3 ммоль) в

1680; 16 Оу 1520у 1500у 1450„ 1370у метиленхлориде (20 мл) добавляют БСА

1300; 123 ; 1150; 1115; 1080, 990; (1, 1 мл, 4,5 ммоль) и смесь перемеши900; 840; 750; 700. вают в-,течение поЛучаса при комнатной

УФ-спектр, ф ЕВОН, нм, (К): 240 1 . температуре с образованием проэрач(24900); 260 (19400). ; ного раствора. Смесь (2) -2-аллилоксиЯМР, 8 СВС1, млн ": 1,30 (6Н, д имино-2-(2-тритиламинотиазол-4-ил)ук-

6 Гц), 3,37 и 3 ° 70 (1Н каждый,, сусной кислоты (1,40 r, 3,0 ммоль) д, I 16 Гц); 4,22 (2Н, с), 4,55 и пятихлористого фосфора (690 мг, (1Н, м, I 6 Гц); 4,95 (1Н, g, . 20 3,3 ммоль) в метиленхлориде (2p мл)

I 4,5 Гц); 5,83 (1Н, g-g) 1 4,5 перемешивают в течение 15 мин при 9 Гц, g для РсО); 6,66 (1Н, c), комнатной температуре и выливают в

6,87 (1Н с); 7,25 (25 Н, c). виде одной порции в раствор триме С; 7- j(Z)-2-(2-пропоксиимино)- тилсилилированного соединения У.

-2-(2-ам нотиазол-4-ил)ацетамидо)- 25 Смесь перемешивают 20 мин при ком.-3- ((1-метил-1-пирролидиний)метил)- наткой температуре и разбавляют этил-.

l-3-цефем-4-карбоксилат (1с). ацетатом (200 мл), промывают водным .Смесь соединения по примеру 5В бикарбонатвм натрия и водой, осушают (545 мг, 0,55 ммоль) и 1-метилпир- и отгоняют при пониженном давлении. ролидина (70 мг, 0,82 ммоль) в ди- З0 Маслонодобный остаток очищают на сихлорметане (10 мл) перемешивают при ликагеле методом хроматографии в кокомнатной температуре в течение по- . лонке (" Вако-гель", С-200, 30 r). лучаса и разбавляют эфиром (100 мл). Колонку элюируют хлороформом и комРезультирующий остаток собирают бинируют фракции, содержащие целевой фильтрованием. Раствор осадка в З продукт. Отгонка при пониженном дав90Х-ной ТФК (4,5 мл) перемешивают ленни дает целевой продукт в виде при комнатной температуре в течение, аморфного порошка, выход 2,32 r получаса и.упаривают s вакууме. Oc- (89X). Т. пл. 100-115 С (разложение). таток растирают с эфиром с. получе- ИК-спектр (KBr),, кс, см ": кием 3 17 мг сырого продукта, кото - 40 3990; 1790, 1730, 1680; 1530; 1380; рый хроматографируют в колонке HP-20 1250; 1160, 1020. (50 мп), элюируют водой (500 мл) и ЯМР, E CDClb, млн . 3,50 (2Н,,.ЗОХ СН1ОН (500 мл). Элюат в ЗОХ-ном 2-Н); 4,32 (2Й, с, 3-СН .); 4,6-6, 1 .СН ОН концентрируют и лиофилизуют,, (7Н, м, СН СН=СН 6,7-Н); 6, 70 (1H, с йолучением 109 мг смеси изомеров 4> с, Н тиазола); 6,90 (1Н с Ph

Ъ < 3

° t 2 b и b (b / b 6/1), 100 мг которого 7 ° 1-7,6 (ÇOH, м, протоны фенила) . ..очищают с помощью ЖХВД ("Лихросорб

И

RP-.18 ° 15X МеОН), получая 5 мг (ЗХ) l4 64. К 7 50 7 30. 8 6 85 6,85; целевого соединения пО примеру 1С С1 7 55 7

° S Э

C ö Н N О, э Cl ° 1/3 СПС1

УФ-спектр, )щ„"„, (рН 7, буфер),нм ° Рассчитано,X:Ñ 64,05; H 4,45; (с.): 236 (15100), 252 (14600) .. N 7,73, S 7,0д, С1 7,82.

ЯМР: е D О, млн : 1,42 (6Н, д, В. Бензгидриловый эфир 7- j(Z)—

I 6 Гц); 2, ЗЗ (4Н, с); 3, 1О (ЗН, с); -2-аллилоксиимино-2-(тритиламинотиаЗ,ф5 (4Н, c); 3,83 и 4,23 (1Н, каж- 55 зол)-4-ил)ацетамидо)-3-иодометил-3- ,дый, д, I 17 Гц); 5,45 (1Н, д, I -цефем"4-.карбоновой кислоты. 4,S Гц); 5,95 (1Н, д, 1 4,S Гц); Смесь соединения по примеру 6А

7 ° 05 (1Н, с). (2,30 г, 2,65 ммоль) и иоднда натрия

12 (2 г, 13, 3 ммоль) в ацетоне (15 мл) перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем упаривают при пониженном давлении. Раствор маслоподобного остатка в этилаце" тате (200 мл) промывают 10Х-ным тиасульфатом натрия и водой, упаривают при пониженном давлении с получением указанного соединения в виде аморфного порошка, который используют на следующей стадии без дальнейшей.очистки. Выход 2,52:г (99 ).

С. 7- ((2)-2-анлинаасиииино-2-(2-аминотиазол-4-ил) ацетамидо) -3-({1-метил-1-пирралидиний)метился-3-цефем-4-карбоксилат (1)., Смесь соединения по примеру 6В (478 мг, 0,5 ммоль) и Н-метилпирролидина (0,05 мл, 0,5 ммоль) в метиленхлориде (5 мл) перемешивают 20 мии при комнатной температуре и разбавляют эфиром (50 мл) для осаждения. четвертичного продукта (выход 500 мг), Смесь четвертичного продукта и ТФК (2 мл) отстаивают при комнатной температуре. в течение полутора часов и разбавляют эфиром для осаждения сы» рай соли ТФК продукта (выход 265 мг), которую хроматографируют на колонке

HP-.20 (1,8х 18 см). Колонку элюируют водой и ЗОХ-ным водным метанолом.

Метанольный элюат упаривают при па- . нк»(енном давлении и остаток.леофилизуют с получением аморфного порошка (выход 124 мг), который содержит целевой. продукт (17 ) и соответствующий Р-изомер (83Х). Смесь очищают с помощью ЖХВД {"Лихросорб RP-18", 0,01 М,НН,Н,РО„(pH 7): СН,ОН85: 15) . Элюат подкисляют до рН 3 . разбавленной HCl и хроматографируют на колонке HP-20 (1,8.х 10 см) .Колон ку элюнруют водой, а затем ЗОХ-ным водным метанолом. Метанольный элюат упаривают при пониженном давлении и остаток лиофилизуют с получением а цел(вого указанного соединения (f 8) в виде аморфного порошка (выход

13 мг, 5,1Х). Т.пл. 155 С (разл.)

ИК-спектр, (КВг) )щ,ке см

3600-2800; 1 7 70 1670, 16 1 0; 1 530;

1200.

УФ-спектр, (рН 7, буфер), нм «)

235 (!6600); 253 (15600).

ЯМР; д D О ° млн "а 2»1-2 ° 5 (4Нр с, и пирролиднна) 3, 10 (ЗН, с, CH3} °

3,4-3,8 (4Н, м, пирролидина); 5,95

50123 10 (1H g, 4Н, T Н)," 7,10 (1H, с, Й тиазала).

П р и и а р 7. 7-(2-(2-анинотиазол-4-ил)-(Z}-2-карбоксипрап-2-оксиимино-ацетамида)-3-((1-метил-1-пирралидиний)метил)-3-цефем-4-карбаксилат (1е).

A. Бензгидриловый эфир 3-хлор- . метил.-7"t(Z)-2-(2-трет-бутоксикарба16 нилпроп-2-онсиимино-2-(2-тритиламн-; нотиазал-4-ил)ацетамидо) -3-цефем-4-карбоксиловой кислоты.

М е v о д и к а 1. Смесь (Z)-2(2-трет-бутоксикарбонилпроп-2-оксиимино)-2-2-тритиламинотиазал-4-ил)уксусной кислоты (1,94 г, 3,6 ммоль), ДДЕ (742 мг, 3,6 ммоль) и И-гидроксибензтриаэала (486 мг, 3,6 ммоль) в тетрагидрофуране (ТГФ) перемешивают при комнатной темпера" туре в течение 45 мин, на протяже" нии которых отделяется дициклогек .. силмочевина. Последнюю удаляют филь" трованием и фильтрат смешивают с бенэгидрилавым эфиром 7-амина-3-хлорметил-3-цефем-4-карбононой кислоты (1,5 г, З,б ммоль)., Смесь перемешивают на протяжении ночи при комнатной температуре, а затем у а< ривают в вакууме. Остаточное масла растворяют в,СНС1 (20 мл), промывают насыщенным водным NaHC0> и насыщен" ным водным НаС1 осушаюг над NgS04 и упаривают до сухого остатка. Оста35 ток" (3,9 г) растворяют в í-гексане!

СНС1 (1:2) и пропускают через ко- . лонку с силикагелем {40 r), используя ту же систему растворителей.

Фракции, содержащие целевое соеди40 некие, упаривают в вакууме с полу- . .чением 1,3 г (39X) указанного сое,динения, плавящегося при температу ре свыше 100 С (разл.).

L »

ИК СПЕКтр р (КВГ )» ра(а(а7(р ° .СМ

4э 3990; 1790;1715,Ó 16 0.

УФ-спектр, 1„ „ е (ECOH) нмг

240 {В т 280) 265 (Е» 190)

ЯМР; 8 СВС1, млн : 1,45 (5Н,с);

1,63 Е I 66 (6Н, квжд. с); 3,49

Ю (2H, широкий с)", 4,34 (2H, с), 4,96 (1H,. д, X 4,5 Гц), 5,90 (1H д-д, Х 4,5 и 7,5 Гц); 6,66 (1Я, с), 6,86 (1Я, с); 7,0-7,.5 - (25И, м);

8»23 (1Я, д» Х m 795 Гц) °

И . М е т о д и к а 2. Раствор беяэнлового эфира 7-амина-3-хлорметил-3", цефем- Ф-карбоновой кислоты (1 86 r, 4,49 ммоль) в СЯ>С1

12

12501 73

11 (46»5 мл) обрабатывают в течение ляют эфиром (SO мл) . Образующийся

40 мин с получением прозрачного раст- осадок собирают фильтрованием и про. вора К раствору добавляют растнор . MblHAx)T эфиром,с получением 420 мг клораигидрида киСюи ты» который полу-. четвертичного продукта, который дечают нз соединения III а (2,56 г, 5 блокируют 907-ной ТФК (4,2 мп) при

4,49 ммоль) и РС11 (1,12 г, хомпатной температуре в течение 1 ч.

38 ммоль) i метиледхлориде (26 мл). Затем реакционную смесь упаринают до

Смесь перемешивают при комнатной сухого остатка. К остатку добавляют температуре а течение получаса, вы- эфир с получением сырой ТФК-соли ливают в холадную воду (100 мл) и эк- lO соединения 1ь (245 мг, количествен-: страгируют зтилацататом (3 х 50 мл). ный выход)« котоРый пРедстанллет соз

Скомбинированные экстракть1 промывают бои смесь 1:4 изомеРов > и b Сырой водным NaClj осушают и упаривают. продукт подвергают очистке методом

Остаточный сироп (5 г) хроматографи- . ЖХВ4 ("Лихросорб RP-18": 4 х 300 мм, руют и колонке с силикагелем (100 r) . 15 элюирование 0,01 И ал1мсний-фосфатным элюированйем 10: 1 смесью толуола и буфером (РН 7,0), содержащим 10% этилацетата. Фракции, содержащие це- СН ОН). Фракцию, содержащую целевой левое соединение, комбинируют и упа- продукт, собирают и упаривают до неривают с получением 2»84 г (65%) ука.- большого обьема. Концентрат доводят задного соединения, 20 до РН около 2 добавлением 1М НС1 и пропускают через колонку HP-20 (2 х

Элюат упаривают и лиофилизуют с по" лучением 2 1 мг (f0%) целевого про500 мг Q 53 ммоль) и ЫаЛ ° (240 мг, дукта (fr ) в Виде бесцветного порош6 мь оль) в ацетоне (3 мп) переме- ка. Т. пл. 160 С (разл.). е1ивают 2 ч при комнатной температу- ИК-спектр, (KBr) 3 см ": 3400 .

l ае, а затем упарнвают к вакууме. К .. остатку добавляют CH Cl< (20 мл) и - Уф-спектр ),цд с фосфатный буфер, еоду (10 мл). 0ргаиичаский слой про- РН 7, нм (K): 237 (15700), 257

1иывают 10 об.%, раствором тиоауль- (155500). фата натрия (5 мл) и йоддым ЯаС1 ЯМР, Ю Р О, мпн ": 1,65 (6Н, с); (5 мл), осушают иац И880 и упаривают 35 2,3 (4Н, м); 3,09 (ЗН, с), 3,7 (4Н, до сухого остатка с получением 540 мг .м); 4,0 (2Н, м); 5,44 (1Н, д); (50%) указанного соедииеиия р виде 4, 8 Гц = 5, 94 (1Н, д), ?, 15 (1Н, с) . аморфного порошка, плавящегося при Соединения формулы 1 проявляют f00 С (разл.) .. высокую антибактериапьную активность, ИК-спектр .(KBr) » „„,см ": 3350; I в отношении грамположительных и грам1790» 1690. отрицательньпс бактерий, пригодны для

УФ-спектр, « EtOH: 240 (Е 270) : лечения бактериальных инфекций живот265 (Е,ст 190

pj»» 1Н « иых, а также человека, могут быть исЯИР, ЮСЭС1З« млн ": 1«44 (9Н, с), пользованы для приготовления препа1,á5,(6H, с); 3,54 (1Н 4,28 (2Н,с), 4> ративных форм, предназначенных для

4« 98 (1Я» д, Х 4,5 Гц) 5« 85 (1Н, употребления парентерально, обычным д"д« Х 4«5 и 7«5 Гц), 6»70 (1Н,c)"» путем с применением известных фарма- .

6«90 (10, с}; 7, 1-7,5 (25H» м). - цевтических носителей и эксципиенС. 7- р-(2-амииотиааол 4-ил)-(Z)- . тов.и могут быть представлены в ниде

-2 (2-карфоксипроп"2-оксиимино)ацет-. > единичных доэировочных форм или н амидо)3-((1-метил- 1-пирролидиний)ме- виде множественно-дозироночных фдрм.. тил -Э-цефем"4"карбоксилат (ff»). композиции могут быть представлены в

Смесь, иодометильиого производ-, виде растворов, суспензий или эмульного по примеру 7В (538 мг 0»51 ммоль). . сий в масляных или водных разбавите-. и,N-метилпирролидииа (О«079 мл» 55 лях .и могут содержать. обычные дисо»076 ммоль).в СИ С1 (10«8 мл) от- . пергирующие,. суспендирующие и стастаивают при комнатной температуре билизирующие вещества. Композиции в течение получаса а затем разбав- могут быть представлены в виде сухо»

12501

S ну; Я Zf СН, Н соон б М цефотаксии соединение для сравненн»

g+c-.сонь н,с+си, В

Щ-й

СОО цефтаэидим,:соединение дл» сравнения м. о (,е -снД ) („

СОО СНЗ

082 испытуемые соединения го пороика, предназначенного для разбавления перед употреблением, например, стерильной водой, не содераащей пирогенных,веществ. Соедине ния формулы 1 могут быть такие при- э готовлены в виде свечей, испольэующих обычные для этой цели основы, например, масло какао или другие 1m цернды. При кеобходнмости предлагаемые соединения.могут быть предписаны 10 в .сочетании .с другими антибиотиками, такими как пенициллины или другие цефелоспорикы.

В случае приготовления в аиде еди-: ничных Доэировочных форм композиЦии 13 предпочтительн6 содеркат 50.-1500 мг активного ингредиента формулы I.Для лечения взрослых дозировка предпочтитеаьно составляет 500-5000 мг/сут в зависимости от частоты и способа 20 приема. В случае вкутрнмавечкого или внутривекного введения взрослому человеку полкая доза в корме обычно составляет 750-3000 мг/сут в виде разделънык дозировок, хотя дл» неко- 23 торых соединений монет потребоваться более высокая суточная доза в случае

73 14 . инфекций бактериями рода Pseudomonas.

Предпочтительными являются соединения формулы 1, в которых R - метил или этна, Наиболее предпочтительное соединение с R - -метил. В ходе первичной оценки предлагаемых соединений иннималъную ингибирукщую концентрацию (ВВ) для соединений идвух соединений для сравнения (цефотаксим и цефтаэидим)- определяют методоидвукратного разбавления агара с нспоаь» зоваиием агара Мюллера-Хинтона для .32 втаммов искытуеиас органкзмов ° поделенных ка весть групп.

Геометрические средние значения

NHK определенные в этом эксперимен-. те, приведены в табл., 2 н 5.

Уровень. содераания в квоки после внутраеезечного.введения мыиам (20 мг/кг) приведен, в табл. 3.

Реэистентность (ИЖ >i 8 sect /мл) к одному. нлн нескольким испытуемым соединениям среди 240 итаммов Entегоbacterieceee в. среде Мюллера-Хинтока показана В табл е 4 °

2501 73

Таблица 1

Экспе рнмен

Растворитель

Выход, 7

Время реакции, мин

Отношение

Ь ) ь

Отношение соединения по примеру 1В, г к растворителюэ мл

1/8

15

1:20

2 СН Cl эфир (1/10)

3 Этилацетат/ эфир (1/10) 4/1

15

1: 100

1: !00

1:100

fç :100

1: !00

1:60

1:60

15 27

2/1

64

5 Эфир

6/1

6?

, 3/f

3, 5/1

15

1/2.82

15 t

1 Все испытуемые соединения более активны, чем цефотаксим в отношении групп (G-.)-II и (С-)-121 испытуемых организмов, причем наиболее предпочтительное соединение !а является явно более активным, Все испытуемые соединения более активны, чем цефтазидим в отношении групп (С+)-l и (С+)-1, испытуемых организмов,причем наиболее предпочтительное сое° Ю динение 1о явно активнее цефтазидима в, о ношении всех групп испытуемых организмов, эа исключением (С-)-Ш, которые несколько более чувствитель- . ны к цефтазидиму. .Абсорбцию наиболее предпочтитель-. ного соединения 1о и соединений для сравнения (цефотаксим и цефтазидим) определяли на мышах после однократной внутримышечной инъекции испытуемого соединения (растворенного в

1М фосфатном буфере, РН 7) при до- . зировке 20 мг/кг. Пробы крови соби- рали из орбитальньис синусов в обра- ботанные гепарином капиллярные трубки и высевали на среду Июллера-Хинтона с использованием Horganella

Morganii А 9695 в качестве нспытуемого организма. Уровни содержания s крови в различные промежутки времени, величины полупериодов (t /e) иплощади под кривыми (ППК) представлены в табл. 3.

Проводили также испытания для выявления организмов, резистентных к предпочтительному соединению форму лы Io, цефотакснму и цефтазиднму.

Значения МИК для этих трех соединеHlfA B .отношении 240 штаммов Еп етоg bacteriaceae определяли в среде Июлt лера-Хинтона и значение ИИК, равное или превышающее 8 для не менее одного иэ испытуемых соединений, произвольно принималось эа свидетель"

10 ство резистентности организма. Из

240.штаммов 27 оказались реэистентными не менее чем к одному нэ нспы-. туемых соединений. Иэ табл. 4 следует, что 3 организма резистентны к

15 соединению lo, 15 к цефтазидиму и 18 к цефотаксиму. Соединение Ie. активнее цефотаксима в отношении группы (С-)-II испытуемых организмов и намнбго активнее цефотаксима в

20 отношении группы (G-)-.Ш .испытуемых организмов (Ps ° aeruginos Оно активнее цефтазидима в отношении

scex групп грамположительных испытуемых.организмов, исключая. (G-)-III (Ps. aeruginosa) которые чувствительнее к цефтазидиму, Испытуемое соединение по табл.. 5.

30 1..!н, „/ ) - 2-ск -я ) oe) Н С-1"СИ

COOH .

1250173

Геометрическое среднее (С+)-Ь (5 втам мов) -)- fci (5) . (С-) - Q (6) (С+)-Y (5) (G- ) "П (5) (С-) -Ш (6) ЮМФ ФЮЮЮЮВВ\В

2,8

0 33

3 1 0,025 0,13

192

1ml R-метки

5 6

Зе 1 01087 Ов 32

1,0

1Ь, R-этил . 1,4

36 035 13 о

36 053 11

3,2

1с; R-ssoaypnsm 1,4!

2,4

1д; R-aswarm» 1,8

Цефотаксим (а)

Цефтаэидим (а) 22

1,О 2,2 0,015 0,35

12 . 0,070 1,7

4,1

1,8

2,6

5,1

П р и м е ч а н и е. (G+)-1е(ф ) ВВ1Ь (G-)-1 (С-)-1Ь(С-)-II(С-)- И1 (ы)1Таблица 3!

Соединение е 1/2, н

IlIIK9 мкг ч/мл

° В Вт

1о, Rметнл (а) 207 196 136 38 . 40 «0 9 $7

13 5

Цефотаксим (Ь) 14,9

Цефтазнднм (с) 21,5 18,4 14,9 8,7 4,4, «0,8 17

13,8

П р н м е н а н и е. (е) - среднее эначение для 2-х испытаний," (Ь) - одно испытание, (c):- среднее эначение для 3-х испытаний.

Ю ° В ВВ .Соединение

° В!

Таблица 2 и эначенне MHK мкг/и.

ВВ (5 атаммов), чувствительный к пенициллину; (5 итаммов), чувствительнын к пенициллину; . (2,итамма); Е,(1 втамм) и (2 итамма), чувст-, вительные к цефайотину, (Э итамма) и (3 итамма), реэистенаные к цафалотину; (1 итамм), (2 итамйа) и (2 атаюеа); (6 итаммов); среднее значение по пяти экспериментам..

° ° В

Уровень содериания в крови, мкг/мл, sa время после введения, мии

10 20 30 45 60 90

27 ° 8 19э3 13еО ° 9э1 4эб 1 ° 2 15

1250173!

Таблица оличеств таммов

Организм

Escherichia coli

Escherichia coli

0,25

0,5

Ф

0,13

13

0,25

40

0,5

1,6 63

>63

>32 р63

0,35

32

0,03

° 0,06

Ъ63 Proteus vulgaris

0,06

2,8

16

>63 63

27

18

Klebsiе11а pneumoniae

Entегоbacter aегоgenes

Entегоbacter aегоgenes

Entегоbacter с lоасае Entегоbacter cloacae

Entегоbacter сlоасае

Entexobacter сlоасае

Citrobacter freundii

Citrobacter species

Horganella morganii

Serratia marcescens

Serratia marcescens

Serratia marcescens

Serratia marcescens

Serratia marcescens

Общее число резистентных втаммов

Геометрическое среднее значение

ИИК, мкг/мл оединение цефазидин цефотаксим

Та

1250173 22

Таблица 5

1 T

Испытуемые ор- Соединение ганизмы te

Цефтазидим (а) Цефотаксим (а ) (С+) -1а (5 итаммов) 1,0

5 ° 1 (С+) - 1Ь (5) 2,2

12

0,070

09015 (С-)-1а (5)

Ф (G-)-1Ь (6) 0,066

0,79

1,2

0,35

1,7 (С-)-Х1 (5) (G-)-III . (6) 4,1

2,6 22

4,0

1,8 чувствительный к . пенициллину (5 итаммов); чувствительный к пенициллину (5 атаммов); чувствительный .к цефакотину (2 итзмма), К1.(1 итамм) и (2 итамиа); резистентный к цефалотину (3 итамма) и (3 втамма); (1 штамм),, (2 атамма) и (2 итамма), (6 итаммов), среднее значение для 5 экспериментов.

Ю

II р н м е ч а н и е. (G+)-1e(G+)-1Ь(с ),jd-.

1 (С-)-jL(С-)-И (С-)- (е) Составитель 3.Латыпова

Редактор А.Козориэ Техред Н.Боикало: Корректор А.Зимокосов

ФВ Ю ВЮ ЮЮ И °

Заказ 4341/60 Тнрак 379, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР . по делам изобретениф и открытий

113035, Москва, 5-35, Рауаская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Уагород, ул. Проектная, 4