Способ получения сыворотки плодов животных

 

Изобретение касается использования продуктов животноводства и направлено на более полное использование отходов производства каракульчи путем получения сьшоротки при сохранении целостности шкурки плода. Одновременно с убоем овцематок из околоплодных оболочек через шейку матки извлекают плод. Плацентарное кровообращение сохраняют. Переживают пуповину до появления самостоятельного дыхания . Кровь берут путем пункции правой артерии пуповины при одновременном пережатии левой артерии и непрямом массаже сердца. Отделенная сьюоротка пригодна для культивирования клеток млекопитающих. С обескровленного плода снимают каракульчовую шкурку. (Л эо 0д

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

С(Х1ИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) А1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по делАм изОБРетений и ОткРыти (21) 3784087/28-13 (22) 26.06 ° 84 (46) 23.06.87. Бюл, 1(23 (71) Каттакурганский специализированный комплекс по откорму овец Госагропрома УЗССР и Государственный научноисследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича (72) З.С.Кондрашова, О.В.Бодехина, Б.И,Анохин, Н.Зульпитдинов, А.А.Никольский, С.Т.Каршиев, Н,Ибадов, С.Г.Дзагуров, Г.M.Гнуни, Л.И.Игудин, В.Н.Павлов, С,Д.Светлышев, Н.В.Шалунова, О.Г.Имамалиев и И.Г.Баландин, (53) 615.373(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 733603, кл. А 22 В 5/00, А 61 В 17/00, 30.03,78.

Авторское свидетельство СССР

В 1089777, кл. А 01 К 62/00, 1983. (5)) 4 C 12 00 5 02 А 61 В 17/00 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТКИ ПЛОДОВ ЖИВОТНЫХ (57) Изобретение касается использования продуктов животноводства и направлено на более полное использование отходов производства каракульчи путем получения сыворотки при сохранении целостности шкурки плода. Одновременно с убоем овцематок из околоплодных оболочек через шейку матки извлекают плод. Плацентарное кровообращение сохраняют ° Пережимают пуповину до появления самостоятельного дыхания. Кровь берут путем пункции правой артерии пуповины при одновременном пережатии левой артерии и непрямом массаже сердца. Отделенная сыво ротка пригодна для культивирования клеток млекопитающих. С обескровленного плода снимают каракульчовую шкурку

t 13186

Изобретение относится к животноводству, а точнее к использованию продуктов животноводства в биотехнологии, Цель изобретения - получение макси- мальиого количества сыворотки, пригодной для культивирования клеток млекопитающих, при одновременном сохранении целостности шкурки плода.

Пример 1. На конвейер мясо lO комбината подается группа (500-1000 голов) суягных овцематок со сроком беременности 130-135 дн. На конвейере при убое овцы одновременно через разрез белой линии ее брюшины отделя- 15 ют плод со всеми околоплодными оболочками и сразу перекладывают на специальный стол-конвейер, где без какой-либо задержки вскрывают околоплодный пузырь, и синхронно сокращению стенок матки на стол вытягиваются через шейку матки плод и его пуповину без нарушения плацентарного кровообращения плода. В целях увеличения забора плодной крови искусственно

25 включают у плода легочный круг кровообращения, путем пережатия на несколько секунд (10-15) всех сосудов пуповины до появления у него самостоятельного дыхания. Забор крови делают при полном дыхании плода из правой пуповочной артерии, идущей от плода к плаценте, при этом левая вена и левая артерия пуповины плода зажимаются хирургическими зажимами. Забор 35 крови производят: иглой "И-52" с дренажным устройством в стерильные сосуды, заполненные азотом.

В дальнейшем из собранной плодной крови выделяют и хранят фетальную 40 сыворотку по общепринятой технологии, а обескровленный плод затем поступает в сырьевой цех для снятия с него каракульчовой шкурки.

Пример 2. На конвейер комбината подают овцематку каракульской породы суягности 130-135 дней и после ее забоя помещают на операционный стол. Оператор вскрывает овцематку, а затем околоплодный пузырь, не нару- 50 шая целостности пуповины. В такт сокращениям матки осторожно вытягивают голову плода из пузыря.Второй оператор освобождает наружные дыхательные пути от слизи и для включения дыха- 55 ния и легочного кровообращения у пло.да зажимает рукой все сосуды пуповины примерно на 10-15 с, до появления

13 2 первого вздоха. Третий оператор зажимает на расстоянии 4-5 см от пупочнаго кольца левую вену, по которой кровь идет от плода к плаценте, четвертый обрабатывает правую пульсирую" щую артерию 5-10Х-ным раствором иода, пятый подставляет под правую артерию резиновый турникет и слегка натягивает сосуд, шестой вводит в артерию иглу и через дренаж осуществляет забор крови в стерильный стеклянный флакон, заполненный азотом. По окончании процесса обескровливания плод поступает для снятия шкурки„ а флаконы с кровью после 2-3-часового выдерживания при комнатной температуре помещают в холодильник при 8 С на 12 ч, после чего сыворотку, отделившуюся от сгустка, отсасывают во флаконы в асептических условиях, замораживают и храо нят при -10 С.

Пример 3. Применение сыворотки плодов овец 130-дневного возраста для культивирования клеток фибробластов куриных эмбрионов.

Куриный эмбрион 9-дневного возраста извлекают в стерильную чашку Петри, где удаляют глаза, клюв, лапы и крылья. Оставшуюся тушку промывают в трех сменах раствора Хенкса и измельчают на кусочки, равные примерно

3 мм в поперечнике. Измельченную ткань снова промывают в трех сменах раствора Хенкса и переносят в коничес кую колбу для трипсинизации. В колбу добавляют 0,257.-ный раствор трипсина в растворе Хенкса (200 мл на 5-

10 эмбрионов), а затем помещают в цилиндрический магнит и на магнитной мешалке перемешивают суспензию в течение 1 ч при комнатной температуре.

Затем клетки осаждают центрифугированием (10 мин при 600 об/мин), промывают в растворе Хенкса, вторично центрифугируют и суспендируют в ростовой среде следующего состава: сыворотка плодов овец 130-дневного срока беременности 10 и 0„5Х-ный гидролизат лактальбумина на растворе Хенкса 907.

Посевная доза составляет 500000 клеток/мл на пробирку, куда разливают по 2,0 мл суспензии. При культивировании клеток монослой сформируется на 2-е сутки, Пример 4 ° Условия те же, что в примере 2, но используют только сыСоставитель А,Семионов

Техред М.Моргентал Корректор И.Муска

Редактор В.Петраш

2479/22 Тираж 499 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 13 воротку плодов овец 135-дневной беременности.

Пример 5. Применение сыворотки плодов овец 132-дневного возраста для культивирования клеток СПЭВ (перевиваемая культура почки эмбриона свиньи).

9 мл взвеси клеток СПЭВ при посевной дозе 100000 клеток(мл вносят во и флакон с рабочей поверхностью 20 см

Питательной средой служит среда—

0,5Х-ный . гидролизат лактальбумина в растворе Хенкса, рН 7,6. Клетки помещают в термостате при 37 С. Сыворотку плодов овец 132-дневного возраста 10Х-ной концентрации в среде

199 добавляют во флакон с клетками на 3-4-е сутки. Контролируют рост клеток при световом микроскопировании, и по мере формирования сплошного монослоя используют для репродукции вирусов.

Испытание сыворотки крови плодов овец каракульской породы на ряде других клеточных линий показывает, что

) 8613 4 она вполне может заменить дефицитную фетальную сыворотку крупного рогатого скота, помимо того, источник ее практически неисчерпаем, так как получае ся она из отходов производства каракульчи. !

Формула изобретения

1Q Способ получения сыворотки плодов животных, включающий забой беременного животного, извлечение плода, его обработку, отбор крови и отделение сыворотки, о т л и ч а ю щ и й15 с я тем, что, с целью получения сыворотки при сохранении целостности шкурки плода, из животных используют овец, плод извлекают иэ околоплодных оболочек через шейку матки, сохраняя

20 плацентарное кровообращение, пережимают пуповину до появления самостоятельного дыхания и берут кровь путем пункции правой артерии пуповины при одновременном пережатии левой артерии с левой веной и непрямом массаже сердца.