Способ диагностики целиакии

 

Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - повышение точности способа. Суспензию лимфоцитов смешивают с равным объемом раствора глиадина. После инкубации лимфоциты.осаждают. .Надосадочную жидкость сливают, осадок ресуспендируют, отмывают и центрифугируют. В пробирки добавляют раствор отрицательно заряженного хромофора и регистрируют флюоресценцию. Для целиакии характерно интенсивное свечение лимфоцитов. Способ позволяет диагностировать целиакию в ранние сроки. U) 00 tn эо

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

4335 А1 (19) (И) (s)) 4 С 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4000094/28-14 (22) 30 ° 12.85 (46) 07.10.87. Бюл. Ф 37 (71) Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии (72) А.С. Логинов, Р. Б. Гудкова, Н.И. Екисенина и Т,М. Царегороцева (53) 615.375(088.8) (56) Scott Н. Fausa Т.Е. Scand, J. Immunol, 1983, 18, N- 3, р. 185191. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЦЕЛИАКИИ (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — повышение точности способа. Суспензию лимфоцитов смешивают с равным объемом раствора глиадина. После инкубации лимфоциты. осаждают.,Надосадочную жидкость сливают, осадок ресуспендируют, отмывают и центрифугируют. В пробирки добавляют раствор отрицательно заряженного хромофора и регистрируют флюоресценцию. Для целиакии характерно интенсивное свечение лимфоцитов. Способ позволяет диагнос тировать целиакию в ранние сроки.

1343358

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим способам диагностики, и может быть использовано для дифференциальной диагностики хронических заболеваний тонкой кишки и специфических подходов к лечению.

Цель изобретения — повышение точности дифференциальной диагностики целиакии и хронического энтерита.

Способ осуществляется следующим образом.

У больных натощак берут из локтевой вены 4 мл крови в пробирки с гепарином (25 ед, на 1 мл). В пробирки доливают равный объем физиологического раствора. Для вьщеления лимфоцитов 4 мл разведенной крови наносят на 2 мл раствора фиколл-верографина (плотность 1,08) и центрифуги руют 30 мин при 3 тыс. об./мин, Полученное белое кольцо (лимфоциты и моноциты) отсасывают пипеткой в сухую пробирку и дважды отмывают срезой 199 (по 5 мл) с повторными центрифугированиями по 5 мин, при

1500 об./мин, Полученную суспензию для удаления прилипающих клеток инкубируют на пластиковых чашках Петри в термостате при 37 С в течение

30 мин. Затем подсчитывают лимфоциты в камере Горяева. Концентрация

6 лимфоцитов доводится до 1 10 в

1 мл. Суспензию лимфоцитов вносят в пробирки (не менее 5 параллельных проб) по 0,1 мл и смешивают с равным объемом раствора антигена-глиадина, приготовленного на физиологическом растворе рН 7,2-7,4, и в контрольную пробирку — 0,1 мл физиологического раствора вместо антигена. Пробирки инкубируют в течение 1 ч в термостате при 37 С. Взятые дозы глиадина являются оптимальными,так как дозы ниже 3,5 мг/мл не дают стабильности показателей свечения, а дозы больше

5,5 мг/мл токсичны для мембраны .лимфоцитов. После инкубации лимфоциты осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1500 об ° /мин, надосадочную жидкость осторожно сливают, осадок ресуспендируют 1 мин и дважды отмывают в 5 мл физиологического раствора по 5 мин с последующим центрифугированием.

Для определения флюоресценции в пробирки доливают и о ?,5 мл физиоло-Ъ гического раствора и 0,05 мл 5 10

I)

50 раствора 1-анилино-8-нафталиносульфоната (АНС ) — отрицательно заряженного хромофора. флюоресценцию регистрируют на спектрофлюориметре.

Квантовый выход возбуждают при 470 нм и регистрируют при 470 нм. Количественные показания на шкале прибора свидетельствуют об интенсивности свечения мембраны лимфоцитов, и выражают их в относительных единицах.

В результате исследования лимфоцитов периферической крови у больных целиакией и хроническим энтеритом II степени тяжести при действии глиадина выявлены значительные различия в интенсивности флюоресценции.

Полученные данные показывают, что только у больных целиакией выявляется интенсивная флюоресценция лимфоцитов после обработки их глиадином. Интенсивность свечения лимфоцитов у больных целиакией при действии глиадина достаточно отличалась от показателей флюоресценции у больных хромическим энтеритом II степени тяжести (р 0,001). Следовательно, в реакции выявляется специфическая реакция лимфоцитов у больных целиакией после предварительной обработки их глиадином, Пример 1. Больная T. 39 лет °

Жалобы: на частый жидкий стул, боли по всему животу, снижение алетита, периодические судороги мышц конечностей, потерю в весе. Анамнез: больна с 18 лет, когда периодически появлялись боли в животе и жидкий стул.

С 30 лет ежегодные по 2-3 раза обострения, стала терять в весе. Лечилась амбулаторно, но без эффекта.

Осмотр: Резко пониженное питание (рост 170 см, вес 49 кг) ° Кожные покровы и видимые слизистые — выраженно бледные. Повышенная ломкость ногтей и выпадение волос, Язык обложен белым налетом с отпечатками зубов по краям. Симптом "мышечного валика положительный. Живот вздут, болезненный по ходу толстой кишки.

Определяется "шум плеска" в слепой кишке. Печень и селезенка не пальпируются.

Анализ крови: э 3,8, нем. 11,07, цп 0,89, л 4,0 и. 1, с 51, э 2, лим

36, м 10, СОЭ 4 мм/ч. Общий белок

7,54 rX, алью. 4,29rX, глоб. 3,25rX

Пробы на всасываемость: с Д-ксилозой 2 ч — 0,8 г, 5 ч — 1,2 r (уме134 3358

40

50 целиакии. ренное снижение); общие жирные кислоты: 7,6 г/ч, свободные жирные кислоты 4,3 r/÷ — умеренное увеличение. Иммуноглобулины сыворотки: A

110 мгЖ (55-251), И 125 мг7. (68-350), С 260 мг7. (97-235). Рентгеновское исследование тонкой кишки: петли тонкой кишки выполняются равномерно.

Тонус несколько снижен. Пассаж ускорен. Рельеф равномерно перистый, беэ с рубых видимых изменений. Предварительный диагноз: хронический энтерит II степени тяжести. Дополнительное исследование лимфоцитов периферической крови после стимуляции их глиадином позволило поставить заключительный диагноз — хронический энтерит II степени тяжести, так как интенсивность флюоресценции равнялась 1,1, что было достоверно ниже показателей у больных целиакией, средняя арифметическая интенсивность которых равнялась 5,79 ед.

Подтверждением правильности поставленного диагноза с помощью метода флюоресцентных зондов с использованием обработки лимфоцитов глиадином явилось выздоровление от проведенного лечения.

В качестве другого примера представлена история болезни, где также трудно было диагностировать целиакию.

Так как имелось атипичное клиническое течение заболевания, наличие

35 редко встречаемых при данной патологии симптомов.

II p и м е р 2. Больная С,, 29 лет

Жалобы: на частый жидкий стул, вздутие живота, боли по всему животу, слабость, головокружение, кровото- чивость десен, появление синяков пЪ коже, судороги кистей рук, похудание.

Анамнез: больна с 24 лет, когда 4 после родов появились упорные запоры, сменявшиеся на поносы, вздутие живота, позднее с 26 лет — повышенная кровоточивость десен, судороги мышц конечностей.

Осмотр: пониженное питание (рост

169 см, вес. 58 кг). меренная сухость кожи, истонченность и ломкость ногтей. Разрыхленность и кровоточивость десен. Язык влажный, сосочки сглажены. Симптом "мьсшечного валика положительный, живот умеренно вздут во нс «х отделах, безболезненный, мягкий шум плеска" в слепой кишке не с пределяетс я. Ilt ÷ñ чь и c åлеэенка не пальпируются, Анализ крови: эр. 3,9, гем.

12 бган., л, 4 6, и. ?., с 60, э-2. б 1, лим. 24, м. 11, СОЗ вЂ” 5 мм/ч.

Общий белок 6,86r, альб. 3,43, гамма-глоб ° 15, 27.. Пробы на вс.асыва емость с Д-ксилоэой: 2 ч О, 38 z„

5 ч 0,65 г (снижена), общие жирньн кислоты 38,1 г/ч, свободные жирные кислоты 22,3 г/ч(увеличесса). Иммуноглобулины сыворотки: А 80 мгХ, (55-25 1), Yi 110 мг7. (68-350), G

210 мг7. (97-235).

Рентгеновское исследование тонкой кишки: выраженные изменения двенадцатиперстной и верхних петель тощей кишки — слизь, жидкость впросвете, гипотония и гипокинезия. Рельеф сохранен, но сглажен и местами перестроен.

Предварительный диагноз: хронический энтерит II степени тяжести

Целиакия.

Методом флюоресцентных зондов выявлена интенсивность свечения лимфоцитов стимулированных ин витро глиУ адином, равная 7,12. Полученная резко положительная реакция лимфоцитов на глиадин позволила диагностировать целиакию, Заключительный диагноз:

Целиакия.

Раняя диагностика целиакии у больных хроническими заболеваниями тонкой кишки обеспечивает назначение лелечения с соблюдением диеты, исключающей из питания глиадин, и, как следствие, сохранение трудоспособности. Всего обследовано 52 чел (целиакия, хронический энтерит II степени тяжести, доноры).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет дифференцировать целиакию и хронический энтерит 11 степени тяжести по изменению интенсивности флюоресценции лимфоцитов периферической крови при действии глиадинов. Для целиакии по сравнению с нормой характерно интенсивное свечение стимулированных глиадином лимфоцитов ° Для больных хроническим знтеритом характерны низкие значения флюоресценции лимфоцитов, обработанных глиадином. Это позволяет повысить точточность в ранние сроки диагностики

1343358

Составитель Г. Крюкова

Техред А. Кравчук Корректор А. Тяско

Редактор В ° Данко

Заказ 4819/47

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула и 3 обре т е н и я

Способ диагностики целиакии путем добавления глиадина к лимфоцитам периферической крови больных с последующей оценкой реакции, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа путем дифференциальной диагностики целиакии и хронического энтерита, оценку осуществляют флюоресцентным зондом по интенсивности свечения лимфоцитов, при этом глиадин добавляют в концент8 С рации 3,5-5,5 мг/мл на 1 ° 10 лимфоцитов и при интенсивности свечения от

3,3 до 9,7 ед. диагностируют целиакию, а при интенсивности свечения

1П 0,4-2,8 ед. — хронический энтерит.