Способ получения 6-замещенных метиленпенициллановых кислот, или их сложных эфиров,или их солей с щелочными металлами

 

Изобретение относится к способу получения 6-замещенных метиленпенициллановых кислот, или их сложных эфиров, или их солей с щелочными металлами формулы {)п RjCH,. т т из 0 COORz где R, - хлор, формил, оксиметил, С,-С4-алкилтио, фенил, фенилтио, 2-хинолинил, 2-пиридил, свободный или замещенный атомом С1, метилом, метоксигруппой, аллилоксиили оксигруппой, 2-пиримидинил, свободный или замещенный метилом, 2-пиразинил или К-метил-2-пирролил; R сложноэфирная защитная группа, такая как аллил или пивалоилоксиметил, Н или катион щелочного металла; п О, 1 или 2, которые используются в медицине. Получение целевых соединений ведут из соединения формулы О ч 0 .S Шз COORV где Ri. - сложноэфирная защитная группа , такая как аллил или пивалоилоксиметил , g реагента Виттига формулы R .CH Р (CgH5),cr, где R| имеет указанные для R, значения, кроме 2- пиридила, замещенного оксигруппой, и оксиметила, в присутствии амида щелочного металла в среде инертного органического растворителя (ИОР) при (-78°С). В случае необходимости получения целевого продукта, где Rf - оксиметил, восстанавливают со- . ответствующее соединение, где R - формил, гидридом диизобутилалюминия в гексане при -78°С и выделяют целевой продукт, где , в виде эфира или в случае необходимости обрабатывают его окислителем, таким как 3- хлорпербензойная кислота, в среде ИОР при комнатной температуре с получением целевого продукта, где nfl или 2, и/или в случае необход51мости целевой продукт обрабатывают каталитическими количествами тетракис (трифенилфосфин)палладия (0) и трифенилфосфина и эквимолярным количеством щелочной соли 2-эти.пгексановой кислоты и выделяют целевой ,. где Rj - Н или катион щелочного металла, и/или где RJ - 2-пириднл, замещенный оксигруппой. 5 табл. СО со СП 4 CN

СО103 СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСГВБ ЛИК

1

Ъ ф с, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ HOMHTET СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3844124/23"04 (22) 28.01 ° 85 (31) 575354 (32) 30.01.84 (33) US (46) 07.05.88. Бюл. № 17 (71) Пфайэер. Инк. (US) (72) Юхпинг Лианг Чен (TW) (53) 547. 789.61. 07 (088. 8) (56) Патент США № 4282236, кл. 424/270, опублик . 1 981 . (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-ЗАМЕЩЕННЫХ

МЕТИЛЕНПЕНИЦИЛЛА НОВЫХ КИСЛОТ, ИЛИ ИХ

СЛОЖНЫХ ЭФИРОВ, ИЛИ ИХ СОЛЕЙ С ЩЕЛОЧНЫМИ МЕТАЛЛАМИ (57) Изобретение относится к способу получения 6-замещенных метиленпени" циллановых кислот, или их сложных эфиров, или их солей с щелочными металлами формулы (о)„

Сн

СН3

0 СООЕ2 где R< — хлор, формил, оксиметил, С,-С -алкилтио, фенил, фенилтио, 2-хинолинил, 2-пиридил, свободный или замещенный атомом Cl метилом, метоксигруппой, аллилокси- или оксигруппой, 2-пиримидинил, свободный или замещенный метилом, 2-пираэинил или N-метил-2-пирролил; R< — сложноэфирная защитная группа, такая к ак аллил или пивалоилоксиметил, Н или катион щелочного металла; n = О, 1 или 2, ко" торые используются в медицине. Полу„,Я0 „„1395144 А 3

yg 4 С 07 Р 499/ОО // А 61 К 31/43 чение целевых соединений ведут иэ соединения формулы где R — сложноэфирная защитная группа, такая как аллил или пивалоилоксиметил, и реагента Виттига формулы

R,СН P (C H )çCl указанные для R значения, кроме 2пиридила, замещенного оксигруппой, и оксиметила, в присутствии амида щелочного металла в среде инертного органического растворителя (ИОР) при (-78 С) . В случае необходимости получения целевorо продукта, где . R - оксиметил, восстанавливают со, ответствующее соединение, где R< формил, гидридом дииэобутилалюминия Я в гексане при -78 С и выделяют целевой продукт, где п=О, в виде эфира или в случае необходимости обрабатывают его окислителем, таким как 3хлорпербенэойная кислота, в среде

ИОР при комнатной температуре с получением целевого продукта, где n l .или 2, и/или в случае необходимости 4 целевой продукт обрабатывают каталитическими количествами тетракис 1трифенилфосфин) палладия (О) и трифенилфосфина и эквимолярным количеством щелочной соли 2-этилгексановой кисло- 3 ты и выделяют целевой продукт, где (рф

R< - Н или катион щелочного металла, и/или где R — 2-пиридил, замещенный оксигруппой. 5 табл.

1395144

Изобретение относится к способу получения новых соединений пенамового ряда, а именно 6-замещенных метилен" пенициллановых кислот, или их сложных эфиров,или их солей с щелочными металлами, которые являются ингибиторами Р"лактамазы или полупродуктами в синтезе ингибиторов Р-лактамазы, и являются перспективными для исполь- 10 зования в медицине.

Целью изобретения является создание новых соединений, усиливающих ингибирующее р -ëàêòàìàçó действие анти" биотиков пенициллинового ряда. 15

Пример 1. Сложные эфиры

6-альфа-оксипенициллановой кислоты.

А. Сложный аллиловый эфир. Раствор

85 r (0,39 моль) 6-альфа-оксипеницил" лановой кислоты в 300 мл диметилформ- 20 амида обрабатывают 34 мл (0,39 моль) бромистого аллила, 5Ф мл (0,39 моль) триэтиламина и 2 г бикарбоната натрия .и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч. После 25 прерывания реакции добавлением воды и экстракции диэтиловым эфиром объединенные эфирные соли промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме, получая 43 r неочищенного продукта.

Этот неочищенный материал очищают на хроматографической колонке с силикагелем, элюируя смесью хлороформ: этилацетат (9:1),и получают 22,75 г (23X) сложного аллилового эфира.

Спектр ПИР (CDC1 ), м.д, (хим.сдвиг):

l,42 (с.ЗН), 1,60 (с.ЗН), 4,45 (с. 1Н), 4,5-5,0 (м, ЗН), 5,2-6,2 (м,4Н).

Б. Сложный пивалоилоксиметиловый эфир. Смесь 9 r (О, 041 моль) 6-альфа-оксипенициллановой кислоты, 40 мл диметилформамида, 7,4 мл (0,041 моль) диизопропилэтиламина, 6мл (0,041 моль) 45 хлорметилового эфира пивалоиловой кислоты и 6,15 г (0,041 моль) йодистого натрия перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч.

Добавляют в смесь воду, смесь эк- 50 страгируют диэтиловым эфиром, эк стракты сушат и концентрируют, получая 9 г неочищенного сложного эфира, который очищают на колонке с силикагелем, элюируя смесью хлороформ: 55 этилацетат (9:! ) . Объединенные фракции продукта составляют 4,384 г (32 ) .

В. Сложный бензиловый эфир. В смесь 20 г (0,092 моль) 6-альфа-оксипенициллановой кислоты, 12,9 мл (0,092 моль) триэтиламина, 1,105 г (0,013 моль) бикарбоната натрия и

200 мл диметилформамида (ДИФ) добавляют 12,0 мл (0 101 моль) бромистого бензила, Эту смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч, распределяют ее между диэтиловым эфи" ром и водой и водную фазу подкисляют до рН 2,0 6 н. хлористоводородной кисло ой. Слои разделяют, водный слой дважды экстрагируют снова диэтиловым эфиром. Объединенные слои промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой, сушат и выпаривают растворитель. Остаток кристаллизуют из горячей смеси хлороформа и гексана, получая 9>1 r бесцветных кристаллов с температурой плавления 165-167 С.

Г. Сложный (5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)-метиловый эфир. Смесь

I5 г (0,078 моль) бромистого (5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метила, 18,7 r (0,078 моль) натриевой соли

6-альфа-оксипенициллановой кислоты в 225 мл диметилформамида перемешивают при комнатной температурЕ в течение 4 ч, выливают смесь на лед и обрабатьвают, как указано, получая целевой сложный эфир.

Пример 2. Сложные эфиры 6оксопенициллановой кислоты.

А, Аллиловый эфир 6-оксипенициллановой кислоты. Смесь 2,84 мл (0,04 моль) диметилсульфоксида, 3,67 мл (0,026 моль) ангидрида трифторуксусной кислоты и 50 мл хлористого метилена перемешивают при -78 С в течение 10 мин. Добавляют раствор

5,14 г (0,02 моль) аллиловorо эфира

6-альфа-оксипенициллановой кислоты о в 10 мл хлористого метилена при -78 С и образовавшуюся смесь перемешивают в теч ение 40 мин. При э той температуре добавляют 7,24 мл (0,052 моль) триэтиламина, смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и . прерьвают взаимодействие добавлением воды. После экстракции хлористым метиленом объединенные органические слои трижды промывают ведой, сушат и растворитель выпаривают в вакууме, получая в виде желтого масла указанное соединение в количестве 5,1 r (1007.). Спектр ПИР (CDC1 ), м.д. (хим.сдвиг): 1,60 (с.бН), 4,7 5 (м,2Н), 3 13951

4,82 (с, 1H), 5,1-6,3 (м, ÇH), 5,82 (с, 1Н) .

Б. Сложный пивалоилоксиметиловый эфир. Смесь 0,36 мл (5,06 моль) диметилсульфоксида, 0,47 мл (3,29 ммоль) ангидрида трифторуксусной кислоты, 839 мг (2,53 ммоль) пивалоилоксиметилового эфира 6-альфа-оксипенициллановой кислоты и 5 мл хлористого ме- lg о тилена перемешивают при -78 С в течение 30 мин и добавляют 0,92 мл (6,58 ммоль) триэтиламина. Обрабатывают продукт, как указано в и. А, и получают 788 мг (95 ) целевого ке- 15 тона. Спектр ПМР (СРС1 ), м.д. (хим, сдвиг): 1, 3 (с, 9Н), 1, 65 (с, 6Н), 4,85 (с, l Н), 5,8 (м,ЗН) .

Пример 3. Аллиловый эфир

6 (Е)-(2-пиридил) метиленпенициллано- 20 вой кислоты.

Смесь 2,64 r (6,6 ммоль) 2-пиколилтрифенилфосфонийхлорида и 0,265 r (6,8 ммоль) амида натрия в 6 мл сухого тетрагидрофурана (ТГФ) переме- 25 шивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Образовавшуюся коричневую суспензию охлаждают до -78 С, добавляют в один прием раствор 1,8 r (7,0 ммоль) аллилового эфира 6-оксо- . 30 пенициллановой кислоты в 4 мл сухого о

ТГФ и смесь перемешивают при -78 С в течение трех минут, Взаимодействие прерывают путем добавления насыщенного водного раствора хлористого аммония, экстрагируют смесь этилацетатом, объединенные органические слои трижды промывают водой, сушат сульфатом магния и концентрируют в вакууме, получая 3,3 г красного масла. 4

Это масло очищают хроматографически на колонке. с силикагелем, получая

1,35 г (60,7 ) целевого продукта в виде желтого масла. Спектр ПМР (СПС1®), м. д. (хим.сдвиг): 1,50 (с,ЗН),.1,58 (с,ÇH), 4,57 (с,lH)

4,65 (д,2Н), 5,15-6,15 (м,ÇH), 6,17 (д, 1Н, I=1 Гц), 6,87 (д,1Н, I=1 Гц), )

7, 2-7,4 (м, 2Н), 7,60 (т.дублета, 1Н), 8, 62 (дд), С-ЯМР (CDClp ), м.д. (хим.сдвиг): 26,04; 32,99; 62,77;

65,75; 70,0lyó 70,54; 119,10; 123»24»

124»02; 125»86; 131»06; 136»34;

144,66; 149,94; 1 52,13; 167,54; .

168 73.

Пример 4. Используют мето55 дику примера 3, но вместо 2-пиколилтрифенилфосфонийхлорида берут соответствующий реактив Виттига формулы

44

4 (С Н ) P СН. R, Cl и получают соединения, приведенные в табл. 1.

Пример 5. Натриевая соль

6(Е)"(2-пиридил)метиленпенициллановой кислоты.

Смесь 0,120 r (0,38 ммоль) ал" лилового эфира 6-(Е)-(2-пиридил)метилпенициллановой кислоты, 20 мг тетракис-(трифенилфосфин)палладия (О) и 20 мг трифенилфосфина растворяют в

3 мл этилацетата и в этот раствор в-атмосфере азота добавляют 0,76 мл (0,38 ммоль) 0,5-молярного раствора натриевой соли 2-этилгексановой кислоты в зтилацетате. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение двух часов, осадок отделяют фильтрацией, промывают этилацетатом и сушат в вакууме, чтобы получить

57 мг (48 ) указанного соединения в виде желтого твердого вещества.

Спектр ПМР (DzO) м.д. (хим.сдвиг):

l, 55 (с, 6Н) ) 4,33 (с,) Н), 6, 17 (д, 1Н, I = 0,5 Гц); 7,03 (д,lН, = 0,5 Гц); 7,17-8,07 (м,ЗН); 8,57 (м.lН). ИК-спектр (KBr) 3433, 1756, 1605 см

Пример 6. Используя соответствующий исходный материал, выбранный из сложных аллиловых эфиров, по" лучаемых в примере 4, по методике примера 5 аналогичным образом получают следующие натриевые соли, приведенные в табл. 2.

Пример 7. 6-Фенилтиомети" ленпенициллановая кислота.

Смесь 93 мг (0,26 ммоль) аллилового эфира 6-фенилтиометиленпенициллановой кислоты (смешанные изомеры), 10 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия (О) и 10 мг трифенилфосфина растворяют в 1 мл этилацетата, добавляют 0,52 мл 0 5-молярного раствора натриевой соли 2-этилгексановой кислоты в этилацетате при комнатной температуре, и образовавшуюся смесь перемешивают в течение 10 ч в атмосфере азота. Так как в осадок выпадает очень мало соли, смесь разбавляют водой и экстрагируют хлористым метиленом. Водный слой подкисляют до рН 3,5 и экстрагируют хлористым метиленом. Высушенные экстракты концен" трируют в вакууме для того, чтобы получить 63 мг (75 ) свободной кис" лоты в виде смеси изомеров. Спектр

ПМР (CDC1>), м.д. (хим.сдвиг): 1,5 (с,2,1Н); 1,55 (c, 09,H); 1,6 (с,2;1Н);

1395)44

1,65 (c,0,9Н), 4,4 (с,0,7Н), 4,5 (с,О,ЗН), 5,38 (д,0,7Н); 5,7 (с,О ° 3H), 6,7 (с,ОЗН); 7,1 (д,0,7Н), 7,5 (м,5Н).

Пример 8. Аллиловый эфир

l,l-диоксо-б(Е)-(2-пиридил)метиленпенициллановой кислоты..

К раствору 1,30 r (4,09 ммоль) аллилового эфира 6(Е)-(2-пиридил) метиленпенициллановой кислоты в 15мл 10 хлористого метилена добавляют 1,70 r (8,2 ммоль) м-хлорбензойной кислоты (чистота 80-85%) и смесь. перемешива" ют в атмосфере азота в течение трех часов при комнатной температуре. Пос" 15 ле прерывания взаимодействия добавлением насыщенного водного раствора тиосульфата натрия и воды смесь экстрагируют хлористым метиленом, органический слой подщелачивают до 20 рН 7,5 насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, промывают водой, сушат сульфатом магния и растворитель выпаривают в вакууме, получая

1,4 г (98%) продукта в виде желто- 25 го масла. Это масло очищают на хроматографической колонке с силикаге" лем, при злюировании смесью гексанэтилацетат (7:3) получают 0,78 r (55X) указанного в заголовке сульфона в виде бесцветных кристаллов.

Спектр ПМР (CDC1> ), м.д. (хим. сдвиг):

1,48 (с,ÇH), 1,63 (с,ÇH), 4,46 (с, I Н), 473 (д 2Н), 5 1 "6 2 (мЗН), 5,77 (д, IН, I=. 0,5 Гц), 7,27 (д, IН, I = 0,5 Гц), 7,1-8,1 (м,ЗН), 8,6 (M,1H) . ЯМР - С (CDC1 ) м.д. (хим. сдвиг) t 18,531 20, 43; 63, 181

64 25; 66 63; 72 04; 11991; 124 64;

126,03; 130,68; 132,83; 136,77; 40

l 50 ° 31; 166,86; 168,11. ИК-спектр (KB1), см : 1323, 1586, 1759, 1783, 3437.

Пример 9. Аллил 1,1-диоксо-6(Е) -(2-оксиэтилиден)пеницилланат.

К раствору 0,190 r (0,61 ммоль)

45 аллил 1, 1-диоксо-6 (E) "формилметиленпеницилланата в 4 мл сухого тетрагид- рофурана при -78 С прибавляют 0,61 мл (О, 61 ммоль) 1М раствор диизобутилалюминийгидрида в гексане, Смесь перемешивают при -78 С в течение ) О мин, гасят метанолом, перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин и фильтруют. Фильтрат концентрируют под вакуумом и получают 0,258 r сыро- 55 го продукта, который разбавляют водой, экстрагируют хлороформом и высушивают органический слой над сульфатом магния. Выпариванием хлороформа получают 160 мг соединения, которое дополнительно очищают хроматографированием на колонке с силикагелем с использованием в качестве элюента смеси хлороформ: этилацетат (4:1) и получают 113 мг (60X) укаэанного соединения. " Н-ЯМР (CDCl ), ч/млн (дельта): 1,40 (синглет,ЗН), 1,60 (синглет, ЗН), 2,60 (широкий синглет, IH), 4,3 (мультиплет, 2Н), 4,4 (синглет, IН), 4,7 (дублет, 2Н), 5,1-6,0 (мультиплет, ÇH), 5,25 (дублет, IH) 6,38 (мультиплет, IH).

II р и м е р 10. Исходя из соответствующего 6-метиленпенициллатного сложного эфира (и О), полученного по примеру 4, и используя его в качестве исходного. соединения в методике по примеру 8, получают следующие соединения, приведенные в табл. 3 °

Пример 11. Аллил 6(Е)- 1(1-оксохинолин-2-ил)метилен1-1,1-диоксопеницилланат.

Аллил 6(Е) — ((хинолин"2-ил)метилен1-1"оксопеницилланат, полученный как сопродукт при получении соответствующего сульфона по примеру 10 (124 мг, 0,313 ммоль), растворяют в

5 мл метиленхлорида и прибавляют

195 мг (0,904 ммоль) 80%-ной метахлорпербензойной кислоты. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, гасят водой и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракты промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой, сушат, концентрируют под вакуумом и получают желтое масло. Масло очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле и получают 45 мг (35X) целевого

N-оксида в виде твердого желтого соединения. Н-ЯМР(СВС1э), ч/млн (дельта): 1,45 (синглет, ЗН), 1,6 (синглет, ÇH), 4,45 (синглет, IН), 4,.7 (мультиплет, 2Н), 5,0-6,0 (мультиплет, ÇH), 5,85 (дублет, IH) 7,3-8,0 (мультиплет, 7Н) .

Пример 12. 1,1-Диоксо-б(Е)— (2-пиридил) метиленпеницилланат натрия.

Смесь аллил I, l-диоксо-б(Е)-(2-пиридил)метиленпеницилланата (0,14 r, 0,4 ммоль), 20 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия (О) и 20 мг трифенилфосфина растворяют в 2.мл этилацета" та и в атмосфере азота прибавляют

0,8 мл (0,4 ммоль) 0,5М раствова 2"

1395144 8 этилгексаноата натрия в этилацетате.

Образующуюся смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5мин.

Выпавший осадок отфильтровывают, про" мывают этилацетатом, сушат и получают 0,13 г (957) натриевой соли в виде твердого желтого соединения. Н-ЯМР (D О), ч./млн (дельта): 1,50 (синглет, ЭН), 1,60 (синглет, ЭН), 4,23 (синглет, 1Н), 5,90 (дублет, 1H I = 1 Гц), 7,1-8,0 (мультиплет, 4Н), 8,57 (мультиплет, 1Н). Инфракрасный спектр (КВк)> см . 1590, 1621, 1770, 3454.

Пример 13. Аллил l,l-диоксо-6(Е)-(1-оксо-2-пиридил)метиленпеницилланат.

Раствор аллил ),1-диоксо-б(Е)-(2пиридил) метиленпеницилланата (100 мг, 0,286 ммоль) в 5 мл метиленхлорида обрабатывают метахлорпербензойной кислотой (1 20 мг, О, 59 ммоль) и пере" мешивают при комнатной температуре в течение трех дней ° Смесь гасят насьцценным раствором тиосульфата натрия и экстрагируют метиленхлоридом. Органический слой нейтрализуют насыщенным раствором бикарбоната натрия, промывают водой, сушат,, концентрируют и получают 82 мг желтого масла.

Желтое масло очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием этилацетата в качестве элюента и получают 22 мг (2!%) целевого соединения и 14 мг ()3X) сопутству- 35 ющего продукта 2,3-эпоксипропанил

l,l-диоксо-б(Е)-()-оксо-2-пиридил) метиленпеницилланата °

Аллил 1,)-диоксо-б(Е)-(l-оксо-2-пиридил)метиленпеницилланат.

Н-ЯМР (CDC1 ), ч./млн (дельта); 1,5 (синглет, ЭН), 1,6 (синглет, ЭН), . 4,45 (дублет, )H), 4,7 (дублет, 2Н);

5,1-6,0 (мультиплет, ЭН), 5,8 (синглет, 1Н), 7,1-8,4 (мультиплет, 5H).

Пример 14. Гидролизом соответствующего аллилового сложного эфира по методике, описанной в примере 12, получают продукты, представленные в табл. 4. 50

Пример 15. Пивалоилоксиметил 6 (Е) -(метилтио) метиленпеницилланат.

Смесь 2,4 ммоль (метилтиометил) трифенилфосфоний хлорида и 2,4 ммоль 55 амида натрия в 5 мл сухого тетрагид- . рофурана (ТГФ) перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин.

К образующемуся желтому раствору при

О

-78 С прибавляют раствор 788 мг (2, 4 ммоль) пивалоилоксиметил 6-оксо" пеницилланата в 10 мл сухого ТГФ.

Смесь перемешивают при -78 С в течение 1 мин, выливают в насыщенный раствор хлорида аммония и экстрагируют этилацетатсм. Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия, растворитель удаляют под вакуумом и получают 774 мг сырого продукта, который счищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя хлоро- формом, и получают 220 мг (24,57) чистого продукта. Н-ЯМР (СЭС1 ), ч/млн (дельта): 1,25 (синглет, 9H), 1,50 (синглет, ЭН), 1,65 (синглет, ЭН), 2,45 (синглет, ЭН), 4,45 (синглет, 1Н), 6,85 (мультиплет, 3H), 7,0 (дублет, 1Н).

Пример 6. 6(Е)-(N-Метилпиррол-2-ил)метилен-l,l-диоксопеницилланат натрия.

Раствор 46 мг аллил 6(Е)-(N-метилпиррол-2-ил)метилен-l,l-диоксопеницилланата, 5 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия (О), 4 мг трифенилфосфина и мл метиленхлорида переме- шивают в атмосфере азота в течение

5 мин. Образовавшуюся смесь разбавляют 1 мл этилацетата и прибавляют

0,25 мл раствора 2-этилгексаноата натрия в этилацетате. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч смесь фильтруют, осадок промывают этилацетатом, дизтиловым эфиром и получают 30 мг желтого твердого соединения, Н-ЯМР (D О), ч,/млн (дельта): 1,50 (синглет, ЭН), 1,60 (синглет, ЭН), 3,65 (синглет, ЭН), 4,10 (синглет, )Н), 5,4 (синглет, 1Н), 6,1-6 5 (мультиплет, 1Н), 7,0 (широкий синглет, 2Н), 7,2-7,4 (м, 1H). Инфракрасный спектр (KBr), см

1568, 1616, 1660, 1745, 3465.

Пример 17. 1,1-Диоксид

6(Е)-фенилметиленпенициллановой кислоты.

К раствору 0,1 г (0,28 ммоль) ал" лил 6(Е)-фенилметилен-l,l-диоксопеницилланата, 20 мг трифенилфосфина и

20 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия (О) в 3 мл этилацетата прибавляют 0,57 мл 0,5 М раствора 2-этилгексаноата натрия и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение

1 ч. После выстаивания в холодильнике в течение 65 ч осадок не обра13951

35 зуется. Смесь разбавляют этилацетатом и, водой и отделенный водный слой доводят до рН 1,8 разбавленной хлорнстоводородной кислотой экстрагнру1

5 ют свежим этилацетатом, экстракты сушат над безводным сульфатом натрия, растворитель удаляют под вакуумом и получают 62 мг (697) продукта в виде желтых кристаллов (иэ ацетона). H-ЯМР(СР СОСР ), ч,/млн (дельта):.

1,55 (синглет, ЗН), 1,65 (сннглет, ЗН), 4,43 (синглет, IH) 5,93 (дуб-. лет, IН), 7,3-7,9 (мультиплет, 6Н), 8,7 (широкий синглет, IН)., Инфракрасный спектр (КВг), см . 1327, 1685, 1737, 1772, 2929, 2961, 3108, 3477.

П. р и м е р 18. Аллиловый эфир

1, 1-диокс о-6 (Е) "(2-пиримидинил) метиленпенициллановой кислоты и ее калиевая соль.

А. Аллил"6 (Е) - (2-пиримидинил) -метиленпеницилланат (560 мг, 1,69 ммоль) н..3-хлор ербензойную кислоту (730 мг, 25

3,38 ммоль) растворяют в 10 мл метиленхлорида и перемешивают в атмосфере азота в течение четырех часов. Смесь гасят водой, экстрагируют метиленхлоридом, экстракты промывают тио" сульфатом натрия, нейтрализуют бикарбонатом натрия, промывают раствором соли, сушат, концентрируют под вакуумом и получают 460 мг сырого масла.

Масло очищают хроматографированием на колонке с силикагелем, с использованием смеси хлороформ: этилацетат (9:I) в качестве элюента, и получают

180 мг целевого аллилового сложного эфира в виде бледно-желтого твердого соединения. Н-ЯМР (СРС1 ), ч/млн

40 (дельта): 1,45 (синглет, 3Й), 1,65 (синглет, ЗН), 4,5 (синглет, IН), 4,75 (мультиплет, 2Н), 5,2-6,3 (муль" типлет, ЗН), 5,75 (синглет, IН), 7,1"7,5 (мультиплет, 2Н), 8,9 (дублет, 2Н).

Б. Проводят реакцию между полученным аллиловым сложным эфиром и трифенилфосфином, тетракис(трифенилфосфин)палладнем (0) и 2-этилгексано- 50 атом калия по методике, описанной в примере 12, и получают целевую ка-. лиевую соль с выходом 897 в виде бледно-розового твердого соединения.

Н-ЯМР (Р О), ч./млн (дельта): 1,6 55 (синглет, ЗН), 1,68 (синглет, 3Н), 4,4 (синглет, 1Н), 6,1 (синглет, IН), 7,48 (синглет, IН), 7,54 (триплет, 44 10

1Н), 8,8 (дублет, 2Н). " С-ЯМР (D О), ч./млн (дельта1: 20,9; 22,7; 68,8;

68,9; 14,6; 124 5; 132 5; 139,9;

1 60, 9; 163, 2; 17 2, 5. Инфракрасный спектр (KBr) см : 1560, 1615, 1771

3439.

6-Замещенные метиленпенициллановые кислоты или их соли в сочетаниях с бета-лактамными антибиотиками обнаруживают синергическую активность в противомикробных испытаниях вне ор" ганизма. Такая активность была продемонстрирована при измерении мини" мальной ингибирующей концентрации (МИК), мкг/мл, против множества микроорганизмов. В методике испытания используют агар экстракта мозга и сердца (ВНХ)и устройство для воспроизведения инокулята. Содержимое пробирок, выросшее за ночь, разбавляют

100 раэ для использования в качестве стандартного инокулята - на поверх1 ность arapa помещают 20000-10000 клеток приблизительно в 0,002 мл; 20 мл

BHI arapa (в чашке). Применяют двенадцать двукратных разбавлений испытуемого соединения, причем: начальная концентрация испытуемого медикамента составляет 200 мкг/мл. При отсчете пластинок, через 18 ч при 37 С, отдельными колониями пренебрегали.

Чувствительность МИК испытуемого ор" ганиэма расссчитывают, как самую низкую концентрацию испытуемого соединения или сочетания соединений, которая способна вызвать полное ингибирование роста, которое подтвер" ждается невооруженным глазом.

6-Замещенные метиленпенициллановые кислоты или их соли в сочетаниях с известными бета-лактамными антибиотиками являются полезными в качестве промышленных антимикробных препаратов, например при обработке воды, регулировании слизи, предохранении красок и древесины, а также для местного применения в качестве дезинфецирующих средств. В случае использования этих соединений для таких применений часто удобно смешивать активный компонент с нетоксичным носителем, таким как растительное или минеральное масло, или умягчающий крем. Аналогично, они могут быть растворены или диспергированы в жидких разбавителях или растворИтелях, таких как вода, спирты, гликоли или их смеси. В большинстве слу1395144

12 чаев достаточно испольэовать концентрации активного компонента приблизительно 0,1 — 10 мас., в расчете на общую композицию.

Кроме того, соединения имеют еще большее значение в качестве потенциальных ингибиторов микробных беталактамаз. По этому механизму они увеличивают противомикробную эффектив- !О ность бета-лактамных антибиотиков (пенициллинов и цефалоспоринов) про" тив многих микроорганизмов, в особенности тех, которые продуцируют бета-лактамазу.Способность новых соединений увеличивать эффективность бета-лактамногo антибиотика подтверждена экспериментами, в которых определялись значения МИК одного антибиотика и одного соединения указанной формулы. Затем эти значения МИК сопоставляли с ИИК, полученными для сочетания данного антибиотика и соединения указанной формулы. Когда противомикробная эффективность для сочета- 25 ния существенно превышает эффективность, которая может быть рассчитана из эффективностей отдельных компонентов, то имеет место усиление активности.

Соединенйя укаэанной формулы усиливают противомикробную активность бета"лактамных антибиотиков внутри организма.

Результаты испытаний приведены в табл. 5. 35 формула изобретения

Способ получения 6-замещенных метиленпенициллановых кислот, или их сложных эфиров, или их солей с щелочными металлами общей формулы (Ojn

К СН СНз

О "COOR

I где R — хлор, формил, оксиметил, С,-С -алкилтио, фенил, фе50 нилтио, 2-хинолинил, 2"пиридил, свободный или замещенный хлором, метилом, метоксигруппой, аллилокси- или окс игруппой, 2-пнримидинил, свободный или замещенный метилом, 2-пиразинил или Н-метил-2-пирролил;

R — сложнозфирная защитная группа, такая как аллил или пивалоилоксиметил, водород или катион щелочного металла; и О, 1 или 2, отличающийся тем, что соединение общей формулы! где R - сложноэфирная защитная группа, такая как аллил или пивалоилоксиметил, подвергают взаимодействию с реагентом Виттига общей формулы

Ry CH=P8 (C AH)) зсмк где R имеет указанные для R, значения, кроме 2-пиридила, замещенного оксигруппой,и оксиметила, в присутствии амида щелочного металла в среде инертного органического растворителя при температуре -78 С и/или в случае необходимости получения целевого продукта, где К, — оксиметил, восстанавливают соответствующее соединение, где R, — формил, гидридом дииэобутилалюминия в гексане при температуре -78 С и выделяют целевой продукт, где n = О, и в виде эфира или в случае необходимости обрабатывают его окислителем, таким как 3хлорпербензойная кислота, в среде инертного органического растворителя при комнатной температуре с получе» нием целевого продукта, где n = 1 или 2, и/или в случае необходимости целевой продукт обрабатывают каталитическими количествами тетракис(трифенилфосфин)палладия (О) и трифенилфосфана и эквимолярным количеством щелочной соли 2-этилгексановой кислоты и выделяют целевой продукт, где

R — водород или катион щелочного металла, и/или где К, 2-пиридил, saмещенный оксигруппой.

1395144

Т ° блица I

Получеияе еллилозых зфирое 6-замеиеиюпс матилеилеяициллвкозых кислот и их сеойстза

R) 8

° ° °

СЯз

° C00CH2СН CHз

30 От -78 до +25

В изонер 1,5 (с, ЗИ), 1,6 (с, ЭН), 4,5 (с, IH) 4,65 (д, 2Н), 5,1-6,2 (н, ÇH), 5,73 (д, IH) 6,82 (д, 1И).

Х-изомер: 1,5 (с, ЭН), 1,6 (с, ЗН), 4,57 (с, IН), 4,7 (д, 2Н), 5,15-6,24 (м, ЗН), 5,77 (с, IН), 6,37 (с, IÍ).

+3,2 (Е) Е-изонер: 1,48 (с, ЗН), 1,60 (с, ЗН), 2»58 (с, ЗН), 4,42 (с, Н), 4, 60 (д, 2Н), 5»0-6»0 (и» ЗН) ° 5»58 (с» IH) °

6,42 (с, IH) й-изомер: I,45 (с, ЭН), 1,60 (с, ЭН), 2,40 (с, ЭН), 4,60 (с, 1Н), 4,80 (д, 28), 5 ° 0-6,1 (н, ЗН), 5,72 (д, IН), 6,90 (д, 1Н) . й-изомер: 1,45 (с, ЗИ), 1,60 (с, ЗН), 2,40 (с, ЗН), 4,60 (с, !Н), 4,80, (д, 2Н), 5,0-6,1 (н, ЗИ)» 5 ° 72 (д» IH) 6,90 (a, 1Н).

1 6(E)

2 (Е)

15 (В+Е) ) -78 сн s

I "1b

16 (й)

2(Z)

15(Е+Е) I 50 (с, ЗН), 1,60 (с, ЭН), 4,52 (с ° 1Н), 4,62.(д, 2И), 5,1-6,0 (м» ЭН), 5,90 (д, !Н), 6»80 (д IH) 9 73 (д, 1Й).

СНО

В 32(В) lO 25

1,5 (с, ЭН), l 62 (с, ЗН), 4,6 (с, !Н), 4,7 (д, 2Н), 5» 6»2 (м, ЗН) ° 6,35 (д, 1Н), 7 ° О (д, 1Н)» 7,2-8,2 (м, 6Н).

2-хииолил

3 «78

80 (Е) I 5 (с, 2,2Н), 1,55 (с, О ° ВН) °

1 65 (с 2 гН) 7 (с О ВН)

4,5 (с, 1Н), 4,5-4,8 (н, 2И), 5»1-6»! (н» 4H), 6,8 (с, 0,26Н), 7,15 (a, 0,74Н), 7,4 (н, 5H).

12(Е,Z) сн8

"78

3 -78

В 20(E) I 45 (с, Зн), 1,55 (с, ÇH), 4,55 (с» IН), 4,65 (Д» 2Н), 5, 2-6, 1 (н, ЗН), 6,!5 (д, 1Н) ° 6„75 (A» 1Н), 7,05-7,75 (н, ЭН) °

4(Е) 1,5 (с, >Н), 1,6 (с, ЗН), 4.6 (c. 1Н), 4.68 (a. 2Н), 5,1-6,1 (и, ЗН), 5,77 (с, IН), 6 ° 57 (с, lн), 7 ° 2"7,64 (м, 3H), 7,64-8,16 (м, 2Н). °

5 -78 сн

3H), I ° 62 (с, ЗН) ° 4,60

4,69 (д ° 2Н), 5,1 6,3

6,1 (a» IH)» 7»03 (a» (с, 5H)..1»52 (с, (с» 1И)» (н, ÇH), 1й). 7,4

30(В) Щ СНЗ

N у1

-78

14 (E) 1,55 (с, ЭЫ), 1,65 (с, Зн)» 2,55 (с, 6Н), 4,65 (с, IH), 4,75, (д, 2Н) ° 5»1-6,1 (и, ЗН), 6,25 (д, 18) °

6,9 (с» IH), 7 0 (a, !Н).

10(В,Е) ОСН> 3 -78

5 (c 3Í) 16 (с ЗН) 385 (с, ЗН), 4,55 (с, 1Н) ° 4 ° 7 (д, 2Н), 5,1-6,! (н, ЗН), 6,2 (д, !Н)»

7,0-7,5 (н, Зн), 8,2 (т, IH). (E) 15

1395144

Продолжение табл.3

l,5 (с, ЭН) fò6 (с, ЗН), 4,4-4,8 (и, 5H), 5,1"6,3 (и, 6Х) ° 6,2 (д, IH) ° 7 ° 15 (д, 2Н) ° 7,4 (д, IH) °

8,!5 (.. 1H).

04 Н2(Н (Б2 5 - -78

1,6 (e ЭН), 1Н), 4,65

ЭН) ° 6,2

7,0-7,7

3 -78

Ь 27 .Н»иаомвр: 1,5 (с, ЗН), 1,6 (с, ЭН), 4,55 (с, IH) 4,67 (м, 2Н), 5,0-6,2 (и, ЗН), бе !5 (д, IН), 6,95 (д, IH)

8,4-8 8 (и, ЗН), 5 -78

С SO

Е-иаоиер! 1,5 (с, ЭН)

4,55 (с, IH) ° 4,7 (и, (и, ЗН), 6,2 (с, IH)

ЗН)> 8,5 (д, IН).

l,7 (с, ЭН), 2Н), 5, 1-6;2

6,5-7,0 (и, S -78

Таблица 2

Структура, выход и физические свойства натриевых солей .6-замещенных иетиленпенициллановых кислот

RicH

СН!

СнЗ

" COGNAC

95 Желтое твердое вещество, ПИР,(Р О), м.д. (хим.сдвиг): 1,50 (с, ЗН), 1,58 (с, ЗН), 4.,3 (с, 1Н), 5,83 (д, 1Н), 7, 1 (д, 1Н); HK-спектр. (KBr), см . !

573, 1607, 1688, 1775, 3460, (Е) Cl

89 ИК-спектр (KBr), см : 1580, 1609, 1679, 1758, 3491.

80 Белое твердое вещество, ПМР (D О), м.д. (хим,сдвиг): 1,48 (с, ЗН), 1,56 (с, ЗН), 2,50 (с, 3Н), 4,20 (с, 1Н), 5,88 (с, 1Н), 7,2 (C, 1Н) "„

ИК-спектр (KBr), см : 1396, 1606, 1749, 2926, 2963, 3552. сн s (е) и гексаи!втилацетет (9г!), д1 ° rextax39тилацетат (7ФЗ)

8 хлороформ, C клорофори!этнлацетет (9!1), D « клороформгэтилацетат (99: 1).

В-иэомер (R< в вити-конфигурации относнтелъио Ьеталактама)

2-яеоиер (R, в сии-конфигурации отиоснтелъио Ьеталактама) (а1 Нроводит с формилметнлентрифеиилфосфораион в Ьвиаоле.

В-иаомер! 1,5.(с, ЗН)

2,6 (a, ЗН), 4,6 (с, (м, 2Н), 5,1-6,2 (м, (д, !Н); 6,85 (д, IН) (и, ЭН), 1395144

18

11родолжение тлел>2

Светло-желтый порошок.

Белый порошок, ПИР (О О/ЛИСО) и.д. (ким. сдвиг): 1, 5 (с, 6Н) (с, 1Н), 6,1 (д, 1Н), 7,0 (д, 7,4 (с, 5Н); ИК-спектр (KBr), 1626, 1642, 1655, 1742, 3434.

4,25

1Н), см

Таблица 3

Структура, выход и фнэнчесхие свойства аллиловых эфиров I, I-диоксо-6-эанекеиных нетиленпенициллаиовых кислот

Фиэнческне свойства Н-ЯМР (CDC1 ), ч/мли (делъта) Элнент длл силикагелл

Выход, Х

Нэоиер

38), 1,60 (с, 38), 4,50

4,70 (д, 28), 5,1-6,0

5,32 (с, 1Н), 7,1 (н, IН), IH).

l>42 (с> (с, 1Н), (и, ЗН), 9,73 (д, СНС1

22 (Е) СНО

2-хниолнл

l,5 (с, ЗН)> 1,6 (с, ЗН), 4,45 (с, IН), 4,7 (д, 28), 5, 1-6,1 (м, ЗН), 5,8 (д, 18), 7,3-8,5

<м, 7H).

28 СНСI (Е) 6-хлор-2-пириднл (E) 1,5 (с, ЗН), 1,6 (с, ЗН), 4,45 (с, IН), 4,7 (д, 28), S 1-6,3 (м, ЗК), 5,75 (д, IН), 7,1-7,8 (м, 4Н).

34 СНС1

СН, <Е)

K К

I 6 (с, ЗН), 2,55 (с, 18), 4,7 (д, (м, ЗН), 5,7 (д, 1Н), 7,3 (д, 18).

l>5 (с, 38), (с, ЬН), 4 ° 5

2Н), 5,0«5,9

IН), 6 9 (с, 8 СНС1 (792. сырого соединеяил) 1,6 (с, ЗН), 3,8 (c, IН), 4,65 (д, (к, ЗН), 5,8 (д, 1H), 7,8 (д, 18) 9

47 (Е) Гексак: этнлаиетат (1:1) ОСН <Н-С з (Е) l,45 (с, 3H), 1>6 (с, ЗН), 4,44,8 (к, 5H), 5>1-6,3 (н, 68), 5,65 (д, 18), 7, 15 (д, 2Н), 7 ° 7. (д, 18), 8,15 (т, IH) 54

Гехсан: этнлацетат (I l I) 1,5 (с, ЗН), 1,64 (с, ЗН), 2,64 (с, ЗН), 4 ° 48 (с, IН) ° 4,74 (д, дублет триплетов, 28), 5,3-5,5 (н, 28), 5,8 (д, IH), 7>1-7,2 <м> 2Н),.

7,25 (д, IH)> 7>6 (т, IН).

Нифракрагный спектр (KSr), сн

1588, 1688> 1728, 1756, 1795, 2931, 2976, 3433.

53 СНС1

I,56 (с, ЗН), 1,7 (с, ЗН), 4,6 (с, 18)> 4,85 (и, 2Н), 5,2-6, 2 (н, ÇH), 5,8 (д, IН) ° 7>4 (д, iH), 8,5-9,0 (и, 38). (Е) 40

СНС1э этнлапетат (9э 1) (Е) 99

t ° 5 (с> ЗН)> (с, ÇH)> 4,5

2H), 5,2-6,3

18) 6,1-7 0

lH), 8,5 (д, Очистка ие требуетсл е

Ь последункем эксперименте сулъфон (n 2) с выходом 292 долучавт э>пэнрованиеи иэ колонки с снлнкагелем хлороформом, содерхащим 22 этилапетата, а такие получают более ооллрную фраки>ео, ндеитэ>фипируенув хак сулъфокснд (n l) с выходом 27Х.

С Н (К) с н (E) I

1,4 (c, ЗН), (с, ЗН), 4,4

28), 5,3 -6,2 !

Н), 7,4 (с, 8,35 (т, 18)..

17 (с,38) ° 39 (с, 18), 4 ° 75 <», (и, ЗН), 5,7 (д, (н, 2Н), 7,2 (д, 1H).

1395144

Таблица 4

О О

Выход, Е

Ивонер физические свойства

Н-ЯМР (Э О); ч/млн (дельта): I 5 (c ЗН), 1,6 (с, ЗЙ)> 4,24 (с, .18) 4,30 (дп, 28), 5,75 (с, IH), 7,20 (д, 1Н), Инфракрасный спектр (KBr), сн : 1618, 1674, 1767, 3408, 3440.

53 (Е) ю

2-xsllomm

Н-ЯМР (250 МГц, ДМСО), ч/млн (дельта)

1,45 (с, ЗН), 1,48 (с, ЗН), 3,82 (с, IH)

5,96 (с, IH), 7,55-8,55 (м, 7Н).

Инфракрасный спектр (KBr), см : 1619, 177 l 3437.

76 (Е) lH-ЯМР (250 МГц, ДМСО), ч./млн (дельта):

1,56 (с, ЗН), 1,64 (с, ÇH), 4>34 (с, 18)

6 IS (с, IН), 7,45-8,0 (м, 48) .

Инфракрасный спектр (KBr), см : 1624, 1771, 3433 °

6-хлор-2-пи- (Е) ридил

СН (, Н (E) г

Кч К H-ЯМР (250 МГц, Р О), ч./млн (дельта):

1,52 (с, ЗН), 1,60 (с, ЗН), 2,5 (с, 6Н) ° 4,32 (с, !Н), 6,16 (д, IH), 7,35 (д, 18), 7,65-7,75 (м, IH).

Инфракрасный спектр (KBr) см : 1629, 1781, 3403.

75 осн, К

Н-ЯМР (250 МГц, CDC1g) > ч/мпи (дельта)

1.42 (с, ÇH), 1,48 (с, 38), 3,85 (с, -I H), 3,95 (с, ЗН), 5,85 (д, 1Н), 7,45 (д, IН), 7,45-8,0 (и, 2Н), 8,22 (и, IН), Инфракрасный спектр (KBr), см : 1617, 1767, 3454.

Инфракрасный спектр (KBr), см : 1553, 1622, 1769, 3413..

1-оксо-2-хн- (Е) полил

Н-ЯМР (ДМСО), ч/млн (дельта):

l,35 (с, 6Н), !,4 (с, 1,48), 1,44 (с, 6Н), 1,48 (с, 1,4Í), 3,7 (с, IH), 4,55 (д, IН), 4,75 (д, 18) 5,15-5,5 (и, 2Н), 5,67 (с, 0,68), 5,8 (с, 0,4Н), 5,8-6,0 (м,.О>58), 6,0-6, 2 (и, 0,5H),.

6,75-7,0 (м, 28), 7,4-7,5 (и, 1H), 8,2 (д, 0,58) °

Инфракрасный спектр (KBr), сн : 1613, 1760, 3429.

ОСНфМСНУ (Е+г) 99 (1 нгроскопичиай хвлиеэ ад . colt!> ) (}.

Н-ЯМР (D<0) > ч,/млн (дельта); !,8 (с, ЗН), 1,9 (с, ЗН), 4,56 (с, IH)

7,2 (18)> 7,34 (1Í), 7,62 (!Н), 8,68 (!H).

> С-SMP (D O)> ч/млн (дельта)! 20,9;

22 ° 7> 58 ° 7 ° 64>6 ° 68>7 74>6 !З>9!

1! 5>9 ° 134 ° О> 134>2 ° 54>б> 55 ° 1 ° 169>4ъ

173,7; 175,6. (Е) Структура, выход и фиэические свойства иатриевых солей 1, I-диоксо-6занев!енных метиленпенициллвновых кислот

1395144

О

D сч л

3 3 8 л о сч — сл сч сч С4 л л,D сч л сЧ л

«« « с ««е °

%«Ю сЧ о

Я сс у сч л л сс сЧ е со

Ю о сч л сч л ссс сЧ чс

D сч

1 I л э а

Q +» «сл ;н B

w$ g й3 н м н и н н

w н н нс н н в о ов

v н

"3r

Ф

k

Г сЧ

IV

М

Ф

В б

3 3 Р 3 ю . 8 и сч к сч е «Ф сч сч ссс л л л h

3 и 8 8 н 3 3 х сч — Х сч — а л л л

ill о О сЧ о сс

8 ссс сс) с с сч ссс сч «cc cc« л л

3 3 g 8 8 н 8 о н

° л л A h h л о g 3 о н 3 о н

3 g 3 3 g 8 о е .V л л л

IA

Ж о сч 8 а л, л л сч

3 о 3 о 8 о н

c4 g сч сч Я сч сч 35 л ч л ю к V

1395144

CV а 8 а

»ч

Д а

3 <ч а о о

»ч ч л

8 л и и

3 еч g

Я

8 л

cv .а

1 л а

3 3 ". а 8

»ч g c» + р» cv c4 л л я

3 л

CV ю ю а 3 ° а 3»ч о оа ь . м м а c» - ch»ч а л л л л а а

»ч 8»ч ©.. c»

»ч ф <ч Ф g сч Ф Л»»ч а л

A л л

8 3 л

3 3 8 3 3 3 и 8 3 и 8 8 8 8

g c4 g »ч» g»ч g c» g c» th»ч s Ц л л л л .я л л я l о

g сч сс g»ч»ч g cv g»ч»ч g »ч»ч ЛЛ

v ч М A I ю

3 g g 3.о а If» c» o р» ч w y К e g сч п ys»ч е рл еч а в л л A

3 8 О, о

g 3 Й g „® g . я g „-ла 5» „3 л 1 л л е g 8 в л я .I л ф сч ф 8

A а л

Ч

»ч Я g cv ec g

8 8 а ю я м

g 5 g g З.о .,л-v . a

)8

;cv © л

a g 3 е л н 8 л н м н и и и .й и

w и и Н и и й w и й и м и и и и и н и

3 л

8 е °

- Е л

»ч м а л

3 и я

МЪ

3 а еч о а» л а

1395144

6д„3аи3"e5

I м е.

8 8 3 3 л A Л

8 8 8 8

8 8 g 8 л Л A

8 3 еч Я е еч Я

М л

3 3 g go 3 g 3 8 H 3 3 н 3 8 g 8 8 g 8 3 л л л Л A A A A I л л Л A

3 D 8 о л v v

3 3 Ж еч еи ее С л л еч

35 еч л еЧ о о ее е»» л

8 cv с»с щ

3 еЧ еч че Ц л

° еч л

3 3 л

8 3 н 3

3 3 л л

»л .3 Г сп

A ю еее 3 р» еч ч> л о о о»c» о в еч еч ссс еч л л о еч»е» рИ л

D н о о щ еч еч л ч

g Д еч Я л ч н 3 о

СЧ ЕЧ л

8 о н 8 о н 8 еч еч g еч еч g еч л 4. Л Ч о н еч я ч еч еч л ч н н н н н н

H H H H Н H н Н н

H H H . H H н н н н н, н w и н н н н н н

w н

0 сс ф 8 8 8 g g 8 g g 8 л л A л

3 8 3.- 8

Я лл . м м 1) Й - - л л л,» I л В

3 о g 8 î g 3 о g 8 î g 3 о

»»

В

3 3 c»C еч л л

»v »» я 3 еч в еч Ф л

1 395 I 44

8 < 8 8

3 о !-!.hl 3й ч

8 8 еч м cv 4 а

6 8 „8 3 л . 1

Ol я 5 а, 8

@ " 8 8 8

ФО л

CV о

Л о g о î g

v 1 й.. о !м еч !! «1 л

3 н 8 8 8 н

a h — м! !ч — м!

Л д л

Щ МЪ

С4 Ф 4

Ф о в

3 м щ я е е

Н H M

Н Н H H Н

H Н Н H H H H

° В 1 "

1)1 о эоле м м !: v !- !. м и м о !- х s ек окоем .! ! ! 4

Рм Vl Q Ф Ч 35 е м