Способ получения замещенных винилцефалоспоринов
Изобретение касается замещенных цефалоспоринов, в частности винилцефалоспоринов (ВЦ) с Z - конфигурацией по экзоциклической связи общей формулы
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
А3
„,SU„„1 07 (5D 4 С 07 D 501 24
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ!
/
S )
n- R,-P-а,- Н3-СН(ННЯ)-C 0» к-с(соотг)-с -сн,э б П -Й -И-R)-С Н -CH(NHR)-Сф)-Nfl CH — 8 СН ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3698551/23-04 (22) 24.01.84 (31) 461883; 564604 (32) 28.01.83; 28.12.83 (33) US (46) 30.06.88. Бюл..9 24 (71) Бристоль-Мейерз Компани;(U8) (72) Есио Абе, Такаюки Канто, Дзюн Окумура, Хидеаки Хоси и Симпей Абураки (дР) где R — Н, аминозащитная группатрет.-бутоксикарбонил R, - Н, ОН галоген, низший алкил, И -" Н или. ОН; R- - H, низший алкил, аралкил, низший алкокси(низший) алкил, R — H или сложноэфирная группа, которые обладают антимикробной активностью и где В(-Яя и В4 указа ве, в среде ,.несмешивающегося с водой органического растворителя в присутствии водной щелочи при комнатной температуре. Полученный фосфоранильный продукт обрабатывают в безводных условиях при комнатной температуре карбонильньи соединением формулы R -СН =.О, где (53) 547.869.1.07(088.8) (56) Патент Великобритании Р 1342241, кл. С 2 А, 1974. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАМЕЩЕННЫХ ВИНИЛЦЕФАЛОСПОРИНОВ (57) Изобретение касается замещенных цефалоспоринов, в частности винилцефалоспоринов (ВЦ) с Z — конфигурацией по экзоциклической связи общей формулы могут быть использованы в медицине. ,Цель изобретения — создание соединений указанного класса, обладающих лучшими свойствами. Получение соединений ВЦ ведут из трифенилфосфина и соединений формулы В имеет указанные значения, с после дующим, в случае необходимости, снятием аминозащитной или сложноэфирной группы и выделением целевого продукта. Испытания ВЦ показывают, что они активны к грамположительным и грамотрицательнья, а также анаэробиым бактериям. 8 табл. 1407400 Изобретение относится к области ! ,получения новых замещенных винилцефалоспоринов общей формулы. (5 ( де R - водород или аминозащитная группа, такая. как трет.-бутоксикарбонил; R, — водород, гидроксил, галоген или низшая алкоксигруппа; R I — водород или гидроксил, R — С -С -алкил или С -С -арал3 4 Ф и к ил, R — водород или сложноэфирная группа, с Z — - конфигурацией относительно экциклической двойной связи, обладаюе противомикробной активностью. % 25 Целью изобретения является разработка на основе известных методов способа получения новых соединений, обладающих ценными фармакологическими свойствами. 30 Пример 1. Бензгидриловый фир 3-оксиметил-7р-фенилацетамндо3-цефем-4-карбоновой кислоты (сое- нение 1). К перемешиваемой суспензии фосфат35 Ного буфера (рН 7, 162,5 мп) и сухих еничных отрубей (20, г) при комнат-! яой температуре добавляют натриевую соль 7-фенилацетамидоцефалоспорано40 ой кислоты (5 г, 12,1 ммоль) в виде одной порции. Протекание реакции прослеживают методом жидкостной хроматографии высокого разрешения (ЖХВР), пока не завершится гидролиз (5 ч). 45 Суспензию фильтруют, чтобы удалить пшеничные отруби, и фильтрат охлаждают до 5-10 С для экстрактивной этерификации. К охлаждаемому раствору добавляют 32 мл хлористого метилена и затем 24 мп 0,5 М раствора дифенил- 50 диазометана в хлористом метылене. Затем доводят рН смеси до 3,0 с поМощью 287-ной фосфорной кислоты. Через 1 ч реакционной смеси дают на греться до 20 С. Медленно добавляют 56 мп гептана, образовавшийся кристаллический продукт выделяют фильтрацией. Выход продукта 3,0 г (50X). Пример 2. Бензгидриловый эфир 7Р-амино-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 2). К суспензии РС1 (8,3 r, 40 ммоль) в 1000 мл хлористого метилена добавляют 3,2 г пиридина (40 ммоль), смесь перемешивают при 20 С в течение 20 мин. К этой смеси добавляют 5,1 r бензгидрилового эфира оксиметил-7-фенилацетамидо-3-цефем-4-карбоновой кислоты (1) 10 ммоль при перемешиваO нии при -40 С за один прием. Эту смесь перемешивают при -10 С в течение 15 мин и выдерживают при -10 до -15 С в течение 7 ч. К охлажденному о раствору (1-20 С) добавляют 10 мл пропандиола-1,3, смесь выдерживают 16 ч при -20 С и затем при комнатной температуре в течение 20 мин при пе- ремешивании. Полученный раствор прот-., MblBBlo ледяной водой (2х20 мл) и 10 мл насыщенного водного раствора NaC1 высушивают над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Смолистый осадок (12 г) растворяют в смеси хлороформа и н-гексана (2:1) и подвергают хроматографическому разделению,, используя колонку с 200 r силикагеля и тот же растворитель в качестве элюента, Фракции, содержащие указанное соединение, выпаривают в вакууме, остаток растирают в порошок в н-гексане, получая 2,1 r (51X) соединения 2 с т. пл. 110 С (с разл.). ИК-спектр на KBr-. 3400, 2800, 1785, 1725 см, УФ-спектр в этаноле: максимум при 265 нм (Е „ 160) ° ЯИР-спектр, хим.сдвиг в ДМСО-d. + + CDC1q, н.д.: 3,69 (2Н, с); 4,43 (2Н, с) 5,09 (!Н, д, J = 4,5 Гц); 5,24 (1Н, д. Z = 4 ° 5 Гц); 6,87 (1Н, с); 7,3 (1он, м). Пример 3. БеьЬгидриловый эфир 7$-tD-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-пара-оксифенил)ацетамидо)-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 3). К смеси 20,7 r (0,05 моль) бенэгидрилового эфира 7-амико-3-хлорметил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (2) и 20 г (0,075 моль) D-2-(трет-бутоксикарбониламидо)-2-(пара-оксифенил) уксусной кислоты в 500 мл сухого тетрагидрофурана (ТГФ) добавляют 15,45 г (0,075 моль) N,N -äèöèêëoråêсилкарбодиимида (ДЦК), смесь перемешивают при комнатной температуре в 1407400 течение 2 ч и выпаривают насухо. Остаток растворяют в 1 л этнлацетата, а нерастворимую дициклогексилмочевину удаляют посредством фильтрации 5 Фильтрат промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным водным раствором NaCl высушивают над безводным сульфатом натрия и выпаривают досуха. Маслянистый остаток 10 разделяют хроматографически на колонке с 500 r силикагеля (Вакогель С-100) элюируя 4 л хлороформа и 6 л смеси 99Х хлороформа и 1Х метанола. Целевые фракции объединяют и выпари- 15 вают насухо. Маслянистый остаток растирают в порошок с эфир-изопропиловым эфиром, получая 3086 г (92Х). соединения 3. ИК-спектр на KBr, см : 1790, 1710, 20 1670, 1500, 1360, 1230, 1150,. ЯМР-спектр, хим. сдвиг в CDCl мд: 1,45 (XH, с, С-СН1); 3,4 (2Н, шир с, 2 Н); 4 28 (2Н, с СН Сl); 4,86 (IH, д, 4,5 Гц, 6-81; 5, l2 (IH, 25 д, 6 Гц, СН-СО); 5,68 (lH д-д, 8 и 4,5 Гц, 7-Н); 6,63 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 6,93 (1Н, с СН-фенил ); 7,08 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 7,0— 7,5 (IOH» фенил-Н). Этот маслянистый орч аток может использова1ься без хроматографической очистки В йримере 4. Пример 4. Бензгидриловый эфир 78-(D-2-(трет-бутоксикарбонил35 амино) -2-(пара-оксифенил) ацетамидо)— -3-иодметил-3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 4), .Смесь 26,6 r (0,04 моль). 3 т 18 г (О, 12 моль) иодистого натрия в 400 мл 4р ацетона перемешивают нри комнатной температуре в течение 2 ч и выпаривают досуха. Остаток экстрагируют 400 мл этилацетата, экстракт промыВают ВОДным растВОрОм Na S 0 5 ВОДОЙ 45 и насыщенным водным раствором хлористого натрия. После выпаривания растворителя остаток растирают с эфиризопропиловым эфиром, получая 27 r (89X) указанного соединения, Этилацетатный раствор может использоваться непосредственно на следующей стадии (соединение 5) без выделения соединения 4. ИК-спектр íà KBr, 3585854< см 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, ii50 ЯМР-спектр, хим. сдвиг в CDC1, м.д.. 1 47 (9Н, с, С-СН ); 3,3-3,6 (2Н, м, 2-Н); 4, 20 (2Н, с, СН ); 4,89 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-H); 5,12 (1Н, д, 6 Гц, СН-CO); 5,68 {1H, д-д, 8 и 4,5 Гц, 7-Н); 6,62 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 6,92 (1Н, с, СН-фенил ); 7,08 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 7-7,5 (10Н, м, фенил-Н), Пример 5 ° Бензгидриловый эфир 7 - tD-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(пара-оксифенил)ацетамидо1-3-(трифенилфосфонио)метил-3-цефем-4-карбоновой кислоты, иодид (соединение 5) ° Смесь 15,1 r (0,02 моль) 4 и 15,7 r (0,06 моль) трифенилфосфина в 200 мл этилацетата перемешивают 1 ч при комнатной температуре. Образовавшийся осадок собирают посредством.фильтрации и получают 17,4 г (85,5%) соединения 5, плавящегося при 170-180 С. Фильтрат концентрируют до объема 100 мл, хонцентра: разбавляют 500 мл эфира, получая дополнительный выход (1,1 г). 5. Общий выход 18,5 г (91%.). Суммарный выход соединения 5 из 2 74,5%. Он может. быть увеличен до 87,5% вниду исключения стадий очистки и выделения, как указано. ИК-спектр на КБг 1,„„„,, см 1780 1670, 1490, 1420, 1350, 1240, 1150 1090. ЯМР-спектр. хим.сдвиг в ДМСО, м.д.. 1,42 (9Н, с С-СН ); 3,45 (2Н, шир.с., 2-Н); 5-5,4 (ЗН, м, 3-Н и 6 Н); 5 7 (1Н, м, 7 Н); 6 63 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 7,1-7,45 (12Н, и, фе" нил-Н); 7,5-7,9 (15Н, м, фенил-Н). Вычислено, Х . С 61,36; Н 4,85; N 4,13; S 3,15. Найдено, Х: С 61,26; Н 4,82; N 4,11 8 3,92. Пример 6. Бензгидриловый эфир 7р (О-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(пара-оксифенил)ацетамидо)— -3-((2)-1-пропен-1-ил) -3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 6). К раствору 1,8 г (1,77 ммоль) соединения 5 в 100 мл хлороформа добавляют 100 мл воды, содержащей 2 мл (2 ммоль) 1 н.раствора гидроокиси натрия, смесь встряхивают в течение 5 мин. Органический слой отделяют, промывают водой и высушивают над безводным сульфатом натрия. Хлороформовый раствор отфильтровывают, фильтрат концентрируют до 50 мл при понижен07400 6 ИК спектр на КВг» м » 1760, 1660, 1590, !400, !360, 1250 ° УФ-спектр, „„ „, в фосфатном буфере .рН 7, нм(э): 227 (!1300), 280 (8200). ЯМР-спектр, хим. сдвиг в D<0 м.д.. 1,65 (ЗН, д, 6.Гц, -С-CH ); 3,2! (1Н, д, 18 Гц, 2 H) 3 52 (1Н, д, !8 Гц, 10 2-Н); 5,12 (1Н, д., 4,5 Гц, 6-Н); 5,68 (1Н, д, 4,5 Гц, 7-Н}; 5,5-5,9 (1Н, м, винил-Н); 5,95 (1Н, д, 11,5 Гц, винил-Н); 6,94 (2Н, д, 8 Гц, фенил-Н); 7,36 (2Н, д, 8 Гц, фенил-Н). 15 Пример 8. 7в-(D-2-Амино-2-(паратоксифенил)ацетамидо) -3- ((F)-1-пропен-1-ил)-3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 8, ВВ8-1067). Полученный в примере 7 неочищенный 20 продукт,11,9 r соединения 7 до хрома-. тографической очистки, растворяют в 50 мл смеси 0,01 М фосфатного буфера (рН 7,2) и метанола (85:15), раствор подкисляют до рН 6 соляной кислотой 2б.(6 н.). Этот раствор подвергают препаративной жидкостной хроматографии высокого разрешения (ЖХВР) (prep PAK-500/С,, System 500, фирма Уотерэ) чри элюировании 0,01М фосфатным буфе30 ром (рН 7,2), содержащим 15Х метаноЯМР-спектр, хим.сдвиг s СЭС1,, м д. ° 1,3 1 5 (12Н, м С СН ), 3,22 (2Н, шир, си. 2Н}; 4,90 ()Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,15 (1Н, шир. д., СН-СО}» 5,5-6, 1 (ЗН, м, СН СН и 7-Н)» 6,63 (2Н, д 9 Гц, фенил-Н); 6,,91 (1Н, с, СН-фенил); 7,09 (2Н, д, 9 Г »ф Енил--Н); 7,2-7,5 (10Н, м, фенил-Н), Пример 7. Натриевая соль 7P — (Р-2-амико-2-(пара-оксифенил)ацетамидо) -3- (Е)-1-пропен-1-ил) -3-цефем-4-карбоновой кислоты, соединенке 7, ВМУ-28100, натриевая соль. Смесь 318 мг (0,48 ммоль) соединения 6 и 2,5 мл трифторуксусной кислоты (ТФК) перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем разбавляют 50 мл эфира и 50 мл изопропилового эфира. Остаток выделяют и собирают путем фильтрации, промывают эфиром, получая 188.мг (»X) трифтор ацетата 7, который растворяют в 2 мп метанола, К этому раствору добавляют 2 мл (2 ммоль). раствора 2-этилгексаноата,,натрия в этилацетате, смесь разбавляют 30 мп этилацетата, чтобы выделить осадок, который собирают путем фильтрации, промывают эфиром и высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора, получая 144 мг (73X от 6) неочищенного соединения 7.-Неочищенный продукт (135 мг) растворяют в 10 мл воды, раствор хроматографируют на колонке (25 мм х 100 мм), используя около 20 мп набивки фазы ргер РАК500/С; (фирма Уотерз). Колонку элюируют водой и элюат, содержащий целевой продукт, концентрируют до 5 мп, лиофилизуют, получая 93 мг (69X) сое-, динения 7. Т. пл. 200 С (постеп. раэл.). Оценка чистоты по ЖХВД около 60 . 55 5 14 ном давлении. К концентрату добавляют 1 r ацетальдегида, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и выпаривают досуха. Маслянистый остаток очищают хроматографически на колонке с 50 г силикагеля (Вако-гель С-200}, элюируя хлорофор" мом и смесью хлороформа и метанола (99!1). Целевые фракции собирают и выпаривают, получая 318 мг (28 ) продукта 6 с т.пл. 120-130 С (с разл.). HK-спектр на КВг, ) „,, см : 1780, !670, 1710» 1490, il360» 1210, 1150, ла, Элюат анализируют методом ЖХВР, найдено, что первые 4 л фракции содержат цис-иэомер (ВМУ-28100) . Вторую фракцию (1 л), содержащую трансизомер, собирают и концентрируют до 500 мл. Концентрат подкисляют.до рН 3 разбавленной соляной .кислотой и хроматографируют на колонке HP-20 (100 мл}, элюируя 1 л воды и l л 30 .ного метанола, Последний элюат (около 300 мл) концентрируют до 10 мп и лиофилизируют, получая 290 мг неочищенного транс-изомера (55 чистоты). Этот материал растворяют в 100 мл 50Х-ного метанола и обрабатывают активированным углем. Фильтрат концентрируют до объема 20 мл и выдерживают в течение ночи при 5 С. Этот продукт кристаллизуется в виде бесцветных призм, которые собирают при фильтрации и высушивают в вакууме, 129 мг, т. пл. 230 С (с разл.).. ИК-спектр на KBr, 3»«см": 1760, 1680, 1590, 1550, 1520, 1450, 1390, 1350, 1240, УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7)» Лм »,с » нм (э): 228 (13000), 292 (16900) ° 7 14074 ЯМР-спектр, хим.сдвиг в D<0 + сода, мд: 1, 89 (ЗН, д, 6 Гц, С=С-СН з); 3,60 (2Н, с, 2-Н);. 5,13 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,20 (1Н, с, СН-СО); 5,68 (1Н, д, 4,5 Гц, 7-Н); 5,99 (1Н, д-д, 16 и 6 Гц); 6,54 (1Н, д, 16 Гц); 6,98 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 7,41 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н). Пример 9. Кристаллическая 7Р-(Л-2-амино-(пара-оксифенил) ацетамидо) -3- ((Z)-1-пропен-1-ид) -3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 9, ВМУ-28100). Первую фракцию (4 л), полученную методом препаративной ЖХВР в примере 8, содержащую цис-изомер (ВМУ— 28100), концентрируют до объема 2 л, концентрат подкисляют до .рН 3 разбавленной соляной кислотой, Раствор загружают в колонку, содержащую 1 л фазы HP-20, и колонку промывают. 6 л воды, пока рН отходящего потока не установится равным 7,0. Затем колонку элюируют 4 л 307.-ного водного 25 .метанола. Элюантный раствор анализируют методом ЖХВР и соответствующие фракции объединяют (около 2,5 л) и концентрируют до 50 мл при гемпературе ниже 40 С при пониженном давле- 30 нии. Образуется кристаллический осадок. Концентрат охлаждают при О С в течение 2 ч, кристаллический осадок собирают путем фильтрации, промывают 807-нья водным ацетоном, затем 100Хным ацетоном и высушивают в вакууме над P О, получая 4,09 r чистого кристаллического целевого продукта, с т. пл. 218-220 С (с разл.) ° бесцветные призмы чистотой 95Х, как найдено по анализу ЖХВР. ИК-спектр, на КВг, O„м,смк с 1750, 1680, 1560, 1520, 1460, 1390, 1350, 1270, 1235. УФ-спектр в фосфатном буфере (РН 7) 45 Я, нм (э): 228 (12300), 279 (9800). ЯМР-спектр, зим, сдвиг в D Î + NaHC03, мд: 1,71 (ЗН .д, 6 Гц), т. С-СН ); 3,27 (1Н, д, 18 Гц, 2-Н); 3,59 (1Н, д, 18 Гц, 2-Н); 5,18 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,22 (1Н,-с, СНСО); 5,73 (lH д, 4,5 Гц, 7-Н); 5,5-6,0 (1Н, м, СН=С); 6,02 (1H, д, 11 Гц, GH=C); 6,98 (2Н, д, 9 Гц, фенил-H); 55 7,41 (2Н, д, 9 Гц, фенил-H) Вычислено, 7.: С 54,26; Н 5,06; N 10,55; S 8,05. С Н Х 068 1/2Нф 00 8, Найдено, .: С 54,15; Н 5,13; N 10,30; S 8,38. С 54,19; Н 5,08; N 10 42 S 8,04. Маточный раствор из предшествующей кристаллизации концентрируют до объема 1О мл и обрабатывают 20 мл ацетона. После выдерживания раствора в холодильнике в течение ночи образуется кристаллический осадок, который собирают посредством фильтрации и высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора, вес 670 мг (чистота 90,по данным ЖХВР). Часть этого материала (560 мг) растворяют в 200 мл 507-ного воднбго метанола, раствор обрабатывают 0,5 г активированного угля и фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении при 40 С до объема ю 20 мл и хранят в течение 5 ч при 5 С. Продукт кристаллизуется, его собирают путем фильтрации, промывают ацетоном и высушивают в вакууме над Р О, получая 227 мг кристаллического ВМУ-28100 (чистота 98Х по данным ЖХВР). При лиофилизации маточного раствора получают 181 мг ВМУ-28100, имеющего чистоту 957 (ЖХВР). Пример 10. Дифенилметиловый эфир 7P-tD-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(пара-оксифенил) ацетамидо)— -3-винил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 10). Раствор 3 г (2,95 ммоль) бензгидрилового эфира 7-(2-(N-трет-бутоксикарбониламино)-2-(пара-оксифенил) ацетамидо),-3-(трифенилфосфонио)метил-3-цефем-4-карбоновой кислоты, иодида (5) в 50 мл хлороформа встряхивают со смесью 3 мл (3 ммоль) 1 í.раствора едкого натра и 50 мл воды при комнатной температуре 1 мин, Отделяют органический слой после добавления насьлценного раствора NaC1 (20 мл) и промывают водой (Зх30 мл). К органическому раствору добавляют 2,5 мл 357-ного водного формальдегида при тщательном перемешивании и охлаждении водой. Перемешивание продолжают в течение 20 мин. Органический слой отделяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Концентрат помешают в колонку с силикагелем, которую элюнруют хлороформом (600 мл) и 2Х метанола в 800 мл хлороформа, получая 850 мг (457) указанного соединения. Тонкослойная хроматография (ТСХ): R 00 10 :хлороформ = l: 10), выпаривают, получая 1,08 г (55 ) указанного соединения ИК-спектр на КВг, 4макс 1780, 1680, 1500. Н р и м е р 13. Натрий 7p-I D-2-амин0.-2-(пара-оксифенил)ацетамидо)— -3-$(Z)-1-бутен-1-ил)-3-цефем-4-карбокснлат (соединение 13, BBS-1058, натриевая соль). Раствор 1,08 r {1,61 ммоль) соединения 12 в 11 мл трифторуксусной кислоты, содержащий 1Х воды, выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре . Смесь концентрируют до объема около 2 мл в вакууме, полученный сироп растирают приблизительно с 20 мп диизопропилового эфира, получая 796 мг желтого порошка, Этот порошок растворяют в 3 мл метанола, раствор обрабатывают 3 мп 0,8М раствора этиленгексаноата натрия в этилацетате, чтобы получить осадок, который фильтруют, промывают диизопропиловым эфиром и растворяют в 5 мл воды. Раствор пропускают через колонку, заполненную 80 мл фазы prep РАК-500/С (сменный патрон фирмы Уотерз), которую промывают водой и элюируют последовательно 10 -ным метанолом, 20Х-ным метанолом и 30 .-ным метанолом. Целевые фракции (просматривают методом ЖХВР) объединяют, концентрируют и лиофилизируют, получая 118 мг (9,4 ) указанного соединения, оценка чистоты 55 . (по ЖХВР); темнеет при нагреве в стеклянном капилляре при температуре выше 180 С. ИК-спектр на КВг, 3„„„„с, см . 1755ю 1660э 1580 ° УФ-спектр s фосфатном буфере (рН 7) дмакс, нм (э): 228 (10900), 278 (7200) ° ЯМР-спектр в D О, хйм. сдвиг,, м.д.: 0,81.(ЗН, т, 7 5 Гц); 1,7-2,2 (2Н, м); 3,25.(2Н, АВ кв.); 5,01 (1Н, д, 5.Гц);. 5,50.(1Н, д, 7,5 и 12 Гц)! 5 58 (1H, д, 5 Гц); 5 78 (1Н, д, 12 Гц); 6,86 (2Н, д, 8 Гц); 7,26 (2Н, д, 8 Гц). Пример 14. Дифенилметиловый эфир 7p-jD-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(пара-оксифенил)ацетамидо)— -3- f(Z) 3-фенил-1-пропен-1-ил) -3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 14). Раствор 3 r (2,95 ммоль) соединения 5 s 50 мп хлороформа встряхи9 14074 0,48 (силикагель, метанол-хлороформ 1: 10), ! Пример l. 7p-tD-2-Амино-21 -(пара-оксифенил)ацетамидо) -3-винил5 -3-цефем-4-карбоновая кислота (соеди .íåíèå 11, BBS-1064). Смесь 850 мг (1,32 ммоль) соединения 10 и 5 мл 90Х-ной водной трифторуксусной кислоты выдерживают при ком- fQ натной температуре в течение 1 ч и концентрируют приблизительно до 1 мл в вакууме. Концентрат растирают с 20 мп диизопропилового эфира, получая 679 мг желтого продукта, который растворяют в 3 мп метанола и затем разавляют 30 мп воды. Этот раствор проускают через колонку с фазой HP-20 (50 мп), которую промывают 200 мл воы и элюируют 250 мл ЗОХ-ного метано- 20 а. Элюат, содержащий целевое соедиение, концентрируют H лиофилизиРуют олучая 197 мг (31 ) указанного сое-. нения, чистота 60Х по оценке ЖХВР, г. пл, 190 С (с разл.). 25 ИК-спектр на KBr „, сьев"" I Il760, 1680, 1615, 1570, 1520 ° УФ-спектр в фосфатном буфере рН 7), i! Ä„, нм (э): 228 (13500), 83 (14400) . ЯМР-спектр в D О, хим.сдвиг,,,д.: 3,6 (2Н, с, SCH ); 5,51 (1Н, э 5 и » 6 Н) â $5ý 73 (1Ню дэ 5 Гцэ -H); 7 03 (2Н, д, 8 Ar,, фенил-Н); 1 ,45 (2Й, д, 9 Гц, фенил-Н). Пример 12. Дифенилметиловый фир ?P -t D-2- (трет-бутоксикарбонилт мино ) -2- (пар а-ок сифе нил) ацетамидо!3- ((Е)-1-бутен" 1-ил) -цефем-4-карбо овой кислоты (соединение 12). Раствор 3 r (2,95 ммоль) соединения 5 в 50 мп хлороформа смешивают «!о смесью 3,2 мл (3,2 ммоль) 1 н.раствора едкого натра и, 50 мл воды, с!месь встряхивают при комнатной тем- 45 Пературе в течение 3 мин. Отделяют органический слой, промывают водой (,3 раза по 30 мп) и насьпценным водным раствором NaC1 и высушивают над безводным сульфатом натрия. К раствору 50 добавляют 1,71 r (29,5 ммоль) пропиоиового альдегида. Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре и концентрируют при пониженном добавлении. Концентрат загружают в колонку с силикагелем, которую элюируют 1 2 . метанола в хлороформе. Объедин яют фракции, для которых наблюдается методом ТСХ пятно с Rf 0,30 (метанол:! !4 вают со смесью 3 2 мл (3 2 ммоль) ! н.раствора едкого натра и 50 мл воды в течение мин. Отделяют органический слой после добавления насыщенного раствора ИаС1 (20 мп), промывают водой (3 раза по 30 мл) и насьпценным раствором NaC1 и высушивают над безводным сульфатом натрия. К этому раствору добавляют 7,2 r (30 ммоль) 50 -ного фенилацетальдегида, смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, концентрат очищают на колонке с 75 г силикагеля, используя l метанола в хлороформе как элюэнт, получают 800 мг (37 ) указанного соединения. ТСХ: R 0,33 (силикагель, метанол: :хлороформ =. 1:10). ИК"спектр, KBr . !780, 17101680 см= . Это соединение использовали для синтеза в примере 15 без дополнительной очистки. Пример 15. ?Я-1Р-2-Амино-2-,(пара-оксифенил) ацетамзщо) -3- ((Е),3-фенил-1-пропен-1-ил)-3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 15, BBS-1076). Раствор 800 мг соединения 14 в 4 мп 90 .-ной трифторуксусной кислоты выдерживают в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрируют и концентрат растирают с дииэопропиловым эфиром, получая 490 мг желтого порошка. Раствор порошка в 2 мл метанола смешивают с 20 мп воды и подают на колонку с фазой HP-20 (50 мп), которую промывают водой 250 мл и элюируют 250 мп 30 -ного метанола и затем 300 мл 75 ного метанола. Метанольный (75X) элюат концентрируют и лиофилизуют в 10 мл 75 .-ного метанола и хроматографируют на колонке, заполненной 80 мп фазы (prep РАК-500/С,, сменный патрон фирмы Уотерз). Колонку элюируют 75Х-ным метанолом, получая 158 мг (3! ) целевого продукта. Оценка чистоты по ЖХВР— 65X. Вещество темнеем при нагреве в ст"клянном капилляре выше 175 С. ИК-спектр, КВг, .! см : 1760, . 1680, 1600-1580, 1520. УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7)э 1„„„,, нм (э): 280 (8900) ° ЯМР-спектр в ДМСО-d +D 0 (5йl), хим.сдвиг, м.д.: 4,45 (2Н, д, 4 Гц, CH Ph); 4,87 (1Н, с,.СНАП ); 6,7 07400 12 ЯМР-спектр в CDCl +D О, хим. 30 сдвиг. м д.: 1,45 (9Й, с, трет.-бутил); 3,15 (ЗН, с ОСНОВ); 3,27 (2Н, с, 2-СН ); около 3,5 (2Н, м, -СН— Оме); 4,9 (1H, д, 5,0 Гц, 6-Н); 3,12 (!Н, с, -СН-ND-); около 5,5 (1Н, м, =CH-ÑÍ -); 5,72 (1H, д, 6-Н); 6,18 (1Н, д, 12 Гц, -СН=СН-СН -); 6,65 и 7,10 (каждый 2Н, д, НО-С Н ); 6,90 (1Н, с, -СНРЬ ); 7,3 (!ОН, с, Ph). Пример 17. 7р- (2-Амино-2(п-оксифенил) ацетамидо) -3- ((Е)-3-меток си-1-пр о лен-1-ил) -3-цеф ем-4-карбоновая кислота (соединение 17, BBS1092). Соединение 16 деблокируют трифторуксусной кислотой (3 мл) при комнатной температуре в течение 1 ч. При выпаривании растворителя с последующим выделением осадка из изопропилового эфира получают трифторацетат продукта, который очищают на колонке с HP-20 хроматографически. Колонку про45 50 мывают 500 мл воды и элюируют 500 мл 30 -ного метанола, чтобы получить 350 мг (75X) целевого продукта. Оцен55 ка чистоты по ЖХВР-90%, т. пл. 160 С 0 (с разл,) . ИК-сп ектр, KBr, ) „„„,, см: 3400, 3180, 1760, 1680. (2Н, д, 9 Гц, фенил); 6,9-7,5 (7Н, м, фенил) . Пример 16. Дифенилметиловый 5 эфир ?P-(D-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(пара-оксифенилацетамидо))— ,-3- ((Z)-3-метокси-1-пропен-1-ил) -3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 16). Раствор 3,0 r (2,95 ммоль) соединения 5 в хлороформе (100 мп) обрэ,батывают смесью 2 н.раствора едкого на- тра (1,8 мл) и 100 мл воды при комнатной температуре в течение 5 мин. Органическую фазу отделяют, промывают 50 мп воды и 50 водного NaC1, высушивают и выпаривают до объема около 10 мл. Полученный красный раствор илида обрабатывают 1,8 мп метоксиацет2О альдегида (!5 ммоль) при комнатной температуре в течение 15 мин. После выпаривания растворителя остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (100 .г), элюируя смесью толуол25 этилацетат (3:1 и 1:1), чтобы получить указанное соединение (750 мг, 38 ) . 1407400 14 УФ-спектр, в фосфатном буфере (рН 7), g „„,,м (s): 28 (500), 279 (9400). ЯМР-спектр в 0 О, хим.сдвиг, м.д.: 3,4 (ЗН, с, ОСН ); 3,40 (2Н, :АВ-кв, 2-СН ); 4,0 (2Й, м, -СН ОМе); 5э19 (IНв дю 4э5 Гцэ 6 Н)l 5э25 (IEэ ,с,,-СН-NDz); 5,77 (IН, д, 7-H); около j5>8 (IH> м., СН-СН -); 6,20 (IH> д„ I11 Гц, -СН=СН-.СН ); 7,05 и 7,45 (каж дыи 2Н, д и д, НО-С Н -) ° Пример 18. Дифенилметиловый ! ;.эфир 7Я-(П-2-(трет-бутоксикарбонил::амино)-2-(п-оксифенил)ацетамидо) -3-! - ((Z)-3-хлор-1-пропен-1-ил) -3-цефем:, -4-карбоновая кислота (соединение 181. Раствор соединения 5 (5 r, l4,9 ммоль) в 100 мл хлороформа обра-! батывают смесью 2 н,раствора едкого ! ;натра (2,9 мл, 5,8 ммоль) и воды (100 мп) при комнатной температуре в течение 5 мин, Отделяют органичес:кую фазу и промывают 50 мл воды и ;50 мл насыщенного раствора NaC1, и 1 высушивают над безводным сульфатом натрия. Фильтрат выпаривают до объема около 20 мл и добавляют 2,0 мл (25 ммоль) хлорацетальдегида. Смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин и выпаривают в вакууме. Оставшийся сироп хроматографируют на колонке со 100 r силикагеля, элюируя 1 ! смесью толуол-этилацетат (3, 1), получая 900 мг (27X) указанного соединения 18. ЯМР-спектр в CDC1 +О О, хим,сдвиг, м.д.: 1,45 (9Н, с, трет.-бутил), около 3,3 (2Н, м, 2-СН ); 3,5-4,0 (2Н, м, -СН -С1); 4,92 (IН, д, 5,0 Гц, 6-Н); 5,12 (IH, с, -СН-ND-); около 5,7 (2Н, м, 7-Н и =СН-СН ); 6,15 (IН, д, 11 Гц, 3-СН=СН-СН -); 6,63 и 7,10 (каждый 2Н, д, и д, НО-С Н,); 6,89. (IН, с, CHPh ); (10H, с, фенил),. При деблокировании этого вещества трифторуксусной кислотой, как в предыдущих примерах (например, 7, 11 и др.) образуется 7-tD-амино-2-(и-оксифенил) -ацетамидо) -3-((Z)-3-хлор-1"пропен-1-ил) -3-цефем-4-карбоновая кислота. Пример 19. Дифенилметиловый эфир 7Я-|D-(трет-бутоксикарбониламиНо)-2-(п-оксифенил)ацетамидо) -3- t(E)— -3-иод-1-пропен-1-ил)-3-цефемкарбоновой кислоты (соединение 19). Смесь 900 мг соединения 18 (1,8 ммоль) и 590 мг иодистого нат5 15 рия (3,9 ммоль) в 18 мл ацетона перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. После выпаривания растворителя остаток растворяют в этилацетате (100 мл), промывают последовательно водой, водным раствором ым р ор м 11а сушивают и выпаривают, получая указанное соединение (1,02 г). ЯМР-спектр в CDC1 +D О, хим.сдвиг, м.д. . 1,45 (9Н, с, трет.-бутил); около 3,4 (2Н, м, 2-СН ); около 3,8 (2Н, м, -CH I);ð 4,90 (1Й, д,,5 Гц, 6-Н); 5,14 (IН, с, -СН-ND-); 5;73 (1Н, д, 7-Н); около 5,5-6,0 (IН, м,. =СН-СН -); 6,68 и 7,10 (каждый 2Н, каждый д, НОфенил);6,78 (1Н,д,15 Гц,З-СН=СН-СН -); 6,99 (IН, с, CHPhi); 7,3 (IOH, с, Ph). Пример 20. .Дифенилметиловый эфир 7Я-tD-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(и-оксифенил)ацетамидо) -3-(3(IН" -1,2,3-триазол-5-ил)тио-I-пропен-1— 25 -ил)3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 20). К раствору 1,0 r соединения 19 (1,3 ммоль) в этилацетате (20 мл) добавляют 0,27 мл окиси пропилена З0 (3,8 ммоль) и 19 мп 0;IМ раствора (1Н-1,2,3-триазол-4-ил)тиола в этилацетате. Смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин и выпаривают при пониженном давлении. Оставшийся сироп хроматографируют на колонке с силикагелем С-200 (50 г). Целевой продукт элюируют смесью хлоро- . форм-метанол (10; 1) и получают 800 мг (837.) указанного соединения. ЯМР-спектр в CDCl +H О, хим. сдвиг, м.д.: 1,45 (9Н, с, трет-бутил); около 3 3 (4Н, .м, 2-СН вЂ” и -СН -"-.-); 4,80 (IH, д, 5,0 Гц, 6-Н); 5,20 (IН, с, -СН-ND-); 5,70 (1Н, д, 45 7-Н); около 5,95 (IH, м, =СН-СН вЂ” ); 6,68 (2Н, д, НО-фенил)1 6,90 (1Й, с, -СН-Phz);ð 7,25 (IОН, с, Ph)g 7,52 (1H, с, триазол-4-Н). Пример 21. 7p-fD-2-амино50 -2-(п-оксифенил) ацетамидо) -3-j3-(IH-2, 2, 3-триазол-5-ил) тио-1-пропен-1-ил) 3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 21, ВВ5-1091) . Смесь 800 мг соединения 20 и 2 мл трифторуксусной кислоты выдерживают 1 ч при комнатной температуре и затем выпаривают досуха. К остатку добавляют изопропиловый эфир и получают желтый осадок (600 мг), который о 15 !4074 растворяют в 1 мл воды и заливают на колонку со 100 мл фазы HP-20..Колонку промывают 500 мл воды и элюируют 30 . метанола и затем 50 -ным метано5 лом. Фракции, содержащие целевое соединение, собирают, выпаривают и лиофилизируют, получая 170 мг (33 ) целевого продукта, оценка чистоты по ЖХВР— 50, т. пл. 180 С (с разл.). ИК-спектр на KBr, 1, cM . 3360, 3280, 1755, 1670. УФ-спектр в фосфатном буфере, 1„,„„ нм (э): 235 (14100); 252 (12300). S1MP-спектр в D О + DC1, хим.сдвиг, 15 м,д.: около 3,4 (4Н, м, 2-СН вЂ”, СН,-S-); 5,43 (IH, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,15 (IН, с, -СН-ND ); около 6,0 (2Н, м, 7-H и =СН-СН -); 6,7 и 7,15 (каждый 2Н, каждый д, HO-Ph-); 8,05 (IН, с, триазол-4-Н). Пример 22. Бензгидриловый эфир 7Р-(Р-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-фенилацетамидо) -3-(трифенилфосфонио)метил-3-цефем-4-карбоновой 25 кислоты, иодид (соединение 22). Смесь 14,5 г (0,0196 ммоль) бензгидрилового эфира 7-(0(-)-а-(трет-бутоксикарбониламино)-а-фенилацетамидо) -3-иодметил-3-цефем-4-карбоно- 30 вой кислоты и 5,24 r (0,02 моль) трифенилфосфина в 300 мл этилацетата перемешивают при комнатной температуре 2 ч.. В эту реакционную смесь добавляют 200 мл эфира для образования 35 осадка, который собирают посредством фильтрации и промывают эфиром, получая 14,3 r (73 ) указанного соединения. Фильтрат концентрируют до 50 MJI и концентрат разбавляют эфиром 4р получая 2,4 г дополнительного выхода продукта. Общий выход 16,7 r (85 ). ИК-спектр, KBr, 5 „, см : 1780 ° 1690, 1480, 1420, 1350, 1240, 1150. Пример 23. Бензгидриловый 45 эфир 7 - (D-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-фенилацетамидо) -3- ((Z)-1-пропен-1-ил) -3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 23). K раствору 5 г (5 ммоль) соединения 22 в 200 мп хлороформа добавляют смесь 100 мл воды и 5 мп (5 ммоль) н,раствора едкого натра, смесь встрял вают 3 мин. Отделяют органический слой„промывают водой и насыщенным раствором NaC1 и высушивают над безводным сульфатом магния. Хлороформовый раствор фильтруют, фильтрат концентрируют до 100 мп при понижен00 l6 ном давлении. К концентрату добавляют 3 мл ацетальдегида, смесь перемешивают при комнатной температуре 1,5 ч и выпаривают досуха. Маслянистый остаток хроматографируют на колонке с 50 г силикагеля (кизель-гель 60), элюируя хлороформом. Целевые фракции собирают и выпаривают досуха, а остаток растирают с н-гексаном, получая 990 мг (31 ) укаэанного соединения 23. ИК-спектр, КВг, 3,ц,, см . 17 0, 1710, 1660, 1510, 1490, !360, 1240, 1 210, 1150, ЯМР-спектр, в CDC1» хим. сдвиг, м.д..", 1,3-1,5 (12Н, м. С-СН -); 322 (2Н, с, 2-Н); 4,93 (IН, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,23 (IН, д, 8 Гц, СН-СО) 5,56,2 (ЗН, м, 7-Н и винил-н); 6,94 (1Н, с, CHPh); 7,2-7,5 (15H, м, фенил-Н). Пример 24. Натрий 7p-fD-2-амино-2-фенилацетамидо)-3- ((Z)-1-пропенил) -3-цефем-4-карбоксилат (соединение 24, BBS-1065). Смесь 0,94 г (1,47 ммоль) соединения 23 и 3 мп трифторуксусной кислоты перемешивают 30 мин при комнатной температуре, затем разбавляют 50 мл смеси этилового эфира и изопропилового эфира (1:1), получая около 800 Mr выделившегося осадка, который собирают фильтрацией и растворяют в 3 мп метанола. К ра твору добавляют 4,5 мп (4,5 ммоль) 10 раствора 2-этилгексаноата натрия в этилацетате, смесь разбавляют 50 мл эфира и затем 50 мл изопропилового эфира. Осадок собирают путем фильтрации и получают 710 мг неочищенного продукта 24, который растворяют в 20 мп воды, и хроматографнруют на колонке, используя 50 мп набивки фазы prep РАК-500/С (сменный патрон фирмы Уотерз). Колонку элюируют водой и 10/ метанола. Содержащие целевой продукт фракции собирают, анализируя их методом ЖХВР, концентрируют до 5 мл и лиофилизируют, получая 182 мг (31/) целевого продукта, плавящегося при 200 С. Оценка чистоты по ЖХВР-50/ ° ИК-спектр, KBr >„„ „, см . 1760, 1660, 1400, 1180, 1100. УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7), a „, нм (э): 282 (SSOO) ° SIMP-сп ктр в D О,,м.д.: 1,60 (ЗН, д, 6 Г 1, С-СНз); 3,12 (IН, д, 18 Гц, 2-Н); 3,48 (IН, д, 18 Гц, 2-Н); 5 03 (IН, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,62 (1 Н, д, 4 5 Гц, 7 Н)1 5 93 (IH, д, !О Гц, 17 14074 винил-Н); 5,2-5,8 ()Н, м, винил"Н), 7,41 (5Н, с, фенил-Н). П р и и е р 25, Бензгидриловый эфир 7р- )1)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-фенилацетамидо)-3- ((Z)-3-хлор-1-пропен-1-ил)"3-цефем-4-кар боновой кислоты (соединение 25). К раствору 2 г (2 ммоль) соединения 22 в.50 мп хлороформа добавляют )О 50 мп воды, содержащей 2 мл (2 ммоль) 1 н.раствора едкого натра, смесь встряхивают 3 мин. Органический слой отделяют и промывают водой, затем на" сыщенныч раствором NaCl. Высушенный хлороформовый раствор концентрируют при пониженном давлении до объема 30 мп. К концентрату добавляют 2 мп хлорацетальдегида.исмесь перемешивают при комнатной температуре 1 ч, промы- 20 вают водой и насыщенным раствором NaCl, Органический раствор высушивают и выпаривают досуха. Маслянистый ос таток хроматографируют на колонке с силикагелем (50 r Вако-геля 0-200), 2б элюируя хлороформом. Целевые. фракции собирают и выпаривают досуха, получая 534 г неочищенного продукта. ИК-спектр, KBr м,ц,, см : 1780, 17)0, 1660, 1500, 1490, 1360, 1240, 30 1210, 1150. Структура этого образца не подтверждена ввиду нечеткости его ЯМРспектра. Пример 26, Натрий 7р-(Р-2, -амино-2-фенилацетамидо) -3- f(Z)-335 -хлор-1-пропен- 1-ил)(-3-цефем-4-карбоксилат (соединение 26, BBS-1066). Смесь 472 мг (0,7 ммоль) соединения 25 и 1,5 мл трифторуксусной кис- 40 лоты перемешивают 15 мин при 10-15ОC ,и разбавляют 30 мп смеси эфира и изопропилового. эфира (1:)), чтобы получить 330 мг светло-желтого осадка, который собирают посредством Фильтра- 45 ции. К раствору осадка в 3 мл метанола добавляют 2 мл (2 ммоль) 2-этилгексаноата натрия в этилаЦетате и смесь разбавляют 50 мп этилацетата. Образовавшийся осадок собирают путем фильтрации и промывают эфиром, получая 244 мг неочищенного продукта. Раствор неочищенного продукта в 10 мл воды хроматографируют на колонке, заПолненной 50 мл фазы prep РАК-500/С 8 (сменный патрон фирмы Уотерз). .Колонку элюируют водой и IОХ-ным метанолом. Целевые фракции в )OX-ном метаноле объединяют и концентрируют до 5 ип и 00 18 лиофилизируют, получая 60 мг твердого продукта, плавящегося при 200 С (постеп. разл.). ИК-спектр, КВг, )макс ю см 1 1760, 1660, 1630, 1360, 1120, 1070, УФ"спектр в фосфатном буфере, нм (э)1 243 (12700), 200 плечо {4200), Пример 27. 7p- fD-.{-)-2-Амино-2-фенилацетамидо) -3-((Е)-1-пропен-1-ил)-3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 24, BB-1065, в виде амфиона) . 1,5 г,.соединения 23, диметилметилового эфира 7-p(D-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-фенилацетамидо) -3†(i-пропенил)-3-цефем-4-карбоновой кислоты (2,34 ммоль) обрабатывают 3 мп трифторуксусной кислоты, смесь перемешивают 20 мин при комнатной температуре и разбавляют 100 мл этилового эфира, получая 1,15 r (96X) неочищенного трифторацетата BBS-1065. ИК-спектр,КВт, :) „„,, см . !760, 1670, 1200 1130 ° УФ-спектр в фосфатном буфере рН 7)> чмакс 283 нм (a=8300) ° 1,1 r трифторацетата (2,25 ммоль) растворяют в 20 мп воды и раствор хроматографируют на колонке, содержащей 100 мл набивки, полученной из ргер РАК-500/С, (сменный патрон фирмы Уотерз). Колонку элюируют водой, IОХ-ным метанолом и ЗОХ-ным метанолом. Элюат.ЗОХ-ного метанола концентрируют до 10 мп. Кристаллический продукт выделяют, собирают и промы-. вают ацетоном и высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора. Получают 505 мг (46X).чистого BBS-)065 (в виде амфиона), плавящегося при 180— 183 С (с разл.) ° Оценка чистоты— 95Х. ИК-спектр, KBr 4 мс,)1с, см 1750, 1690, 1590, 1400, 1350. УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7), Я„, ц,с . 282 нм(э=8800) . ЯМР-спектр в П О + NaHCO, хим.. сдвиг, м.д. . 1:53 (3H, д, J = 6 Pq, С-CH3); Çэ3 (2Нэ дэ-2 H); 5 03 (IН, д, J = 4,5 и, 6-Н); 5,2 (IН,.с, СН-СО); 5,1-5,8 ()Н, м, СН=С); 5,63 (IН, д, J = 4,5 Гц, 7-Н); 5,92 (IH, д, J =-12 Гц, СН=С); 7,4 (5H, с, фенил-Н) ° Пример 28. П(-)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(3-хлор-4-оксифенил)уксусная кислота(соединение 28) ; 19 14 Смесь 6 г (0,03 моль) 3-хлор-4-оксифенилглицина и 9,8 г (0,045 моль) ди-трет-бутилдикарбоната в 120 мл 50 -ного водного тетрагидрофурана, содержащего 10 мп (0 071 моль) триэтиламина, перемешивают при комнатной температуре 3 ч. Смесь концентрируют до 60 мп и концентрат промывают эфиром. Водный слой подкисляют 6 н.соляной кислотой и экстрагируют 200 мп эфира, Экстракт промывают водой и насьпценным раствором NaC1 сушат над сульфатом магния и выпаривают досуха, получая 10 г маслянистого остатка, который не отверждается при растирании в смеси эфира с гексаном, Пример 29. Бензгидриловый эфир 7р-(О-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетамидо) -3-хлорметил-3- цефем"4-карбоновой кислоты (соединение 29). К раствору 6,2 г (0,015 моль) со. единения 2 и 5,4 r (0,018 моль) соединения 28 в 150 мл сухого тетрагидрофурана добавляют 3,7 r (0,018 моль) дициклогексилкарбодиимида, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч., Дициклогексилмочевину,. которая выделяется при перемешивании, удаляют посредством фильтрации и фильтрат выпаривают досуха, Остаток экстрагируют 200 мл этилацетата, экстракт промывают. водным растворам 07400 20 30 сьпценным раствором NaC1 и высушивают сульфатом магиия. Этилацетатный раствор фильтруют, фильтрат концентрируют до половины объема. К концентрату добавляют 3,9 r (15 ммоль) трифенилфосфина, смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре ° К раствору добавляют 300 мп эфира, чтобы выпал осадок, который собирают посредством фильтрации и высушивают, получая 9,2 г иодина фосфония 30. ИК-спектр, KBr, ) „, см : 1780,. 1680, 1490, 1350, 1240, 1150. В Пример 31. Бензгидриловый эфир 7Р-(О-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетамидо) -3-$(Z)-1-пропен-1-ил)-3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 31). Раствор 9,5 г (9 ммоль) соединения 30 в 200 мп хлороформа располагают слоем со смесью 100 мл воды и 10 мп 1 н,раствора едкого натра, смесь встряхивают 3 мин, Органический слой промывают водой и насьпценным раствором NaC1, сушат сульфатом магния и .концентрируют примерно до 50Х объема. К концентрату добавляют 20 мп 907-ного ацетальдегида, смесь перемешивают при.комнатной температуре в течение 3 ч, обрабатывают безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат выпаривают досуха, остаток хроматографируют на 120 г кизель-геля (фирма бикарбоната натрия, водой и насыщенным 55 раствором NaC1 и высушивают над.сульфатом магния. Фильтрат выпаривают досуха, маслянистый остаток хроматографируют на колонке с 140 г силикагеля (Вако-гель С-200), элюируя смесью толуола и этилацетата (IO:1). Целевые фракции собирают и выпаривают досуха, получая 10 r продукта 29. ИК-спектр, KBr 3„,», см : 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240, 1160. Пример 30. Бенэгидриловый эфир 7J-t.D-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетамидо) -3-(трифеннлфосфонио)-метил-3-цефем-4-карбоновой кислоты (соедине-. ние 30), иодид. К раствору 10 r (14 ° 3 ммоль) соединения 29 в 100 мл ацетона добавляют 11,2 г (75 ммоль) иодистого натрия, смесь перемешивают 30 мин при комнатной температуре. Смесь концентрируют до 30 мп. К концентрату добавляют 200 ип зтилацетата, смесь промывают водным раствором Иа $ Оз, водой, на35 Мерк), элюируя смесь толуола и этилацетата (4:1). Целевые фракции собирают и выпаривают досуха, остаток растирают со смесью этилового и изопропилового эфиров и н-гексана. Получают 1,33 г блокированного продукта 31. ИК-спектр, KBr, 3 см : 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1120 ° Пример 32. 711-(В-2-Амино-2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетамидо) -3— t(Z) 1-пропен-1-ил) -3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 32, ВМУ28060) . Смесь 1,33 r (1,93 ммоль) соединения 31 и 3 мп трифторуксусной кислоты перемешивают при комнатной температуре 30 мин,смесь разбавляют 50 мп смеси (131) этилового и изопропилового эфиров, получая 1,072 r неочищенного трифторацетата 32, который хроматографируют на колонке, заполненной фазой prep PAK-500/С, (сменный патрон фирмы Уотерз) (80 ми). Колонку элюируют водой и IOX-ным метанолом..Элюат 21 14 10Х-ного метанола концентрируют до )0X от первоначального объема, при этом выделяется кристаллический осадок, который собирают посредством фильтрацииэ промывают ацетоном и суЩат в вакууме над Р О . Получают 38 мг, соединения 32 (чистота, 95 ), авящегося при 180-185 С (постеп. аэл.). Фильтрат концентрируют до мп и лиофилиэируют, получая 154 мг полнитепьного выхода продукта, стотой 80 (по.ЖХВР). ИК-спектрэ KBr, Ф „, см 1 l760, 80 ° 1570э 1410э 1390э 1350 1290 ° 1 70 ° УФ-спектр, фосфатный буфер (рН 7), нм (э): 232 (! 0000), 280 (10500) ° SIMP-спектр в Э О + КаНСОээ хим. виг, м.д.: 1,68 (ЗН, д, J = 6 Гц, С С-СН ); 3,25 (IН, д, Л = 18 Гц, 2 Н)э Зэ57 (IНэ дэ J = )8 Гцэ 2 H)s 4 90 (IH, с, СНСО); 5,18.(IН, д, J =, 4,5 Гц, 6-Н); 5,72 (IH д, J = 4,5 Гцэ 7 H)э-5э5 5э9 (IНэ мэ Сф=С); 5,97 (1Н, д, J = 12 Гц, СН=С); 7 02 (IH, д, J = 8 Гц, фенил-Н); 7 3 (1Н, д, !Ю = 8 и 1,5 Гц, фенил-Н); 7 50 (1Н,,д, 1,5Гц, фенил-Н). Пример 3. В(-)-2-(трет-бут ксикарбониламино)-2-(3,4-диоксифен )уксусная кислота (соединение 33a) в смеси с ее 3-(и-4)- моно-0-бутокси к. рбонильными производными (соединен е 336). Смесь 3,66 r (20 ммоль) 3,4-диокс фенилглицина и 9 ° 24 r (40 ммоль) -трет-бутилдикарбоната в 120 мл 50 истого водного раствора тетрагидрофурана э содержащего 1О мп (71 ммоль) триэ иламннаэ перемешивают 16 ч при комнатной температуре и смесь коицентри руют до 60 мл. Концентрат промывают 100 мп эфира, подкисляют 1 н.соляной кислотой и экстрагируют эфиром (i()0x2 мл). Объединенные экстракты прюмывают водой и насьпценным растворо1» NaC1, высушивают сульфатом магния и выпаривают досуха, получая 8 г маслянистого остатка, который представляет собой смесь целевой производной 3,4-диоксифенила и 3- и 4-моно-0-буто сикарбонилзащищенных производных. Пример 34 ° Бензгидриловый эфир 7p-)D-(-)-.2-(трет-бутоксикарбони гамино)-2-(3,4-диоксифенил)ацетамидо -3-хлорметил-3-хлорметил-3-цефем-4 карбоновой кислоты (соединение 34а) 07400 22 и смесь его 3-(и-4) моно-0-бутоксикарбоннльных производных (соединение 346) . Смесь 8 r (19,3 ммоль) соединения 2,8 r смешанного продукта опыта 33 и 4,12 (20 ммоль) дициклогексилкарбоди-. имида в 200 мп сухого тетрагидрофурана перемешивают 1 ч при комнатной 10 температуре. Реакционную смесь выпаривают досуха, Остаток растворяют в 200 мл этилацетата, нерастворимый материал (дициклогексилмочевину) удаляют с помощью фильтрации. Фильт15 рат промывают. водным раствором бикарбоната натрия, водой и насьпценньм раствором хлористого натрия, высушивают сульфатом магния и выпаривают досуха при пониженном давлении. Маслянистый 2р остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (130 г кизель-геля 60), элюируя смесью толуол-этилацетат (5:1).и затем той же смесью (2:1). Элюат с соотношением толуол/этилацетат (5:1) собирают и выпаривают досуха, получая 9,5 г смеси моно-0--трет-бутилоксикарбонил (БОК)-N-БОК дизащищенных производных 346. Элюат с соотношением толуол/этилацетат 30 2:1 собирают и выпаривают досуха, получая 3 г,4-диоксифенильной производной 34а. Соединение 34а: ИК-спектр, KBr мак m 1"70э 1720э 1690э 1500э 1370, 1240, 11507. ЯМР-спектр в CDCl э хим. сдвиг., м д.: 1 ° 42 (9Н, с, С СН ); 3 4 (2Н, шир, с., 2-Н); 4,30 (2Н, шир. с., СН -Cl); 4,85 (IН, д, J = 4,5 Гц, 40 6-Н)э 5,07 (IН, д,.J = 6 Гц, CHNH); 5,74 (1H, д-д, J = 9 и 4,5 Гц, 7-Н); 6,6-6,9 (ÇH, м, фенил-Н); 6,93 (1Н, с, СНРп);, 7,3 (IОН, с, фенил-Н). Смесь 346. ИК-спектр, KBr, э 45 сьГ : 1770, 1720, 1690э с1500э 1370, 1240, 1150. SIMP-спектр в CDCl .хим. сдвиг, м.д. . 1,42 (9Н., С-СН ); 1 55 (9Н, с, С-СН ); 3,4 (2Н, шир.с 2-Н); 4,35 щ (2Н, шир.с,, СН Cl); 6,9-7,1 (4Н, м., CHPh и фенил-Н); 7,3 (10Н, фенил-Н). Пример 35. Бенэгидриловый эфир 7P-LD(-)-2-(трет-бутоксикарбониламнно)-2-(3,4-диоксифенил)ацетамиSS до1-3-трифенилфосфониометил-3-цефем-4-карбоновой кислоты, иодид (35а). Смесь 3 г (4,4 ммоль) продукта 34а и 3,3 г (22 ммоль) иодида натрия в 50 мл ацетона перемешивают при 1О 35 23 14 комнатной температуре 30 мин, смесь концентрируют насухо. Остаток экстрагируют этилацетатом (100 мп), экстракт промывают водным раствором Na NaC1. После высушивания сульфатом магния экстракт концентрируют до 60 мп. К концентрату добавляют 1,4 r (5,3 ммоль) трифенилфосфина, смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре. К смеси добавляют 100 мп эфира, чтобы выделился осадок, который собирают посредством фильтрации и промывают эфиром, получая 3,2 г (70X) иодистого фосфония (35а) ° ИК-спектр, KBr, Эм,к, » см : 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150. По аналогичной методике 9,5 г (12 ммоль) смеси моно-О-БОК-защищенных производных (346) подвергают взаимодействию с иодистым натрием и затем с трифенилфосфином, получая 10,7 r (77X) смеси соответствующих производных моно-О-БОК-Н-БОК-трифенилфосфониометила (356). ИК-спектр, КВг» макс » см : 1770, 1720, 1680» 1480» 1430, 1360, 1240» 1140. Пример 36. Бензгидриловый эфир 7y-(D(-)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(3,4-диокеифенил)ацетамидо)-3- ((2)-1-пропен-1-ил)-3-цефем-4карбоновой кислоты (соединение 36а). К перемешиваемому раствору 3,15 г (3 ммоль). соединения 35а и 10 мп ацетальдегида в 50 мп хлороформа добавляют по каплям 8 мл (4 ммоль) 0,5 н.раствора гидроокиси натрия в течение 10 мин, смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промывают водой и насыщенным раствором NaC1» высушивают над сульфатом магния и выпаривают при пониженном давлении. Маслянистый ос. таток хроматографируют на колонке с 60 r силикагеля (Вако-гель С-200), которую элюирую 2 л хлороформа и 2 метанола в хлороформе, анализируя элюат методом ТСХ (хлороформ-метанол= 10:1). Целевые фракции из 2 -ного метанольного элюата собирают и выпаривают досуха, получая 0,8 г (40X) пропенильной производной Зба. ЯМР-спектр. в CDC13 хим.сдвиг, м.д. . 1,28 (ЗН, д, J = 6 Гц, С-СН ); 1,42.(9Н, с, С-СН ); 3,25 (2Н, с, 2-.Н); 4,92 (IH, .д, J = 4,5 Гц, 6-Н); 5,08 (IН, д, J = 6 Гц, .СН-H); 5,3 07400 24 5,8 (IН, м, СН=С); 5,80 (IH» д, 45Гц,7Н);604(IH,д,J — 11 Гц, СН С); 6 ° 70 (2H, с, фенил Н); 6,82 (IН, с, фенил-Н); 6,92 (IH с, CHPh); 7,3 (IOH, с, фенил-Н). По аналогичной методике подвергают взаимодействию 10,5 г (9,3 ммоль) смеси 3- и 4-О-БОК-N-БОК-дизащищенных производных 356 с ацетальдегидом, получая 3,3 г (4б ) соответствующей 3-пр пенильной произ- водной 366. ИК-спектр, КВг, „„„„,, см : 1770 1700, 1500, 1370, 1240, 1150. ЯЖ-спектр, хим. сдвиг в CDC1 » м.д.: 1,4 (9Н, с, С-СН ); 1,55 (9Н, с, C-СН ); 3,25 (2Н, с, 2-Н); 6,07 (1H, д, J = 11 Гц, СН=С); 6,9-7,1 (4Н, м, СН-фенил и фенил-Н); 7,3-7»5 (l0H, м, фенил-Н). Пример 37. 7p- tD-(-)-2-Амино-2- (3, 4-диоксифенил) ацетамидо J -3— ((Z)-1-пропен-1-ил)-3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 37, ВМУ28068). Смесь 0,8 г (1,2 ммоль) соединения Зба, 0,8 мл анизола и 3 мп трифторуксусной кислоты перемешивают 5 мин при комнатной температуре и разбавляют 25 мл эфира (диэтилового) и 25 мл изопропилового эфира. Образовавшийся осадок собирают посредстisoM фильтрации и промывают изопропиловым эфиром, получая 557 мг неочищенной трифторацетатной соли соединения 37. Раствор неочищенного продукта в 10 мл воды очищают хроматографически на колонке, заполненной 40 !00 мл фазы prep PAK-500/С (сменный патрон фирмы Уотерз), колонку элюируют водой и затем 5 . — ным метанолом, Метанольный элюат (5 ), содержащий желаемый продукт, концентрируют до объема 5 мп и лиофилизируют, получая 231 мг (47X) соединения 37 (в виде амфиона, чистота 90X). T. пл. 200 С (постеп. разл.). ИК-спектр, Ъ„„,„, » cM 1760» 1690, 1580, 1530, 1400, 1360, 1290 ° 1270. УФ-спектр, фосфатный буфер (рН 7), нм (э): 233 (9200), 281 (11000). ЯМР-спектр, хим. сдвиг в D О, м д.: 1 68 (ЗН, д, J = б Гц, С СН ); 3,26 (IН, д, J = 18 Гц, 2-Н); 3,58 (IН, д, J = 18 Гц, 2-Н); 5,18 (IН, с, CHNH); 5,22 (IH, д, J = 4,5 Гц, 25 1407 б-Н}; 5,5-5,9 (2Н, м, СН=С и 7-H) ° . ;; 5»97 (IH, д, J = 11 Гц, СН=С);ð 7,05 (ЗН» м» фенил-Н) ° Аналогично из 3,3 г (4,3 ммоль) N,О-ди-трет-БОК-защищенных производ5 ных смеси Збб получают 1,3 г (75 (, соединения 37 в виде амфиона {чи стота 90 ), которое имеет спектры, идентичные приведенным. 10 11 р и м е р 38. D(-)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(4-окси-3"метоксифенил)-уксусная кислота (соединение 38). Смесь 2,96 г (15 ммоль) D(-)-2-амино-2-(4-окси-3-метоксифенил)уксусной кислоты и 3,6 г {0,0165 моль) ди-трет-бутилдикарбоната в 100 мл 50%-ного водного тетрагидрофурана, содержащего 4,2 мл (0,03 моль) три- 20 этиламина, перемешивают 16 ч при комнатной температуре, реакционную смесь концентрируют до 50 мл. Концентрат промывают 50 мп эфира, подкисяют 1 н.соляной кислотой и дважды 28 экстрагируют эфиром (по 100 мл). Об ьединенные экстракты промывают водой насыщенным раствором хлористого атрия. Высушенные экстракты выпариают досуха, получая 4,38 r соедиения 38 в виде твердой пены. ЯМР-спектр, хим. сдвиг в CDC1»» ..д. . 1,4 (9Н, с, -С-СН ); 3,8 (ЗН, ОСН ); 5,!5 (IH, д, J = 6 Гц, «Н-NH); 6,85 (ÇH, с, фенил-Н).. Пример 39. Бензгидриловый 35 фир 7р-(О (-) -2-(трет-бутоксикарбоамино) "2- (4-ок си-3-меток сифенил)ацетамидо) -3-хлорметил-3-цефем-4 карбоновой кислоты (соединение 39). 40 Смесь 4,3 r соединения 38,5 г fI2 ммоль) соединения 2 и 3 r (15 ммоль) дициклогексилкарбодиимида 150 мл сухого тетрагндрофурана перемешивают 2 ч при комнатной темпера- 45 уре. Выпавшую в осадок мочевину удаляют фильтрацией, фильтрат выпаривают досуха. Раствор остатка в 200 мл этилацетата промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором NaC1 сушат сульфатом магнгя и выпаривают досуха. Маслянис.,тый остаток хроматографируют на кох!онке со 100 r силикагеля (кизельгель 60), которую элюируют смесью то- бб Луола и этилацетата (4:1), анализируя злюаты методом ТСХ (проявитель толуал/этилацетат 1:1 или хлороформ/метанол 50:1). Целевые фракции собира400 2Ь ют и выпаривают досуха, получая 7 г З-хлорметилцефема, со единение 39, в виде твердой пены. ЯМР-спектр, хим. сдвиг, м.д.: 1,4 (9Н, с,.С-СН ); 3,45 (2Н, шир., с, 2-Н) 3»83 (ЗН ° с ° ОСН,) 4»32 (2Н» с, -СН С1); 4,92 (IН, д, 3 = 4,5 Гц, 6-Н); 5,13 (IН, д, J = 6 Гц, CHNH); 5,65 (IН, д, J = 6 Гц, NH}; 5,80 (IH, д-д, J = 8 и 4,5 Гц, 7-Н); 6,85 (ÇH, фенил-Н) 6,95 (IН,-с, СН-Ph) 7,27,5 (!ОН, м, фенил-Н). Пример 40. Бензгидриловый эфир 7,!1-(D(-}-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(4-окси-3-метоксифенил) ацетамидо) -3-трифенилфосфониометил-3-цефем-4-карбоновой кислоты, иодил (соединение 40). Смесь 7 г (1О ммоль) соединения 39 и 7,5 г {50 ммоль) иодида натрия в 100 мл ацетона перемешивают при ,комнатной температуре в течение 30 мин и выпаривают досуха, Раствор остатка в 200 мл этилацетата промывают в водном растворе Na S О водой 2 и 3» и насьш!енным раствором NaC1, сушат сульфатом магния и концентрируют до 100 мл. К концентрату добавляют 3,1 r {12 ммоль) трифенилфосфина, смесь перемешивают ) ч при комнатной температуре, К реакционной смеси добавляют 100 мл эфира и выделившийся осадок собирают посредством фильтрации, промывают эфиром и сушат, получая 5,8 г трифенилфосфониевой производной соединения 40. Эфирный фильтрат концентрируют до 10 мл, к концентрату добавляют 300 мп эфира, чтобы получить 0,9 г продукта в виде дополнительного выхода." Общий выход 6,7 r. Пример 41, Бензгидриловый эфир ", -(D-(-)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-(4-окси-3-метоксифенилацетамидо)-3- 1(Е)-1-пропен-1-ил 1-3t -цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 41). К перемешиваемой смеси 5,8 г (5,5 ммоль) соединения 40 и 10 мл 90 -ного ацетальдегида в 100 мл хлороформа добавляют по каплям 11 мл (5,5 ммоль) 0,5 г раствора гидроокиси натрия в течение 25 мин, смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промывают водой, затем насыщенным раствором NaC1, сушат сульфатом магния и вьгпаривают насухо. Маслянистый остаток . хроматографируют на колонке с 130 r 07400 "8 27 14 силикагеля (киз ель-гель 60), элюируя ее смесью толуола и этилацетата (соотношение изменялось постепенно4:1 (1,.3 л), 3:! (1,1 л), 2:1 (1,0л): и элюат собирают во фракции по 20мл. Фракции 26 - 59 объединяют и выпаривают досуха, получая 830 мг целевой 3-пропенильной производной соединения 41 в виде твердой пены.! О 25 Спектр ЯМР в СРС1, хим..сдвиг, м,д. . 1,35 (ÇH, д, =СН-.СН ); 1,4 (9Н, с, С-СН )", 3,85 (ЗН, с, О-СН ); 6,07 (1Н, д, J = 11 Гц, -СН-С), Пример 42. 7у-(Р-(-)-2-Амино-2-(4-окси-3-метоксифенил)ацетамидо) -3- f(Z)-1-пропен-1-ил)-3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 42, ВМУ-28097). Смесь 830 мг (1,2 ммоль) соединения 41, 0,5 мп анизола и 2 мл трифторуксусной кислоты перемешивают при комнатной температуре 5 мин, смесь разбавляют 30 мл эфира (этилового) и 30 мл изопропилового эфира. Образовавшийся осадок собирают посредством фильтрации, промывают изопропиловым эфиром и сушат, получая 437 r неочищенного трифторацетата соединения 42. Неочищенный продукт хроматографируют на колонке, заполненной 100 мл фазы prep РАК-500/С, (сменная колонка фирмы Уотерз), которую элюируют водой и 5Х-ным метанолом. Элюат 5 -ного метанола концент" рируют до 5 мп и лиофилизируют, по-. лучая 225 мг соединения 42 (амфион, чистота 90Х). Т. пл. 176-180 С (разл.) . ИК-спектр, 4„„„„с, см : 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280 ° УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7), 3„„ „,, нм (э): 235 (10000), . 280 (11000). . ЯМР-спектр в D О, хим. сдвиг, м.д.. 1,68 (ЗН„з д, J =.6 Гц,.С-СН ); 3,25 (1Н, д, J = 18 и,.2-Н); 3,57 (1H, д, J = 18 Гц, 2-Н); 4,01 (ÇH, с, ОСН ); 5,10 (1Н, с, СН-СО); 5,19 (1Н, д, J = 4,5 Гц, 6-Н); 5,78 (1Н, д, 7 = 4,5 Гц, 7-Н); 5,5-5,9 (1Н, м, CH=C) 5,98 (1Н, д, J = 11 Гц, СН=С); ;7,07 (2Н, с, фенил-Н); 7,17 (lHj шир. с, фенил-Н). ЖХВР: время удержания 9,3 мин (0,02 М ацетатный буфер с рК 4, содер жащйи 15Х ацетонитрила„ П р и м е- р 43. Выделение соединения 42 из мочи крыс, принимавших соединение 37, Шесть самок крыс Уистлера (вес 400-600 г) помещают в стальные метаболические клетки после перорального введения соединения 37 в дозе 100 мг/кг и в течение 24 ч собирают мочу крыс. Крыс кормили. регулярно и в течение опыта давали воду. Объем мочи, мл,собранный в различные интервалы вр емени . 0-2 ч 2-4 ч 4-6 ч 6-24 ч Сумма 18 19 5 13 42 92 5 Мочу (около 90 мп) подкисляют до рН 3 однонормальной соляной кислотой и фильтруют, чтобы удалить осадок. Фильтрат подвергают хроматографированию на колонке, заполненной 300 мл фазы HP-20; колонку элюируют 2 л воды и 2 л 30 .-ного метанола, анализируя элюаты методом ЖХВР. Фракции, содержащие биологически активные компоненты в ЗОХ-ном метанольном элюате, собирают, концентрируют до 10 мл и лиофилизируют, получая 390 мг коричневого твердого вещества. Раствор этого вещества в 20 мл воды хроматографируют на колонке, заполненной 200 мл фазы prep PAK-500/С,z (сменный патрон фирмы Уотерз), последовательно элюируя водой, 5Х-ным метанолом и 10Х-ным метанолом. Первую половину 5 -ного метанольного элюата концентрируют до 5 мл и лиофилизируют, получая 44 мг соединения 37 (чистота 70 ) содержащего примеси, перешедшие из мочи. Вторую половину 5Х-ного метанольного элюата концентрируют до 5 мл и лиофилизируют, получая 36 мг продукта, который представлял собой смесь соединения 37 ° соединения 42 и примесей, перешедших из мочи. Элюат I0 -ного метанола (около 600 мл) концентрируют до 5 мл и лиофилизируют, получая 38 мг соединения 42 (чистота 70Х по данным ЖХВР), которое повторно хроматографируют на колонке с той же набивкой, что и выше (40 мл), элюируют водой, 5Х-ным метанолом и 10 ным метанолом. Целевые фракции, элюированные 10 -ным метанолом, объединяют и концентрируют до 5 мп и лиофилизируют, получая 16 мг соединения 42.с чистотой 90Х, по данным ЖХВР (0,02 М ацетатный .буфер с рН 4 — ацетонигрил = 85:15). Т, пл. 180 С (постеп. разл.). 29 14 ИК-спектр, KBrь мако, см : 17609 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280. УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7), нм (э): 233 (8200), 280 (8800) МЙР-спектр (D О), хим. сдвиг, м.д.: 1,68 (ЗН, д, J = 6 Гц, С-СН ); Зу26 (1Ну ду,. .J = 18 Гц, 2-H); 3у,58 -(1Н, д, J = 18 Гц, 2-Н); 4,01 (ЗН, с, ОСН ); 5,12 (1Н, с, СН-СО); 5,21 (1Н, д, J = 4,5 Гц, 6-Н); 5,78 (1Н, 4,5 Гц, 7-Н); 5,5-5,9 (1H, м, Н=С-); 5,98 (1Н, д. 1 = 11 Гц, Н=С); 7,07 (2Н, с, фенил-Н); 7,17 (1Н, шир.с фенил-Н), Структура продукта метаболизма становлена как 7p-(D(-)-2-амино-2. (4-окси-3-метоксйфенил) ацетамидо1-3Р((Z)-1-пропен-1-ил) -3-цефем-4-кароновая кислота посредством сопоставения спектров ЯМР, ИК, УФ и хромаограмм ЖХВР с соединением 42, приотовленным по методикам примеров 8-42-. Фармакологические испытания со единений, подтверждающие их противомик" дробную активность, приведены в ниже. В табл. 1 дана структура продуков примеров 1-43. Большая часть тих соединений представляет собой P-(D-фенилглицщтамидо)цефалоспорины, которых имеется 1-пропен-1-ильная руппа в положении 3. Концевой атом глерода пропенильного заместителя в некоторых соединениях содержит заместитель, такой как алкильная rpyni)a (метил), галоид (хлор или иод), рильную группу (фенил) гетероциклиескую тио-группу (1,2,3-триаэол-5- ил-тио) или алкокси-группу (метокси-). Фенилглициламидо-группа может 6ыть незамещенной, или моно-,или диэамещенной окси-, алкокси-группой или атомом галогена., В табл. 2 представлена противоиИкробная активность вне организма предложенных соединений. Приведены величины минимальной ингибирующей концентрации, которые определяли по методике разбавления агаром для трех групп организмов, обозначенных Гп-lа, Гп-lб и Го-lа. Каждая из этих трех групп организмов содержит пять индивидуальных штаммов микроорганизмов, кОторые идентифицированы в сноске к табл. 2. Организмы Гп-lа представляют собой грамположительные стафилокдкки, которые являются чувствитель07400 30 5 55 ными к пенициллину. Организмы Гп-lб представляют собой грамположительные стафилококки, которые являются стойкими к пенициллину и продуцируют пенициллиназу. Организмы Го-1а представляют собой грамотрицательные бактерии, которые являются чувствительными к ампициллину и цефалотину. Соединения по изобретению обычно обладают пониженной активностью в отношении грамотрицательных бактерий, стойких к ампициллину и цефалотину.. Иэ табл. 2 можно сделать следующие выводы относительно противомикробной активности этих соединений вне организма. Все соединения обладают хорошей активностью против стафилококков, чувствительных к пенициллину (Гп-lа). Обычно они менее активны (в три или более. раэ) против стафилококков, стойких к пенициллину (Гп-lб). Однако в каждом случае эти соединения в несколько раз более активны, чем цефалексин и цефадроксил. Удовлетворительной активностью против грамотрицательных бактерий (Го-1a) обладают только те соединения, в которых имеется незамещенная цнс(Е)-пропенильная группа в положении -3. Это соединения 9, 24, 32 и 42. Транс-(Е)-пропенильное вещество, соединение 8, обладает в восемь разнизшей активностью против грамотрицательных бактерий по сравнению с соответствующим цис-пропенильным соединением 9. Аналогично. замещение концевой метильной группы в пропенильном заместителе в положении -3, по-видимому, приводит к понижению грамотрицательной активности. Это соединения 13, i5 21 и 17. Это также верно для винильного соединения 11. Тем не менее эти соединения являются потенциальными противомикробными агентами, кбторые практически эквивалентны цефалексину и цефадроксилу. Замещение в кольце никоим образом не ухудшает противомикробной активности. Сравните соединения 9, 24, 32 и 42. По-видимому, соединение 37 является исключением, однако фактически оно является высокоактивным соединением против грамположительных и грамотрицательных бактерий, как показано в табл. 3. В табл. 3 содержатся сравнительные данные о противомикробной активности 31 1407400 32 вне организма против тех же организмов, что и в табл. 2, при использовании двух различных микробиологических культурных сред. Агар МюэллерХинтона является стандартной средой, применяемой в испытаниях, относящихся к табл. 2. В табл. 3 содержится сопоставление минимальных ингибирующих концентраций для тр .. испытуемых соединений, которые определяли первоначально в среде Мюэллер-Хинтона и затем в питательном агаре для соединения 9, которое содержит 4-окси-заместитель в фенильном кольце и соединение 42, которое содержит 3-метокси-4-окси-заместитель в фенильном кольце, наблюдается только умеренное влияние среды. Зто означает, что различия в минимальных ингибирующих концентрациях не превышают трехкратной величины. Соединение 37, 3,4-диоксифенильное замещенное соединение, иллюстрирует различие в активности между двумя средами, которое составляет от 600 до 1200K, причем минимальная ингибирующая концентрация в питательном агаре гораздо ниже, чем в агаре Мюэллвра-Хинтона. В соответствии с этим противомикробное действие соединения 37 сравнимо с таковым для других цефалоспоринов, имеющих циспропенильную группу в положении -3, которые приведены в табл. 2. Выведенные из указанных исследований вне организма корреляции между структурой и активностью подтверждаются результатами исследований in vivo на мышах. В табл. 4 сведены за- щитные дозы для мышей, зараженных летальной посевной культурой бактерий (пероральная обработка). В этом исследовании применяли два различных вида бактерий: грамположительные и грамотрицательные. Защитная доза (ЗД ) представляет собой дозу, ко-. Бо торая при введении группе зараженных мышей (5 особей) приводит к 50 -ному выживанию спустя 5 сут. (найдена путем интерполяции из кривой зависимости отклика от дозы), Обычно зараженные необработанные мьпии умирают в течение 3 сут после заражения летальной посевной культурой, Данные в табл. 4 составлены из нескольких различных экспериментов. В этих экспериментах в качестве контрольной обработки использовался цефалексин. Значение ЗД„, найденное для цефалексина в том же эксперименте, приведено в скобках сразу после 5 величины ЗД для испытуемого соединения. Очевидно, что каждый из цефалоспоринов обладает хорошей активностью против инфекции грам + Staphylococcus aureus и что соединения, имеющие цис-пропенильную группу в положении -3, являются бопее активными против грамотрицательной инфекции — соединения 9, 24, 37. В табл. 5 содержатся сравнительные даннае о содержании соединений в крови мышей, обработанных перорально и внутримышечно испытуемыми соединениями, указанными в табл. I. Одинаково хорошее поглощение при пероральном введении наблюдается для всех соединений, кроме соединения 21, которое имеет гетероциклический тио-заместитель в 3-пропенильной группе. Для 25 соединения 37 наблюдается исключительно высокое содержание в крови мышей после перорального введения. Было .показано, что это соединение при метаболизме у крыс превращается в со» единение 42 (см. пример 43). Соединение 37 представляет собой 3,4-диаксифенильное соединение, а соединение 42 является З-. етокси-4-оксифенильным соединением. Последнее соединение 35 имеет высокую активность в организме (in vivo) и вне организма (in vitro). В табл. 6 содержатся дополнительные in vivo данные для соединения 9 против четырех других организмов в сравнении с цефалоксином, цефаклором и цефадроксилом. В табл. 7 и 8 содержатся сравнительные i11 vitrî данные для соединения 9 в сопоставлении с цефалексином, цефадроксилом и цефа45 хлором в отношении ряда стрептококков, Neisseria, Haemophilis и различных анаэробных бактериь . В опытах по выделению с мочой крыс выделение в течение 24 ч соединения 9 с мочой крыс, обработанных перорально, сравнимо с таковым для цефалексина и цефадроксила и выше, чем для цефахлора. Изучение стабильности соединения 9 по сравнению с це5 фалексином и цефахлором в растворе с использованием фосфатного буфера при рН 6,5 м рН 7,0, человеческой сыворотки (рН 6,8), лошадиной сыворотки (рН 7,6) и телячьей сыворотки 33 (рН 6,8) в качестве носителей показано, что соединение 9 существенно более стабильно, чем цефахлор и сравнимо по стабильности с цефалексином. 1407400 S в снсокн I щ " (:Н Д 5 соок где Б,, R u R имеют укаэанные значения, подвергают взаимодействию с триарилфосфином при комнатной температуре в среде несмешивающегося с водой органического растворителя в присутствии водной щелочи, образовавшееся при этом фосфоранильное соединение обрабатывают в безводных условиях при комнатной температуре карбонильным соединением общей формулы Способ получения эамещенных винил цефалоспоринов общей формулы a, снсовн-? — г уц, О4 СК* СИЯ з 4 соотг, д е R . .— водород или аминозащитная группа, такая как трет. -буток сикарбонил, Н ? - водород, гидроксил, галоген или низшая алкоксигруппа; R — водород или гидроксил, R> " С,-С .-алкил или С1-С,<-аралм R< - водород или сложноэфирная группа, Е-конфигурацией относительно экциклической двойной связи, о ти ч а ю m, и и с я тем, что соеение общей формулы Н,СНО ° 20 где R — имеет указанные значения, с последующим, в случае необходимости, снятием аминозащитной группы или сложноэфирной группы, и выделе2в нием целевого продукта. Приоритет по признакам: 28,01,83 — при R — водород или гидроксил, R - гидроксил; 28,12,83 при R, — галоген или 3р низшая алкоксигруппа, R — водород. Таблица 1 СИСОМН I Mrз О CH=CHRÇ со,н R, R R (конфигурация) Соединение н он -сн,"(z) 9 (ВМУ-28100) 13 (ВВЯ-1058) -с,н, (к) Н Он Н ОН Н Н Н Н Н Н Н ОН 11 (ВВЯ-1064) 24 (BBS-?065) 26 (BBS-!066) 8 (BBS-1067) 15 (BBS-1076) -сн,-s-Г- 4 l 2? (HBS-1091) Н ОН Формула иэобретенйя -снр (z) СН2С1 (z) -СН С Н (Е) 35 1407400 36 Продолжение табл.1 Й (конфигурация) I Н ОН СН ОСН (Z) -сн (z) Cl Он НО ОН Сн з (2) СН,0 ОН -CH Р) Т аб лиц а Со единения Гп-1а" Гп-1 б» 1 2 1 2 1 2 0,23 0,35 0,92 0,8 0,8 0,7 9 (ВМУ-28100) 4,1 1,4 13 (ВВ5-1058) 11 (ВВ5-1064) 0,40 0,40 0,23 0,3 3,6 1 2 24 (BB5-1065) 8 (BB5-1067) 0,92 0,92 0,8 0,8 1,4 6,3 0,26 15 (BB5-1076) 0,20 > 50 0,7 21 (BB5-.1091) 0,61 2,7 2,7 )7 (BB5-1092) 32 (ВМУ-2806О) 0,53 2,1 2,7 0,53 0,13 37 (ВМУ-28068) 42 (ВМУ-28097) 6,3 7,2 6,30 035»» 1 2»» 0,53"» 1,2 0,70 4,1 3,6 . 6,2 4,1. Цефалек сии 1 2 1,10 3,6 4,1 8,3 8,3 Цефадроксил " Среднее для пяти организмов каждой группы: Гп-1а, грамположительные стафилококки чувствительные к пенициллину; пенициллиназа не образуется: S. aureus Smith А9537, S. aureus А9497, S. aureus Terajima, S. аигеиз А9534, S..aureus A9601, Гп-1б грамположительные стафилококки, стойкие,к пенициллину; продуценты пенициллиназы: S. aureus 193, S. aureus ВХ-1633-2 А9606 S. aureus A15092, S. aureus Russell, А. aureus А9602;, Го-1а грамотрицательные бактерии, чувствительны к ампициллину и цефалотииу: Е. coli ТШп A15119, E, coli А9660, К. pneumoniae Д11, Р. mirabilis A9554, P. mirabilis А9900. "" Не часть испытания,I а отдельное испытание. 17 (BBS-1092) 32 (ВМУ-28060) 37 (ВМУ-28068) 42 (ВМУ-28097) нимальные ингибирующие концентр ц r/ìë, по методике разбавления агаром (агар Мюллер-Хинтона) 37 1407400 Таблица 3 Соединения ные ингибирующие концентрации, мкг/мл 1а»» Гп-?б»» Го-?а»» 0,70 9 (ВИУ-28100) А" 0,23 0,92 0,70 0,17 0,35 6,3 37 (ВМУ-28068) А 4,8 5,5 0,61 0,40 0,92 0,35 1,2 0,53 42 (ВМУ-28097) А 0,40 0,23 0,40 " А: агар Мюэллера-Хинтона. Б: питательный агар. "" Средние величины для тех же групп организмов, что и в табл. 2. Т аб лиц а 6 Зд, мг(кг, дпя мышей, зараженных Соединения S. aureus Smith . Е. coll Juhi 1,2 (8,4)» 3,0 (8,4) " Величины в скобках — данные для цефалексина в том же опыте. "" В этом опыте для ВМУ-28100 получено значение дозы 0,16 мг/кг; контрольные величины для цефалексина или цефадроксила отсутствуют. 9 (ВМУ-28100) 13 (ВВ5-1058) ll (BB5-1064) 24 (ВВ5-1065) 8 (ВВ5-1067) 32 (ВМУ-28060) 37 (ВМУ-28068) 42 (ВМУ-28097) О,!4 (0,31) 0 32 (О 31) 0,18 (0,31) 0,18 (0,27) 0,20 (0,31) О,!7 (0,22) О,13 (0,27) 0,09»" 3,8 (8,4) 1,5 (8,2) 7,5 (8,2) 3,04 (8,4) 0,44 (8,2) 1407400 I «0 1 «О «Ч Е 0 \ «д о СЧ СЧ «Ч СЧ «"Ъ I л 0О Л о о »1 СЧ ° 1 о 00 00 ««Ъ ° ° о о о съ «СЪ сО о о л «еЪ о СеЪ Се) Ю е о 1 О «Чг - CV О 10 X l O4 Ю ОО «О «еЪ о ° л СЧ 0О Ф СЪ СЧ ю ° СЧ в о ° ° ° CV Ch л «О ° ° о л ° ° an аО СЧ СЧ ° » ° ° Ch Л .00 «Ъ 0О е л о л ° « л I «О «О СЧ 0O:. » ь Ъ О но б ° Ю ф «О ° е «» СЧ Себ е ОЪ ФЧ ° ° л сч е «Ч С Ъ «еЪ е ° .-ъ ° е 4 . ° е ° е\ ° « 34 1 14 1 OZ1 о Ю иъ о «Ч СО о о С Ъ ю«С г о о о 1О Ю 0 О «СЪ î о о СО ««Ъ О «О о о 1 б СО И 0C1 CCI 0«б С«б Л О Щ о о I I а оъ 0C! CCI СС! С«б О1 Ю ! са ССб I Ж I 8 СО О 0О СЧ 3=. 3 0О (! 1 1 Р О б» Ж I О 4 Р 1 э 30 i jl »*1 g 1 Са Ь В Ж 1 l0 1 I ! » к1 — — 1 4 1 - 1 и зе О 1 6 4 «Ч 1 4 14 u z 1 в1 ) Х Z I I и о! «Ч х 1! I a0 I I Зб О! 1 IC 1 Ж I O 4 I I а1(!%I(g Э! 1 ! о ОЪ О О СбЪ 1 О ° ° ° е о о о о «Ч Ф «0 «0 01 01 0о 3 1 «0 СЧ Q ) В С Ъ 6 I 0 » 42 1407400 Т аблица 6 Организм 2,2 0,11 1э8 Таблица 7 Организм (BNY-28100) 15 (BBS (группа 2) 1076) 08, 02 S. pyogenes S-23 О. 2 0.8 О. 05 0.2 0,2 0.8 0.8 Dick О. 05 0.2 А9604 0.8 0.8 0,2 О. 05 0.2 0.2 0.8 0.8 0,05 А20065 А15040 0.2 0.2 0.8 0.8 0.05 0.20 0.80 0.2 О. 80 О. 050 l.6 1.6 0.2 3.1 0.2!.6 3.1 О. 2 О. 2 l.6 0.2 3.1 О. 2 А9585 3.1 1.6 1.6 0.4 0.2 0.8 1.6 0,2 0.2 А1 5069!.3, 1.6 О. 23 3.1 О. 20 0.8 6.3 6,3 100 0.8 N. gonorrheae 6.3 6.3 >! 00 0.8 6.3 0.8 6 ° 3 >100.О. 8 S. aureus BX-1633 S. pyogenes A20201 Н, influenza А9729 Р. ш таЪЖа А9554 Среднее геометрическое S. pne oniae тнп II Среднее геометрическое А!5! 12 А20142 А20143 Защитные дозы ЗД для мышей, зараженных летальной посевной культурой; пероральная обработка 9 (ВМУ-28100) Цефа- Цефа- Цефалексин хлор дроксил 17 2,2 7,2 0,74 О, 14 0,25 18 1 6 25 12,5 1,8 14 Активность in vitro против. стрептококков, МИК, мкг/мп Цефа- Цефад- Цефахлор лексин роксил 1407400 Продолжение табл. 7 Органиэм МИК», мкг/мп (ВИТ-28100) 15 (ВВЯ (группа 2) )076) ад- Цефахлор сип Цефалекси А20154 А20155 0.8 6.3 6.3 0.8 )100 0.8 6.3 6.3 0.8 )100 О. 80 6.3 6.3 >1 00 0.8 О. 8. 6.3 6.3 )1 ОО, 0.8 0.8 6.3 0.8 0.8 6.3 >100 0.8 0.8 6.3 6.3 )1 00 6.3 О. 8 )1 00 6.3 0.8 6.3 0.8 0.80 >100 6.3 )200 6.3 6.3 О ° 8 0.8 6.3 0.8 0.8 6.3 )100 6.3 0.8 6.3 0.8 >100 6.3 0.8 О. 8 )100 6.3 0.8 6.3 0.8 6.3 0.4 >100 6.3 А9833 А22483 А22482 6.3 0.8 >100 6.3 0.4 6.3 0.8 >100 0.80 )100.6.3 О. 66 6.3 6.3 3.1 6.3 I.6 3.1 A22481 А22491 6.3 1.6 3.1 0.4 0.8 0;2 О. l 3.),0.4 3.1 0.2 » Минимальная ингибирукицая концентрация, Среднее геометрическое N. meningitidis A20048 А20049 A2)487 А21496 А2!497.Среднее геометрическое Н. influenzae А9729 А20)77 А20)93 А2 1523 Среднее геометрическое H. unfluenzae A22l57 S-. pyogenes A2020) S. pneumoniae А207$9 Активность in vi trn против стрептококков, 45 1407400 Таблица 8 Организм 4 ° и актама- 9 (IINY- .Яефалекснн l Цефахлор 28!00) В. frsgilis 0.8 3 . I 12.5 6.3 Го, палочки 12.5 0.8 6.3 3.1 А2093 Среднее геометрическое 3.2 9.9 3,9 100 В. f r sgi l i s А22053 (+) SO (+) ) 1 00 о >I 00 Го, палочки A2202I А22693 (+) о 100 )IOO > l O0 , >1 00 Среднее геометрическое )100 100 А22695 А22533 100 >100 (+) > 100 >100 >! 00 Среднее геометрическое >100 6.3 gp reés Гп, палочки 100 I.6 12.5 0.4 Орр соссх 0.8 0.4 1 ° 6 0.8 Err, конки 6.3 0.4 О. 95 Среднее геометрическое МИК - минимальнаа ингибируащая концентрация, а> Стойкие к клнндамидину, Составитель И. Бочарова -Редактор О. Спесивых Техред М.Дидык Корректор Л, Патай Тираж 370 Подписное БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий. 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 3акаэ 3749 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, А20928-1 А21900 С. difficile А21625, С. perfringens A9645 P. genes . A21933 Р. апаегоЬжа А21905 ивность in vitr6 против различных аиаэроббактерий МИК", мкг/мл, водой и насыщенным раствором 
