Способ определения повреждения нервной системы

 

Для раннего выявления повреждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани в сьшоротке крови и/или в спинномозговой жидкости определяют аутоантитела к галактоцереброзидам мозга. При повышении их титра относительно нормы для данной возрастной группы диагностируют повреждение упомянутых структур нервной ткани.

СО1ОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

I (51) 4 G 01 N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К Д ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3981406/28-14 (22) 22.11 ° 85 (46) 30. 07 .88. Бюл. У, 28 (71) Институт физиологии им. И.П.Павлова (72) Н.П. Таранова и О.С. Лучакова (53) 615.373(088.8) (56) Панов А.Г. и др. — В кн.:

Ч Всесоюзный съезд невропатологов и психиатров, т. 1. М., 1969, с. 242-243.

„„SU„„1413531 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ

НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ (57) Для раннего выявления повреждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани в сыворотке крови и/или в спинномозговой жидкости определяют аутоантитела к галактоцереброзидам мозга. При повышении их титра относительно нормы для данной возрастной группы диагностируют повреждение упомянутых структур нервной ткани.

1413531

Изобретение относится к медицине и экспериментальной биологии, в част.ности к иммунологическим методам диагностики, и может быть испольэова- 5 но в клинической практике и в экспериментальных исследованиях заболева-. ний, связанных с деструкцией глиальных и миелинизированных структур . нервной системы. 10

Цель изобретения — раннее выявление повреждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани.

Для достижения поставленной цели определяют в сыворотке крови и/или 15 в спинномозговой жидкости аутоантитела к галактоцереброзидам мозга (ГалЦ) и в случае превышения их титра относительно нормы для данной возрастной группы, диагностируют повреждение 2р олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани.

Способ осуществляют следующим образом.

Для определения аутоантител к ГалЦ 25 мозга в РСК готовят серию двукратных разведений сыворотки крови больного, вносят по 0,02 мл каждого разведения сыворотки в лунки полистироловых панелей, добавляют во все лунки по

0,02 мл липидной суспензии антигена (содержащей ГалЦ, фосфолипиды и хо-. лестерин в примерном соотношении 11:

:40:35 мкг на мл суспензии) и по

0,02 мл комплемента (в подобранной дозе) и инкубируют панель 45 мин при 37 С для того, чтобы произошло образование комплекса антиген — антитело и фиксация комплемента на этом комплексе. Затем во все пробы добав- 40 ляют по 0,04 мл гемолитической системы (смесь суспензии бараньих эрнтроцитов с антисывороткой против них) и инкубируют при 40 С 3-5 мин для того; чтобы комплемент, оставшийся не- 45 связанным с комплексом ГалЦ вЂ” антитела, фиксировался на втором комплексе эритроциты — антиэритроцитарные антитела и вызвал гемолиз эритроцитов. Результатом реакции или титром аутоантител к ГалЦ считают то разве-. дение исследуемой сыворотки, при котором гемолиз достигает 80-100Х.

В случае положительной реакции и выявления антител в титрах, четырех55 кратно превышающих верхнюю границу нормы (верхняя граница нормы для детей — титр 1:4, для взрослых — титр

1:2), диагностируют наличие повреж дения олигодендроглиальных и миелиновых структр нервной ткани. При постановке иммунологических реакций с сывороткой крови — PCK, реакции пассивной гемагглютинации и др. диагностичееки значимым принято считать 4кратное возрастание титра.

Пример 1, Больной Х-ин О., 9 л,и 9 мес., диагноз: острый энцефалит, установленный на основании результатов обследования общепринятым способом (клинико-анамнестическое обследование, цитологическое и биохимическое исследование ликвора, электрофизиологические методы), обследован согласно предлагаемому способу диагностики в конце первой недели заболевания. В сьворотке крови обнаружены антитела к ГалЦ в титре

I:256, что не только подтверждает наличие деструктивных изменений в мозге, но н указывает на вовлечение в патологический процесс клеточных структур олигодендроглиального происхождения, Пример 2. Больная Ф-ва Н,, 12 л,и 10 мес., диагноз: острый энцефалит, установленный общепринятым способом, обследована согласно предлагаемому способу диагностики на

5-й день заболевания. В сыворотке крови обнаружены аутоантитела к ГалЦ в низком титре 1:4, не превышающем верхнюю границу нормы. Этот результат указьвает на то, что на данном этапе заболевание протекает беэ повреждения олигодендроглиальных и миелинизированных структур мозга.

Пример 3. Больной С-ин,.

60 л., диагноз:"тяжелая черепно-мозговая травма, установленный на основании результатов клинико-анамнестического исследования, обследован согласно, предлагаемому способу диагностики на третий день заболевания. В сыворотке крови обнаружены аутоанти" тела к ГалЦ в титре 1:32, что указывает на развитие деструктивных изменений клеточных структур олигодендроглиального происхождения в ткани мозга у этого больного.П р.и м е р 4. Больной Ш-ев, 76 л., диагноз: черепно-мозговая травма средней тяжести, установленный общепринятым способом, обследован согласно предлагаемому способу диагностики,на третий день болезни. Аутоантитела к ГалЦ обнаружены в низком

3 14! 35 титре 1:2, не лревьппающем норму. Это позволяет заключить, что повреждения олигодендроглиальных и миелиновых структур в данном случае черепно-моз5 говой травмы места не имеют.

Пример 5. Согласно предлагаемому способу обследован кролик из группы животных, отобранных для иммунизации с целью получения моноспецифических антисывороток к определенным очищенным антигенам мозга. В сыворотке кролика обнаружены аутоантитела к ГалЦ в титре I 16, что свидетельствовало о деструктивном процессе в мозге и послужило основанием для его выбраковки. Гистологический анализ ткани мозга {окраска азурэозином) подтвердил наличие патологического процесса в моэгел в оболоч- 20 ках мозга, а также в сером и белом веществе были обнаружены явные воспалительные изменения. Это позволяет заключить, что предлагаемый способ диагностики может быть использован 25 в экспериментальной биологии и экспериментальной невролатологии как для выбраковки животных, так и для изучения экспериментальных моделей различных поражений мозга. 30

Испытание способа проведено при обследовании 34 здоровых лиц, 7 больных с инфекционным заболеванием, не затрагивающим нервную систему, и

68 больных с инфекционными, воспалительными и травматическими поражениями ЦНС и ПНС. Результаты теоретической и экспериментальной проверки предлагаемого способа, а также анализ примеров его конкретного выполнения 40 свидетельствуют о том, что предлагаемый способ обладает высокой специфичностью по отношению к нервной ткани, так как основан на выявлении аутоантител к ГалЦ, локализованным исключительно ив нервной ткани и являющимся специфическими антигенными маркерами клеточных структур олигодендроглиального происхождения. Специфичность способа подтверждается отсутствием антител к ГалЦ у больных без поражения нервной системы, а также обязательным выявлением высоких титров против ГалЦ антител в случаях заведомо острых деструктивных поражений нервной ткани.

Применение предлагаемого способа дает возможность диагностировать как в ЦНС, так и в ПНС наличие ранних

31

4 тонких деструктивных изменений в нервной ткани, не выявляемых другими методами, а также диагностировать деструктивные изменения в определенных клеточных структурах нервной ткани, а именно в олигодендроцитах и миелиновых оболочках, эа счет высокой специфичности способа.

Предлагаемый способ дает объективный лабораторный тест для повышения точности диагноза у ряда неврологи" ческих больных (дифференциальная диагностика менингитов и минингоэнцефалитов; определение степени тяжести черепно-мозговых травм, наличие или отсутствие периаксональной демиелинизации при поражениях ПНС и пр.), а также для уточнения латогенеэа заболевания у данного больного, а своевременная постановка правильного диагноза позволяет обеспечить выбор патогенетически обоснованной терапии.

Кроме того, предлагаемый способ дает возможность на основании специфического лабораторного теста выбраковывать экспериментальных животных с бессимптомными поражениями мозга при отборе здоровых животных для получения моноспецифических антисывороток, а также для диагностики повреждения клеточных структур нервной тка" ни лри изучении различных экспериментальных моделей различных поражений ЦНС.

Способ характеризуется простотой исполнения и может быть использован в любом стационаре, имеющем лабораторию, располагающую техникой постановки иммунологических реакций. Осуществление способа не требует специального оборудования, за исключением обычно применяющегося для серологической диагностики, и он может быть проведен средним медицинским персоналом, имеющим квалификацию лаборанта.

Способ не травматичен, так как требует для анализа лишь небольшие количества (до 0,3 мл) сыворотки крови или ликвора. Применение способа рекомендуется для дифференциальной диагностики функциональных нарушений и органическихпоражений нервной системы при инфекционно-воспалительных,, дегенеративных демиелинизирующих лроцессах, токсических и травматических поражениях мозга, нарушениях кровоснабжения мозга и других неврологических заболеваниях для раннего вы4I353I 6 что, с целью раннего выявления повреждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани, в ис5 следуемой крови и ликворе определяют антитела к галактоцереброзидам и при повышении их титра по сравнению с нормой - определяют повреждение нервной системы.

5 I явления деструктивных изменений в клеточных структурах нервной ткани.

Формула изобретения

Способ определения повреждения нервной системы путем исследования крови, отличающийся тем, Составитель П. Бонарцев

Техред Л.Олийнык Корректор Л. Патай Редактор А. Огар

Заказ 3777/47 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4