Способ получения s-аденозилметиониновых (сам) солей
Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения S-аденозилметиониновых солей минеральных сильных кислот с (количество молей последних 4, или 5, или 6), обладающих защитным и рассасывающим действием при гепатическом стеатозе. Цель - создание нового способа синтеза новых солей указанного класса. Процесс ведут из концентрированного водного раствора технической S-аденозилметиониновой соли, рН которого доводят до 6-7, затем очищают пропусканием через слабокисдоткую ионообменную смолу, злюируют разбавленным раствором (0,1 Н.) сильной минеральной кислоты с последующим титрованием до строго стехиометрического количества к присутствующей S-адекозилметиониновой соли концентрированной неорганической кислоты. В другом случае титрование ведут сильно основной ионообменной смолой в ОН-форме с последующими упариванием злюата до достижения концентрации целевой соли 50-100 г/л и лиофилмзированием преимущественно в присутствии инертного вещества (лучше маннита или порошкообразной кремниевой кислоты ) . Новые соли обладают лучшей активностью , чем соответствующий дисульфат ди-пара-толуолсульфонат S-аденозилметионина, и наряду с гепатозащитным действием оказывает еще антидепрессантную и противоревматоидную активность. 1 з.п. ф-лы, 8 табл. i 1 &9 С«д
СООЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
Н ПАТЕНТЪ(ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
Г10 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3490997/23-04 (22) 06.09.82 (46) 23.10.88. Бюл. Ф 39 (71) Биорисерч С.п.А. (IT) (72) Федерико Дженнари (IT) (53) 547.455.07 (088.8) (56) Strament.inoli G., Pezzoli С.
and Kienle М.G. Protective го1е of
S-adenozyl-L Methionine against aceta
minophin induced mortality апй hepatotoxicity in mice. — Biochemical
Pharmacology, 1979, v. 22, р. 35673571 °
Патент США 9 2969353, кл. С 07 Н 19/04, опублико 1961.
Заявка ФРГ У 1803978 кл. С О? Н 19/04, опублик. 1970.
Авторское свидетельство СССР
И- 676169, кл. С 07 Н 19/04, 1975. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ S-АДЕНОЗИЛИЕТИОНИНОВЫХ (САМ) СОЛЕЙ (57) Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения S-аденозилметиониновых солей минеральных сильных кислот с рН <2,5 (количество молей последних 4, или 5, или 6), обладающих защитным и рассасывающим действием при гепатическом
„. SU „„) я а А 3
pe 4 С 07 Н 19/16, А 61 К 31/70 стеатозе. Цель — создание нового способа синтеза новых солей указанного класса. Процесс ведут из концентрированного водного раствора технической
Б-аденозилметионнновои соли, рН которого доводят до 6-7, затем очищают пропусканием череs слабокислотную ионообменную смолу, элюируют разбавленным раствором (0,1 н.) сильной минеральной кислоты с последующим титрованием до строго стехиометрического количества к присутствующей
S-аденозилметиониновок соли концентрированной неорганической кислоты. В другом случае титрование ведут сильно основной ионообменной смолой в
ОН-форме с последующими упариванием злюата до достижения концентрации целевой соли 50-100 г/л и лиофилизированием преимущественно в присутствии инертного вещества (лучше маннита или порошкообразной кремниевой кислоты). Новые соли обладают лучшей активностью, чем соответствующий дисульфат ди-пара-толуолсульфонат S-аденозилметионина, и наряду с гепатозащитным действием оказывает еще антидепрессантную и противоревматоидную активность. 1 s.ï. ф-лы, 8 табл.
1433416 солей общей формулы
Изобретение относится к способу получения S-аденозилметиониновых (CAN) О
15 где Х вЂ” кислотный эквивалент сильной минерально кислоты с рН меньше 2,.5, 1 и равно 4, 5 или 6, обладающих защитным и рассасывающим действием при гепатическом стеатозе ° 20
Цель изобретения — разработка способа синтеза новых солей S-аденозилметионина, обладающих большей стао бильностью при 45 С по сравнению со структурными аналогами — известными солями САМ пХ, где Х вЂ” кислотный эквивалент сильной кислоты, а n - =1, 2 и 3, а также большей активностью в ! отношении защиты печени по сравнению с ближайшим структурным аналогом дисульфатом-ди-п-толуолсульфонатом
S-аденоэилметионина.
Пример 1. 110 л этилацетата и 110 л воды добавляют при температуре окружающей среды к 900 кг дрожжей, «5 обогащенных САМ (6,88 г/кг) в соответствии с методом Нленка.
После энергичного перемешивания в течение 0,5 ч добавляют 500 л 1 ! ! 0,35 н. серной кислоты и продолжают 10
1 перемешивание в течение 1,5 ч °
Смесь .фильтруют и остаток промывают водой, получая 14QO л раствора, содержащего 4,40 г/л САМ, что соответствует 99,57. от присутствующего в исходном материале.
При перемешивании добавляют 23 кг пикролоновой кислоты. Реакционную массу оставляют на ночь и затем осадок отделяют центрифугированием и промывают водой.
Осадок при перемешивании растворяют при окружающей температуре в 62 л
1 н. раствора серной кислоты в метаноле. Затем после отфильтровывания следов нерастворенного вещества к раствору добавляют 500 л ацетона..
После полной седиментации осадка декантируют всплывший раствор, и нерастворимый осадок промывают малым количеством ацетона. Осадок растворяют в 800 л дистиллированной воды, добавляют 2 кг обесцвеченного древесного угля и смесь фильтруют.
Готовят колонку с 200 л Амберлита
IRC 50 в Н форме и тщательно промывают дистиллированной водой.
К ранее полученному водному раствору добавляют 4,8 кг ледяной уксусной кислоты при перемешивании и затем добавляют 2 н. едкий натр вплоть до получения рН 6,5.
Раствор пропускают через колонку со смолой со скоростью 400 л/ч, которую поддерживают постоянной в течение всего процесса, Затем через колонку пропускают последовательно 200 л дистиллированной воды, 1600 л 0,1 М уксусной кислоты и затем 200 л дистиллированной воды.
CAN элюируют 400 л 0,1 н. серной кислоты. Таким образом полученный элюР ат содержит примерно 4 кг CAN и его концентрируют в вакууме до 60 л, Добавляют 0,5 кг древесного угля, и смесь фильтруют. Раствор титруют.
Добавляют концентрированной серной кислоты до получения молярного отношения серной кислоты к CAN равного 2,5: 1. Раствор затем лиофилизируют.
Получают 6,5 кг продукта, имеющего следующий состав: CAN 61X; Н SO
37,5Ж Н О 1ь5 °
Соль имеет кристаллический вид и растворима в воде в количестве, большем 207., давая при этом бесцветный раствор. Однако соль нерастворима в обычных органических растворителях.
Методом тонкослойной хроматографии установлено, что продукт не содержит каких-либо примесей. з 143341
В табл. 1 приведены данные анали за, которые согласуются с элементным составом для соединения формулы
С< Н Н О $ ° 5НС1, Новое соединение также идентифифицировано энзиматическим методом, описанным в примере 1.
Осуществляя процесс как в примере 1, возможно получить продукт, имеющий различную величину солеобразования, и в частности, следующие соли:
САМ.4НС1 0,4Hаоу CAN 6HC1 0,7Нао.
Аналитические данные для солей приведены в табл. 1.
П р и и е р 3. Повторен процесс, описанный в примере 1, с той разницей, что.перед лиофилизацией добавляют к раствору 4,75 кг апирогенного маннита. Затем, раствор лиофилизируют обычным способом.
Добавление маннита позволяет получить продукт с остаточным содержанием влаги 0,1Х.
Полученный таким образом продукт пригоден .для превращения в инъектиру- емую фармацевтическую форму.
Пример 4. Повторена процедура примера 1. Перед лиофилизацией добавляют 4 кг Аэросиля (пыпевидной кремниевой кислоты). Полученную коллоидальную суспензию лиофилизируют.
Добавление Аэросиля позволяет получить продукт с остаточным содержа с нием влаги 0,2Х. Этот продукт пригоден для превращения в таблетки для перорального применения
Пример 5. Повторена процедура примера 2 с той разницей, что .
САМ элюируют 0,1 М раствором фосфорС Н N О 2,5Н ЯО,, 0,5Н О.
Новое соединение также идентифицировано энзиматическим методом, основанным на энзиматическом метилировании никотинамида и гуанидинуксусной кислоты с помощью CAN.
При повторении процесса аналогичным образом, но с добавлением перед лиофилизацией такого количества серной кислоты, чтобы поднять молярное . отношение к CAN до 3:1, получают
CAN ЗН БО 0,7Н О. Данные элементного анализа приведены в табл. 1.
Понижая молярное отношение Н БО / щ
/САМ перед лиофилизацией до 2:1, получают соль CAN 2H S0 0,4Н О. Данные элементного анализа приведены в . табл. 1.
Пример 2. 11,5 кг пикроло- 25 новой кислоты, растворенной в 100 л изобутанола, добавляют к 700 л раствора, полученного лизированием дрожжевых клеток, используя те же исходные материал и способ, что и в приме- З0 ре 1.
После выдержки в течение ночи образующийся осадок отделяют центрифугированием. Осадок растворяют при окружающей температуре при перемепп:ванин в 31 л однонормального раствора серной кислоты в этаноле.
После отфильтровывания малых количеств нерастворенного вещества к раствору добавляют 250 л серного эфира.
Смесь выдерживают, фильтруют, и твердый отфильтрованный остаток промывают малым количеством воды. Твердый остаток сушат в вакууме.
Твердое вещество растворяют в
400 л воды, добавляют 1 кг обесцвеченного древесного угля, и смесь фильтруют. Добавляют ледяную уксусную кислоту, доводя рН до 6,5, и затем .раствор пропускают через колонку с
Амберлитом IRC 50 аналогично тому, как это осуществляют в примере 1.
САМ элюируют .из колонки 200 л
0,1 н. соляной кислоты. Элюат концентрируют в вакууме до 30 л. Добав" ляют 0,25 кг активированного древесного угля и смесь фильтруют. Раствор титруют и добавляют концентрированной соляной кислоты в количестве, достаточном для получения молярного отношения HCl/CAN равным 5:1. Раствор лиофилизируют.
Получают 2,8 кг продукта, имеющего следующий состав: CAN 67,6Х;
НС1 30 9Х; НтО 1 5%
Соль имеет кристаллический вид, и растворима в воде в количестве большем 20Х, давая при этом бесцветный раствор. Соль слабо растворима в обычных органических растворителях.
Методом тонкослойной хроматографии показано, что соединение не содержит каких-либо примесей. Хроматографию проводят способом, аналогичньав примеру
Данные элементного анализа приведены в табл. 1 и согласуются с продуктом формулы
1433416 I0
5 ной кислоты, а не О, 1 н. раствором соляной кислоты, как в примере 2, Лиофилиэации предшествовало добавление концентрированной фосфорной кислоты в количестве, достаточном для получения молярного отношения кислоты к CAM равным 5:1.
Получено 4,26 KI продукта, имеющего следующий состав: CAl 44,4%;
Н РО4 54,6%; Н О 1%.
Данные элементного анализа приведены в табл. 1 и согласуются с сое1 динением, имеющим формулу:
О
Методом тонкослойной хроматогра. — фии, аналогичной описанной в приме ре 1, показано, что продукт не содер- 2О, жит каких-либо примесей.
Новое соединение также идентифици, ровано описанным в примере 1 энзима тическим методом. ! Повторяя операции примера 1, мож- 25 но получить соединения, имеющие раз личные степени солеобраэования, и в ! . частности соли САМ 4Н РО4 0,4Н О, CAN 5Н РО4 0,7Н О, данные элементного анализа для которых приведены в 30 табл. 1.
Кислоты, которые используются для получения новых солей по предлагаемому изобретению, имеют следующие значения рН: НС1 — рК меньше 0,5; Н 04 рК меньше 0,5 (первая стадия), рК = 1,92 (вторая стадия); Н РО4— рК = 2,12 (1 стадия).
Испытания на стабильность проведены на солях, полученных предлага- 40 емым способом, выдерживанием продукта в термостатируемой печи при 45 С и определением процента остаточной соли в фиксированные моменты времени, Для сравнения эксперименты были повто- 45 рены с известными CAM пНС1 солями, в которых n = 1, 2 и 3, и с САМ пН S04, в которых и равно 0,5, 1 и 1,5.
Табл. 2-5 иллюстрируют процент разложения соли в определенные моменты времени.
В табл. 2 приводятся данные для соли САМ пНС1.
В табл. 3 приводятся данные для соли САМ nH В табл. 5 приводятся данные для соли CAN ° 2ÍÑ1 Н S04 . Остаточный CAM-процент в указанные моменты времени определяют способом, описанным ниже, и который обеспечивает максимальную точность измерений за счет того, что позволяет полностью отделить САМ от всех возможных продуктов разложения. В связи с этим найдено, что используемый до настоящего времени способ, основанный на применении аналитической колонки ионообменной смолы Доуекс 50, не позволяет добиться полного отделения CAM от некоторых продуктов разложения, и, в частности, от метилтиоаденозина, что приводит к ошибке в оценке стабильности САМ, которая была предполагаемой. Предлагаемый способ определения, CAM основан на использовании жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД). Использованы следующие условия: колонка Партисил 10$СХ вЂ” 2,5 " <250 мм, элюирующий растворитель 0,1 M муравьинокислый аммоний с рН 4, содержащий 20% метанола для ЖХВД, поток 1 мл/мин; время удерживания CAN примерно 400 с. Из данных табл. 2-5 следует, что CAM-соли обладают максимальной стабильностью в том случае, когда они содержат пять кислотных эквивалентов, Соли с четырьмя и шестью эквивалентами обладают достаточно хорошей стабильностью, в то время как более низкое число кислотных эквивалентов не имеет практического значения в силу значительной нестабильности получаемых солей. Также очевидно, что стабильность имеет одинаковый характер независимо от применяемой кислоты, при условии, что это есть кислота с рК меньше 2,5. Нельзя приготовить соли с кислотами, имеющими рК больше 2,5, содержащими 4-6 кислотных эквивалентов. Аналогичным способом также определена стабильность для солей, которые получают в присутствии лиофилиэирующего агента, указанного в примерах 3 и 4. Результаты приведены в табл. 6 и 7 (для солей САМ 5НС1 и CAM 2,5H SO4 ). Отмечается резкое снижение содержания влаги при проведении лиофилизации в присутствии лиофилизирующего агента и соответствующее повышение стабильности соли, получаемой таким путем. 1433416 Испытания фармакологических свойств солей CAN 5HC1 и CAN 2,5H SO показали высокую активность и их токсичность, не зависящую от аниона, связанного с САМ. Установлено, что активность новых солей существенно за+ висит от способности САМ иона, выделяемого в организме, действующего как донор метильных групп, как природное вещество с большим числом трансметилазовых ферментов, которые катализируют важнейшие реакции бел кового, жирового и глюцидного обмена. Важность новых солей обуславлива- 15 ется тем, что они делают S-аденозилметионин абсолютно стабильным при о температуре вплоть до 45 С, тем самым позволяя полностью использовать его трансметилирующую активность в 20 человеческом организме без опасности образования токсичных продуктов разложения, которые отрицательно влияют на биологические процессы, активированные САМ+, 25 Токсичность. Острую токсичность определяли на мышах. Для обеих солей получены значения ЛД при пероральном приеме . SO больше 3 г/кг, при внутривенном вве- 30 дении — 1,1 r/êã. Переносимость и хроническую токсичность определяли на крысах породы Вистар и Спрагью-Доули, давая им в течение 12 мес. в день по 20 мг/кг З5 продукта. После прекращения эксперимента не было обнаружено патологических изменений в различных органах и системах. На кроликах проведены тератогенные 4р эксперименты. Не обнаружено никакого тератогенного действия ипи врожденных уродств у эмбрионов или утробного плода конечной стадии при введении солей формулы (Е) в дозах, в десять раз превышающих максимальные терапевтические дозы. Внутривенное введение доз вплоть до 200 мг/кг не вызывало у кроликов никакого пирогенного проявления. Внутривенное введение 40 мг/кг у кроликов и крыс не приводило к изменению давления в сонной артерии, частоты сокращения сердца или дыхания, ни к г изменениям электрокардиограммы, 55 Местная переносимость в случае внутримышечных инъекций, даже после повторения введения в течение 3060 дн, и в случае внутривенных инъекций в маргинальную вену внешнего уха кролика была очень хорошей. Фармакологические свойства. Проведенная на крысах полная серия испытаний показала, что новые соли формулы (Е) оказывают очень значительное защитное и рассасывающее действие при гепатическом стеатозе, вызванном гиперлипидной-гиперпротеиновой диетой по Гандлеру, и стеатозе, вызванном острой алкогольной интоксикацией и другими токсическими веществами даже в том случае, когда вводится доза 10 мг/кг САМ ф При экспериментальной гиперлипемии у крыс, например, вызванной Тритоном Я, новые соли демонстрируют очень значительную гиполипемическую активность, которая при используемых дозировках (т.е. 10 мг/кг, выраженных в CAN } была намного выше, чем в слу+ чае других лекарственных препаратов, обладающих гиполипемической активностью. У цыплят, у которых вызван атеросклероз с помощью диеты, богатой холестерином и фруктозой, парентеральное введение продуктов формулы (I) в дозах 10 мг/кг уменьшает холестеролемию и благоприятно изменяет поражения, которые обнаруживаются у контрольных птиц в отношении грудной и брюшной аорт и малых сосудов основания мозга. Что касается фосфолипидного обмена, то было экспериментально установлено, что у крыс имеет место увеличение в тканях печени количества фосфатидилхопина при некомпенсированиом стеатозе. Был определен полный при- рост фосфатидилхолина при расходе альфа протеинов крови при экспериментальных нарушениях, вызванных соотношением бета к альфа-липопротеинов. Все эти эксперименты отчетливо свидетельствуют о лечебном эффекте новых солей формулы (Е) при нарушениях жирового обмена. Дополнительной серией экспериментов на крысах было показано, что введение доз 1 мг/кг вызывает накопление запаса гликогена в крови и мышцах, что демонстрируется как гистохимическими методами, так и количественными определениями. При экспериментальном диабете, вызванном аллоксаном, количество инсулина, которое требуется ввести для возвращения к норме вели1433416 1. Способ получения S-аденозилме30 тиониновых (CAN) солей формулы чины гликемии, значительно уменьшается путем введения 0,5 мг/кг CAN Ф Эти серии экспериментов отчетливо иллюстрируют положительное действие новых соединений формулы (I) на глюцидный обмен. Крыс, у которых экспериментально ыла вызвана гиподиспротеинемия, обабатывали количествами 10 мг/кг CAN. 1О становлено, что указанный продукт t озвращает все показатели протеинемии о нормальных значений в основном пу ем увеличения содержания альбумина таким образом иллюстрируя значитель 1g ую протеиновую анаболическую активость. Соединения формулы (I) проявляют .собенную активность в части защиты ечени. Защитная активность была on- 20 еделена при внутримышечном введении ри дозе 20 мг/кг соли САМ за 5 мин о внутрибрюшинной инъекции 710 мг/кг цетаминофена мыши. Полученные результаты приведены в 25 абл. 8. Результаты показывают существеное увеличение защиты по сравнению с войными солями дисульфат-ди-п-толуол сульфонатов. Эти и другие аналогичные эксперименты иллюстрируют лечебное действие новых продуктов формулы (I) при нарушениях протеиодного обмена. Суммируя сказанное, можно утверждать, что на основе описанных фармакологических экспериментов и многих других данных, которые показывают активность новых соединений формулы (1),изученных на всех уровнях организма человека, активность новых продуктов клинически установлена в гепатологии в случае,острой и хронической гепатической интоксикации, в нейрологии в .качестве антидепрессантов и в остеологии в случае ревматоидных артритов. Новые соли формулы (I) могут вводиться перорально или путем внутримышечных инъекций, или путем внутривенных инъекций. Другими приемлемыми формами применения являются свечи, жидкости для глазных введений, аэрозоли или формы для местного употребления. Формула изобретения где Х вЂ” кислотный эквивалент сильной минеральной кислоты с рН меньше 2,5; n=4 5или6, отличающийся тем, что концентрированный водный раствор технической S-аденозилметиониновой соли, полученной путем лиэиса дрожжевых клеток, обогащенных S-аденозилметиониновой солью по методу Шленка, очищают, после доведения рН раствора до 6-7 пропусканием через слабо кислотную ионообменную смолу, элюируют разбавленным раствором кислоты НХ, например О, 1 н. раствором кислоты, титруют элюат и доводят количество кислоты до строго стехиометрической. пропорции по отношению к присутствующей S-аденозилметиониновой соли прибавлением промышленного концентрированного раствора данной кислоты или титрованием этого раствора сильно основной ионообменной смолой в ОН-форме, упаривают элюат до достижения концентрации S-аденозилметиониновой соли формулы I 50-100 г/л и лиофилизируют его. 2. Способ по п. 1, о т л и ч а— ю шийся тем, что лиофилизацию проводят в присутствии инертного вещества, предпочтительно маннита или порошкообразной кремневой кислоты. 1433416 м СЧ СЧ ъО л л ъО 1 л СЧ л СЬ л о ъО. ь о СГЪ ь л О СЧ ° \ С! Ъ ъО СЧ СЧ л II л ъО 44Ъ О\ л 4 Ъ м м о л ССЪ м С7ъ л 4/Ъ о OО о. л ъО СЧ л С \ л Оъ л ССЪ CO о л 4УЪ ъО 4Г\ л м о л. - .! СО л ССЪ СЧ ° ъ м о ь л С Ъ м л CO м л CG О СО СЧ СЪ л C) ССЪ СЪ 4Г Оъ СО л СО CO С 4 OI л С Ъ СЪ м л ОЪ С"\ СЪ л С"Ъ м л м о л о о С4 о 4 х о о 44 х л CI о С4 х л о о ! С4 х ССЪ л о о С4 х б л о о л о о 44 х л о ! 4 о х ъ4 и х ъО .o v v v о ! 1 В I 1 Х ! CJ ! Q 1 1 Рч 1 о (I Ю I I.O» Й I 1 Ф I 1 Х Х 1 1 1 Ж I 1 л4 1 c0 I V I I Х 1 1 л 1 .4. 1 M О 1 I О I ! Ы . ! Р L !! 1 М I 1 0) 1 l >И! 1 сб 1 1х! 1 1 cII 1 & 1 М 1 Р I О 1 01 Р» ! «,ъ« 1 о х ж III 1 1 ф I! д о I 9 1 I4 I U 1 Ф 1 Р 1 Х . I Р 1 Ж 1 1 X ClI! O . 1 1 С 1 о I O Ю к \6 44 х ССъ о о ф4 х о г о M 4 х С!4 х СГЪ л о, ъ . ln M ! 4\ ъ о с4 х Мъ о о и х ССЪ л о о С!4 х ССЪ л СЧ Ю M о к 4С! С ° х 4С! и о х л л ь о СЛ С4 х м о С4 х » ь л о In о х о Ю С4 х ССЪ л о ! 4 и 44ъ Ю ъС4 к х Фъ Ю о о 4 х Г л о ! 4 и х СЛ! -4 СЛ х 44Ъ о о С4 х б о О» R х и о С4 х СЪ л о Въ Р4 СЛ 4съ о Ф к ъ! х о о х л л о Я» С4 о к Ф х . и 1433416 Таблица 2 о Остаточ- Разложение при 45 С, % после периода ная влаж- времени, дни ность, % 60 120 180 240 360 100 100 100 0,2 100 100 80 100 0,5 100 100 0,8 1,5 3 4,5 1,5 14 17 10 Таблица 3 п Остаточ- Разложение при 45 С, %, после периода о ная влаж- времени, дни ность, % 05 0,2 100 100 100 100 100 0,5 100 1 00 17 20 4,5 5 17 20 Таблица 4 и Остаточная влажность, % 17 20 4,5 5 10 14 1,5 3 1 1 2 1,5 3 2 10 1,5 0,8 2 1 2,5 1,5 3 2 100 100 80 100 30 60 ;5 10 100 100 100 100 60 80 10 14 1,5 3 10 14 Разложение при 45 С, %, после периода о времени, дни 60 120 180 240 360 1433416 Таблица 5 о Разложение при 45 С, %, после периода времени, дни и Остаточная влажность, X 60 120 180 240 360 100 80 100 30 60 5 10 3 4,5 1,5 5 10 14 17 Таблица 6 Процесс лиофилизации Остаточная влажность, % Без лиофилизирующего агента 1,5 С манйитом (100 r САИ+ + 120 r маннита) 0,1 С Аэросилем (100 г CAN + 120 г Аэросиля) 0,2 Таблица 7 РазложеПроцесс лиофилизации Остаточная влажность, Без лиофилиэирующего агента С маннитом (100 г САМ + + 120 г маннита) 0,1 С Аэросилем (100 г CAN+ + 100 г Аэросиля) . 0,2 0,5 0,8 1 1,5 1,5 2 2 Разложение при 45 С спустя 360 дней Х ние при 45 С спустя 360 дней, % 1433416 Таблица 8 Смертность животных 7 Соль для защиты CAN ° 2Н БО CAN Z,5н,sO слм зй,sa, сли 4нс СЛМ.5НС СЛМ 6НС1 6,5 3 з CAN-Дисульфат-дн-и-толуол-сульфбнат (структурный аналог) Контрольная группа 43,0 Составитель Г. Коннова Техред Л.Олийнык Корректор Л Пилипенко Редактор Е. Папп Заказ 5471/59 Тираж 348 Подписное ВНИКПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб °, д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
