Способ получения производных бензоилмочевины

 

Изобретение касается производных бензоилмочевины ,в частности, получения N=(2- нитробензоил)-N<SP POS="POST">1</SP>-[4-(5- бромили хлор-2-пиримидинилокси)-3-хлорфенил]-мочевины, которые обладают противоопухолевой активностью и могут быть использованы в медицине. Цель - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией 4-(5-бромили хлор-2-пиримидинилокси)-3-хлоранилина с 2-нитробензоилизоцианатом в среде растворителя-октана, ксилола, пиридина, диметилсульфоксида, этилацетата, диоксана, хлорбензола или 1,2-дихлорэтана при 0-120°С. Новые вещества активно ингибируют лейкомию Р-388 при дозе 25 мг/кг (в день) на 168% и 210% в сравнении с контролем (внутрибрюшинно), а также меланому В-16 и саркому яичников при токсичности LD<SB POS="POST">50</SB>=100 мг/кг. 8 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

1 (21) 4023808/23-04 (22) 19.02.86 (31) 32365/85; 44737/85 (32) 20.02.85; 08.03.85 (33) JP (46) 07.08.89. Бюл. № 29 (71) Исихара Сангио Кайся, Лтд (7Р) (72) Такахиро Хага, Нобутоси Ямада, Хидео Суги, Тору Каянаги, Нобуо Кондо, Цунетака Накадзима, Масахиро Ватанабе и Казумаса Иокояма (ЗР) (53) 547.856.1.07(088.8) (56) Выложенная заявка Японии № 57-109721, кл. С 07 D 239/34, опублик. 08.07.82, сер. 3 (2), сборник ¹ 48 (206). (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

БЕНЗОИЛМОЧЕВИНЫ (57) Изобретение касается производных бензоилмочевины, в частности

Изобретение относится к способу получения производных бензоилмочевины — новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения — способ получения новых малотоксичных производных бензоилмочевины, обладающих более высокой противоопухолевой активностью.

Пример 1. Синтез соединения

1:N-(2-нитробензоил)-N --(4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-хлорфенил)мочевины. (511 4 С 07 С 127/19, С 07 D 239/34

2 ! получения N-(2-нитробензоил)-N t 4-(5-бром- или хлор-2-пиримидинилокси)-3-хлорфенил) -мочевины, которые обладают противоопухолевой активностью и могут быть использованы в медицине. Цель изобретения — создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией

4-(5-бром- или хлор-2-пиримидинилокси)-3-хлоранилина с 2-нитробензоилизоцианатом в среде растворителя — октана, ксилола, пиридина, диметилсульфоксида, этилацетата, диоксана, хлорбензола или 1,2-дихлорэтана при О

120 С. Новые вещества активно ингибируют лейкемию P-388 при дозе 25 мг/кг (в день) на 168 и 2107 в сравнении с контролем (внутрибрюшинно), а так>ке меланому В-16 и саркому яичников при токсичности LD — 100 мг/кг.

8 табл.

1. В колбу помещают 7,00 г 5-брсм-2-хлорпиримидина, 5,19 г 4-амино-2-хлорфенола, 9,98 г карбоната калия и 70 мл диметилсульфоксида и проводят реакцию в атмосфере азота при

120 С в течение 1,5 ч при перемешивании. После окончания реакции продукт выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой и насыщенным водным раствором хлористого натрия, сушат над безводным сульфатом натрия, а затем чистят хроматографией на колонке силикагеля, посредством чего получа3 1500156 ют 6,80 r маслянистого 4-(5-бром"2-пиримидинилокси)-3-хлоранилина.

2. В колбу помещают раствор, полученный путем растворения 6,80 r 4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-хлоранилина в 30 мл диоксана, и в него добавляют по каплям раствор, полученный путем растворения 5,76 r 2-нитробензоилиэоцианата в 30 мл диокса- IP на, а затем проводят реакцию полученной смеси при комнатной темпера- туре в течение 9 ч ° После окончания реакции продукт выливают в воду, подвергают его фильтрованию и промыва- 15 ют горячей водой. Полученные таким образом кристаллы помещают в метанол и перемешивают раствор, затем его фильтруют, получают 9,42 r целевого продукта, имеющего точку плавления 20

234-236 С.

Пример 2. Синтез соединения

2- N-(2-нитробенэоил)-N -t 3-хлор-4-(5-хлор-2-пиримидинилокси) фенил)мочевины.

1. В колбу помещают 1,50 r 2,5-дихлорпиримидина, 1,45 r 4-амино-2-хлорофенола, 2,76 г карбоната калия и 15 мл диметилсульфоксида и проводят реакцию в атмосфере азота при 30

100" С в течение 1,5 ч при перемешивании. После окончания реакции продукт выпивают в воду и экстрагируют диэтиловым эфиром. Экстракт промывают насыщенным водным раствором хло-35 ристого натрия и высушивают над безводным сульфатом натрия, а затем растворитель отгоняют. Полученный таким образом неочищенный продукт чистят и выделяют с помощью хроматогра- 40 фии на колонке силикагеля, получают

2,20 r 3-хлор-4-(5-хлор-2-пиримидинлокси)анилина, имеющего точку плавления 95-96 С.

2. В колбу помещают раствор, по- 45 лученный путем растворения 1,50 r

2-нитробензоилизоцианата в,6,5 мп диоксана, и в него по каплям добавляют раствор, полученный путем растворения 1 00 r 3-хлор-4 -(5-хлор-2-

У

-пиримидинилокси) анилина, полученного в указанной стадии, в 6,5 мл диоксана, смесь выдерживают при комнатной температуре s течение 3 ч.

После окончания реакции продукт выпивают в воду и отфильтровывают кристаллы. Кристаллы промывают водой при температуре примерно 50 С, сушат и суспендируют в этилацетате.

В смесь добавляют небольшое количество н-гексана, и осажденные крис,таллы собирают фильтрованием, сушат, получив 1,05 r нужного продукта, имеющего точку плавления 222-225 С.

Пример 3. В колбу с раствором 6,80 r 4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-хлоранилина, полученного по примеру синтеза 1.1,, в 30 мл хлорбензола по каплям добавляют при О С раствор 5,76 г 2-нитробенэоилизоцианата в 30 мл хлорбензола и затем смесь оставляют для продолжения реакции при 0 С 24 ч. После завершения реакции продукт отфильтровывают. Кристаллы растворяют в диметилсульфоксиде и раствор выливают в воду с последующей фильтрацией. Полученные при этом кристаллы помещают в метиловый спирт и перемешивают, а затем снова подвергают фильтрованию и получают 7,05 г желаемого продукта.

Пример 4. 1,73 г 2-нитробензоилизоцианата растворяют в 3 мл

1,2-дихлорэтана. Затем к нему при

60 С по каплям добавляют раствор

2,47 г 4-(5-бром-2-пиримидинилокси)—

-3-хлоранилина в 1,2-дихлорэтан.

После окончания добавки смесь оставляют для продолжения реакции на

30 мин при нагревании с обратным холодильником. По завершении реакции реакционную смесь охлаждают и подвергают фильтрации. Затем кристаллы промывают 1,2-дихлорэтаном и получают 3,7 r целевого соединения.

Пример ы 5-9. Исходные материалы и растворитель смешивают и подвергают взаимодействию в условиях реакции, представленных в табл.1.

По завершении реакции полученный продукт охлаждают в случае, если это необходимо. Затем к реакционной смеси добавляют 30 мл метилового спирта и проводят фильтрацию для получения желаемого продукта.

Полученные при этом результаты показаны в табл. 1 вместе с результатами, полученными по примерам 1-4.

Проведены биологические испытания производных бензоилмочевины, полученных в условиях предлагаемого способа. В качестве соединения сравнения использована N-(2=нитробензоf г ил) -N — 13-хлор-4-(5-йод-2-пиримидинилокси)фенил)мочевина.

Пример 1 (испытательный).

Инокулирование раковых клеток и вве5

1500156

Соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных определяют по испытательному примеру 2, за исключением того, дение испытуемых веществ производят внутрибрюшинно (в одну и ту же часть тела). Мышам штамма BDF внутрибрю{ шинно инокулируют P-388 лейкемийные

5 клетки в количестве 1 !0 клеток/мышь, Испытываемое соединение вводят внутрибрюшинно дважды, т.е. через 1 и

4 дня после инокулирования. Мьш.ей обследуют в течение 30 дн на предмет выживания или смерти. Определяют соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных, при этом число дней выживания мышей в контрольной группе, которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают за 100. Соединения вводят в виде дисперсии, полученной путем добавления небольшого количества поверхностно-активного вещества (на20 пример, Твин-80), поставляемого компанией Atlas Povaer СО, к испытываемому соединению.

Действие испытуемых соединений на лейкемию P-388 при внутрибрюшинном введении в место, пораженное раковыми клетками, представлено в табл. 2.

Пример 2 (испытательный).

P-388 лейкемийные клетки инокулируют внутрибрюшинно, в то время как испытуемые соединения вводят орально.

В мышей штамма BDF внутрибрюшинно вводят P-388 лейкемийные клетки в количестве 1 ° 10 клеток/мышь ° Ис6 пытываемое соединение орально вводят дважды, т.е ° через 1.и 4 дня после 35 инокулирования. Мышей наблюдают в течение 30 дн. на предмет выживания или смерти и определяют соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на группу), причем число дней выживания мышей контрольной группы, в которых вводят физиологический солевой раствор, оценивают за 100.

Испытываемые соединения готовят по рецептурному примеру 1.

Действие испытуемых соединений на лейкемию P-388 при оральном введении представлено в табл. 3. 50

Пример 3 (испытательный).

P-388 лейкемийные клетки инокулируют

/ внутрибрюшинно, в то время как лекарство вводят орально. что испытываемые соединения, приготовленные по рецептурному примеру 1, готовят по рецептурному примеру 2.

Действия испытуемых соединений на лейкемию P-388 при оральном введении в большой фон представлены в табл. 4.

Пример 4 (испытательный).

L-12 10 лейкемийные клетки инокулируют внутрибрюшинно, в то время как испытуемые соединения вводят внутривенно.

В мышей штамма ВРУ, внутрибрюшинно инокулируют 1-1210 лейкемий5 ные клетки в количестве 1 1О клеток/мышь. Внутривенно вводят испытываемое соединение, приготовленное по рецептурному примеру 2. Мышей наблюдают в течение 30 дн на предмет выживания или смерти и определяют соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на группу), при этом число дней выживания мышей контрольной группы, которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают как 100.

Действие соединения 1 на.лейкемию

P-388 при внутривенном введении представлено в табл. 5.

Пример 5 (испытательный).

Ь-12 10 лейкемийные клетки инокулируют внутрибрюшинно, в то время как испытуемое соединение вводят орально.

В мышей штамма BDF, внутрибрюшинно инокулируют L-1210 лейкемийные клетки в количестве 1 ° 10 .клеток/мышь. Испы5 тываемое вещество, приготовленное в соответствии с рецептурным примером 1, вводят дважды, т.е. через 1 и 4 дня после инокулирования. Мышей наблюдают в течение 30 дн на предмет выживания или смерти, и определяют соотношение среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на группу), при этом число дней выживания мышей контрольной группы, которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают как

100.

Действия соединения 1 и соединения сравнения на лейкемию L 1210 при оральном введении представлены в табл. 6.

Пример 6 (испытательный) .

Клетки меланомы В-16 инокулируют

1500156 внутрибрюшинно, в то время как испытуемые соединения вводят орально.

В мышей штамм BDF, внутрибрюшинно инокулируют 0,5 мл жидкости, полученной путем диспергирования 1 r клеток меланомы В-16 в 8 см физиологического солевого раствора в количестве

О, 5 мл/мышь. Испытываемое соединение, приготовленное в соответствии с рецеп-10 турным примером 1, вводят орально три раза, т.е. через 1, 7 и 14 дней после инокулирования. Мьппей наблюдают в течение 60 дн для определения выживания ипи смерти и определяют соотноше- 15 ние среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на группу), при этом число дней выживания мышей контрольной группы, 2р которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают как 100.

Действие соединения 1 и соединения-сравнения на лиланолиз В-16 при оральном введении представлено в 25 табл. 7.

Пример 7 (испытательный).

Клетки М-5074 саркомы яичника инокулируют внутрибрюшинно, в то время как испытуемые соединения вводят gp орально.

В мьппей штамма BCF внутрибрюшинно инокулируют клетки M-5)74 саркомы яичника в количестве 1,10 клеток/мышь. Испытываемое соединение, приготовленное в соответствии с ре- 35 цептурным примером 1, вводят орально три раза, т.е. через 1, 7 и 14 дней после инокулировання. Мьппей наблюдают в. течение 60 дн. на предмет выживания или смерти и определяют отноше- ние среднего времени выживания испытательных и контрольных животных для каждой обработанной группы (10 животных на группу), при этом число дней выживания мышей контрольной группы, которым вводят физиологический солевой раствор, оценивают как 100.

Действие испытуемых соединений на саркому яичника M-5074 при оральном введении представлено в табл. 8. 50

Данные по острой токсичности, дозировке и способам введения производных бензонлмочевины, полученных в условиях описываемого способа, следующие. 55

I I

Острая токсичность. В мышей штамма day (10 животных) внутривенно ввели соединение 1 или 2, приготов-, ленное в соответствии с рецептурным примером 1, причем количество соединения составило 100 мг/кг, после чего ни одна из мьппей не умерла. Таким образом, установлено, что величины острой токсичности (LD> 1 соедине5п ний 1 и 2 составляют не менее

100 мг/кг, т.е. их можно отнести к категории малотоксичных.

Дозировки. Указанные соединения вводят непрерывно или с перерывами в некотором диапазоне, в котором полная дозировка не превьппает некоторого уровня с учетом результатов опытов на животных и различных условий. Однако дозировку можна изменять в зависимости от пути введения и от состояния больного или животного, которых нужно лечить (например, от возраста, веса тела, пола, чувствительности, пищи и т.п.), от интервалов в введении лекарства, от лекарств, используемых в сочетании с указанными соединениями, и от степени заболевания.

Оптимальную дозировку и число введений в некоторых условиях могут определить специалисты.

Пути введения. Противоопухолевые вещества можно вводить оральным, внутривенным, ректальным, внутримышечным а подкожным путями, предпочтительно оральным, внутривенным или ректальным путями, наиболее предпочтительно оральным путем.

Предлагаемые соединения плохо растворимы как в воде, так и в органических растворителях, поэтому их предпочтительно включать в рецептуру в водные суспензии, которые дополнительно могут содержать фосфолипиды.

Кроме того, эти соединения можно включать в рецептуру в таблетки, капсулы., кишечные средства, гранулы, порошки, растворы для инъекции или в суппозитории с помощью известных способов приготовления препаратов.

Пример 1 (рецептурный). Соединение 1 предварительно измельчают с помощью центрифужного измельчения.

Верут 5 мас.ч. отвержденного полиоксиполиэтиленом (60) касторового масла, 0,2 мас.ч. силикона и 0,3 мас.ч. полиоксиэтилен-полиоксипропиленового блок-полимера, добавляют к 79,5 мас.ч. физиологического солевого раствора, чтобы получить водный раствор, к ко— торому добавляют 10 мас.ч. измельченного соединения 1. Смесь измель156 10 мы В-16, лейкемии L-1210 и лейкемии

P-388 при оральном введении в сравнении с известным: N-(2-нитробензоил)— г

-N- 3-хлор-4-(5-йод-2-пиримидинилокси) фенил) мочевиной.

Формула из о бр е те ния

Способ получения производных бензоилмочевины общей формулы

1 где А — бром или хлор, отличающийся тем, что, нитробензольное соеДинение формулы

О CON CO подвергают взаимодействию с производным пиримидина общей формулы

Н 1Ч-Я-О-С с)-А

С1 где А имеет указанные значения, в присутствии органического растворителя, такого как октан, ксилол, пиридин, диметилсульфоксид, этилацетат, диоксан, хлорбензол или 1,2дихлорэтан, при 0-120 С.

Приоритет по приз яакам:

Т а б л и ц а 1

Условия реакции

Пример

Исходные материалы

Выход продукта, г

Количество

А Количе- Раство Количе- T.реак- Время ство ритель ство, ции, С (и) (вид) мл (с) Комнат- 9 ч ная тем9,42

5,76

Br 6,80 Диоксан 30+30 пература

С1 1,00 Диоксан 6,5+6,5 То же 3 ч

1,05

1,50

7,05

О 24 ч

Br 6, 80 Хлор- 30+30 бензол

5,76

9 1500 чают в мокрой системе с помощью песчаной мельницы, используя стеклянные шарики (807. частиц имеют размер частиц не более, чем 2 микрона). Затем

5 мас.ч. ксантановой смолы (2X-ный раствор) добавляют туда, чтобы получить водную суспензию.

Пример 2 (рецептурный). Берут 0,24 мас.ч. соединения 1,2,4 мас.ч.10 очищенного фосфолипида желтка и

0,0024 мас.ч. g-токоферола растворяют в 48,7576 мас.ч. хлороформа, а затем хлороформ отгоняют путем нагревания под пониженным давлением с помощью роторного испарителя, получив тонкий слой фосфолипида, содержащего соединение 1. К этому тонкому слою добавляют 48,6 мас.ч. физиологического водного раствора хлористого натрия и сразу же интенсивно встряхивают при комнатной температуре,. а затем проводят ультразвуковую обработку в течение 1 ч при ледяном охлаждении с помощью аппарата Зоникатор. Затем про- 2В водят центрифужное разделение при комнатной температуре, после чего собирают остаток самого нижнего слоя и промывают с помощью центрифуги несколько раз указанным физиологическим водным раствором хлористого натрия, а затем отфильтровывают, чтобы удалить бактерии, посредством чего получают водную суспензию, содержащую фосфолипид с размером частиц 0,2—

2 микрона.

Проведенные испытания показывают, что производные бензоилмочевины, полученные предлагаемым способом, малотоксичны и проявляют более высокую противоопухолевую активность в отношении саркомы яичника М-5074, меланоО CONHCONH 0 Π— (О д

ХО Ñ1

20.02.85 А — бром;

08.03.85 A — бром, хлор.

1500156

Пример

Условия реакции

Выход продукта, г с

T.ðåàê- Время ции, С

А КоличеКоличество

Раство ритель (вид) Количе ство (с ) ство, мл (с) Br 2,47

05ч

1,73

3,7

Вг 2,47 н-Октан 10

Br 2, 47 Ксилол 10

120 10 мин

1,73

3,5

3,6

Комнат 5 ч

1,73 ная температура

То же

1, 73 Br 2, 47 Пиридин 10

5 ч

3,2

5 ч

Br 2,47 ДМСО 10

1,73

2,5

Br 2,47 Этилаце- 10 тат

1,73

5 ч

2,8

Т а блица 2

Соединение Доза активного ингредиента, мг/кг/день

Отношение среднего времени выживания испытательных/контрольных,X

1

Сравнительное

Таблица 3

Доза активного ингре диента, мг/кг/день

Соединение

Соотношение среднего времени и выживания испытательных/контрольных, 7.

Сравнительное

Исходные материалы

-+фФ-)!

1, 2-ди- 3+ 4 хлбрэтан

12,5

12,5

12,5

400

Кипяч.с борат. холод. (83,5o C) 168

173

171

173

157

178

139

186

143

116

Продолжение табл.

l4

Таблица 4

1500156

Соединение

Доза активного ингре диента, мг/кг/день

Соотношение среднего времени выживания испытательных/контрольных, 7.

143

183

141

Сравнительный

Таблица 5

Соединение Доза активного ингре- Соотношение среднего вредиента, мг/кг/день мени выживания испытательных/контрольных, 7

195

12,5

Таблица 6

Доза активного ингре- Соотношение среднего диента, мг/кг/день времени выживания испытательных/контрольных, 7

Соединение

Сравнительное

Таблица 7

Доза активного ингредиента, мг/кг/день

Соединение

Соотношение среднего времени выживания испыта.тельных/контрольных, 7

Сравнительное

Таблица 8

Соединение Доза активного ингреди- Соотношение среднего ента, мг/кг/день времени выживания испытательных/контрольных,7

139

138

400

1

Сравнительное

200

1600

200

213

156

124

213

212

124