Способ получения производных резазурина или резоруфина в виде таутомеров

 

Изобретение касается гетероциклических соединений и, в частности, способа получения производных резазурина или резоруфина в виде таутомеров общих формул @ где R<SB POS="POST">1</SB> - H, галоген, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкил, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкоксикарбонил или C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкоксил

R<SB POS="POST">2</SB> и R<SB POS="POST">5</SB>-H, галоген или C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкил, R<SB POS="POST">3</SB> и R<SB POS="POST">4</SB> - H, галоген, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкил, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкоксикарбонил, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкоксигруппа, карбоксигруппа или CO-морфолиногруппа

R<SB POS="POST">6</SB> - H, галоген, карбоксил, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкил, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкоксикарбонил, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">5</SB>-алкоксигруппа, NO<SB POS="POST">2</SB>, сульфогруппа или группа формулы - C(O)O-C<SB POS="POST">2</SB>H<SB POS="POST">4</SB>-O-C<SB POS="POST">2</SB>H<SB POS="POST">4</SB>-OC<SB POS="POST">2</SB>H<SB POS="POST">5</SB> или -C(O)-NH(C<SB POS="POST">2</SB>H<SB POS="POST">5</SB>)

Y - азот или группа NO, причем все радикалы от R<SB POS="POST">1</SB> до R<SB POS="POST">6</SB> одновременно не водород, если Y - азот, - полупродуктов для синтеза новых индикаторных ферментов для обнаружения гликозидаз. Цель изобретения - создание новых полупродуктов для синтеза новых активных веществ. Синтез целевых веществ ведут реакцией соединений общих формул R<SB POS="POST">1</SB>C=C(NO)-C(OH)=CR<SB POS="POST">3</SB>-C(OH)=CR<SB POS="POST">2</SB> и R<SB POS="POST">6</SB>C=CR<SB POS="POST">5</SB>-C(OH)=CR<SB POS="POST">4</SB>-C(OH)=CH, где R<SB POS="POST">1</SB>-R<SB POS="POST">6</SB> - см.выше, в присутствии пиролюзита и серной кислоты в спиртовой среде при 0-20°С. Целевой продукт выделяют непосредственно при Y - группа NO, или его обрабатывают порошкообразным ZN в водной среде в присутствии NH<SB POS="POST">3</SB> при 0-20°С с выделением целевого продукта при Y - азот. Способ позволяет получать целевые продукты с выходом 30-85%. 1 табл.

СООЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТУ (/", С:!

В2

ОН

R R4

КО З В4. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОбРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ CCCP (21) 4027681/23-04 (62) 3878797/28-14 (22) 24.06.86 (23) 28.03.85 (31) P 3411574.9 (32) 29. 03. 84 (33) DE (46) 23.06.90. Бюл. ¹ 23 (71) Берингер Маннхайм ГмбХ (DE) (72) Кристиан Кляйн, Ханс-Георг Батц, Манфред Сернегц и 10рген Хофманн (DE) (53) 547 .867 .6 .07(088 .8) (56) Выложенная заявка ФРГ ¹- 2919258, кл. С 07 D 265/38, опублик. 1980. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

РЕЗАЗУРИНА ИЛИ РЕЗОРУФИНА В ВИДЕ TAУТОМЕРОВ (57) Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности способа получения производных резазурина или резоруфина в виде таутомеров общих формул где R. — Н, галогей, С<-С -алкил, С -С -алкоксикарбонил или С -С -алкоксил;В. и К вЂ” Н,галоген или С -С вЂ . алкил; R> и К4 - 8, ãýëoãåí, С, — С вЂ”.алкил

Изобретение относится к способу получения новых производных резазурина или резоруфина в виде таутомеров, которые являются исходными соединениями для получения новых производных гликозидсодержащего резаэурина или

„„Я0„„157417З Л 3 (51)5 С 07 D 265/38//A 61 K 31/535

2 С„-Сq àëêîêñèêàðáîíèë, С -С -алкоксигруппа, карбоксигруппа или СО-морфолиногруппа, R < — Н, галоген, карбок сил, C -C -алкил, C -С -алкок сика рбонил, С,-С5-алкоксигруппа, КО, сульфогруппа или группа формулыС(0) О-С Н+-О-С Н -ОС Н или

-С(О)-1 1Н(С Н ); Y — азот нли группа

N0, причем все радикалы от Rq до R одновременно не водород, если Y —азот, — полупродуктов для синтеза новых индикаторных Ферментов для обнаружения гликозидаз.Цель изобретения— создание новых полупродуктов для синтеза новых активных веп,еств.

Синтез целевых веп,еств ведут

Реакцией соединений общих Формул

R C=C(N0) — С(ОН) =CR — С(ОН) CR2

R„C=CR С(ОН) =CR4 С(ОН) СН где К; К6-имеют приведенные значения, в присутствии пиролюзита и серной о кислоты в спиртовой среде при 0-20 С, Целевой продукт выделяют непосред:ственно при Y — группа NO, или его обрабатывают порошкообразным- Еп в водной среде в присутствии NH> при

0-20 С с выделением целевого продукта при Y — азот. Способ позволяет получать целевые продукты с выходом

30-85Х 1 табл. резоруфина, которые находят применение в качестве средства для обнаруже-., ния гликозидаэ.

Целью изобретения является создание новых полупродуктов для синтеза

1574173

50 новых индикаторных ферментов для обнаружения гликозидаз на основе производных гликозидсодержашего резазурина или резоруфина, обладающих повышенной эффективностью °

Пример 1. Метиловый эФир резоруфин-1-карбоновой кислоты.

5б г нитрозорезорцина,53,3 г метилоного эфира 3,5-диоксибензойной кисло- 10 ,ты и 28,0 r пиролюзита смешивают с

500 мл метанола. При охлаждении льдом при 5-10 С прикалывают 34,3 мл о концентрированной серной кислоты.

После удаления ледяной бани продол,жают перемешивать еще 2 ч . Затем при охлажцении добавляют 200 мл водного раствора аммиака. Выпавший осадок отфильтровывают через стеклянный

Фильтр. К фильтрату добавляют порция- 20 ми при 5-10 С 10 r цинкового порошка.

При комнатной температуре перемешивают до окончания процесса восстановления (контроль с помощью тонкослойной хроматографии, уксусный эфир:ме- 25 танол = 4:1 в качестве растворителя, время реакции 1>5 ч). На ротационном испарителе при температуре бани

25 С концентрируют до .I/3 объема. ПуТем подкисления концентрированной 30 соляной кислотой до изменения окраски и высушивания в вакууме над хлоридом кальция получают метиловый эФир резоруфин-1-карбоновой кислоть1. Выход

30,9 r (30%. от теории) . ЯМР-"H (Г03 — 35

ДМСО), : 3,98 (синглет,ЗН), 6,47 (дуплет, Л = 2,2 Гц, IН), 6,85-6,95 (мультиплет, 2Н); 7,09 (дуплет, Л

= 2,2 Гц,IН); 7,60 (дуплет, J = 9,6 Гц

1Н) . 40

Флуоресценция при абсорбции

> м„с = 570 нм, при эмиссии h макс=

= 588 нм.

Аналогичным образом получают следующие производные резоруфина: 45 резоруфин-1-карбоновая кислота с

УФ (видимая область, 0,1 N калиевоФосфатный буфер, рН = 7 5) % макс

569 нм ; метиловый эфир-4-метоксирезоруФин-1-карбоновой кислоты с УФ (видимая область, 0,1 _#_ калиево-фосфатный буфер, рН = 7„5) Ъ ма„с = 592 нм; метиловый эфир 8-бром-4-метоксирезоруфин-1 -карбоновой кислоты с УФ

55 (вццимая область, 0,1 г калиево-ФосФатный буфер, pH =- 7, 5) Ф мак = 569 нм1 метиловый эфир 8-бром-4-метоксирезоруфин-1-карбоновой кислоты с УФ (видимая область, О,1 Y калиево-Фосфатный буФер, pH = 7,5) h акс = 588 HM, 1-нитрорезоруфнн с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-Фосфатный буФер, pH = 7 5) % макс резоруфин-1- сульфокислота с УФ (видимая область, 0,1 Y калиево-ФосФатный буфер, рН = 7,5) о макс= 570 нм, 1-метилрезоруфин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,2 М калиево-Фосфатный буфер, pH = 7,5)

9 макс= морфолидрезоруфин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-Фосфатный буфер, pH = 7,7) ) макс = 575 нм.

ЛИР- Н((016 — Д СО) 3: 3,3-3 8 (мультиплет, 8Н); 6,50 (дуплет, J =

= 2 Гц, IH); 6,64 (дуплет, J = 10 Гц, IН), 6,76 (двойной дуплет, J =10 и

2 Гц, IH) 7,44 и 7,51 (каждый раз дуплет, J = 1 О Гц, 2H) .

Пример 2. Резоруфин-4-кар,боновая кислота.

1,60 г (10,5 ммоль) иитрозорезорцина, 1,55 r (10,0 ммоль) 2,6-диоксибензойной кислоты и 0,86 r (10 ммоль) пиролюзита поглощают в о

20 мл метанола и охлаждают до О С.

К получаемой таким образом смеси прикапывают 1,06 мл концентрированной серной кислоты. Продолжают перемешивать еще 2 ч без охлаждения. Выпавший осадок красного цвета отфильтровывают, промывают метанолом и высу— шивают. Выход 2,3 r (85% от теории).

УФ (видимая область, 0,1 И калиевоФосфатный буфер, pH = 7,5) Ъ макс . =

614 нм (= 48 см моль ); после

2 подкисления i « = 522 нм (E = 32 см " смоль ).

Пример 3. Резоруфин-4-карбоновая кислота.

2,3 r резоруфин-4-карбоновой кислоты, полученной по примеру 2 растворяют в 20 мл воды и 5 мл 25%-ного аммиака. К раствору синего цвета при охлаждении льдом добавляют 5 r цинковой пыли, а затем удаляют охлаждение льдом, так что раствор постепенно нагревается до комнатной температуры.

3а восстановлением можно легко следить по изменению окраски от синей до темно-фиолетовой и с помощью тонкослойной хроматографии (paстворитель: ме ганол/уксусный эфир, 1:1) . Избыточный цинковый IIopoEIoK отфильтровывают. Реакционный раствор подкисляют

5 157

5 мл ледяной уксусной кислоты и кон-= центрированной соляной кислоты.0садившийся продукт отфильтровывают, промывают разбавленной соляной кислотой и высушивают в вакууме над хлоридом кальция. Выход 1,8 r (823 от теории) .

УФ (виднмая область, 0,1 М калиевоФосфатный буфер, рН = 7,5): Ъ „,,„с

= 579,4 нм (Е = 48,6 см * моль ); после подкисления 9 макс= 485,9 нм, (Я = 34,7 см моль ).

IT р и м е р 4. 8-Улоррезазурин-4-к арбоновая кислота.

1,83 r 4-хлор-б-нитрозорезорцина, 1,56 г 2,6-диоксибензойной кислоты, 0,86 r пиролюзита и 1,06 мл серной кислоты подают в 20 мл метанола и а перемешивают 2 ч при 0 С, а также

14 ч при KOMHBTHOP Te e T e. IIO лучают осадок красного цвета, который отфильтровывают и высушивают.

Выход искомого продукта 2,45 г (807. от теории). УФ (видимая область

0,1 N калиево-Фосфатный буфер, рН

9 мс кс = 621,5 нм.

Аналогичным образом получают следующие соединения:

6-Метилрезазурин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-Фосфатный буфер, рН = 7,5)

612 нм, 8-метилрезазурин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-Фосфатный буфер, рН = 7,5) л мслкс

НО

ОВ

20 З 4 ! где RÄ - водород,галоген, С,-C 5-аТТкил С -С -алкокснкарбо5 нил С -C -алкоксил или л

25 карбоксил, К и В. — водород галоген или Сл -С - и

1 алкил. R u R — водород галоген, С< -Сс-алД

Э кил, Сл -С -алкоксикарбонил, С вЂ .С -алкоксигруппа, карбо-. л 5

30 ксигруппа или CO-морфолиногруппа;

R — водород, галоген, карбоксил, С, -С5-алкил, Сл -С5-алкоксикарбонил, С -С -алкоксигруппа, нитрогруппа, сульфогруппа или группа формулы

-СО -С Н -0-С Р -ОС Р5 или

-CO-NH-(C Н ), — азот или группа NO, причем

40 радикалы IT,-В6 одновременно не водород, если Y — азот, отличающийся тем, что соединение общей формулы

45

НО (III) 0Н

НО

8-бромрезазурин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-Фосфатный буФер, рН = 7,5) макс

Пример 5. 8-хлоррезоруфин-4-карбоновая кислота.

2 r 8-хлоррезазурин-4-карбоновой кислоты., полученной по примеру 4, растворяют в 20 мл воды и 5 мл 25Хного аммиака. При охлаждении льдом добавляют цинковый порошок, вплоть до полного изменения окраски до красно-Фиолетового цвета. Избыточный цинк отфильтровывают. После подкисления продукт отфильтровывают и высуо шивают в вакууме при 40 С над хлоридом кальция. Выход искомого продукта

1,5 r (79K от теории) . УФ (видимая область, 0,1 N калиево-фосфатный буфер, рН = 7,5) 9 макс = 585,5 нм.

Аналогично примерам 1-5 получают еще соединения, сведенные в таблице..

4173 6

Структура и спектры производных резазурина или резоруфина в виде таутомеров формулы (I) приведены в таблице.

Ф о р м у л а изобретения

Способ получения производных ре зазурина или резоруфина в виде тау,томеров общих Формул

10 1 б

Rg где R --R имеют укаэанные значения, э подвергают взаимодействию с соединением общей формулы где R -R имеют указанные значения, 7 1 574173 8 в присутствии пиролюз твии пиролюзита и серной кис- порошкообразным цинком в водной срелоты в спиртовой среде при температу- де в присутствии аммиака при темпераре от до комнатн

0оС комнатной с получением туре от 0 С до комнатной с получением целевого пр ого продукта общих формул (?) где ел в го

Y — группа NO, или его обрабатывают где Y — азот.

2 о

ОН

НО

R3 R4, 3 4

Активное сое

Ф

УФ

R, макс динение

Н Н со н

2 Н Н -co н

3 Н H . .-СО,Н

4 Н Н Н

5 Н

СН H н сн, H Br

-OCH Н

Н

Н

Н

-со,сн, со сн, N

N к к

602

509

589

-СО- 0 Н

6 Н

581

-СОН

-СО,С,H, Н

Hr

-ос н„ сн

С,НН

I8 H

i 9 -осн

20 -СО2Н

21 Ci

22 -С Н„

23 -ОС Нц

24 -С02СНЗ

25 С1

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

598

611

584

593

6 l 0

624

602

-С02 СаНиН

Сl Н

СН3 н

-ос н„ н

СЛН н

Н Н ф

УФ (видимая область; калиево-ФосФатнь111 буФер с рН = 7,5).

Составитель 3. Латыпова

Техред M.Õîäàÿè÷. Корректор Л.Ратай

Редактор И. Дербак

Заказ 1649 Тираж 324 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.ужгород, ул. Гагарина, 1 1

tf и

Г н !01

9 Н

10 Н

i1 Н

12 Н

13 Н

14 Н

i5 СН

i6 -С02с ни

Н

Н

Н

Н

Н с К„

СН>

Н

Н

Н

Н

Н

Н

-СО2Н

Ц

Н

Н

Н

Н

-Осн, Н

Н

Н

-со,н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н сн

C,H„

СО2ИН (С2 и ) к

СО Сна

СО2-С2Н4-О-С Н4-ОС Н

-со сн

-К02

-S0„H снэ

Н

Н

-СО,С,Н„

ОС1

Н сн„

-СО Н

-ОС Нн

-с н„, Cl

-со,сн, к

N

N к

N

N к

И

N

N

608

612

618

594

613

618»

624.