Способ определения антител класса i @ м к корантигену вируса гепатита в

 

Изобретение относится к медицинской биотехнологии, связано с генной инженерией и касается диагностики вирусного гепатита В С целью упрощения способа на твердую фазу сорбируют антитела к Ig M человека, вносят исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиеся в них Ig M связывают с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавляют меченый антиген, который взаимодействует со связанными специфическими Ig M. Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце антител класса Ig M. Кор-антиген высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е coli Антиген метят радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европия или другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакциях. Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого в иммунологических реакциях со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАР СТ В Е ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

А

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4626700/13 (22) 27.12.88 (46) 15.04.91. Бюл. ¹ 14 (71) Институт органического синтеза

АН ЛатвССР (72) В,В, Цибиногин и В.Я, Лосева (53) 576.8.094.29 (088.8) (56) Roggendor T.М, et al. Compari son of

hepatitis B core antigens deruled from human

liver or lnthesized in Escherichia coli and

evaluation of fheir use in Diagnostic assays

for anti — НВс Ig М. — К Virol. Meth. 1983, р, 61-70.

Hashe G. Use of hepatitis В core antigen

produced in Escgherichia Coil to detect

immunoglobulin М, specific antibodies on an

Enziyme-linked immunosorbent assay,—

Eur. I. Ciln, Microbiol., 1984, № 3, р. 30-34. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ

КЛАССА Ig M К КОР— АНТИГЕНУ ВИРУСА

ГЕПАТИТА В (57) Изобретение относится к медицинской биотехнологии, связано с генной инжене1

Изобретение относится к медицинской биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано для диагностики вирусного гепатита В.

Цель изобретения — упрощение ñïîñoба.

На твердую фазу сорбируют антитела к

1д M человека, затем вносят исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиеся в них Ig М связываются с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавляют меченый антиген, который взаимодействует со связанными

„.,!Ж„„1642399 А1

est)s G 01 N 33/53, А 61 К 39/29 рией и касается диагностики вирусного гепатита В. С целью упрощения способа на твердую фазу сорбируют антитела к Ig М человека, вносят исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиеся в них Ig M связывают с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавляют меченый антиген, который взаимодействует со связанными специфическими

Ig М. Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце антител класса lg M, Кор — антиген высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е. coii. Антиген метят радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европия или другой меткой, используемой в высо качу вствител ьн ы х иммунологических реакциях. Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые иэ полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого в иммунологических реакциях. специфическими Ig М, Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце анти—

НВс класса lg М.

Согласно предлагаемому способу в качестве меченого компонента используют меченый кор — антиген, который взаимодействует с антителами класса Ig М, предварительно связанными с сорбированными на твердой фазе антителами к Ig М человека.

HBc Ag высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е. coli.

1642399

Составитель И.Тареева

Техред М.Моргентал Корректор В.Гирняк

Редактор А.Огар

Заказ 1145 Тираж 425 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина. 101

НВс Ag метят радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европия или любой другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакциях.

Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого. в иммунологических реакциях на стадии сорбции первого слоя.

Изобретение позволяет упростить процесс определения антител класса Ig М к кор-антигену вируса гепатита В, При этом чувствительность метода не снижается.

Кроме того, исключается необходимость использования крови человека, Пример. Определение анти-НВс класса lg М в радиоиммунологической реакции.

На твердую фазу сорбируют антитела против тяжелых цепей Ig М человека в концентрации 10 мкг/мл в объеме 0,1 мл в 0,05 М карбонат — бикарбонатном буфере, рН 9,5, в течение 16 — 18 ч при +4 С. После трехкратной отмывки дистиллированной водой в лунки вносят разведения испытуемых человеческих сывороток 1;t0, 1:10 и т. д, до

1;10 по 0,1 мл в 0,4 М Na — фосфатном буфеб ре, рН 7,2-7,4, содержащем 0,15 М хлорида натрия, 0,1 тритона Х вЂ” 100 и 0,1 бычьего сывороточного альбумина, После инкуба5 ции в течение 1 — 2 ч при +37 С лунки отмывают 5 — 6 раэ дистиллированной водой и вносят раствор меченного I HBc Ag в том же фосфатном буфере. После инкубации с антигеном 1 — 2 ч при +37 С следует отмывка

10 5-6 раз. Затем лунки вырезают и определяют их радиоактивность ву-счетчике. Результаты, полученные по известному и предлагаемому способам, совпадают, т. е. чувствительность обоих методов не отличается.

Формула изобретения

Способ определения антител класса Ig

M к кор-антигену вируса гепатита В, включающий проведение на твердой фазе имму20 нологической реакции между антителом и антигеном с использованием меченого компонента, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве меченого компонента используют кор-антиген, а

25 антитела класса Ig M из испытуемых образцов связывают с сорбированными на твердой фазе антителами к ig M человека.