Штамм гриба beauveria ваssiаnа (bals) vuill для производства инсектицидного препарата боверина

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при получении инсектицидного препарата боверина, используемого для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и леса. Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего большей продуктивностью и вирулентностью , чем известные штаммы. Штамм получен методом селекции на основе многоспорового рассева культуры. Beaveria bassiana после пассажа через колорадского жука. Исходная культура гриба выделена из природной популяции. Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ - Г - 399. Выход спор 83,15 г/кг субстрата против 69,38 у известного штамма 124 - Р, ЛКбо% 0,0004 против 0,001 у штамма 10 Е. 3 табл. сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4633079/13 (22) 05.01.89 (46) 07.11.91. Бюл, М 41 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72) И.Ю.Гальвидис, Э.B.Êîíîíîâà, В.И.Дубова, А.И.Баласова, Е.Ю,Бабаян, А.В.Наконечная и Г.Н.Коновалова (53) 632.08:576.8(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 923024, кл. А 01 N 63/00, 1980.

Авторское свидетельство СССР М

1115262, кл. А 01 N 63/00, 1982. (54) ШТАММ ГРИБА BEAUVERIA BASSIANA (BALS) ЧОЕ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ИН

СЕКТИЦИДНОГО ПРЕПАРАТА БОВЕРИНА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть исИзобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при получении инсектицида боверина, используемого для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и леса..

Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего большей продуктивностью и вирулентностью, чем известные штаммы.

Штамм получен методом селекции на основе многоспорового рассева культуры

В.bassiana после пассажа через колорадского жука. Исходная культура гриба выделена.из природной популяции.

Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ вЂ” Г -399.

„,5U „„1688820 A t (я)э А 01 N 63/04, С 12 N 1/14 польэовано при получении инсектицидного препарата боверина, используемого для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и леса. Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего большей продуктивностью и вирулентностью, чем известные штаммы.

Штамм получен методом селекции на основе многоспорового рассева культуры.

Beaveria bassiana после пассажа через ко- лорадского жука. Исходная культура гриба выделена иэ природной популяции, Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ вЂ” à — 399. Выход спор

83,15 r/êã субстрата против 69,38 у известного штамма 124 — Р, ЛК5оф 0,0004 против

0,001 у штамма 10 Е. 3 табл, Штамм имеет следующую характеристику.

Морфологические признаки. При выра- G щивании штамма на плотной агариэованйой СО среде Сабура втечение15дней при 26-28 С Q() гриб образует круглые плоские колонии, QQI прижатые к субстрату с валиком по перифе- (Я рии колонии. Не имеет вторичного роста, С1 коремий. Конидиальный слой меловой кон- систенции, пигментация конидиального слоя кремового цвета, нижней части — жел- 4 товато-рыжая по А.С.Бондарцеву. Размер колоний от 86 и 0,37 до 90 0,2 мм, интенсивность споруляции 1155 — 1038 млн. спор/мл среды. Воздушный мицелий разветвленный, септированный, белый. Гифы мицелия в диаметре 3,5 — 5,0 мкм. Конидиеносцы бутылевидные формируются одиноч1688820 но, попарно или мутовками, конидии образуются базипетально на стеригмах. Размер конидий 2,8 — 3,5 мкм, одноклеточные, одноядерные. В гемолимфе пораженных насекомых гриб образует специфические гифальные тела, бластоспоры, которые размножаются делением. Прорастают конидии через

12 ч (на агаризованной среде при 26 — 28 С)

1 — 2-ростковыми трубками. Начало конидиобразования через 24 ч.

На сусло-агаре образует идентичный тип колоний.

Физиолого-биохимические признаки.

Отношение к источнику углерода: усваивает сахарозу, глюкозу, лактоэу, мальтозу, фруктозу, рамноэу. Не усваивает целлюлозу.

Крахмал гидролизует.

Усваивает уксусную, щавелевую кислоты. Не усваивает янтарную кислоту.

Усваивает дульцит, сорбит, глицерин.

Не усваивает н-бутанол, изобутанол.

В качестве источника азота использует каэеин, пептон, аммонийный азот, нитраты.

Аминокислоты стимулируют массовое конидиеобразование.

Протеолитическая активность 3,42 ед/г, липазная активность 1960,6 ед./г.

По отношению к кислороду — гриб азроб.

Гриб образует антибиотики — боверицин, бассианолид.

Температурный диапазон роста культуры гриба от 10 до 30 С. Оптимальная для данного штамма температура 26-28 С; рН

4,8 — 6, оптимальная рН 5,4 — 5,5.

Фаги не выявлены.

Штамм 188 стабилен до 8 генераций.

Штамм хранится в пробирках на скошенном сусло-агаре при 4 С в течение 2 лет.

Препарат боверин на основе гриба

В.basslana не токсичен для теплокровных и человека. ПДК в воздухе рабочей зоны

0,3 мг/мз, класс опасности 2.

Пример 1. Сравнительная продуктивность различных штаммов В.basslana, Культуру гриба В.bassiana выращивают в колбах на качалке(1-я стадия) в жидкой питательной среде, : меласса 4; кукурузный экстракт 2;

КС! 0,2; KHzPO40,2, Время культивирования

48 ч при 27 — 28 С. Образуется хорошо развитый мицелий и бластоспоры (инокулятдля

4 твердого субстрата — ll стадия). Полученный инокулят смешивают со стерильным твердым субстратом в отношении 1:1. Твердым субстратом являются отходы ячменя при

5 производстве трихограммы. Время выращивания 120 ч, температура 27 — 28 С.

Полученные данные приведены в табл.1.

Пример 2. Сравнительное определе10 ние активности различных штаммов

В.basslana на различных насекомых.

Опыт ставят в пяти поверхностях. В чашки Петри помещают по 15 особей насекомых, обработанных 1 -ной суспензией

15 спор (2,5 см с титром (1 — 2) х 10 сп./мл).

Корм помещают в чашку и меняют в течение всего периода наблюдения. Учет проводят на 7-е сутки, температура 28 +. 1 С.

В табл,2 приведена активность штаммов гриба В.basslana на различных насеко20 мых-вредителях.

Пример 3. Определение вирулентно.сти различных штаммов В.Ьазз!апа.

Для определения вирулентности штаммов гриба В.Ьазз!апа используют метод до25 зированного инфицирования тест-насекомых(имаго Musca donestica а).цля биологической оценки используют односуточные имаго домашней мухи (лабораторная популяция). Обработку мух производят суспен30 зией спор 0,1; 0,01; 0,001 и 1, каждая концентрация в трех повторностях. Обработку насекомых проводят 4 мл суспензии каждой концентрации. В стерильные банки помещают по 15 особей мух, корм ставится

35 в виде сахарного сиропа. Насекомых помещают в сухо-воздушный термостат при

28 C. учет гибели мух производят на 7-е сутки, Дальнейший расчет проводится по сис40 теме пробитов(способ Пригге), В табл.3 приведена вирулентность штаммов В.basslana.

Таким образом, штамм 188 имеет продуктивность и вирулентность выше, чем из45 вестные штаммы 124 — P, 21 — б, 10 Е, 80%4.

Формула изобретения

Штамм гриба Beauveria basslana (Bals)

ЧиИ! ВКПМ вЂ” à — 399 для производства ин50 сектицидного препарата боверина.

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Составитель Ю.Рогачев

Редактор И.Шмакова Техред М.Моргентал Корректор М.Мэксимцшинец

Заказ 3759 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101