Способ дифференциальной диагностики хронического активного гепатита и хронического персистирующего гипатита
Изобретение относится ч медицине, в част-юс|И к (долью изобрв ени - ччпяется повышение точности способа Для этого у больных с хроническим гепатитом определяют в ппазме концентрацию ф лбропектина методом твердофазно о мммуноферментного анализа. Для исследования достаточно 0,01 мл плазмы При снижении уровня с| ибропектмна в 1,25 рзх и менее относительно нормы диагностируют хронический персистирующий гепатит я при снижении в 1,65 раза и более - хронический активный Точность диагностики хроиическо.о пер систирующего гепатита увеличивается ча 33% а хронического -«ктивнот - на 29% по сравнению , прогот по Способ имеет гь.ую АС точное)Ь мто и - икциончг би /.1 2 таСп
союз советских
СОЦИЛЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕ1ЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ Г Нт СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ! (д (С: (21) 4685574/14 (22) 25.04,89 (46) 30.12.91, Бюл. N- 48 (71)Харьковский научна-исследовательский институт терапии (72) Н,И,Яблучанский, O.ß.Áàáàê, С.Н.Панчук и В,И.Гришина (53) 616.07 (088,8) (56) Логинов А,С., Блок 1О.Е. Хронические гепатиты и циррозы печени. — M,; Медицина. 1987, с. 89-108. (54) С П О С О Б Д И Ф Ф Е Р Е Н Ц И А 11Ь 10 и Д ИАГНОСТИКИ ХРО г1И -i ÅÑÊOÃO АКТИВЧОГО ГЕПА1ИТА И ХРОНИЧЕСКОГО ПЕРСИС!ИРУ1ОЩЕ1 О ГЕПАТИТА (57) Изобретен "8 относится к медицине, в частности к гепа.алагии. Цель10 изобретеИзобретение стносится к медицине, в частности к гепаталогии. Цель изобретения — повышение точно-, сти способа. Способ осув,ествляют следующим обРаЗОМ. 3 бальнаГО с предполагаемым хрон1/;ческим епатитом 8 стадии обострения утром натощак в паложечии лежа осуЩествлягат заба1. веназHОЙ кpÎди в количестве 10-20 мл, Затем определяют показатели каагулаграммь!, уровни билирубина, трансамин&з, Щелочной фасфатазы, гаммз-глутамилтранспептидазы, общего белка и ега фракций, иммуноглобулинов Ти B-.ëèìôîöèòîâ крови, осадочные пробы, изучают клинический анализ крови и при „„5 U,:„1762369 А1 ния qBляется повышение точности способа. Для этого у больных с хроническим гепатитом спределяют в плазме концентрацию фибрОпектина м8тадам твердафазH0:"0 ИММУнаферм8нтнОГО аналиаа. Для исследования достаточно 0,01 мл плазмы. При снижении уровня фибропектина в 1,25 раза и менее относительно нормы диагностируют хронический персистирующий гепатит. а при снижении в 1 65 раза и более — хронический активнь:й гепат1.т, Точность диагностики хрснического пер" СИСтИРУЮЩЕГО ГЕПатИта УВЕЛИчИВавтСЯ На 33%. а храническсго =.1ктив1.агс — на 29с„ па сравнению:. Г1рататипол:. Способ име8Т такую же гачнасть, чта и и, HK«! 0Híßß би;;-:;.:я. 2 табл. их зменении относительно нормь; д 1аг110— стиру.от xncHè÷8ñxèé гепат:;:т;, стад::-.и обастре-;ия, После зтаго допал;-1И1,:л-..„:0 измеря.ат урасе -.ь фиаоап8ктина в плаз! «Q кро.-. !- . ПО известной методике, напримеp ил1муназеамен гн"! M способом, О.Г1 мл плазмы, полу1еннай из цитратнай:;.Ови (свежей или хранившейся Н8 более трех месяцев в замороженном састоянпи и ри темпе рату ре — 20" С), размаоажива ют при ьом .атной температуре в течение 30 мин. "..8T8ë плазму разводят в 1000 раз, для -чего вначале к 0,99 мл 0,85%-нага раствора хлористоГО натрия дабавля10т 0,01 мл плазмы, тщательна перемешива1702309 ют. После этого к 0,1 мл полученного раствора добавляют 0,9 мл ФСБР с твин-20. Затем готовят материал для калибровки "Отрицательный контроль". Кроме того, во время размораживания плазмы готовят растворы конъюгата, отмывающий, субстратную смесь согласно инструкции, Прилагаемые к тест-системе планшеты предварительно тщательно ополаскивают сильной струей водопроводной воды, после чего лунки заполняют на 1-2 мин отмывающим раствором, затем вновь промывают проточной водой, Процедуру повторяют три раза. Затем в лунке А1 и А2 вносят "Отрицательный контроль", а в лунки В1, В2, С1, С2 и т.д, — соответственно 6, 5-е и т,д. разведения материала для построения калибровочной кривой. Исследуемые образцы вносят в оставшиеся лунки — по 0,2 мл каждого образца в две лунки горизонтального ряда, После внесения исследуемых образцов в планшет его помещают в термостат на 1 ч при 36 + +1, Затем проводят первую отмывку планшета согласно указанной выше схеме, также троекратно. После промывки, используя многоканальную автоматическую пипетку, вносят по 0,2 мл коньюгата во все лунки планшета и ставят его на повторное прогревание в термостат на 1 ч при той же температуре. Вторую промывку планшетов проводят аналогично первой. Субстратную смесь (по 0,2 мл в каждую лунку планшета) быстро вносят, используя многоканальную автоматическую пипетку. Затем планшет выдерживают при комнатной температуре в течение 10 — 15 мин, после чего быстро многоканальной автоматической пипеткой в каждую лунку планшета вносят по 50 мкл 50%-ной серной кислоты для остановки ферментативной реакции. После этого содержимое лунок перемешивают на автоматическом встряхивателе, Учет результатов проводят на многоканальном спектрофотометре "Tutertek Multiscan" из комплекта оборудования для иммуноферментного анализа фирмы "Flow" (Великобритания) при длине волны 492 нм. Построение калибровочной кривой и определение концентрации ФН в исследуемых образцах плазмы проводят с использованием на "IBMPC AT". При снижении концентрации фибропектина в 1,15 раза и менее относительно нормы диагностиру1от хронический перси10 55 стирующий гепатит, а в 1,65 раза и более— хронический активный гепатит. В табл, 1 представлены результаты определения уровня фибропектина плазмы крови у здоровых лиц, больных хроническими активным (ХАГ) и персистирующим (ХПГ) гепатитами. Из табл, 1 видно, что при хроническом активном гепатите уровень фибропектина плазмы крови существенно понижается в сравнении с таковым характерным для хронического персистирующего гепатита, что в принятых в интервалах его изменений (менее чем в 1,25 раза при хроническом персистирующем гепатите, чем более в 1,65 раза при хроническом активном гепатите) обеспечивает дифференциальную диагностику хронических активного и персистирующего гепатитов. Примеры осуществления способа. Пример 1. Больной С., 30 лет, поступил в гастроэнтерологическое отделение с жалобой на чувство тяжести в правом подреберье, слабость, повышенную утомляемость. Считает себя больным в течение двух лет после перенесения острого вирусного гепатита В. При объективном осмотре отмечалась бледность кожных покровов. Со стороны органов грудной клетки — без патологии, Печень в пределах нормы с ровным плотноэластичным безболезненным краем. Селезенка не увеличена, Лабораторные данные — анализ крови; эритроциты 4,3 10 /л, Нв 133 г/л, цветной показатель (ЦП) О,9; лейкоциты 4,5 10 /л зоз-1%, п.ад. 2%, сегм, 67, лимф. 26, мон. 3; СОЭ 6 ммlг, тромбоциты 200 10 /л, АСТ 2,13 ммоль г/л, АЛТ 2,83 ммоль г/л; щелочная фосфатаза 30,3 е/л, билирубин 14,8 мкмоль/л. прямой 3,6 мкмоль/л, непрямой 11,2 мкмоль/л, протромбиновый индекс 83, время рекальцификации 100, конц. фибропектина 2.44 г/л, фибриноген Б++, тромботест Vl, ФАК 180; общий белок 72 г/л, альбумин 51,2%, глобулин а> 5,7%, а2 9,8%,P 15 4%, у17,9%; А/Г 1,5; IgA 3,2 г/л, IgM 1,8 г/л, IgG 15 г/л, Дополнительно у больного был определен уровень плазменного фибропектина, который составил 264 мкг/мл, что в 1,25 раза ниже нормы. Данные инструментального обследования (эхосонография, гепатосцинтиграфия) допол н ител ьной информации не дали. Таким образом, в данном случае лабораторные данные не позволили дифференцировать ХПГ и ХАГ. Проведена пункционная биопсия печени. В результате морфологического исследования больному выставлен диагноз ХПГ, 1702309 55 что соответствует сни:-кению уровня фибропектина в плазме. Пример 2, Больной Р„38 лет, поступил в гастроэнтерологическое отделение с жалобами на слабость, чувство тяжес-и в правом подреберье, повышенную утомляемость. периодическую ломоту в суставах, повышение температуры тела до 37,7 — 37,8 град coB. 8 анамнезе острый вирусный гепатит В окого 10 лет назад. Объективно: бледность кожных покровов; суставы не изменены; сердце и легкие без особенностей; живот мягкий, при пальпации болезненный в правом подреберье; нижний край печени выступает HD 4 см изпод края реберной дуги; поверхность печени гладкая, край закруглен, чувствителен при пальггации, селезенка у края реберной дуги чувстительна при пальпации. Лабораторные данные — клинический анализ крови: зр 4,1 х 10 г/л, Нв 142 г/л, ЦП 1,0; лейк, 6,5х 10 in, э — 3;4, и — 4;4, с — 65%, л 22, м, — 6;(,, СОЗ вЂ” 21 мм/ч; тромб. 210х х 10 /л, АсАТ вЂ” 1,0 ммоль г/n. ANAT 2,56 ммоль г/л„щелочная фосфатаза 87,5 е/л, билирубин общий 28,7 мкмоль/л, .прямой 5,5 мкмоль/л„протромбиновый индекс 79 ф>, время рекальцификации 100; фибриноген 3,5 "/ë, фибриноген Б+++, тромботест I/i, ФАК 220; обгций белс, 76 гlл; альбумин 48,7 р, глооуллн а1 БД у,, à2 6,6;/„ /3 12,7 >, 31,4 g, А/" коэф. С,96. 19А 2,4 г/л, IgM 2,1 гlл, IgG 16.5 г/л. Дополнительно у больного был определен уровень плазменного фибропектина.:.оторь и составил 201 мкг/мл, что в 1,65 раза ниже показателя нормы. что соответствует уровню cDH npu ХАГ, Инструментальные методы обследования (гепатосцинтиграфия, эхосоноскопия) не позволили провести дифференциальную диагностику между двумя морфологическими формами хронических гепатитов: ХПГ и ХАГ, Кроме того, была проведена пункциочная биопсия печени. Чикроско".ическое изучение полученного биоптата позволило подтвердить диагноз ХАГ, Пример 3, Больной X., 21 лет, поступил в гастроэнтерологпческое отделение с жалобами на субфебрилитет. слабость, носовые кровотечения. артералгии. б лет назад перенес 08à В. Указанные жалобы бсспокоят около полу. ода, При обьективном осмотре: кожные покровы бледные, 5 3 = 40 со стороны органов грудной клетки — без особенностей, печень 1-2 см, с плотным ровным безболезненным краем; селезенка не увеличена. Лабораторные данные— анализ крови: эритроциты 3,82 10 /л, Нв .31 г/:, ЦП 1,0, л 5,8 10 /л, баз.-1, з-З, и- 2, с 45, л-42, м-7, СОЭ 20 мм/ч, тромбоциты "i 87 10 /л, АСТ 1,2 ммоль r/n, АЛТ I,3 ммоль гlл, щелочная фосфатаза 105,3 гlл, билирубин общий 18.5 мкмоль/л, прямой 5,4 мкмоль/л. непрямой 13.1 мкмоль/л, протромбиновый индекс 92 j, время рекальцификации 330, конц. фибриногена 3,55 г/л, фибриноген Б1, тромботест У ФАК 240; общий белок 66,2 гlл, альбумины 52,0;4, глобулины а1 4 р, аг 8 ; р 10,0,у 26,0;4; А/Г 1,08. IgA 2,8 гlл; IgM 3,1 г/л, IgG 24,5 г/л. Уровень фибропектина в плазме крови составил 183,3 мкг/мл, что в 1,8 раза ниже нормы. На эхосонографии выявлено незначительное увеличение размеров печения и повышение ее акустической плотности. Таким образом, при невысокой лабор="Tîðíoé активности процесса уровень фибропектина свидетельствует о наличии у больного ХАГ. Произведена пункционная биопсия печени. Морфологические изменения соответствуют данному диагнозу. Использование предложенного способа по сравнению с прототипом позволяет повысить точность диагност.-..ки. снижает необ одимоп ь проведения пункционной Ь-;опс;и печени. =, абл. 2 приводятся данные сравнения с;.<зто-: ипэ и и редлагаемого способа по точ. оо-, и у onьных хроничес«им персистирующ;лм (Х Г) и хроническим активным (ХАГ) .епати-а.:". Точность ко тролировали по даннь;м п,нкционной биопсии печени, Формула изобретения Способ дифференциальной диагностики крон - еского активного rer,атита и хрокичеo,",o!-о персис,ирующего гепатита кли:-гикс-биохимическим г.:утем. о т л и ч а ющ v,,й с я тем, что, с целью повышения то кости способа, дополнительно определяют концентрацию фибропектина плазмы крсви и при ее снижении в 1,25 раза и менее относительно кормы диагностиру-! oт. .рон. ческий персистирующий гепатит, а при снижении в 1,6 ра-а и более — хронический активный гепатит. 1702309 Таблица 1 Таблица 2 Составитель С. Федоров Редактор А.Маковская Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Н Ревскал Заказ 4540 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытилм пр: ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина, 101
