Штамм sтrертомyсеs candidus - продуцент макролидного антибиотика

 

Использование: производство антибиотиков и касается получения нового макролидного антибиотика, высокого активного в отношении Klebsiella pneurnonlae и других грамотрицательных бактерий. Сущность: штамм ИМВ 425 выделен из каштановой почвы Павлодарской области на селективной среде 2 Гаузе с антибиотиком стрептомицином (№ 2062 коллекция ВНИИА и S-919 коллекция ВНИИ генетика). Обладает ярковыраженной антибиотической активностью по отношению к Klebsiella pneumonlae и других грамотрицательных бактерий, грамположительных бактерий и грибов Fusariu m и Asperglllus. Штамм продуцирует новый макролидный антибиотик, отличающийся от всех ранее известных по молекулярной массе с т/е 998. 1 табл.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУЬЛИК (19) (1 I ) (s1)s С 12 P 1/06

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21).4829896/13 (22) 29.05.90 (46) 15,02.93. Бюл, N 6 (71) Институт микробиологии и вирусологии

АН КазССР (72) М.Н,Копытина,З.А,Рымжанова. С.Ш,Хожамуратова, Л.А.Ветлугина, Ж,Ф,Адиятова и Г.Б.Федорова (73) М;Н.Копытина * (56) Шемякин M.M. и др, Химия антибиотиков. М.: 1961, т. 1. (54) ШТАММ STREPTOMYCES CAN0IDUS—

ПРОДУЦЕНТ МАКРОЛИДНОГО АНТИБИОТИКА (57) Использование: производство антибиотиков и касается получения нового макроИзобретение относится к микробиологии, а именно производству антибиотиков.

Известен ряд макролидных антибиотиков (метимицин, магнамицин, олеандомицин, лейкомицин, анголомицин), отличающихся от изучаемого нами по молекулярной массе и активности в отношении

Klebsiella pneumoniae, Цель изобретения — получение штамма — продуцента нового макролидного антибиотика.

Штамм ¹ 425 выделен из каштановой почвы Павлодарской области на селективной среде 2 Гаузе с антибиотиком стрептомицином (концентрация 50 мкг/мл). . Полученный штамм депонирован во

ВНИИА и во "ВНИИ генетика".

Культурально-морфологические признаки.

На всех диагностических средах BM-беловатый, СМ-бесцветный, РП нет. Цепочки спор прямые, волнистые (RF). Споры гладлидного антибиотика, высокого активного в отношении Klebsiella pneumontae и других грамотрицательных бактерий, Сущность: штамм ИМВ 425 выделен из каштановой почвы Павлодарской области на селективной среде 2 Гаузе с антибиотиком стрептомицином (N 2062 коллекция ВНИИА и

S— - 919 коллекция "ВНИИ генетика" ). Обладает ярковыраженной антибиотической активностью по отношению к Klebsleila

pneumonlae и других грамотрицательных бактерий, грамположительных бактерий и грибов Fvsarium u Asperglllus. Штамм продуцирует новый макролидный антибиотик; отличающийся от всех ранее известных по молекулярной массе с m/е 998. 1 табл, 0 кие. Штамм растет при температуре+28 С, оптимальные значения рН 7,0 — 7,2, Штамм Streptomyces candidvs 425 под- @ держивается на средах Гаузе 1 и Гаузе 2.

Состав среды Гаузе 1 (%); крахмал растворимый N 2,0; KzHP04 — 0,05; MgSO4 — 0,05; 0

К1чОз — 0,1; КаС! — 0,05; FeS04 — 0,01; агар—

3,0; рН 7,2-7,4. Гаузе 2 (%): бульон Хоттин- Q гера -3,0; пептон — 0,5; глюкоза — 1,0; агар (В

-3,0; рН вЂ” 7,0 — 7,2. Штамм N. 425 высевается на среды Гаузе 1 и Гаузе 2 на косяки, выращивается в термостате при -2+3 С. Пересев музейных культур приводится один раз в 3 4 месяца.

Физиолого-биохимические признаки.

Хорошо ассимилирует 1 — инозит, 0— лактозу и 0 — мальтозу, хуже L — рамнозу, D — рафинозу, 0 — маннит, глюкозу, 1 — дульцит, сахарозу, арабинозу и D — сорбит. Не используют D — ксилозу. В качестве источника азота интенсивно используют пептон, дрожжевой экстракт, соевую муку, гидроли1795981

Антимикробный спектр антибиотика N. 425

Активность, r/Mn

Тест-о ганизм

1,5

333

111, 12

12 за г Хоттингера., Плохо усваивает минеральные источники, Клеточная стенка содержит L-ДАПК, которая оценивается хроматографическим методом (Lechevaller, 1968), Посевной материал получают на 0,5 питательной. кукурузной среде следующего состава (в ); кукурузный экстракт — 0,5; (NH>)zS04 0,35; NaCI — 0,5; крахмал нерастворимый — 2,5; глюкоза — 1,0; рН 7,0-7,1.

Для биосинтеза антибиотика используют среду А, Пример 1, Для биосинтеза антибиотика используют среду АА, содержащую в (0) соевая мука — 1,0; глюкоза — 1,0; NaCI—

- 0,5; СаСОз — 0,25; рН 7,2-7,4. Посевной материал вносят в количестве 3%, Выращивают при+28 С в течение 96 часов в колбах на качалке (180 об/мин). Антибиотическая активность культуральной жидкости составля. ет 2197 ед/мл и отношении Klebsiella

pneurnoniae.

Пример 2. Для биосинтеза антибиотика используют среду 5339, содержащую в (о/,): глицерин — 2,0; соевая мука — 0,5; (МН4)2304 — 0,15; NaCI — 0,3; СаСОз — 0,3; рН

6,8; Посевной материал вносится в количестве 3%. Выращивают при+28 С в течение

96 часов в колбах на качалке (180 об/мин).

Антибиотическая активность культуральной жидкости составляет 81 ед/мл в отношении

К. pneumon1ае, Штамм N- 425 продуцирует антибиотик, выделяемый из мицеллия и нативного раствора продуцента. Антибиотик из мицелия извлекали ацетоном при рН 7,0, упаривали в вакууме. Водный остаток реэкстрагировали н-бутанолом (1/15 от объема водного остатка). Бутанольный экстракт упаривали в вакууме при температуре +45 С, Из сконФормула изобретения

Штамм Streptomyces candldus ВКПМ S919- продуцент макролидного антибиотика.

Comomonas terrigena АТСС 8461:

Bacterium carotovorum, 19

Klebsiella pheumoniae 444.

$саphylococcus aureus 209Р

Staphylococcus aureus

Васйцэ subtills АТСС 6613

Microcowus tuteus АТСС 9341

Botrytls clnerea

Fus агав зоlапl

Verticiilium dachiliae центрированного экстракта антибиотик осаждали гексаном, осадок высушивали.

Пример 3. Из фильтрата культуральной жидкости антибиотик извлекали н-бута5 нолом 1/15 от объема фильтрата. Экстракт упаривали до минимального объема и осаждали гексаном. Выход антибиотика составляет 1,8 r с антибиотической активностью 5 мкг/мл в отношении К. pneumoniae..

10 Пример 4. Из фильтрата культуральной жидкости антибиотик извлекают экстракцией хлороформом 1/15 от объема фильтрата, Экстракт упаривают до минимального объема и осаждали гексаном, Пол15 учают аморфный порошок белого цвета, выход которого составляет 2,3 г с антибиотической активностью 1,5 мкгlмл в отношении К. pneumonlae.

Очистку антибиотика осуществляют ме20 тодом колоночной хроматографии на кизельгеле 60 марки "Merk". Выход очищенного антибиотика из 1 л культуры составляет 600 мг,,Антимик робн ый спектр антибиотика 425 приведен в таблице.

25 Антибиотик N 425 хорошо растворим в спиртах, хлороформе, ацетоне, мало растворим в воде. Анализ спектральных данных (ИК-, ЯМР-, масс-спектроскопии) позволил отнести изучаемый антибиотик к группе

30 макролидов, Он отличается от всех известных макролидов по молекулярной массе (m/å 998). Сравнение проводилось по компьютерной базе данных антибиотиков, разработанной Я. Берди, BPH.

Анбибиотик 425 высоко активен в отношении К. pneumonlae и других грамотрицательных бактерий в отличии от известных макролидных антибиотиков. Антибиотиче40 ская активность составляет 1,5 мкг/мл.