Способ прогнозирования течения офтальмогерпеса у мужчин

 

Область применения; медицина, а именно офтальмология для прогноза течения офтальмогерпеса. Сущность изобретения: определяют в сыворотке крови концентрации тестостерона и простогландина Е и при значениях тестостерона 2,4 нг/мг и более и 1,1 нг/мг и менее прогнозируют соответственно благоприятное и неблагоприятное течение болезни; у больных с показателями тестостерона в диапазоне 1,2-2,3 нг/мг проводят определение простагландина Е, при значениях которого 340 нг/мл и более прогнозируют неблагоприятное течение, 270 нг/мг и менее - благоприятное. Применение способа в медицинской практике позволит увеличить число одновременно проводимых прогнозов.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (505 6 01 К 33/74

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4770109/14 (22) 09.10,89 (46) 30.03.93. Бюл, N. 12 (71) Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней (72) B.Á,ÌàëüõãIIîà, И.А.Грипась, Г,X,Hàñèбулл ина, Т.Н. Ку; ен кова и Н, Е. Шевчук (56) Авторское св "детельство СССР

М 1364338, кл. А 6". F 9/00, 1982, (54) СПОСОГ ": РОГНОЗИРОВАНИЛ ТЕЧЕНИЯ ОФТАЛЫ IÇÃEPÏEÑË У МУЖЧИН (57) Область применения; медицина, а именно офтальмология для прогноза течения оф тальмогерпеса. Сущность изобретения:

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии.

Цель изобретения — увеличение числа одновременно проводимых прогнозов офтальмогерпеса у больных.

Способ осуществляют следующим образом, Из вены больного (до 43 при наличии одного набора для радиоиммунологического определения) берется кровь в количестве

5-7 мл, после ретракции сгустка сыворотка отбирается в три пробирки: в две по 0 1 мл для определения тестостерона и о одну — 1 мл для выявления простогландина Е.

При определении тестостерона с целью его экстракции в каждую из двух пробирок, содержащих по 0,1 мл, добавляют по 3 мл диэтилового эфира. и они перекрываются пробками, интенсивно встряхивают пробы на вихревом смесителе в течение 1 мин, центрифугируют пробы при ускорении ..

1500-2000 д в течение 2 мин, переносят 1 мл

1 Ы, 1865403 А1 определяют в сыворотке крови концентрации тестостерона и простогландина Е и при значениях тестостерона 2,4 нг/мг и более и

1,1 нг/мг и менее прогнозируют соответственно благоприятное и неблагоприятноеточение болезни, у больных с показателями тестостерона в диапазоне 1,2-2,3 нг/мг проводят определение простагландина Е, при значениях которого 340 нг/мл и более прогнозируют неблагоприятное течение, 270 нг/мг и менее — благоприятное. Применение способа в медицинской практике позволит увеличить число одновременно проводимых прогнозов. эфирного экстракта в пробирки для анализа, которые затем помещают в водяную баню и полностью выпаривают эфир при 37 С, l1eред проведением экстракции определяют величину "фонового тестостерона" в анализе, которую дает используемый растворитель. Для этого определяют параметры связывания антисыворотки в калибровочной пробе без тестостерона в отсутствие (В0) в присутствии (Вэф) сухого остатка после выпаривания 1 мл растворителя, Затем готовят 6 калибровочных проб тестостерона, используя соответствующий набор реактивов для радиоиммунологического определения тестостерона в сыворотке крови человека СТЕРОН-1-125 J.

С этой целью содержимое флакона с концентрированным буферным раствором переливают в стакан и добавляют 30 мл дистиллированной воды, перемешива1от. Затем во флакон с препаратом - J тестостерона добавляют 11 мл буферного

1805403 раствора, перемешива от до полного растворения, Для получения раствора антисыворотки во флакон с этим препаратом добавпя ат 11 мп буферного раствора, перемешивают. Иэ флакона с раствором тестостерона в спирте (640 нг/мп) отбирают 0,1 мп и дабавля:ат к 9,9 мл буферного раствора. Полученный раствор тестостерона является калибровочной пробой тестостерона, садар>кащей 6,4 кг/мл, Все остальные растворы капибравачны>с проб тестостерона, садаржащиа 3,2 - г/мп; 1,6 иг/мп; 0,8 нг/мп;

0,4 нг/мл; О," иг/мп готовят путем саответству ащего разведения буферным растворам первой пробы с 6,4 llr/мл.

Обозначают пробирки длл общей активности (T), "факавага тестостерона" (I,2), калибровочной кривой (5 — 16) и дпя анализа (17 — 102), В пробирки по определению общей активности Щ, "фаиавага тастастарана" (1-4), .садерхсащиа сухой остаток эфирного экстракта иэ анализируемой пробы (17 — 102), вносят па 0,1 мл буферного раствора.

В пробирки 5 — 16 вносят па 0,1 мп раствора cooTDeTGTB le ll> l lx Keлибравач н ых

10

25 проб тестостерона, Во все пробирки вносят па 0,2 мп р-ра "J и па 0,2 мл раствора аитисываратки, Тщательно перемешивают содержимое всех пробирок иа вихревом смеси rene, 30

Затем иикубируют все пробирки при комнаткой температуре 18,25 С в течение 2 ч.

Ва вса праблрки, корме Т, приливают по 1 мп р-ра папизтипаигпиKàïë, тщательна перамашипают на вв реном смесителе, вдаль- 35 кайшам памаща|ат пробирки в центрифугу с горизонтальным ротором и центрифугируют все пробы при комнатной температуре в течение 15 мии при ускорении 1500-2000 g.

После зтага атсасыва от иадасадачну а жид- 40 кость и измеряется скорость счета осадка каждой пробирки в течение 1 мин в гаммасчетчике типа "Гамма-1", Гамма-12", Находят срадкаа арифметическое значение скоростей счета l" ",J-тестостерона, для каж- 45 дай иэ 43 пар пробирок, Затем проводят расчеты и графическое построение согласно общеизвестной инструкции па применению набора реактивов CTEPOH-Т- J для радиаиммуиолагическаго определения тесто- 50 сторона в сыворотке крови человека (утваржденнай МЗ СССР 16 ноября 1984 r.).

При переводе абьамио-весовой концентрации тестостерона в малярную пользовались соотношением: имоль тестостерона 55

/л=-и-/мп тестостерона х 3,46.

С целью определения прастагладина Е к 1 мп сыворотки больных добавляют 3 Йл эфира, после удаления которого добавляют

3 мп раствора, содар>кащага этипацетат, изопропанол, 0,2 HCI s соотношении 3 .3,1.

Перемешивают и добавляют 2 мл зтилацетата и 3 мл дистиллированной воды, Перемешивают, центрифугированием раствор разделяют на фазы. Органическая фаза, 3 мп, переносится в полипропиленовую пробирку и высушивается в потоке воздуха под колпаком. Для разделения фракций простагландинов используется селикагелевая колонка. Далее нумеруют парные пробирки следующим образом:

Т1, Т2 — общие количества

1, 2 — неспецифический связывающий комплемент (NS8) ,3, 4 — содержащие стандарт PGB<, нг/мл (B о)

5. 6 — 1/243 стандарта (8,2 нгlмл)

7, 8 —. 1/81 стандарта (25 нг/мл)

9; 10 — 1/27 стандарта (74 нг/мл)

11-12 — 1/9 стандарта (222 нгl мл)

13, 14 — 1/3 стандарта (667 нгlмп)

15-16 — 1/1 стандарта (2000 нг/мл)

17-18 — образцы проб больных, Для приготовления проб стандарта

PGB> (40 нг/мл) во флакон, его содержащий, добавить 1,0 мл дистиллированной воды, 15 мин отстаивают, перемешивают, В пробирки, пронумерованные 1/3, 1/9, 1/27, 1/81;

1/243,добавляют по 0,6 мл гелевого трис-буфера (к 100 мл трис-буфера добавляют 10 r. желатины, нагревают, помешивая,"до растворения желатины, астужают до комнатной температуры и доводят рН до 7,4, добавлял 0,1 П NaOH ипи HCI).

Исходному стандарту PGB l дают номер

1/1, переносят 0,3 мп этого стандарта в пробирки 1/3, перемешивают и 0,3 мл стандарта 1/3, переносят в пробирку 1/9, перемешивают. Продолжают зто раэведенле до последней пробирки 1/243.

Затем в пробирки с NSB добавляют 1,1 мл гелевого трис-буфера, по 1 мл гелевого трис-буфера — в пробирки N 3-16 и по 0 6 мл его — в пробирки с пробами больных.

В соответствующие парные пробирки добавляют по 50 мкл каждого стандарта PGB1 и по 0,4 МКЛ проб больных. Вовсе пробирки вносят по 50 МКЛ (Н) PGBl, входящий в набор реактивов для радиоиммунологического определения простагландинов и растворенный в 10 мл гелевого трис-буфера. Во все пробирки добавляют по 50 MKJl кроличьей анти-PGB1 сыворотки, также входящей в данный набор реактивов и растворенной в 10 мл гелевого трис-буфера комнатной температуры. Содержимое пробирок перемешивают на вихревой мешалке.

Инкубируют в водяной бане при 37 С в течение 60 мин, Во все пробирки, кроме Т1 и Т2, добавляют по 100 МКЛ нормальной

1805403 кроличьей сыворотки и по 100 МКЛ козьей простогландина Е, при значениях которого анти-кроличьей сыворотки, входящих в на- 240 нг/мл и более прогнозируют неблагопбор реактивов для радиоиммунологическаго риятное течение, 270 нг/мл и менее благоопределения простогландинов. Паремеши- приятное, вают на вихревой мешалке и инкубируют 5 П р и и е р 1. У больного M. с диагнозом о

18-20ч при 2-8 С. Затем центрифугируют "Древовидный герпетический кератит" равсе пробирки, кроме Т1 и Tz,при 2 — 8 С в . диоиммунологическим методом в сывороттечение30мин при1600 g. Изовсехпроби- ко крови обнаружена концентрация рок, кроме Т1 и Т, полностью удаляют над- тестостерона, равная 0,4 нг/мл. С этой осадок. Высушивают пробирку снаружи и f0 целью.использовали набор реактивов для . внутри,.не задевая осадок, фильтровальной радиоиммунологического определения тесбумагой. Во все пробирки добавляют по 1,0 тостерона "СТЕРОН-1- Л", Исследование мл 0,1 П NaOH, перемешивают и растворя- уровня тестостерона осуществляли по опиют осадок. Переливают растворы изо всех санной выше матодике. Согласно предлагапробирок в соответствующие пронумеро- 15 емого нами способа мы прогнозировали ванные флаконы, туда затем добавляют по затяжное течение инфекции. Действитель11 мл сцинтилляционной жидкости, переме- но, заболевание приняло затяжное течение, шивают. Считают общую активность про- не купировалось противовирусными средст. стогландинов в каждой пробе. Затем В0 все вами и продолжалось 45 дней, флаконы, включая Т1 и Tz, добавляют по 20 Пример 2, У больного Г. наступил

0,01 мл радиоактивного простогландина рецидив поверхностного герпетического ке(Н) PGB, все перемешивают и результаты ратита на трансплайтате роговицы. Измеподсчитывают еще раз, Нормализирован- ренная концентрация тестостерона на 7 ные СРМ должны быть использованы во день заболевания равнялась3,7нг/мл. Провсех подсчетах по следующей формуле; нор- 25 гноз офтальмогерпеса — благоприятное темализованное количество простогландинов чение. На 27 день заболевания наступило в стандарте или образце (CPM) подсчитыва- выздоровление с благоприятным исходом ется по формуле без снижения остроты зрения, Пример 3, У больных Н., Б„С, с

Сру CPM х Т вЂ” Т

30 офтальмогерпесом показатели уровня тес(СРМ, — CPM ) тостерона равнялись 1,2 нг/мл, 2,3 нг/мл и п, 2,2 нг/мл, Определение тестостерона прогде T среднее отТ Т Т1 т 1и, -cpeäíåeотТ1 и Tz т.е Т вЂ” после из ере и с(эН CPM ческим методом. КонцентРациЯ этого (35 количество простогланди ов после обав- 3.> гормона лежала в диапазоне 1,2 — 2,3 нг!мл. ления (H)

В этой связи был проведен анализ концентрации простогландина Е, определяемого в параллельных исследованиях, с помощью отклонения (n) по формуле соответствующего набора реактивов. ПокаСРУ > — NS B)

40 затели его равнялись у вышеупомянутых

В=100 х больных соответственно 200 нг/мл, 350 нгlмл и 470 н г/;nr, На основе предлагаемого ч ми способа прогноза офтальмогерпеса в е кое в пРо первом случае заболевание должно было иметь благоприятное течение, а во 2 и 3— х и, c= o-, где о — средняя 4г ари метическая в пробирках 3 и 4.

Затем на пол ф " б атем на полулогарифмической бумаге неблагоприятное, затяжное, В соответствии рог озом у больного Н, герпетический щ " от кератоувеит протекал благоприятно и через, дней наступило выздоровление, у больл ой оси — концентрацию строят кривую стандарта и, зная соответст- к рати о заболевание имело затяжное . и отклонения каждого контроля и . ч образца находят з ц, находят значения концентрации течение, протекало с осложнениями в виде наслоения вторичной инфекции и длилось соответственно 87 и 42 дня, В группе об"" " л" 5 с едованных больных предложенным нами способом прогноз офтальмогерпеса был гоприятное течение болезни: у больных с . показателям . тестостерона в д ап

1 2-2 3 нг/мл проводят оп е ел ние сывороток, взятых от 26 больных, что значи1805403 тельно повысило производительность труда лабораторного рабвтника.

Составитель Н. Валеева

Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор .И. Шмакова

Редактор

Заказ 940 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР . 113035. Москва, Ж-35, РаушЬкая наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения офтальмогерпеса у мужчин путем исследования крови больного, отличающийся тем, что, с целью повышения производительности за счет увеличения числа одновременно проводимых прогнозов, в пробе крови определяют концентрацию тестостерона и при значении этого показателя 2,4 кг/Mh и более прогнозируют благоприятное течение заболевания, при значении 1,1

5 кгlмл и менее — неблагоприятное, а при значении 1,2-2,3 кгlмл дополнительно определяют содержание простогландина Е и при его значении 340 мг/мл и более и 270 нг/мл и менее прогнозируют неблагоприят10 ное течение заболевания,