Способ получения иммуногенной композиции для перорального введения

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения иммуногенной композиции для перорального введения. Цель - повышение стабильности. Сущность изобретения заключается в смешении иммуногена, способного иммунизировать человека или животных, и желатина 2 со средним мол.м. 80000-120000 и прочностью геля более 150 (Блум, г.б. 2/3%), выращивании и нанесении кишечно-растворимой пленки. 6 з.п. ф-лы.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю А 61 К 9/20

Г СУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

В ДОМСТВО СССР (Г9СПАТЕНТ СССР) ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ПАТЕНТУ (2 (2 (4 (3 (3 (3 (7 (7 су (5

ОО (.л) () с

iC)

IQQ

) 4831416/14

) 28,09:90

) 23.08.93. Бюл. N. 31

) 256472/89

) 29.09.89

)JP

) Дзе Ниссин Ойл Миллз ЛТД (JP)

) Куниаки Нероме. Кунихару Секи и Катико Охиама (J P)

) Заявка JP 502262, А 61 К 9/20, 1987.

I Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается сп соба получения иммуногенной композици для перорального введения.

Цель изобретения заключается в создани препарата для перорального введения, по воляющего перорально вводить иммуноген нс преодолением в результате различных пр блем, присущих препаратам для инъекци, но без снижения активности иммуногена

В соответствии с настоящим изобретени м получают стабильную композицию имму огена для перорального введения, пр дставляющая собой высушенную сфериче кую форму. содержащую иммуноген, сп собный иммунизировать человека или животных, и желатин среднего молекулярно о веса 80000-120000 и прочностью геля

„„Я „„1836081 АЗ (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ КОМПОЗИЦИИДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО

ВВЕДЕНИЯ (57) Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения иммуногенной композиции для перорального введения. Цель — повышение стабильности. Сущность изобретения заключается в смешении иммуногена, способного иммунизировать человека или животных, и желатина 2 со средним мол.м. 80000 — 120000 и и рочностью геля более 150 (Блум, г.б, 2/3%), выращивании и нанесении кишечно-растворимой пленки, 6 з.п. ф-лы. более 150 (Блуум, г.6,2/3%). и такая форма является тонкокишечной.

В настоящем изобретении термин "иммуноген". способный иммунизировать человека или животных), употребляемый выше включает любые иммуногены, которые можно использовать для профилактики инфекционных заболеваний. Примерами их являются дезактивированные вакцины (гриппа, японского энцефалита, коклюша, тройная вакцина, холеры, пневмококка и

1 т.n.), ослабленные живые вакцины (поли- (Д омиелита, кори, краснухи, эпидемического паротита, ВСС, тифа. натуральной оспы и т,п.). токсоиды (дифтерии, столбняка, антоксин тримерезурус, тифа, бутолин и т,п.) и компонентные вакцины (гримма НА, гепатита В, гепатита. отличного от А и В, герпеса и т.п.), 1836081

Известен метод стабилизации живой вакцины полиомиелита сушкой вымораживанием, но нами найдено, что такая лиофилизованная сушкой вымораживанием вакцина непригодна в качестве исходного материала в настоящем изобретении.

Необходимо, чтобы желатин, входящий в состав композиции изобретения, имел средний молекулярный вес 80000-120000 и прочность геля выше 150 (Блум, г„6.2/3).

Даже если средний молекулярный вес желатина находится в указанном интервале, прочность геля менее 150 не может обеспечить композиции необходимой стабильно-сти. Максимальная прочность геля применяемого желатина примерно 340, а . рекомендуемая прочность составляет примерно 300. Исходные продукты для желатина не ограничены при условии удовлетворения вышеуказанных условий.

Композиция изобретения может быть получена добавлением желатина к содержащему иммуноген буферному физиологическому солевому раствору, смешиванием при низкой температуре (к примеру 0-10 С. предпочтительно 4-5 С) и нагреванием (например, ниже 50 С, предпочтительно ниже

40 С) с образованием золя. Композицию в виде золя прикапывают к физиологически неядовитой жидкости, которая не смешивается с оодой и удельный вес которой ниже, чем у воды (например: касторовому маслу, камелиеоому маслу, соевому маслу., жидкому парафину и т.п.) с превращением в результате в эластичную сферическую форму.

B этом случае рекомендуется, чтобы золь был нагрет, а вышеуказанная жидкость была нагрета в своей верхней части и охлаждена в нижней части (например, до 0-10 С), Полученную в результате эластичную . сферическую форму постепенно сушат при атмосферном давлении и низкой температуре (например, при 0-10ОС) предпочтительно

4-5 С) с образованием твердой сферической формы, Диаметр твердой сферической формы не ограничен конкретными значениями, но предпочтительно составляет 0,5 — 2 мм. Содержание воды в сферической форме предпочтительно менее 30, более предпочтительно 20-10 .

Полученная в результате сферическая форма может быть непосредственно покрыта с поверхности тонкомышечным кроющим средством, соответственно подобранным из применяемых в данной области. Рехо-. мендуемые примеры тонкокишечных кроющих средств включают; сополимер метакриловой кислоты, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, карбоксиметилэтилцеллюлоэу, ацетатфтэлат целлюлозы, очищенный шеллак, белый шеллак, этилцеллюлозу или аминоалкил-метакрилатный сополимер.

Покрытие может быть нанесено методом нанесения пленочного покрытия с помощью машины для нанесения покрытия в потоке или центрифужного транулятора.

Полученную в результате тонкокишечную сферическую форму применяют в качестве препарата для перорального введения.

Вместо вышеописанной методики к сферической форме (беэ тонкокишечного floKpbtтия) могут быть добавлены фармацевтически приемлемые наполните5

10 ли или разбавители, связующие средства и т,п. с образованием таблеток, которые затем могут быть покрыты тонкокишечным дуется использовать мурамилпептидное производное (описанное, .например, в от45 крыто отложенной заявке на Европейский патент N . 0316934А2) или аналог липида-А, Добавление вспомогательного вещества усиливает эффективность композиции и уменьшает колебания в ее действии, зависящие от индивидуальных отличий.

При пероральном введении композиции изобретения в кишечные происходит растворение тонкокишечного покрытия и затем желатина с выделением в кишечных иммуногена. который затем абсорбируется из прямокишечного канала. Можно предположить, что иммунизация происходит в пейеровых бляшках. находящихся в прямокишечном канале.

55 кроющим средством. Или же вышеописанная сферическая форма может быть поме20 щена в тонкокишечную капсулу с получением капсулированного препарата.

При изготовлении сферической формы изобретения необходимо использовать небольшое количество иммуногена по сравнению с применяемым желатином. Количество иммуногена зависит от типа используемого

° иммуногена. но, как правило, предпочтительно составляет 1 50-1/100000000 относительно 1 части по массе желатина. При

30 использовании описанного метода может быть гарантирована стабильность иммуногена, Предполо>кительно это можно объяснить тем, что иммуноген заключен в желатин в своей фиксированной конфигурации (в особенности конфигурации антигенной детерминанты, существующей в вирусе, микроорганизме или мертвом микроорганизме) и без химического связывания. Подтверждено, что иммуноген не образует

40 юньгатов с желатином.

Композиция изобретения может содержать вспомогательное вещество. Рекомен1836081 ют коньюгатд

30

Количество вводимой перорально комозиции в сильной степени зависит от вида: рименяемого иммуногена. К примеру, в лучае гриппа обычно перорально вводят

Π— 20000 АКЧ (число агглютинации эритроитов по Чичу) для взрослого человека за дин прием и, возможно, введение повтоят тем же путем спустя 2-4 недели после ервого приема. В случае гепатита В в перый прием взрослому человеку перорально водят обычно 0,1-1 мг антигенного белка, торое введение осуществляют через 4 неели и третье введение проводят спустя 204 недели после первого введения. Таким бразом, введение проводят трижды. В слуае японского энцефалита младенцу старше месяцев перорально вводят дважды 1000. мкг антигенного белка с интервалом в

-2 недели.

Изобретение иллюстрируется следуюими примерами.

Пример 1. (1) Получение высушенной сферической формы

Порошок желатина (20 г прочность геля

300 (Блуум, г.,6,2/3%), средний молекуля рый вес около 100000. N1PP1 Ко., Лтд), доавляют к вакцине гриппа НА (80 мл, 200 кгlмл на белок, НА способность — 14000) и мешивают при 4 С. Для обрвзования золя месь нагревают до 40 С с перемешиваним. В то же время в калиброванный цилиндр а 1000 мл наливают 1000 мл соевого асла, верхнюю часть цилиндра (10 см от . ровня жидкости) нагревакЮ до 40-50ОС, а . его нижнюю часть (50 см îtÐÄíà) охлаждают о 4 С. С помощью шгЦУйца на 20 мл и диа етром 2 мм смесь в виде золя, нагретую до

О С, прикапывают к заполняющему градурованный цилиндр соевому маслу, после его оставляют на 30 мин. Полученные в езультате сферические формы переносят з градуированного цилиндра в химический такан и отмывают от соевого масла охлажденным ацетом. Далее сферические формы

I промывают 5000 мл холодной воды. повта;ряя операцию раз десять, и, наконец, промывают 1000 мл водного спирта (60%).

Полученные желатинизированные сфериче) ские формы сушат 4-5 дней при 4 С в бане

-с регулируемой температурой и получают высушенные сферические формы диаметром 0.5-2 мм и содержанием воды 15% относительно желатинизированной сферической формы. (2). Злектрофорез

Проведением электрофореза на НДСполиакриламидном геле относительно вышеохарактеризованного желатина, антигена гриппа НА и высушенной сферической формы до нанесения на ее пленочного покрытия подтверждено, что желатин дает размытое пятно, антиген гриппа НА дает единственное пятно и высушенная сферическая форма дает два пятна, расположенные в местах, соответствующих пятнам желатина и антигена гриппа НА.

На основании этого сделан вывод о том, что желатин и антиген гриппа HA не образу(3) Тонкокишечное покрытие.

На высушенные сферические формы затем наносят тонкокишечное пленочное покрытие, состав которого приведен в табл.1.

Па методике примера 1 применением вакцины гепатита В, вакцины японского энцефалита, вакцины коклюша, вакцины гепатита (отличного от А и В) и дезактивированной вакцины гриппа в концентрациях. указанных в табл.2, получены соответственно высушенные сферические формы и высушенные сферические формы с пленочным покрытием.

Пример ы 7-10. По методике примера

1 использованием вакцины гриппа НА и желатина (средний молекулярный вес около

100000) с различной прочностью геля получены высушенные сферичеСкие формы, Каждую высушенную сферическую форму (0,1 г) растворяют в 5 мл фосфатного буфера, содержащего коллагеназу, и проводят НА (гемагглутинин) тест в присутствии эритроцитов цыплят с определением антигенной способности формы.

Результаты испытаний приведены в табл.3, согласно которой любая сферическая форма, полученная использованием желатина с прочностью геля более 150, обладает достаточной НА способностью, Пример 11. Вместо высушенной сферической формы с содержанием воды в

15% относительно желатинизированной сферической формы получены сферические формы с содержанием воды соответственно

30%, 40% и 50Я, относительно желатиниэированной сферической формы.

После выдерживания каждой сферической формы в течение 20 дней при 40 С осуществлен НА-тест. Соответственно для содер>кащей 30% воды сферической формы ее НА-способность составляет 106,7. в то время как НА-способность высушенной сферической формы примера составляет

128, Напротив. высушенные сферические формы с содержанием воды в 40% и 50% проявляют НА-способность. соответственно составляющую 64 и 42,7, что оказывается неприемлемым.

1836081

Пример 12, По методике примера 1 получена высушенная сферическая форма, содержащая вакцину гриппа НА, но с добавлением в качестве вспомогательного вещества в концентрвции 100 мкг/мл 5 мурамилпептида, Проведенный для полученной высушенной сферической формы НА-тест дает значение НА-способности в 106,7. Полученный 10 результат не показывает заметного уменьшения НА-способности (см. пример 10);

Испытания на стабильность.

Проведено определение сохранения

-антиген ной способности в ходе выдержива- 15 ния при 40 С высушенных сферических форм (перед нанесением на них пленочного покрытия), полученных в примерах 1-6. Для сравнения определяют сохранение антигенной способности для каждой из вакцин, 20 использованных в качестве исходных проуктов при получении соответствующих выушенных сферических форм. Антиген стабилен в любой из высушенных сферических форм примеров 1-6. 25

Испытание иммунности.

На высушенные сферические формы примеров 1, 2, 6 и 12 наносят пленочное покрытие, после чего выдерживают 20 дней при 40 С. затем соответствующими высу- 30 шенными сферическими формами и затем у них раз в неделю отбирать кровь. Методом ферментного иммуносорбентного анализа в каждом образце сыворотки собранной крови определяют антитела к 10 M. В сравни- 35 тельных целях применяют те. же вакцины, что и для получения соответствующих высушенных сферических форм.

Пример 13, Тонкокишечное покрытие. 40

На сферическую >орму изобретения в количестве 157 относительно сферической формы наносят тонкокишечную пленку следующего состава;

Ацетат — сукци- 45 нат гидроксипропилметил целлюлозы 2,5 части по магсе

Шелла к 0,5 части по массе

Тальк 0,3 части по массе 50

Глицериновый эфир жирной кислоты 0.3 части по массе

Этан ол 25 частей по массе

Дихлорэтан Дополняющее кол-во 55

Итого 100 частей. по массе

Пример 14. На вь>сушенну>о сферическую форму изобретения в количестве

10; относител ь но высушен ной сфе рической формы наносят тонкокишечное кроющее средство следующего состава:

Фталат гидроксипропилметилцеллюлозы. 5 частей по массе

Глицериновый эфир жирной кислоты 0,5 части помассе

Шеллак .О;5 части по массе

Этанол 45 частей по:массе . Дихлорэтан Дополняющее кол-во

Всего 100 частей, по массе

Затем на высушенную сферическуЮ форму с покрытием в количестве 10 относительно высушенной сферической формы наносят пленку следующего состава:

Ацетат-сук цинат гидроксипропилметилцеллюлозы 2,5 части по массе

Шеллак 0 5 части по массе

Тальк 0,3 части по массе

Глицериновый эфир жирной кислоты 0,3 части по массе

Этанол 25 части по массе

Дихлорэтан Дополня>ощее кол-во

Всего 100 частей по массе, Пример 15.

Прессуют следующие компоненты:

Высушенная сферическая форма " 20 частей по >ассе

Лактоза 70 частей по массе

Крахмал Дополняющее кол-во

Стеарат магния 0,5 части по массе

Всего 100 частей по массе.

Затем на полученные таблетки в количестве 57ь относительно таблетки наносят тонкокишечную пленку состава, приведенного в примере 1, Формула изобретения

1. Способ получения иммуногенной композиции для перорального введения путем нанесения иммуногена на носитель, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения стабильности, добавляют желатин со средней мол.м, 80000 — 120000 и прочностью геля более 150 (Блум, г.б. 2/3 ) к содержащему иммуноген буферному физиологическому солевому раствору; смешивают ком>>оненты при низкой температуре, нагревают смесь с образованием золя, переносят золь в несовместимую с водой физиологически нетоксичную жидкость, высушивают полученную эластичную форму при низкой температуре с образованием твердой сферической формы и затем наносят кишечно-растворимую пленку, 2. Способ по п.1, о т л и ч а ю щ ай с я тем, что низкая температура при смешении

1836081

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3 компонентов при высушивании эластичной сферической формы находится в интервале

0 -10 С.

3. Способ по п.1, отличающийся .т м, что. нагревание смеси проводят при т мпературе ниже 50 С.

4. Способ по п.1, отличающийся т м, что физиологически нетоксичная жидк сть является касторовым маслом, камелие ым маслом, соевым маслом или жидким парафином.

3 !

5. Способ по и 1, отличающийся тем, что количество используемого иммуногена составляет (50-100000000) по отношению к массе желатина.

5 6.Способпоп1,отличающийся тем, что иммуноген направлен против гриппа, японского энцефалита, гепатита В, коклюша или гепатитов не А и не В.

7. Способ по п.1, отличающийся

10 тем, что композиция содержит адъювант, способный усиливать иммуногенные свойства иммуногена.