Способ количественного определения полисахаридов в траве видов рода фиалка



 


Владельцы патента RU 2480746:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтическому анализу лекарственного растительного сырья, и описывает способ количественного определения полисахаридов в траве видов рода фиалка, включающий измельчение сырья, водную экстракцию полисахаридного комплекса при нагревании, внесение реагента, фильтрацию и определение содержания полисахаридов по формуле, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют траву фиалки одноцветковой, водную экстракцию проводят в течение 1 часа при соотношении сырье:экстрагент, как 1:50, экстракт фильтруют и к фильтрату, в соотношении 1:1, добавляют 8%-ную хлористоводородную кислоту, выдерживают в течение 2-х часов на кипящей водяной бане, после чего охлаждают и нейтрализуют до pH=6,5-7,0, затем добавляют 1%-ный раствор пикриновой кислоты и 20%-ный раствор карбоната натрия, взятые в соотношении 1:3, полученную смесь выдерживают на водяной бане в течение 30 минут, после чего фильтруют и фильтрат спектрофотометрируют в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при длине волны λ=460±2 нм, а определение количественного содержания полисахаридов проводят в пересчете на глюкозу по формуле. Способ позволяет оценить качество лекарственного растительного сырья за счет точного количественного определения полисахаридов, содержащихся в траве видов рода фиалка. 2 табл., 1 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к фармацевтическому анализу лекарственного растительного сырья.

В настоящее время все большее внимание в лечении и профилактике различных заболеваний уделяют препаратам растительного происхождения. Эффективность применения фитопрепаратов обусловлена комплексом биологически активных веществ, оказывающих терапевтическое действие при минимальной токсичности для организма человека.

Известны различные способы количественного определения полисаридов, содержащихся в растительном сырье.

Так известен способ качественной и количественной оценки содержания полисахаридов в растительном сырье, заключающийся в осаждении этой группы природных соединений из водных извлечений трехкратным объемом спирта этилового 95%-ного (Государственная фармакопея XI издание, т.2 (ФС 20. Листья подорожника большого, стр.264-266).

К недостаткам данного способа, несмотря на его универсальность, следует отнести низкую специфичность и низкую точность, обусловленную соосаждением сопутствующих веществ (белков) (М.Ю.Сафонова. Спектрофотометрический метод определения…. Растительные ресурсы. - 1999. - С.101-105).

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ количественной оценки полисахаридов, содержащихся в траве растений рода фиалка (Бубенчиков Р.А. Фитохимическое и фармакологическое изучение растений рода фиалка. Автореф. дисс. к.м.н.; Изд. Купавна, Курск, 2002, с.8-11).

Известный способ осуществляют следующим образом. Из шрота растительного сырья травы рода фиалка (фиалка трехцветная, фиалка полевая, фиалка душистая) водорастворимые полисахаридные комплексы экстрагируют горячей водой при нагревании, осаждают трехкратным количеством этилового спирта, отфильтровывают, промывают органическими растворителями, высушивают.

Оптимальными условиями для извлечения и осаждения полисахаридов являются: степень измельчения сырья - 2 мм, экстрагент - вода, нагревание в течение 30 минут, трехкратная экстракция этанолом, соотношение сырья и экстрагента 1:10, 4-кратное количество 95%-ного этанола по отношению к извлечению.

Количественное определение суммы полисахаридов проводят гравиметрическим методом.

Фильтр с осадком высушивают сначала на воздухе, а затем до постоянной массы при температуре 100-105°С.Содержание полисахаридов в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где m1 - масса фильтра, в граммах;

m2 - масса фильтра с осадком, в граммах;

m - масса сырья, в граммах;

W - потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.

Выход полисахаридов составил: из травы фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой 10,0%, 5,8%, 10,5% соответственно, а из корней фиалки душистой - 10,2% от массы сухого сырья.

К недостаткам известного способа, как и аналогичного, следует отнести низкую точность и специфичность, что связано с соосаждением сопутствующих соединений (белков).

Задачей заявленного технического решения является количественное определение полисахаридного комплекса в траве видов рода фиалка.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение точности количественного определения группы полисахаридов в траве фиалки, за счет исключения влияния сопутствующих веществ, а также расширение арсенала растительного сырья для получения полисахаридов.

Технический результат достигается тем, что способ количественного определения полисахаридов в траве фиалки включает измельчение сырья, экстракцию полисахаридного комплекса из сырья горячей водой, внесение реагента, фильтрацию и определение содержания полисахаридов по формуле.

Отличия предлагаемого способа заключаются в том, что:

- в качестве растительного сырья используют траву фиалки одноцветковой;

- водную экстракцию на кипящей водяной бане проводят в течение 1 часа, при соотношении сырье:экстрагент, как 1:50;

- экстракт фильтруют и к фильтрату, в соотношении 1:1, добавляют 8%-ную хлористоводородную кислоту;

- смесь выдерживают в течение 2-х часов на кипящей водяной бане, после чего охлаждают и нейтрализуют до pH=6,5-7,0;

- затем добавляют 1%-ный раствор пикриновой кислоты и 20%-ный раствор карбоната натрия, взятые в соотношении 1:3;

- полученную смесь выдерживают на водяной бане в течение 30 минут, после чего фильтруют;

- фильтрат спектрофотометрируют в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при длине волны λ=460±2 нм;

- определение количественного содержания полисахаридов проводят в пересчете на глюкозу по формуле:

где: X - содержание полисахаридов в пересчете на глюкозу, в %;

D - оптическая плотность испытуемого раствора;

D0 - оптическая плотность Государственного стандартного образца глюкозы;

m - масса сырья в граммах;

m0 - масса Государственного стандартного образца глюкозы;

W - потеря в массе при высушивании сырья, в %.

Проведенный сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемый способ отличается от известного вышеперечисленными приемами и, следовательно, соответствует критерию изобретения «новизна».

Из проведенного анализа патентной и специальной литературы установлено, что предлагаемый способ имеет признаки, отличающие его не только от прототипа, но и других технических решений в данной и смежных областях фармацевтического анализа лекарственного растительного сырья.

В доступной литературе авторами предлагаемого технического решения не выявлено способа количественного определения полисахаридов в траве фиалки вышеприведенными приемами.

Предлагаемый способ предусматривает экстракцию полисахаридного комплекса и свободных сахаров из сырья, гидролиза и образования окрашенного комплекса продуктов гидролиза (моносахаридов) с пикриновой кислотой в щелочной среде и последующим измерением его оптической плотности.

При изучении спектра поглощения комплекса моносахаридов фиалки авторами заявляемого способа установлено, что окрашенный комплекс имеет максимум поглощения при длине волны 460±2 нм. Аналогичный максимум поглощения имеет комплекс глюкозы с пикриновой кислотой. Поэтому определение суммы моносахаридов после гидролиза полисахаридов проводят в пересчете на глюкозу.

Исследования авторов заявляемого способа свидетельствуют о том, что использование предлагаемого технического решения позволяет повысить точность количественного определения комплекса полисахаридов. Так, количественное содержание комплекса полисахаридов в траве фиалки одноцветковой, определенное по способу-прототипу составило 12,01±5,1%, а по заявляемому способу - 9,25±3,84%. Полученные результаты подтверждают точность предлагаемого способа, достигаемую за счет исключения влияния сопутствующих веществ водного экстракта.

Предлагаемый способ также позволяет расширить арсенал лекарственных средств растительного происхождения для получения полисахаридов, а также фитопрепаратов из них.

Изложенное позволяет сделать вывод о соответствии техническому критерию «изобретательский уровень».

Способ, составляющий заявляемое изобретение, предназначен для использования в медицине, а именно в фармацевтическом анализе лекарственного растительного сырья, который применяют при оценке качества и состава травы видов рода фиалка. Возможность его осуществления подтверждена описанными в заявке примерами и, следовательно, предлагаемое решение соответствует критерию изобретения «промышленная применимость».

Сущность предложенного способа поясняется примером конкретного выполнения.

Аналитическую пробу сырья травы фиалки одноцветковой измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм.

Точную навеску (около 1 г) измельченного сырья фиалки одноцветковой помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды, закрывают пробкой и взвешивают с погрешностью ±0,01 г. Колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа. После чего колбу охлаждают и массу колбы доводят водой до первоначальной.

Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (белая лента, под вакуумом), затем 20 мл фильтрата помешают в коническую колбу вместимостью 100 мл и прибавляют 20 мл кислоты хлористоводородной 8%-ной. Колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают на кипящей водяной бане 2 часа. Затем раствор охлаждают до комнатной температуры и с помощью pH-метра доводят pH до нейтральной (6,5-7,0). Раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают. Полученный раствор фильтруют через бумажный складчатый фильтр (белая лента).

В две мерные колбы вместимостью 25 мл помещают по 1 мл 1%-ного раствора пикриновой кислоты и 3 мл 20%-ного раствора карбоната натрия. Затем в одну прибавляют 1 мл фильтрата (исследуемый раствор), а в другую 1 мл воды (раствор сравнения). Содержимое колб перемешивают и помещают на водяную баню на 30 мин, после чего колбы охлаждают, объем растворов доводят водой до метки, перемешивают.

Оптическую плотность испытуемого раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 460 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см.

Параллельно измеряют оптическую плотность комплекса глюкозы с пикриновой кислотой в щелочной среде.

Для приготовления раствора Государственного стандартного образца (ГСО) глюкозы берут 0,1500 г (точная навеска) глюкозы, которую помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл и доводят объем раствора до метки, перемешивают. 1 мл раствора содержит 0,0006 г глюкозы. Затем 1 мл раствора глюкозы помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл пикриновой кислоты и 3 мл 20%-ного раствора карбоната натрия, перемешивают и нагревают на кипящей водяной бане 1 час. Раствор охлаждают, после чего объем раствора доводят водой до метки, перемешивают.

Содержание суммы моносахаров после гидролиза полисахаридов в пересчете на глюкозу и абсолютно сухое сырье рассчитывают по формуле

где X - содержание полисахаридов в %, в пересчете на глюкозу;

D - оптическая плотность испытуемого раствора;

D0 - оптическая плотность Государственного стандартного образца (ГСО) глюкозы;

m - масса сырья в граммах;

m0 - масса ГСО (Государственный стандартный образец);

W - потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.

В представленном примере установлено содержание полисахаридов (в пересчете на глюкозу) в траве фиалки одноцветковой 9,25%.

Метрологические характеристики предлагаемого способа представлены в таблице 1 и свидетельствуют об его воспроизводимости с относительной ошибкой ±3,84%.

Таблица 1
n f S2 S точность P, % t(f, P) ΔX Ошибка в % E, %
6 5 9,25 0,0069 0,0831 95 2,78 0,355 ±3,84

где n - число степеней свободы (число определений=6);

f=n-1;

x - среднее показание;

S2- дисперсия (квадратичное отклонение);

S - отклонение;

t - граница вероятности;

ΔX - разность среднего и всех вариантов;

E - относительная ошибка, %.

Для доказательства работоспособности предложенного способа проведены исследования с добавками глюкозы (таблица 2).

Таблица 2
Найдено суммы моносахаров после гидролиза полисахаридов в сырье, г Добавлено глюкозы Должно быть, г Найдено, г Ошибка
Абсолютная (г) Относительная (%)
0,0925 0,0018 0,0943 0,0950 +0,0007 +0,74
0,0925 0,0036 0,0961 0,0953 -0,0008 -0,83
0,0925 0,0048 0,0973 0,0985 +0,0012 +1,23

Относительная ошибка опытов с добавками глюкозы находится в пределах случайной ошибки предложенного способа, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки.

Таким образом, заявляемый способ позволяет повысить точность количественного определения полисахаридов, содержащихся в траве фиалки одноцветковой и, тем самым, дает возможность оценить качество лекарственного растительного сырья.

Предлагаемый способ также позволяет расширить арсенал растительного сырья для получения полисахаридов.

Способ не сложен в исполнении, для его осуществления не требуется дорогостоящего оборудования.

Способ количественного определения полисахаридов в траве видов рода фиалка, включающий измельчение сырья, водную экстракцию полисахаридного комплекса при нагревании, внесение реагента, фильтрацию и определение содержания полисахаридов по формуле, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют траву фиалки одноцветковой, водную экстракцию проводят в течение 1 ч, при соотношении сырье:экстрагент, как 1:50, экстракт фильтруют и к фильтрату в соотношении 1:1 добавляют 8%-ную хлористоводородную кислоту, выдерживают в течение 2-х ч на кипящей водяной бане, после чего охлаждают и нейтрализуют до pH=6,5-7,0, затем добавляют 1%-ный раствор пикриновой кислоты и 20%-ный раствор карбоната натрия, взятые в соотношении 1:3, полученную смесь выдерживают на водяной бане в течение 30 мин, после чего фильтруют и фильтрат спектрофотометрируют в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при длине волны λ=460±2 нм, а определение количественного содержания полисахаридов проводят в пересчете на глюкозу по формуле:
,
где X - содержание полисахаридов в пересчете на глюкозу, %;
D - оптическая плотность испытуемого раствора;
D0 - оптическая плотность Государственного стандартного образца глюкозы;
m - масса сырья в граммах;
m0 - масса Государственного стандартного образца глюкозы;
W - потеря в массе при высушивании сырья, %.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к химическим способам анализа, в частности к определению производных нитрофурана, пиразола, изоникотиновой кислоты, тиоаминокислот в лекарственных формах.

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения содержания озона в озонированной перфторуглеродной эмульсии путем фотометрического измерения количества йода, выделяющегося в результате воздействия озона озонированной эмульсии на раствор йодистого калия с крахмалом, где перед проведением определения предварительно готовят реакционный раствор, содержащий йодистый калий и крахмал, из которого приготовляются подготовительный анализируемый и подготовительные калибровочные растворы, содержащие одинаковое количество йодистого калия и крахмала; к подготовительному анализируемому раствору приливается определенный объем озонированного перфторана, а к подготовительным калибровочным растворам последовательно добавляются такой же объем неозонированного перфторана и титрованный раствор йода в йодистом калии в количестве, необходимом для построения калибровочного графика; приготовленные растворы оставляют стоять в защищенном от света месте при температуре 20°С; растворы фотометрируют на фотоколориметре или спектрофотометре на длине волны 610 нм, следя за ходом изменения оптической плотности во времени до момента совпадения хода кривых калибровочных и исследуемого растворов; строят калибровочный график и вычисляют содержание озона в анализируемой эмульсии.
Изобретение относится к хроматографическому анализу различных химических соединений и может быть использовано в медицине, биологии, экологии и, в особенности, при допинговом контроле.

Изобретение относится к медицине и описывает способ получения тест-объекта для оценки цитотоксичности лекарственных средств, включающий использование роговицы эмбриональных цыплят и клеточной технологии, причем выделяют роговицу эмбрионов цыплят 7-14 дней гестации, которую измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С, при оценке цитотоксичности лекарственных средств замороженный материал подвергают медленной разморозке, переносят в центрифужную пробирку и трехкратно отмывают в растворе NaCl 0,9%, а затем измельчают клеточные элементы до получения гомогенной клеточной суспензии, осаждают строму в центрифуге, надосадок, содержащий клетки роговицы, переносят в стерильную пробирку и вновь осаждают клетки, супернатант удаляют, а к осадку, содержащему роговичные клетки, добавляют 1 мл раствора NaCl 0,9% и ресуспендируют, в полученной суспензии считают цитоз и определяют жизнеспособность клеток по окрашиванию их ДНК-флуорохромами на проточном цитофлюориметре, затем раствором NaCl 0,9% суспензию клеток роговицы доводят до концентрации 5,0·105 клеток в 1 мл и переносят в культуральные флаконы и добавляют исследуемые препараты, для контроля в один из флаконов добавляют NaCl 0,9%, дальнейшую инкубацию проводят в культуральных флаконах в СO2 инкубаторе в течение суток, далее суспензии клеток переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют для осаждения клеток и отбирают по 1 мл суспензии каждого опыта для исследования цитотоксичности по окрашиванию клеток ДНК-флуорохромами, цитотоксичность исследуемых веществ оценивают на проточном цитофлюориметре.

Изобретение относится к аналитической химии применительно к экспресс-анализу лекарственных препаратов, преимущественно для обнаружения и количественного определения активнодействующего вещества.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в контрольно-аналитических, клинических лабораториях для определения концентрации цефалоспориновых антибиотиков.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к исследованию рецептору, сопряженному с G-белком, и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к фармацевтической химии и может быть использовано для количественного определения антиоксиданта коэнзима Q10 в субстанции. .

Изобретение относится к диагностике, в частности к способу количественного определения цефалоспориновых антибиотиков в жидкости ротовой полости и в цельной крови.

Изобретение относится к аналитической химии и описывает способ кондуктометрического количественного определения гидрохлоридов 5-аминолевулиновой (5-амино-4-оксопентановой) кислоты или ее сложных эфиров, включающий подготовку проб анализируемого вещества, измерение удельной электропроводности растворов, титрование, построение кондуктометрической кривой, определение эквивалентных точек и расчет содержания основного вещества, при этом титрование образцов гидрохлоридов 5-аминолевулиновой кислоты или ее сложных эфиров осуществляют титрованием раствором нитрата серебра, а расчет содержания основного вещества в гидрохлоридах 5-аминолевулиновой кислоты или ее сложных эфиров проводят по формуле.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам обнаружения биологически активного соединения - лизина, в сложных смесях

Изобретение относится к аналитической химии, к области фармации и может быть использовано для количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственных препаратах

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для фотоэлектроколориметрического определения сульфаниламидных препаратов - стрептоцида, сульфадимезина, этазола, сульфалена, фталазола, сульфатиазола, сульфадиметоксина, сульфамонометоксина в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях
Изобретение относится к медицине, в частности к фармакогнозии и фармации, конкретно к способу определения содержания кальция в жидких экстрактах из растительного сырья

Изобретение относится к области медицины и описывает способ определения содержания воды в таблеточной массе при промышленном производстве таблеток путем кулонометрического титрования, где в основе лежит взаимодействие воды, содержащейся в исследуемом образце, с кулонометрическим титрантом - электрогенерированным йодом, который образуется при электролизе органического или неорганического йодида (например, СН3I или KI), входящего в состав фонового электролита при постоянной силе тока 50 мА в течение времени, определяемого биопотенциометрически по достижению конечной точки титрования, содержание воды (X, г) в аликвоте исследуемого образца рассчитывается по формуле, и параллельно проводят определение воды в растворителе и по известным формулам рассчитывают содержание воды в таблеточной массе
Изобретение относится к области аналитической химии и биохимической клинической лабораторной диагностики и может быть использовано для определения содержания аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале

Изобретение относится к аналитической химии и фармацевтике и может быть использовано для извлечения пуриновых алкалоидов из водных сред с целью их последующего определения

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для количественного определения лекарственных веществ - производных бигуанидов: глибутида, метформина, прогуанила ГХ, пиклоксидина и хлоргексидина в субстанциях в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях

Изобретение относится к области биологии, медицины, ветеринарии и может быть использовано для проведения исследования биологической активности веществ в биологии, медицине и ветеринарии
Наверх