Средство для лечения заболеваний с реакциями гиперчувствительности замедленного типа в патогенетическом процессе


 


Владельцы патента RU 2487719:

Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)

Изобретение относится к области медицины и фармацевтической промышленности. Средство для лечения заболеваний с реакциями гиперчувствительности замедленного типа в патогенетическом процессе представляет собой легко проникающий через биологические мембраны мылкий амфифильный комплекс высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae с олеиновой кислотой при следующем соотношении компонентов: высокополимерная РНК - 80-90%, олеиновая кислота - 10-20%. Предлагаемое рыночное название - Виталанг-2. Средство оказывает разнонаправленное влияние на гуморальный и клеточный иммунный ответ: стимулирует антителообразование (Th2 ответ) и подавляет Th1 ответ. Перспективно для апробирования при лечении заболеваний с реакциями ГЗТ в патогенетическом процессе (туберкулез, проказа, шистосомоз, саркоидоз и болезнь Крона). Терапевтическая доза - 50 мг/кг массы тела животного или человека. Изобретение обеспечивает создание эффективного препарата для лечения заболеваний с реакциями гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) в патогенетическом процессе с использованием доступных и недорогих компонентов. 1 пр., 3 табл.

 

Изобретение относится к области медицины и фармацевтической промышленности, в частности к препаратам на основе дрожжевой РНК, влияющих либо на гуморальный (Th2), либо на клеточный (Th1) иммунный ответ.

По традиционным представлениям иммуноактивные соединения разделяются на иммуностимуляторы и иммунодепрессоры. Однако современные знания о патогенезе многих заболеваний, связанных с нарушением межклональных взаимоотношений за счет расстройства Th1/Th2 регуляторных влияний и баланса соответствующих цитокинов, выдвигают требования к поиску препаратов, проявляющих при первичном скрининге in vivo на интактных животных, разнонаправленное влияние на интегральные показатели - антителообразование и реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) или оказывающие влияние либо только на Th2, либо только на Th1 иммунитет.

В клинической практике для лечения заболеваний с реакциями ГЗТ в патогенетическом процессе (туберкулез, проказа, шистосомоз, саркоидоз и болезнь Крона) особенно ценны препараты, стимулирующие Th2 и одновременно подавляющие Th1 иммунный ответ.

Однако лечебных препаратов с такими свойствами практически нет.

Целью настоящего изобретения является создание эффективного препарата для лечения заболеваний с реакциями ГЗТ в патогенетическом процессе с использованием доступных и недорогих компонентов.

Цель достигается тем, что в качестве такого препарата используется легко проникающий через биологические мембраны мылкий амфифильный комплекс высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae с олеиновой кислотой при следующем соотношении компонентов: высокополимерная РНК - 80-90%, олеиновая кислота - 10-20% (предлагаемое рыночное название - Виталанг-2).

Пример осуществления предлагаемого способа

Животные

В работе использовали здоровых половозрелых животных - мышей гибридов CBF1 обоего пола, 10-12 недельного возраста, массой тела 22-23 г, полученных из экспериментально-биологической клиники лабораторных животных СО РАМН (Новосибирск). До и в период эксперимента контрольные и опытные животные содержались в виварии в одинаковых условиях: стандартных пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой (не более 10 особей) на стандартном рационе, в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [1]. Все исследования проводили в одно и то же время суток (утром).

Препарат Виталанг-2

Виталанг-2 получали по способу [2], стерилизовали по методу [3], растворяли в день проведения эксперимента в воде для инъекций, встряхивая суспензию 15-30 мин до полного растворения РНК.

Оценку иммуноактивных свойств Виталанга-2 проводили в соответствии с методическими материалами [4] и методическими рекомендациями [5].

Выделение органов, тканей и клеток выполняли по стандартным методикам [6].

Гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана (ЭБ) (число IgM- и IgG-антителообразующих клеток (АОК) в селезенке) оценивали на пике ответа, свойственного данному генотипу, по количеству локальных зон гемолиза после внутривенного введения 2·108 ЭБ [7-9]. Все процедуры с клетками проводили на льду.

Для определения числа IgM-AOK инкубационную смесь, состоящую из клеток селезенки, ЭБ и комплемента, помещали в стеклянные камеры и инкубировали 1,5 ч при 37°C. Виталанг-2 в различных дозах в объеме 0,5 мл вводили внутрибрюшинно один раз в сутки ежедневно в течение 5 дней. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили растворитель препарата (воду). В день последнего введения препарата животных иммунизировали внутривенно ЭБ в дозе (4·108/мл). Количество IgM-AOK в селезенке мышей оценивали на 4-е сутки после иммунизации по количеству зон локального гемолиза в полужидкой среде модифицированным методом [9]. Результаты выражали в абсолютном количестве IgM-AOK в селезенке.

Для определения числа IgG-AOK добавляли антисыворотку против IgG мыши и инкубировали в термостате 2 ч. Зоны гемолиза подсчитывали под бинокулярной лупой (увеличение - ×42). Виталанг-2 в различных дозах в объеме 0,5 мл вводили внутрибрюшинно один раз в сутки ежедневно в течение 5 дней. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили растворитель препарата (воду). В день последнего введения препарата проводили первичную иммунизацию 0,1% ЭБ в объеме 0,5 мл внутривенно. Количество IgG-AOK в селезенке (первичный иммунный ответ) определяли на 9-е сутки после иммунизации. Для определения количества IgG-AOK в селезенке (вторичный иммунный ответ) через 30 дней после первичной иммунизации проводили вторичную иммунизацию 2% ЭБ внутривенно. Количество IgG-AOK определяли в селезенке на пике иммунного ответа (на 5-е сутки после вторичной иммунизации) методом локального гемолиза [9]. Клетки селезенки инкубировали 2 ч при 39°C в камерах с ЭБ, комплементом морской свинки и кроличьей антисывороткой против мышиного IgG (разведение в 2000 раз). Зоны гемолиза подсчитывали под увеличением - ×42. Результаты выражали в абсолютном количестве IgG-AOK в селезенке.

Клеточный иммунитет оценивали по степени выраженности реакции ГЗТ: измеряли величину отека лапки после введения разрешающей дозы ЭБ сенсибилизированным животным; сенсибилизирующая доза - 2,5·107 ЭБ/мышь внутрибрюшинно, разрешающая доза - 5·108 ЭБ/мышь под подошвенный апоневроз задней лапки на 4 сут, контроль - контралатеральная лапка, в которую вводили среду в том же объеме. Виталанг-2 в различных дозах в объеме 0,5 мл вводили внутрибрюшинно один раз в сутки ежедневно в течение 5 дней. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили растворитель препарата (воду). Для оценки влияния препарата на сенсибилизацию в день последнего введения Виталанга-2 мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением 0,25% ЭБ в объеме 0,5 мл, на 4-е сутки после сенсибилизации вводили разрешающую дозу антигена под подошвенный апоневроз правой задней лапки (50% ЭБ в объеме 50 мкл). В контралатеральную лапку вводили растворитель в том же объеме. Для оценки влияния препарата на эффекторную фазу Виталанг-2 вводили в день проведения сенсибилизации и далее в течение 4-х дней. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили растворитель препарата (воду). Реакцию ГЗТ оценивали по методике локальной ГЗТ [10]. Учет реакции производили через 24 часа после введения разрешающей дозы ЭБ, величину отека оценивали штангенциркулем. Результаты выражали в процентах.

Статистическую обработку данных по числу АОК, имеющему распределение, отличное от нормального, проводили по непараметрическому критерию U Манна-Уитни [11].

Результаты исследований

В табл.1 представлены данные о влиянии препарата Виталанг-2, введенного в индуктивную фазу первичного гуморального иммунного ответа, на количество IgM-AOK в селезенке мышей. Как видно из таблицы, введение Виталанга-2 в индуктивную фазу первичного гуморального иммунного ответа достоверно увеличивает в селезенке количество АОК, синтезирующих IgM антитела. В табл.2 представлены данные о влиянии препарата Виталанг-2, введенного в индуктивную фазу первичного и вторичного гуморального иммунного ответа, на количество IgG-AOK в селезенке мышей. Как видно из таблицы, введение Виталанга-2 в индуктивную фазу иммунного ответа (перед первичной иммунизацией) достоверно стимулирует вторичный гуморальный иммунный ответ.

В табл.3 представлены данные о влиянии препарата Виталанг-2, введенного в индуктивную и эффекторные фазы развития реакции ГЗТ, на выраженность клеточного иммунного ответа. Как видно из таблицы, Виталанг-2 оказывает иммунодепрессивное действие на выраженность клеточного иммунного ответа (дозозависимое подавление эффекторной фазы реакции ГЗТ и выраженное подавление фазы сенсибилизации в дозе 100 и 200 мг/кг).

Оценивая полученные результаты, следует отметить, что препарат Виталанг-2 оказывает разнонаправленное влияние на гуморальный и клеточный иммунный ответ: стимулирует антителообразование (Th2 ответ) и подавляет Th1 ответ. Перспективно проведение испытаний данного препарата для лечения заболеваний с реакциями ГЗТ в патогенетическом процессе (туберкулез, проказа, шистосомоз, саркоидоз и болезнь Крона). Терапевтическая доза - 50 мг/кг массы тела животного или человека.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт №16.512.11.2018 от 11.02.2011).

Источники информации

1. Европейская конвенция по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях. Страсбург, 1986.

2. Патент RU 2403288 C1, 10.11.2010.

3. Патент RU 2397988 C1, 27.08.2010.

4. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств. М., 1984.

5. Методические рекомендации по оценке иммунотоксических свойств фармакологических средств. М., 1992.

6. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П.; Под ред. Новицкого В.В. Методы культуры ткани в гематологии - Томск: Издательство Томского университета, 1992. - 272 с.

7. Jerne N.K., Nordin A.A. Plaque formation in agar by single antibody-producing cells. // Science. - 1963. - Vol.140. - P.405.

8. Sterzl J., Riha I. Detection of cells producing 7S antibodies by the plaque technique. // Nature. - 1965. - V.208. - P.858-859.

9. Cunningham A.J., Szenberg A. Further improvements in the plaque technique for detecting single antibody-forming cells. // Immunol. - 1968. - V.14. - P.599-600.

10. Yoshikai Y., Miake S., Matsumoto T., Nomoto K., Takeya T. Effect of stimulation and blocade of mononuclear phagocyte system on the delayed footpad rection to SRBC in mice. // Immunology. - 1979. - Vol.8. - P.577-583.

11. Гублер E.B. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л., 1978. с.68-91.

Таблица 1
Влияние препарата Виталанг-2 на первичный (IgM-АОК) гуморальный иммунный ответ на Т-зависимый антиген у мышей CBF1 (n=5 в каждой группе)
Группы Число IgM-АОК /селезенку
Контроль 13703
Виталанг-2:
10 мг/кг 14134
50 мг/кг 35723*
100 мг/кг 28989*
200 мг/кг 29762*
*p<0,05 относительно контроля
Таблица 2
Влияние препарата Виталанг-2 на количество IgG-AOK при первичном и вторичном гуморальном иммунном ответе у мышей CBF1 (n=5 в каждой группе)
Группы Число IgG-АОК (первичный ответ)/селезенку Число IgG-АОК (вторичный ответ)/селезенку
Контроль 1924 863535
Виталанг-2:
0,5 мг/кг 1471 813651
50 мг/кг 1237 903383
100 мг/кг 1731 1038565*
200 мг/кг 1934 927254
*p<0,05 относительно контроля
Таблица 3
Влияние препарата Виталанг-2 на клеточный иммунный ответ (реакцию ГЗТ) у мышей CBF1 (n=5 в каждой группе)
Группы Введение препарата до сенсибилизации (%) Введение препарата после сенсибилизации (%)
Контроль 34,4 44.3
Виталанг-2:
10 мг/кг 31,8 -8% 37,8 -15%
50 мг/кг 37,7 +9% 38,2 -14%
100 мг/кг 25,2 -27% 29,8 -33%
200 мг/кг 23,1 -33% 26,7 -40%

Средство для лечения заболеваний с реакциями гиперчувствительности замедленного типа в патогенетическом процессе - легко проникающий через биологические мембраны мылкий амфифильный комплекс высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae с олеиновой кислотой при следующем соотношении компонентов: высокополимерная РНК - 80-90%, олеиновая кислота - 10-20%.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к солям 3-(1Н-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)хиназолин-4-ил]пиррол-2,5-диона в кристаллической форме, где указанные соли образованы с кислотой, выбранной из соляной, малеиновой, малоновой и метансульфоновой.

Изобретение относится к амидному производному, представленному следующей формулой (I), где А представляет собой бензол или пиридин, где бензол и пиридин необязательно содержат 1, или 2, или 3 одинаковых или различных заместителя, выбранные из алкила, содержащего 1-6 атомов углерода, циклоалкила, содержащего 3-6 атомов углерода, алкокси, содержащего 1-6 атомов углерода, атома галогена, нитро, циано, алкилсульфонила, содержащего 1-6 атомов углерода, амино, циклического амина, выбранного из 1,1-ди-оксоизотиазолидинила, 2-оксооксазолидинила, оксопирролидинила, 1,1-диоксотиазинила и 2-оксоимидазолидинила, который необязательно имеет заместитель, выбранный из алкила, содержащего 1-6 атомов углерода, и алкилкарбонила, содержащего полное число атомов углерода 2-7, ациламино, содержащего полное число атомов углерода 2-7, и алкилсульфониламино, содержащего 1-6 атомов углерода, причем правая связь связана с карбонилом и левая связь связана с атомом азота, R1 и R2 одинаковы или различны, и каждый представляет собой атом водорода, алкил, содержащий 1-6 атомов углерода и необязательно содержащий 3 атома галогена в качестве заместителя, циклоалкил, содержащий 3-6 атомов углерода, фенил, атом галогена или цианогруппу и R 1 и R2 одновременно не представляют собой атом водорода, R3 представляет собой атом водорода, алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, алкенил, содержащий 2-6 атомов углерода, циклоалкил, содержащий 3-6 атомов углерода, или галоген, R4a, R4b и R4c каждый независимо представляет собой атом водорода, алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, или оксо, R5a, R5b и R5c одинаковы или различны, и каждый представляет собой атом водорода, алкил, содержащий 1-6 атомов углерода и необязательно содержащий заместитель(и), выбранный из фенила, алкоксигруппы, содержащей 1-6 атомов углерода, необязательно замещенной алкоксигруппой, содержащей 1-6 атомов углерода, фенилкарбонилоксигруппой и гидроксигруппой, или фенил, Х представляет собой атом углерода (любой из R 4a, R4b и R4c может быть связан с атомом углерода, но атом углерода не замещен оксо) или атом азота (если Y представляет собой простую связь, атом азота может быть окислен с образованием N-оксида), Y представляет собой простую связь, карбонил или атом кислорода, Z1 и Z2 каждый независимо представляет собой атом углерода (заместитель R3 необязательно связан с атомом углерода) или атом азота, и m представляет собой 1 или 2, его фармакологически приемлемая соль.
Изобретение относится к применению олигосахарида, выбираемого из группы, состоящей из лакто-N-тетраозы, лакто-N-неотетраозы, лакто-N-гексаозы, лакто-N-неогексаозы, пара-лакто-N-гексаозы, пара-лакто-N-неогексаозы, лакто-N-октаозы, лакто-N-неооктаозы, изо-лакто-N-октаозы, пара-лакто-N-октаозы и лакто-N-декаозы.
Изобретение относится к применению олигосахарида, выбираемого из группы, состоящей из лакто-N-тетраозы, лакто-N-неотетраозы, лакто-N-гексаозы, лакто-N-неогексаозы, пара-лакто-N-гексаозы, пара-лакто-N-неогексаозы, лакто-N-октаозы, лакто-N-неооктаозы, изо-лакто-N-октаозы, пара-лакто-N-октаозы и лакто-N-декаозы.
Изобретение относится к применению олигосахарида, выбираемого из группы, состоящей из лакто-N-тетраозы, лакто-N-неотетраозы, лакто-N-гексаозы, лакто-N-неогексаозы, пара-лакто-N-гексаозы, пара-лакто-N-неогексаозы, лакто-N-октаозы, лакто-N-неооктаозы, изо-лакто-N-октаозы, пара-лакто-N-октаозы и лакто-N-декаозы.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для терапии ортодентальных абсцессов у кроликов. .

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для лечения остеонекроза головки бедренной кости. .
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к составам для получения кисломолочного продукта, обладающего высоким пробиотическим потенциалом, в экстремальных условиях, в частности на борту космического корабля или станции, в условиях длительного автономного подводного плавания и т.д.

Изобретение относится к медицине и касается диагностики онкологических заболеваний, в частности диагностики наличия злокачественных новообразований. .
Изобретение относится к области фармацевтики, а именно к средствам для предупреждения оппортунистических инфекций у лиц с ослабленным иммунитетом, в частности у таких как недоношенные и новорожденные младенцы.
Изобретение относится к медицине, а именно к физиотерапии, гастроэнтерологии. .
Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой поликомпонентную адгезивную мазь для лечения эрозивных поражений слизистой оболочки полости рта при обыкновенной пузырчатке, содержащую облепиховое масло и 0,5% преднизолоновую мазь, отличающуюся тем, что дополнительно содержит солкосерил дентальную адгезивную пасту, гель «Лидоксор» и «Полисорб МП», при следующем % соотношении компонентов: облепиховое масло - 20, 0,5% преднизолоновая мазь - 20, солкосерил дентальная адгезивная паста - 30, гель «Лидоксор» - 20, «Полисорб МП» - 10.

Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. .

Изобретение относится к новым соединениям формулы I, его энантиомерам и фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами ингибиторов АКТ протеинкиназы. .
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства для лечения суставов и снятия боли мышечного характера. .

Изобретение относится к медицине, а именно к применению препарата Инфликсимаб в качестве средства, регулирующего метаболизм эритроцитов у больных с воспалительными заболеваниями кишечника
Наверх