Способ оценки локального иммунитета эндометрия


 


Владельцы патента RU 2519125:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздравсоцразвития России) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для оценки локального иммунитета эндометрия. Для этого на исследование проводят забор эндометриальной ткани у женщин с патологией эндометрия на 7-9-й день менструального цикла путем пайпель-биопсии. Определяют в исследуемой ткани относительное содержание IFN-γ и IL-4-продуцирующих лимфоцитов с вычислением соотношения Th1/Th2. При соотношении Th1/Th2 более 0,92 у.е. судят о нарушениях на уровне локального иммунитета, а при Th1/Th2 менее 0,92 у.е. делают заключение об отсутствии признаков нарушений. Использование данного способа позволяет выявить нарушения локального иммунитета эндометрия и своевременно решить вопрос о необходимости проведения терапевтической коррекции выявленных нарушений у женщин с патологией эндометрия. 3 пр.

 

Область применения

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике.

Исследования последних лет показали, что хронические воспалительные заболевания органов малого таза не сопровождаются нарушениями параметров клеточного и гуморального иммунитета, определяемыми в периферической крови. В связи с этим для определения состояния эндометрия возникает необходимость оценки локального иммунитета. Бактериально-вирусная колонизация эндометрия является следствием неспособности иммунной системы полностью элиминировать инфекционный агент, и в то же время возникает ограничение его распространения за счет эффекторных свойств Т-лимфоцитов, NK-клеток и макрофагов. Под воздействием специфических антигенов в ткани эндометрия происходит изменение локального иммунитета, в частности, дифференцировка Т-хелперов на субпопуляции Th-1 и Th-2, специализированные на синтезе определенных цитокинов: IFN-γ (Th-1) и IL-4 (Th-2). Активация Th-1 может вести к развитию избыточно выраженных воспалительных реакций в эндометрии даже в условиях низкой концентрации инфекционного агента, что позволяет использовать определение функциональных характеристик Т-хелперов для оценки выраженности иммунопатологических процессов в эндометрии (1, 2, 3, 4).

Уровень техники

Аналогами данного изобретения являются внедренные в клиническую практику акушерства и гинекологии современные методы диагностики состояния эндометрия: гистологический, учитывающий совокупность общих морфологических признаков хронического воспаления, иммуногистоцитохимический с определением спектра параметров (4, 5, 6).

Прототипом предложенного изобретения является описанный в отечественной литературе способ оценки активности локального воспаления, заключающийся в определении методом ИФА уровня IFN-y в биоматериале, взятом путем мазка с поверхности зоны трансформации шейки матки. Несмотря на очевидные достоинства метода (отсутствие травматичности при заборе материала, наличие прогностических пороговых уровней данного показателя), недостатком метода является то, что оценка активности воспаления проводится с использованием одного параметра (7).

Сущность изобретения

Цель изобретения заключается в разработке способа оценки локального иммунитета у женщин с патологией эндометрия, основанного на определении количества лимфоцитов, экспрессирующих цитокины IFN-γ и IL-4.

Предлагаемый способ позволяет установить вовлеченность иммунной системы в патологический процесс в исследуемой ткани (эндометрии).

Способ осуществляют следующим образом: у женщин с патологией эндометрия на 7-9-й день менструального цикла путем пайпель-биопсии проводят забор ткани эндометрия. 1 мл полученного пайпель-биоптата помещают в пробирку со 100 Ед гепарина натрия в 1 мл фосфатно-солевого буфера (ФСБ). Пайпель-биоптат в ФСБ механически измельчают и доводят до гомогенизированного состояния, пропуская с помощью шприца через иглы нисходящего диаметра. Из полученного гомогената эндометрия выделяют фракцию мононуклеаров на градиенте плотности: 2 мл гомогената аккуратно наслаивают на 2 мл фиколл-верографина и центрифугируют 40 минут при 1500 об/мин. После центрифугирования аккуратно с помощью дозатора собирают опалесцирующее кольцо мононуклеаров, переносят в сухую чистую пробирку и промывают ФСБ дважды путем центрифугирования 15 мин при 1500 об/мин.

- Определение содержания лимфоцитов, экспрессирующих цитокины IFN-γ и IL-4 в мононуклеарах пайпель-биоптата эндометрия проводят согласно рекомендациям фирмы-производителя реагентов (Becton Dickinson, США). Для этого в две пробирки наливают по 200 мкл полной культуральной среды RPMI 1640 и добавляют по 200 мкл мононуклеаров. В обе пробирки добавляют по 0,5 мкл ингибитора белкового транспорта GolgiPlug. В одну пробирку для оценки стимулированной продукции цитокинов добавляют 1 мкл Leukocyte Activation Coctail, содержащий активатор протеинкиназы С форбол-12-миристат-13-ацетат (ФМА) в комбинации с ионофором кальция иономицином. Инкубируют 4 часа при 37°С и 5% СO2. Затем добавляют в пробирки, в которых по 100 мкл стимулированных и нестимулированных мононуклеаров 4 мкл CD3PerCP. Инкубируют 15-30 мин при комнатной температуре в темном месте. По окончании инкубации лизируют эритроциты, добавив 1 мл готового лизирующего раствора (Lisyng). Инкубируют при комнатной температуре в темном месте 10-15 мин. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин и удаляют супернатант. Отмывают 1 раз добавлением 1 мл буфера CellWASH с последующим центрифугированием. Добавляют 250 мкл раствора Cytofix/Cytoperm. Инкубируют 20 мин при комнатной температуре в темноте. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин и удаляют супернатант. Добавляют 1 мл буфера Perm/Wash и инкубируют 10 мин при комнатной температуре в темноте. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин и удаляют супернатант. Добавляют 4 мкл меченых моноклональных антител IFN-γFITC и IL-4PE. Инкубируют 30 мин при комнатной температуре в темноте. Отмывают клетки один раз в 1 мл буфера Perm/Wash. Ресуспендируют клетки в CellFIX буфере для анализа на проточном цитофлуориметре, используя программу CELLQuest.

Проведено обследование 9 здоровых женщин благоприятного репродуктивного возраста (18-35 лет) и 30 женщин с патологией эндометрия. Установлено, что соотношение IFN-γ и IL-4-продуцирующих лимфоцитов Thl/Th2 более 0,92 у.е. свидетельствует о нарушениях на уровне локального иммунитета у женщин с патологией эндометрия. При Th1/Th2 менее 0,92 у.е. делают заключение об отсутствии признаков нарушений.

Чувствительность метода составляет 83,3%, специфичность - 83,8%, эффективность - 83,6%.

Пример 1. Пациентка С., 32 года, поступила в гинекологическое отделение ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития России с диагнозом хронический эндометрит. Акушерский анамнез отягощен тремя регрессирующими беременностями. Менструальная функция не нарушена (через 28-30 дней по 5-6 дней). При исследовании пайпель-биоптата эндометрия Th1/Th2 составило 2,72 у.е., что выше установленного критерия в 0,92 у.е. и свидетельствует о нарушениях локального иммунитета эндометрия. После проведения терапии Th1/Th2 составило 0,64 у.е., что характеризует отсутствие признаков нарушений. При гистологическом исследовании признаков воспаления эндометриальной ткани не выявлено.

Пример 2. Пациентка Г., 27 лет, поступила в гинекологическое отделение ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития России с диагнозом хронический эндометрит. Акушерский анамнез отягощен двумя регрессирующими беременностями. Менструальная функция не нарушена (через 24-25 дней по 5 дней). При бактериологическом исследовании мазка из шейки матки выделена Е. coli в диагностическом титре. При исследовании пайпель-биоптата эндометрия Th1/Th2 составило 1,66 у.е., что выше установленного критерия в 0,92 у.е. и свидетельствует о нарушениях локального иммунитета эндометрия. После проведения терапии Th1/Th2 составило 0,84 у.е., что характеризует отсутствие признаков нарушений. При гистологическом исследовании признаков воспаления эндометриальной ткани не выявлено.

Пример 3. Пациентка Т., 35 лет, гинекологически здорова, что подтверждено данными гистологического исследования. При исследовании пайпель-биоптата эндометрия соотношение Th1/Th2 составило 0,87 у.е., что ниже установленного критерия в 0,92 у.е. и свидетельствует об отсутствии нарушений локального иммунитета эндометрия.

Таким образом, приведенные выше примеры наглядно демонстрируют, что предлагаемый способ дает возможность выявить лабораторные признаки, характерные для нарушений локального иммунитета эндометрия, что позволит своевременно решить вопрос о необходимости проведения терапевтической коррекции выявленной патологии.

Источники информации

1. Плужникова Т.А. Диагностика и лечение хронического эндометрита у женщин с невынашиванием беременности в анамнезе / Т.А. Плужникова, Е.К. Комаров // Журнал акушерства и женских болезней. - 2012. - №2. - С.52-55.

2. Подзолкова Н.М. Клинические и патогенетические аспекты неразвивающейся беременности / Н.М.Подзолкова, В.Г.Истратова, Т.В.Золотухина // Рос. вестник акуш.-гинекол. - 2003. - №2. - С.40-43.

3. Скворцова М.Ю. Профилактика репродуктивных потерь и осложнений гестации у пациенток с невынашиванием беременности / М.Ю.Скворцова, Н.М.Подзолкова // Гинекология. - 2010. - №1. - С.46-49.

4. Михнина Е.А. Способ диагностики хронического эндометрита и характера воспаления / Е.А.Михнина, В.Н.Элиниди и др. // Патент на изобретение №2236013.

5. Элиниди В.Н. Современные возможности диагностики хронического эндометрита / В.Н.Элиниди и др. // Журнал акушерства и женских болезней. - 2003. - №3. - С.64-68.

6. Сухих Г.Т. Хронический эндометрит / Г.Т.Сухих, А.В.Шуршалина // М., 2010.

7. Грибова С.Н. Способ оценки активности локального воспаления при фоновых заболеваниях шейки матки. / Грибова С.Н., Захарова Н.Б., Хрипунова Г.И. // Патент на изобретение №2405145.

Способ оценки локального иммунитета эндометрия, отличающийся тем, что у женщин с патологией эндометрия на 7-9-й день менструального цикла в ткани эндометрия, взятой путем пайпель-биопсии, определяют относительное содержание IFN-γ и IL-4-продуцирующих лимфоцитов и по соотношению Th1/Th2 более 0,92 у.е. судят о нарушениях на уровне локального иммунитета, а при Th1/Th2 менее 0,92 у.е. делают заключение об отсутствии признаков нарушений.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для обнаружения злокачественных опухолей, включая рак молочной железы, рак почек. Для этого проводят измерение экспрессии полипептида, обладающего способностью связываться посредством реакции антиген-антитело с антителом против белка CAPRIN-1, имеющего любую из аминокислотных последовательностей с четными номерами SEQ ID NO:2-30 списка последовательностей, в образце, полученном из живого организма, посредством реакции антиген-антитело в образце, выделенном из живого организма.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и касается способа прогноза гипертензионных осложнений беременности у пациенток с гестационным сахарным диабетом.

Изобретение относится к способам иммуноанализа для детектирования или количественного измерения искомых аналитов в образцах и может быть использовано в лабораторной и клинической практике для детектирования антител, протеинов, гормонов, лекарственных форм в биологических образцах в широком диапазоне концентраций.

Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной иммунологии и предназначено для определения функциональной активности комплемента по его действию на инфузории.

Изобретение относится к медицине. При осуществлении способа через 3 ч после перорального введения препарата «Аласенс» в дозе 15 мг/кг массы тела получают трехканальное RGB флуоресцентное изображение зоны интереса.
Изобретение относится к области медицинской диагностики и касается способа прогнозирования риска развития рассеянного склероза (РС) у больных с оптическим невритом.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии. Предложен способ прогнозирования исхода острого периода ишемического инсульта, заключающийся в определении в венозной крови на 1-й день ишемического инсульта соотношения содержания лиганда растворимого 6 члена суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (sFasL) и растворимого рецептора Fas (sFas) (sFasL/sFas), и при соотношении концентраций sFasL/sFas, меньшем или равном 2,41±0,26, прогнозируют благоприятный исход, при большем 2,67 -неблагоприятный исход.
Изобретение относится к медицине и, в частности к гематологии, вирусологии и инфекционным заболеваниям и описывает способ диагностики вирусных гепатитов путем определения в пробе крови РНК или ДНК вирусов методом ПЦР, при этом в случае отсутствия РНК или ДНК вирусов в сыворотке, плазме крови или «шапке» сгустка крови исследование проводят в сгустке крови больного, предварительно отделенном от сыворотки крови, высушенном и растворенном в физиологическом растворе хлористого натрия, и в случае наличия РНК или ДНК вирусов диагностируют гепатит.
Изобретение относится к медицине и касается способа определения К-антигена Streptococcus pneumoniae для серологической диагностики циркулирующих штаммов пневмококков путем постановки реакции агглютинации на стекле с использованием определенного набора диагностических агглютинирующих пневмококковых сывороток, состоящего из 4 пуловых сывороток, в составе которых содержатся следующие антитела к К-антигенам, в первой из которых содержатся антитела к К-антигенам: 23F, 19F, 6A, 7F, 4, 14, во второй пуловой сыворотке: 19F, 18C, 9V, 6B, 4, 5, 14, в третьей пуловой сыворотке: 6A, 9V, 19A, 1, 4, 5, 14, в четвертой пуловой сыворотке: 7F, 6B, 1, 3, 5, 14.

Группа изобретений относится к индикаторным агентам для тестирования психических состояний посредством логистического регрессионного анализа, включающим по крайней мере три вида молекул, выбранных из группы, состоящей из IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, эотаксина, основного FGF, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IFN-α, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, PDGF-BB, RANTES, TNF-α, VEGF, CSF-2, TGF-β, нейротрофина 5, MCP-3, β-2-микроглобулина, ангиотензина II, CSF-3, CXC-хемокинового лиганда 1, CXC-хемокинового лиганда 5 и HGF; агентам для тестирования интенсивности психических расстройств, включающим по крайней мере три вида молекул, выбранных из вышеуказанной группы; а также к способу измерения психических состояний, включающему стадии измерения уровня факторов в биологическом образце с использованием тестового агента и сравнения количества, полученного в стадии измерения, с количеством индикаторного агента посредством пропорционального взвешивания; способу измерения психических расстройств, включающему стадии измерения уровня факторов в биологическом образце с использованием тестового агента и сравнения количества, полученного в стадии измерения, с количеством индикаторного агента посредством пропорционального взвешивания. Применение группы изобретений позволяет дать объективную и специфическую оценку различных психических или физических состояний, таких как стресс или утомление, для которых оценка традиционно возможна только субъективными, зависящими от симптомов методами. 4 н. и 1 з.п. ф-лы, 23 ил., 3 пр.

Изобретение относится к устройству и способу для количественного измерения аналита с использованием камеры. В частности, для сбора данных идентификационного кода, необходимых для получения точного результата анализа аналита. Способ включает сбор данных результата взаимодействия аналита с использованием камеры, без дополнительного оборудования; считывание идентификационного кода и результата взаимодействия аналита. Измерительное устройство содержит: камеру для захвата зоны распознавания камерой аналитического набора, которая содержит результат взаимодействия аналита, полученный путем взаимодействия аналита, и идентификационный код аналитического набора; блок обработки изображений для выделения изображения результата взаимодействия аналита и изображения идентификационного кода из изображений зоны распознавания камерой аналитического набора, захваченной камерой; блок считывания для считывания изображения результата взаимодействия аналита и изображения идентификационного кода; блок управления для обеспечения возможности обрабатывать результат считывания изображения результата взаимодействия аналита, подлежащего обработке; и блок вывода для вывода конечного результата об аналите, который получен блоком управления. Изобретение обеспечивает получение точного результата. 4 н. и 14 з.п. ф-лы, 9 ил.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа определения в образце индивидуума белка нейтрофильного происхождения липокалина, связанного с желатиназой (NGAL), для определения острого повреждения почек у индивидуума, где преобладающее количество мономерной и/или гетеродимерной форм белка NGAL, по сравнению с димерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из почек индивидуума и что у индивидуума наблюдается острое повреждение почек, тогда как равное или преобладающее количество димерной формы белка NGAL, по сравнению с мономерной или гетеродимерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из нейтрофилов индивидуума и что указанный индивидуум не имеет острого повреждения почек; набора для определения в образце относительных количеств мономерной, димерной и гетеродимерной форм NGAL; применения набора в указанном способе. Группа изобретений обеспечивает установление более точного диагноза и таким образом способствует лучшему направленному лечению. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 пр., 10 ил., 1 табл.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа определения в образце индивидуума белка нейтрофильного происхождения липокалина, связанного с желатиназой (NGAL), для определения острого повреждения почек у индивидуума, где преобладающее количество мономерной и/или гетеродимерной форм белка NGAL, по сравнению с димерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из почек индивидуума и что у индивидуума наблюдается острое повреждение почек, тогда как равное или преобладающее количество димерной формы белка NGAL, по сравнению с мономерной или гетеродимерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из нейтрофилов индивидуума и что указанный индивидуум не имеет острого повреждения почек; набора для определения в образце относительных количеств мономерной, димерной и гетеродимерной форм NGAL; применения набора в указанном способе. Группа изобретений обеспечивает установление более точного диагноза и таким образом способствует лучшему направленному лечению. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 пр., 10 ил., 1 табл.
Изобретение относится к медицине и касается способа получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения, включающего иммунизацию животных клетками вилочковой железы человека, истощение полученной иммунной плазмы обработкой ее человеческой плазмой АВ(IV) группы, 3-этапное фракционирование белков плазмы полиэтиленгликолем-6000 (ПЭГ-6000), удаление из фракционированной смеси антител к нелимфоидным антигенам последовательной двукратной обработкой смесью отмытых донорских эритроцитов и однократной обработкой концентратом тромбоцитов всех четырех групп крови, очистку целевого продукта путем осаждения ПЭГ-6000, растворение полученных иммуноглобулинов в физиологическом растворе, добавление глицина и осветляющую и стерилизующую фильтрацию. Изобретение обеспечивает улучшение качества готового продукта за счет максимального снижения примесей антител к нелимфоидным элементам крови, а также упрощение технологии за счет исключения дополнительного центрифугирования. 2 з.п. ф-лы, 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике персистенции онкогенных типов вируса папилломы человека в цервикальном эпителии. Изобретение может быть использовано в гинекологии, дерматовенерологии. Для построения математической модели с помощью бинарной логистической регрессии выделены наиболее информативные иммунологические показатели цервикальной слизи у женщин с генитальной папилломавирусной инфекцией. В результате вычисления диагностических коэффициентов была предложена модель логистической регрессии: логит (Р)=-1,2352+(17,8125)×Ig А цервикальной слизи (г/л)+(-0,0012)×ИФН-α цервикальной слизи (пг/мл) с последующим вычислением P1/1+e-логит(P), где е - константна, равная 2,718281828. Применение данных формул подразумевает формальную подстановку значений иммунологических показателей, полученных при обследовании пациентки, и вычисление значения вероятности отнесения пациентки к группе риска. Если Р<0,5, пациентку следует причислить к группе 0 - отсутствие риска развития персистенции вируса папилломы человека в цервикальном эпителии, если Р≥0,5 - к группе 1 - наличие риска развития персистенции вируса папилломы человека в цервикальном эпителии. Использование предлагаемого способа дает возможность с высокой точностью определить риск развития персистенции вируса папилломы человека в цервикальном эпителии. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области диагностики злокачественной опухоли. Изобретение относится к способу улавливания, детекции, охарактеризовывания и количественного определения экзосом человека в небольших объемах жидкостей организма человека с использованием сэндвич-ELISA-теста. Способ позволяет полное охарактеризовывание препарата экзосом, таким образом, обеспечивая инструмент для различения связанного с заболеванием состояния и здорового состояния. Способ может быть пригоден для скрининга, диагностики и прогнозирования опухолей в простом образце плазмы. Одновременное количественное определение циркулирующих экзосом может обеспечить информацию о размере опухолевой массы у пациента. 4 н. и 9 з.п., 6 пр., 1 табл., 6 ил.

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике предрака и рака шейки матки иммунологическими методами. Способ прогнозирования прогрессии цервикальных интраэпителиальных неоплазий (ЦИН), ассоциированных с папилломавирусной инфекции, заключающийся в определении иммунологических показателей в крови и цервикальном секрете пациента, включает применение значения коэффициента Р, и если значение коэффициента Р больше 0,5, - группа риска прогрессии заболевания, при значении коэффициента Р меньше или равном 0,5 -отсутствие риска прогрессии заболевания. Коэффициент Р вычисляется с помощью математической модели: , где Р - вероятность отнесения пациента к группе риска, a i - коэффициенты регрессии, Xi - значения вошедших в модель показателей. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и может быть использовано для прогнозирования развития системного воспалительного ответа у больных с инфекционным эндокардитом. Для этого в предоперационном периоде в крови пациентов определяют уровень интерлейкинов 1β, 4, 10. При одновременных значениях интерлейкина 1β более 2,0 пг/мл, интерлейкина 4 более 0,5 пг/мл и интерлейкина 10 менее 25 пг/мл прогнозируют развитие системного воспалительного ответа. Использование данного метода позволяет прогнозировать осложнения в раннем послеоперационном периоде у пациентов с инфекционным эндокардитом, оперированных в условиях искусственного кровообращения. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно способу получения противоопухолевого вакцинного препарата для лечения солидных опухолей. Способ получения противоопухолевого вакцинного препарата для лечения солидных опухолей, заключающийся в том, что производят отбор первоначального опухолевого материала, смешение и гомогенизацию в буферном растворе, неоднократное центрифугирование с отбором образующего осадка, осадок суспендируют в кислом буфере, перемешивают, нейтрализуют, центрифугируют, супернатат собирают, осуществляют обогащение и очистку полученного супернатата с помощью комбинации солевого осаждения и хроматографии на иммобилизованном протеине А или G, полученный раствор пропускают через колонки с иммобилизованными иммуноглобулинами человека класса IgG и иммобилизованными белками плаценты человека, получившиеся антитела подвергают ферментативной обработке для получения Fab- или F(ab)2-фрагментов, которыми иммунизируют животных, получают иммунные антисыворотки, выделяют из них суммарную фракцию иммуноглобулинов, пропускают ее через колонки, с иммобилизованными иммуноглобулинами человека класса IgG и иммобилизованными белками плаценты человека, прошедший через колонки раствор подвергают иммуноаффинной хроматографии на колонках с иммобилизованными иммуноглобулинами, полученными ранее на этапе очистки и обогащения, целевые продукты, специфически связываемые последними видами колонок, элюируют раствором, диссоциирующим комплексы антиген-антитело, концентрируют, фильтруют через антимикробные фильтры, смешивают с адьювантом. Препарат полученный вышеописанным способом позволяет повысить эффективность лечения солидных опухолей. 2 пр.
Наверх