Способ использования иммунологических маркеров для прогноза прогрессии цервикальных интраэпителиальных неоплазий, ассоциированных с папилломавирусной инфекцией



 


Владельцы патента RU 2520746:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Челябинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО ЧелГМА Минздравсоцразвития России) (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике предрака и рака шейки матки иммунологическими методами. Способ прогнозирования прогрессии цервикальных интраэпителиальных неоплазий (ЦИН), ассоциированных с папилломавирусной инфекции, заключающийся в определении иммунологических показателей в крови и цервикальном секрете пациента, включает применение значения коэффициента Р, и если значение коэффициента Р больше 0,5, - группа риска прогрессии заболевания, при значении коэффициента Р меньше или равном 0,5 -отсутствие риска прогрессии заболевания. Коэффициент Р вычисляется с помощью математической модели:

,

где Р - вероятность отнесения пациента к группе риска, a i - коэффициенты регрессии, Xi - значения вошедших в модель показателей. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике предрака и рака шейки матки иммунологическими методами. Большая частота заболеваний шейки матки и их неблагоприятное влияние на репродуктивное здоровье женщины определяет необходимость совершенствования диагностики и лечения данной патологии. С открытием и признанием вирусной этиологии рака шейки матки (РШМ) пересматриваются многие подходы к цитологическому скринингу, ранней диагностике и лечению предраковых состояний. Исходя из современных представлений, РШМ - потенциально предотвратимое заболевание, если оно выявлено на стадии морфологической формы предрака - дисплазии шейки матки или цервикальной интраэпителиальной неоплазий (ЦИН), когда своевременно начатое лечение имеет оптимально-радикальный результат и позволяет добиться полного регресса патологического очага (Ашрафян Л.А. Патогенетическая профилактика рака репродуктивных органов. / Л.А.Ашрафян, В.И.Киселев, Е.Л.Муйнежек. - М.: «Дмитрейд График Групп», 2009. - 175 с.). Однако, несмотря на достигнутые успехи в области онкологии и вирусологии, заболеваемость РШМ в Российской Федерации не снижается. Кроме этого, в последнее десятилетие отмечается рост заболеваемости среди молодых женщин, особенно в возрасте до 29 лет (Чиссов В.И. Состояние онкологической помощи населению России в 2008 году. / Под ред. В.И.Чиссова и др. - М., 2009. - 192 с.).

Основным экзогенным фактором, играющим ключевую роль в развитии интраэпителиальных дисплазии и выступающим в качестве пускового механизма неопластической трансформации эпителия шейки матки, является инфицирование высокоонкогенными типами вируса папилломы человека (ВПЧ) (zur Hausen Н. Papillomaviruses in the causation of human cancers - a brief historical account. / H.zur Hausen // Virology. - 2009. - Vol.384, №2. - P.260-265). Широкий полиморфизм клинических проявлений, частое бессимптомное течение папилломавирусной инфекции (ПВИ), сложность и высокая стоимость диагностических лабораторных исследований, отсутствие единых протоколов ведения пациенток с различными формами инфекции создают для практических врачей определенные трудности. В настоящее время диагностика патологии шейки матки, ассоциированной с ПВИ, включает традиционные методы (цитологическое, кольпоскопическое и гистологическое исследования) и различные тесты на определение ДНК ВПЧ молекулярно-биологическими методами, что позволяет повысить чувствительность и специфичность ранней диагностики РШМ до 99-100% (Прилепская В.Н. Профилактика рака шейки матки: методы ранней диагностики и новые скрининговые технологии: клиническая лекция. / В.Н.Прилепская // Гинекология. - 2007. - Т.9, №1. - С.12-15). Основным методом скрининга в течение нескольких десятилетий является цитологическое исследование эпителия шейки матки - Pap-тест (Прилепская В.Н. Новые технологии в профилактике рака шейки матки. // Новые технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний. - М., 2010. - С.241-242).

Но общепринятый цитологический скрининг имеет ряд существенных недостатков, основным из которых является низкая информативность (от 38 до 67%) (Шипицына Е.В. Диагностика папилломавирусной инфекции в скрининге рака шейки матки. / Е.В.Шипицына, Е.А.Золотоверхая, Е.С.Юшманова, A.M.Савичева // Журн. акушерства и жен. болезней. - 2007. - Т.56. - С.72-75. - Спецвып.; Nuovo J. New tests for cervical cancer screening. / J.Nuovo, J.Melnikow, L.P.Howell // Am. Fam. Physician. - 2001. - Vol.64. - P.780-786.). Цитологический метод неспецифичен при инфицировании ВПЧ ВКР и позволяет диагностировать только клиническую и субклиническую формы инфекции, качество результата в значительной степени зависит от методики и правильности забора материала, техники приготовления мазков и выбора способа окрашивания (Рудакова Е.Б. Использование цитологического метода, качественного и количественного определения вируса папилломы человека в прогнозировании рака шейки матки. / Е.Б.Рудакова, О.Ю.Цыганкова // Урал. мед. журн. - 2008. - №2 (42). - С.16-20).

В настоящее время все шире применяется жидкостная цитология, которая является более чувствительным методом по сравнению с Pap-тестом, однако, характеризуется более высокой стоимостью и почти идентичной специфичностью с традиционным цитологическим исследованием (Сухих Г.Т. Новые скрининговые технологии в профилактике рака шейки матки. / Г.Т.Сухих, В.Н.Прилепская // Материалы Международной научно-практической конференции «Профилактика рака шейки матки: взгляд в будущее». - М., 2008. - С.110-111; Кондриков Н.И. Современные методы диагностики предраковых состояний и карциномы шейки матки. / Н.И. Кондриков, М.В. Шамаракова // Материалы Международной научно-практической конференции «Профилактика рака шейки матки: взгляд в будущее». - М., 2008. - С.72-73).

Кольпоскопический метод более информативен, но достаточно дорог и неспецифичен для патологии шейки матки, ассоциированной с ПВИ. Чувствительность данного исследования составляет порядка 75% при специфичности 20% (Куевда Д.А. ВПЧ-тестирование: алгоритмы диагностики и требования к молекулярным тестам для выявления вирусов папилломы человека. / Д.А.Куевда, О.Ю.Шипулина // Генодиагностика инфекционных заболеваний: сб. тр. / Под ред. В.И.Покровского. - М.: Универ. книга, Пайс, 2007. - Т.3. - С.108-119).

Колыюскопия рассматривается как более чувствительный метод определения субклинической формы ПВИ (Gross G.E. Human Papilloma Virus Infection: a clinical atlas / G.E.Gross. - Berlin; Wiesbaden: Ullstein Mosby, 1997. - 300 p.).

Наиболее специфичными кольпоскопическими признаками ПВИ являются ацетобелый эпителий, йодпозитивные мозаика и пунктация, атипическая зона трансформации (Роговская С.И. Латентная папилломавирусная инфекция у женщин: тактика ведения. / С.И.Роговская, Т.Н.Бебнева, В.Н.Прилепская // Материалы Международного конгресса «Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии». - М., 2006. - С.157). По данным литературы кольпоскопию можно рассматривать не как диагностический метод, а как исследование, позволяющее оценить размеры поражения и его локализацию на границе плоского и цилиндрического эпителия, исключить инвазивный рак (Gross G.E. Human Papilloma Virus Infection: a clinical atlas / G.E.Gross. - Berlin; Wiesbaden: Ullstein Mosby, 1997. - 300 p.).

Основным методом или «золотым» стандартом диагностики патологического процесса шейки матки является гистологическое исследование прицельно взятых биоптатов (Роговская С.И. Клинико-морфологические особенности папилломавирусной инфекции гениталий у женщин. / С.И.Роговская, Л.СЕжова, В.Н.Прилепская и др. // Гинекология. - 2004. - Т.6, №2. - С.57-59.; Хмельницкий O.K. Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний шейки матки. / O.K.Хмельницкий. - СПб.: SOTIS, 2000. - 336 с.). Гистологическое исследование является хорошим вторичным методом подтверждения цервикальной патологии, однако, метод инвазивный и достаточно трудоемкий, в связи с чем не может являться скрининговым методом (Куевда Д.А. ВПЧ-тестирование: алгоритмы диагностики и требования к молекулярным тестам для выявления вирусов папилломы человека. / Д.А.Куевда, О.Ю.Шипулина // Генодиагностика инфекционных заболеваний: сб. тр. / под ред. В.И.Покровского. - М.: Универ. книга, Пайс, 2007. - Т.3. - С.108-119). Гистологическое исследование может быть дополнено гибридизацией in situ, основанной на использование меченых зондов, комплементарных к определенному участку нуклеиновой кислоты ВПЧ, позволяющей выявить присутствие в ткани ДНК или РНК ВПЧ (Папилломавирусная инфекция: пособие для врачей. / Под ред. В.М. Говоруна. - М., 2009. - 63 с.).

Все это обосновывает необходимость применения новых скрининговых технологий в первую очередь с применением теста на определение ДНК ВПЧ молекулярно-биологическими методами - ВПЧ тест (ВПЧ Digene-тест, ПЦР и их аналоги). ВПЧ-тест рекомендуется использовать как скрининговый, диагностический и для контроля эффективности терапии. К числу таких современных методов относится полимеразная цепная реакция (ПЦР) со специфическими праймерами, позволяющая выявлять и типировать вирусные последовательности ДНК в зараженных клетках (Nelson J.H. A novel and rapid PCR-based method / J.H.Nelson, G.A.Hawkins, K.Edlund et al. // J. Clin. Microbiol. - 2000. - Vol.38. - P.688-95.). Метод ПЦР позволяет обнаружить ВПЧ в тех соскобах шейки матки, в которых не определяются диспластические изменения эпителия, а значит, на самом раннем этапе, что делает возможным раннее проведение профилактических мероприятий (Караванова Е.А. Выявление вируса паилломы человека 16/18 типа методом полимеразной цепной реакции. / Е.А.Караванова, И.Л.Напальчикова, М.М.Спиридонова, А.К.Марданова // Генодиагностика инфекционных заболеваний: сб.тр. / Под ред. В.И.Покровского. - М.: Универ.книга, Пайс, 2007. - Т.3. - С.94-95). Тест на вирусную ДНК обладает большей чувствительностью, чем цитологический метод, а выявление вируса после лечения ассоциировано с риском рецидива болезни (Минкина Г.Н. Значение ВПЧ-тестирования в постлечебном мониторинге больных с интраэпителиальными поражениями шейки матки высокой степени тяжести. / Г.Н.Минкина, О.В.Минкина, О.Ю.Шипулина // Материалы Международного конгресса «Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии». - М., 2006. - С.122., Inoue М. The evaluation of human papillomavirus DNA testing in primary screening for cervical lesions in a large Japanese population. / M.Inoue, J.Sakaguchi, T.Sasagawa, M.Tango // Int. J. Gynecol. Cancer. - 2006. - Vol.16, №3. - Vol.1007-1013). Предполагается, что ВПЧ тесты являются более специфичными при диагностике и постлечебном мониторинге цервикальных неоплазий (Гаврикова М.В. Значение определения вирусной нагрузки в постлечебном мониторинге пациенток с предраком шейки матки. / М.В.Гаврикова, Г.Н.Минкина, О.Ю.Шипулина, О.В.Минкина // Генодиагностика инфекционных заболеваний: сб.тр. / под ред. В.И.Покровского. - М.: Универ. книга, Пайс, 2007. - Т.3. - С.187-188; Роговская С.И. ПЦР и DIGENE тест в диагностике цервикальной неоплазий. / С.И.Роговская, Т.Н.Бебнева, Е.САкопова, В.Н.Прилепская, Э.Х.Сабдулаева // Новые технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний. - М., 2010. - С.243).

В многочисленных работах подчеркивается, что важную роль в генезе малигнизации эпителия шейки матки играет иммунная система (Киселев Ф.Л. Генетические и эпигенетические факторы прогрессии опухолей шейки матки. / ФЛ.Киселев // Вестн. РАМН. - 2007. - №11. - С.25-32.; Stanley, М. Immune responses to human papillomavirus / M.Stanley // Vaccine. - 2006. - Vol.24, Suppl. 1. - P.16-22). Показано, что наиболее часто ВПЧ-инфекции разрешаются в результате формирования Th1-иммунного ответа. Однако высокоонкогенные типы ВПЧ активно подавляют эндогенный ответ на уровне системы интерферонов и тормозят активацию Toll-подобных рецепторов, что в сочетании с низкими уровнями вирусного белка, образуемого в рамках инфекционного цикла, а также отсутствием воспаления и виремии способствует длительному игнорированию этой инфекции иммунитетом (Stanley М. Immune responses to human papillomavirus. / M.Stanley // Vaccine. - 2006. - Vol.24, Suppl. 1. - P. 16-22.; Stanley, M.A. Immune responses to human papilloma viruses // Indian J. Med. Res. - 2009. - Vol.130, №3. - P.266-276) и, вероятно, может привести к прогрессированию заболевания до интраэпителиальных поражений высокой степени (ЦИН II-III) и риску развития карциномы. В патенте РФ №2409322, дата публикации 20.01.2011, описан способ прогнозирования варианта развития ЦИН I степени, включающего определение экспрессии P16ink4a с дополнительной оценкой кольпоскопических картин с использованием индекса Reid, системы Coppleson, определением степени распространенности койлоцитоза в биоптате, оценку исследуемых показателей проводят с помощью прогностических коэффициентов (ПК), где при кольпоскопическом индексе Reid 0-2 балла значение ПК=-3, 3 балла - ПК=+2, 4 балла - ПК=+1; при регистрации значащих кольпоскопических картин по Coppleson ПК=+2, незначащих - ПК=-2; при наличии распространенного койлоцитоза ПК=+4, при его отсутствии - ПК=-1; при уровне цитоплазматической метки P16ink4a 1-10% - ПК=-4, при уровне P16ink4α 11-50% - ПК=-2, при уровне P16ink4α, равном 51% и более, - ПК=+5, суммируют прогностические коэффициенты и, если сумма всех прогностических коэффициентов достигает конечного значения со знаком "+", выносят решение о риске неблагоприятного варианта развития ЦИН I степени и рекомендуют хирургическое лечение шейки матки, при достижении конечного значения со знаком "-" - о благоприятном варианте развития ЦИН I степени. Использование данного способа имеет ограничения, заключающиеся в определения риска неопластической прогрессии только у женщин с диагнозом ЦИН I степени и невозможности прогноза для пациенток с ЦИН II и ЦИН III степени.

В патенте РФ №2310197, дата публикации 10.11.2007, описан способ прогнозирования предраковых заболеваний шейки матки у женщин с папилломавирусной инфекцией, заключающийся в иммуногистохимическом исследовании серийных срезов слизистой оболочки шейки матки женщин с папилломавирусной инфекцией, которые обрабатывают по стрептавидин-биотиновому пероксидазному методу и инкубируют с антителами к антигену ядер пролиферирующих клеток - PCNA и к ингибитору апоптоза BCL-2 - с определением митотического и апоптозного индексов, индексов меток PCNA и BCL-2 с последующим вычислением коррелятивного индекса пролиферации (КИП). Если у больных с ЦИН I значение КИП превышает 114,0, то предполагают высокую вероятность перехода заболевания в стадию ЦИН II, а если значение КИП превышает 208,0, предполагают высокую степень перехода заболевания в стадию ЦИН III или развитие онкологической патологии шейки матки. Недостатком данного метода является неспособность прогнозирования развития ЦИН I степени, как одной из стадий неопластической трансформации цервикального эпителия, у женщин с латентной ПВИ и женщин с доброкачественной патологией шейки матки, ассоциированной с ВПЧ-инфекцией, а также отсутствие точного дифференцированного прогноза ЦИН III степени и рака шейки матки. Современные методы диагностики патологии шейки матки, ассоциированной с ПВИ, не обладают должной разрешающей способностью для оценки онкогенного потенциала инфицированных клеток на молекулярном уровне, что не позволяют прогнозировать течение заболевания. Это делает актуальным поиск новых маркеров, позволяющих отнести женщин с ВПЧ-ассоциированной патологией шейки матки в группу с благоприятным либо неблагоприятным прогнозом заболевания и определить адекватную тактику ведения данных пациенток.

Целью изобретения является повышение эффективности ранней комплексной диагностики прогрессирования ЦИН, что послужит основой для изменения тактических подходов к лечению женщин. Мы предлагаем использовать иммунологические критерии как маркеры прогрессии ВПЧ-ассоциированных заболеваний шейки матки.

Для достижения поставленной цели было проведено иммунологическое исследование 193 женщин с патологией шейки матки и наличием ВПЧ высокого риска в цервикальном канале, которые сформировали группы больных: 1 группа - 40 пациенток с хроническим цервицитом, 2 группа - 40 больных с цервикальной интраэпителиальной неоплазией I (ЦИН I), 3 группа - 38 больных с цервикальной интраэпителиальной неоплазией II (ЦИН II) и 4 группа - 38 больных с цервикальной интраэпителиальной неоплазией III (ЦИН III). Исследуемые группы были сопоставимы по возрасту, средний возраст пациенток - 27,2±1,84 лет.Контрольную группу составили 40 женщин без клинико-морфологических изменений на шейке матки и другой гинекологической патологии с наличием ВПЧ высокого риска. Средний возраст - 24,05±1,11 лет.

Отбор больных для иммунологического исследования осуществлялся в соответствии с критериями включения и исключения. Критерии включения: 1) патология шейки матки, подтвержденная морфологическим исследованием;

2) наличие ВПЧ высокого риска в цервикальном канале, подтвержденное методом ПЦР;

3) возраст от 19 лет до 35 лет;

4) информированное согласие пациентки.

Критерии исключения:

1) хронический эндометрит в стадии обострения;

2) аденомиоз, миома тела матки;

3)беременность;

4) хламидийная, цитомегаловирусная и герпесвирусная инфекции урогенительного тракта;

5) экстрагенитальные заболевания в стадии декомпенсации;

6) инфекционный, аллергический, аутоиммунный и лимфопролиферативный синдромы;

7) опухоли другой локализации.

Все пациентки прошли обязательный объем диагностических исследований, который включал в себя:

1. Клинические методы. Обследование проводилось врачом гинекологом.

2. Инструментальные: УЗИ, прицельная биопсия шейки матки под контролем кольпоскопа. Методика проведения исследования была стандартной и осуществлялась врачом-гинекологом.

3. Морфологическое исследование цервикобиоптатов. Исследование и постановка диагноза производились специалистом-гистологом.

4. Иммунологические методы: у женщин исследовались цервикальная слизь и периферическая кровь в первую фазу менструального цикла.

В цервикальной слизи определяли: общее количество лейкоцитов; абсолютное и относительное содержание жизнеспособных нейтрофилов; количество апоптозных нейтрофилов; показатели функциональной активности нейтрофилов; концентрацию иммуноглобулинов A, M, G, секреторного иммуноглобулина A и уровни цитокинов ИФН-α, ИФН-γ, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-10, РАИЛ-1, ФНО-α. В периферической крови определяли: абсолютное число лейкоцитов; абсолютное и относительное количество гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов и их субпопулций; функциональную активность нейтрофилов; концентрацию иммуноглобулинов A, M, G, ЦИК, C3 и С5 компонентов комплемента; уровни цитокинов ИФН-α, ИФН-γ, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-10, РАИЛ-1, ФНО-α.

При иммунологическом обследовании было проведено:

- подсчет общего числа лейкоцитов, абсолютного и относительного количества гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов и их субпопуляций в крови методом проточной цитометрии на лазерных проточных цитометрах Epics™ XL™ и Cytomics FC (Beckam Coulter,CHIA); для определения субпопуляционного состава лимфоцитов использовали двухпараметрические реагенты линии IQTest: CD3-FITC/CD19-РЕ, CD3-FITC/CD4-PE, CD3-FITC/CD8-PE, CD3-FITC/(CD16+56)-PE, CD3-FITC/CD25-PE, CD3-FITC/HLA-DR-PE производства Beckam Coulter (США).

- оценка функциональной активности нейтрофилов в цервикальной слизи и периферической крови с исследованием фагоцитарных реакций и содержания лизосом по методике Фрейдлин И.С. (1986) кислородозависимого метаболизма в НСТ тесте по методике Маянского А.Н., Виксмана М.К. (1979);

- определение концентрации иммуноглобулинов A, M, G (Ig A, Ig M, Ig G) в цервикальной слизи и сыворотке крови с помощью тест-систем ООО «Хема» (г. Москва), секреторного иммуноглобулина A (slg А) в цервикальной слизи с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) методом ИФА на приборе ((Personal Lab» (Италия);

- определение ЦИК в сыворотке крови методом, предложенным В.Гашковой и соавт.(1978);

- определение общей активности комплемента по 50% гемолизу в сыворотке крови по методике Резниковой Л.С.(1967);

- определение уровней ИФН-α, ИФН-γ, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-10, РАИЛ-1, ФНО-α в цервикальной слизи и сыворотке крови, концентраций C3 и С5 компонентов комплемента в сыворотке крови с использованием тест-систем ООО «Цитокин» (г. Санкт-Петербург) методом ИФА на приборе ((Personal Lab» (Италия).

5. Статистические методы. Полученные результаты исследования были обработаны общепринятыми методами вариационной статистики и представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (M±m). При анализе количественных признаков оценка достоверности различий между группами производилась с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Оценка качественных показателей осуществлялась с помощью критерия χ2 и точного критерия Фишера. Связь между исследуемыми показателями оценивали с помощью ранговой корреляции Спирмена. Для оценки диагностической эффективности различных показателей системного и местного иммунитета использовали бинарную логистическую регрессию. Разведочный анализ данных проводили в ходе анализа главных компонент. Во всех случаях различия связи и зависимости считали статистически значимыми при p<0,05. Расчеты и графические построения выполнены в пакетах ROCKIT (v.1.0.1 beta 2), KyPlot (v.2.0 beta 15) и «Statistica 6.0».

В результате проведенных исследований были зарегистрированы достоверные отличия многих иммунологических показателей у больных с ЦИН I, ЦИН II и ЦИН III. Это дает возможность разработки иммунологических критериев для прогнозирования прогрессии цервикальных интраэпителиальных неоплазий, ассоциированных с ПВИ. Авторами впервые предложен способ использования иммунологических показателей для формирования групп пациенток высокого риска по прогрессии цервикальных интраэпителиальных неоплазий, который может быть применен в качестве дополнительного метода диагностики в структуре комплексного обследования больных. Заявляемый способ осуществляют следующим образом:

На основании данных общеклинического, кольпоскопического и гистологического исследований всех женщин разделили на группы: 1 группа - 40 пациенток с хроническим цервицитом, 2 группа - 40 больных с цервикальной интраэпителиальной неоплазие I (ЦИН I), 3 группа - 38 больных с цервикальной интраэпителиальной неоплазией II (ЦИН II) и 4 группа - 38 больных с цервикальной интраэпителиальной неоплазией III (ЦИН III). Контрольную группу составили 40 женщин без клинико-морфологических изменений на шейке матки и другой гинекологической патологии с наличием ВПЧ высокого риска.

Для всех четырех интересующих переходов одного заболевания в другое полученные модели содержали по два показателя, для каждого из которых приводится коэффициент регрессии. Параметры и характеристики логистической регрессии представлены в таблице 1.

Таблица 1
Параметры и характеристики логистической регрессии для прогноза развития цервикальных интраэпителиальных неоплазий, ассоциированных с папилломавирусной инфекцией
Показатели Коэффициент регрессии± станд. ошибка Отношение шансов (95% ДИ) Оценка значимости Р
ПВИ без клинико-морфологических изменений на шейке матки - ЦИН I
Лизосомальная активность нейтрофилов крови, у.е. 0,05835±0,02961 1,06(1,00-1,12) 0,049
CD3+4+, ×109 -0,01062±0,006472 0,99 (0,98-1,00) 0,100
Константа -6,1852
Модель полностью: χ2[2] - 18,76; P<0,0001; Чувствительность - 100%, Специфичность - 90,91%; Площадь под ROC-кривой - 0,982±0,0315.
Хронический цервицит - ЦИН I
Активность фагоцитоза нейтрофилов слизи, % -0,2973±0,1610 0,74 (0,54-1,02) 0,065
CD3-19+, ×109 -0,03757±0,02116 0,96 (0,92-1,00) 0,076
Константа 21,8200
Модель полностью: χ2[2]=19,22; Р=0,0001; Чувствительность - 80,0%, Специфичность - 83,33%; Площадь под ROC-кривой - 0,933±0,0597
ЦИН I-ЦИН II
CD3+8+, % 0,3798±0,2203 1,46 (0,95-2,25) 0,085
ФНО-α крови, пг/мл 0,6303±0,9792 1,88 (0,26-12,8) 0,520
Константа -9,646
Модель полностью: χ2[2]=15,71; Р=0,0004; Чувствительность - 85,7%, Специфичность - 100%; Площадь под ROC-кривой - 0,905±0,061.
ЦИН II-ЦИН III
ИФН-α слизи, пг/мл -0,0007052±0,000416 0,999 (0,9985-1,00) 0,090
ФНО-α крови, пг/мл -3,4158±1,3393 0,033 (0,002-0,45) 0,011
Константа 6,3552
Модель полностью: χ2=20,69; Р<0,0001; Чувствительность - 100%, Специфичность - 87,5%; Площадь под ROC-кривой - 0,929±0,0368.

Для прогноза развития ЦИН I у женщин с ПВИ без клинико-морфологических изменений на шейке матки такими показателями стали: количество CD3+4+(×109/л) и лизосомальная активность нейтрофилов (у.е.) крови. Полученная модель является статистически значимой (; P<0,0001) и в 100% случаев прогнозирует развитие

ЦИН I у женщин с ПВИ без клинико-морфологических изменений на шейке матки.

Для прогноза развития ЦИН I у пациенток с хроническим цервицитом показателями, вошедшими в модель, стали активность фагоцитоза нейтрофилов (%) слизи и количество CD3-19+ (×109/л) крови. Полученная модель является статистически значимой (; Р=0,0001) и в 80% случаев прогнозирует развитие ЦИН I у пациенток с хроническим цервицитом.

Для прогноза развития ЦИН II у пациенток с ЦИН I в модель вошли следующие показатели: количество CD3+8+ (%) периферической крови и уровень ФНО-α крови (пг/мл). Полученная модель является статистически значимой (; Р=0,0004) и прогнозирует развитие ЦИН II у пациенток с ЦИН I в 85,7% случаев.

Для прогноза развития ЦИН III у пациенток с ЦИН II показателями, вошедшими в модель, стали уровень ИФН-α слизи (пг/мл) и ФНО-α крови (пг/мл) Полученная модель является статистически значимой (; P<0,0001) и прогнозирует развитие ЦИН III у пациенток с ЦИН II в 100% случаев.

Зная коэффициенты регрессии, рассчитывается Логит (Р) и далее - само значение Р:

где Р - вероятность отнесения пациента к группе риска, a i - коэффициенты регрессии, Xi - значения вошедших в модель показателей.

где e - константна, равная 2,718281828

Применение данных уравнений подразумевает формальную подстановку значений иммунологических показателей, полученных при обследовании каждой пациентки, и вычисление значения вероятности отнесения ее к группе риска. Если P<0,5, то у пациентки отсутствует риск, если P>0,5, то у пациентки присутствует риск прогрессии заболевания.

Для иллюстрации практического применения математической модели приводим клинические примеры.

Пример 1. Пациентка М., 32 года, на основании клинико-анамнестических, кольпоскопических и гистологических данных обследования, ей выставлен диагноз ЦИН II. При проведении иммунологического исследования получены следующие показатели: ФНО-α крови=1,352 пг/мл и ИФН-α слизи=489,99 пг/мл. Данные показатели были подставлены в полученную формулу:

Логит (Р)=6,3552+(-3,4158)×1,352+(-0,0007052)×489,99=1,391497452

Поскольку Р больше 0,5, то данную пациентку с ЦИН II следует причислить к группе риска по переходу в группу ЦИН III.

Пример 2. Пациентка Н., 26 лет, на основании клинико-анамнестических, кольпоскопических и гистологических данных обследования, ей выставлен диагноз ЦИН II. При проведении иммунологического исследования получены следующие показатели: ФНО-α крови=2,213 пг/мл и ИФН-α слизи=480 пг/мл. Данные показатели были подставлены в полученную формулу:

Логит (Р)=6,3552+(-3,4158)×2,213+(-0,0007052)×480=1,5424614

Поскольку Р меньше 0,5, то для данной пациентки с ЦИН II нет оснований причислять его к группе риска по переходу в группу ЦИН III.

Способ прогнозирования прогрессии цервикальных интраэпителиальных неоплазий (ЦИН), ассоциированных с папилломавирусной инфекцией (ПВИ), включающий определение иммунологических показателей в крови и цервикальном секрете пациента, отличающийся тем, что в качестве диагностического теста применяется значение коэффициента P, если значение коэффициента P больше 0,5 - группа риска прогрессии заболевания, при значении коэффициента P меньше или равном 0,5 - отсутствие риска прогрессии заболевания, вычисляемое с помощью математической модели P=1/(1+2,718281828-логит(P)), где логит(P)=константа+a1x1+a2x2:
1) для прогноза прогрессии ЦИН I у женщин с ПВИ без клинико-морфологичсских изменений на шейке матки константа = (-6,1852), a1=0,05835, x1 = лизосомальная активность нейтрофилов крови (у.е.), a2=(-0,01062), x2=CD3+4+(×109/л) крови;
2) для прогноза прогрессии ЦИН I у пациенток с хроническим первицитом константа = 21,8200, a1=(-0,2973), x1 = активность фагоцитоза нейтрофилов слизи (%), a2=(-0,03757), x2=CD3-19+(×109/л) крови;
3) для прогноза прогрессии ЦИН II у пациенток с ЦИН I константа = -9,646, a1=0,3798, x1=CD3+8+(%) крови, a2=0,6303, x2=ФНО-α крови (пг/мл);
4) для прогноза прогрессии ЦИН III у пациенток с ЦИН II константа = 6,3552, a1=(-3,4158), x1=ФНО-α крови (пг/мл), a2=(-0,0007052), x2=ИФН-α слизи (пг/мл).



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области диагностики злокачественной опухоли. Изобретение относится к способу улавливания, детекции, охарактеризовывания и количественного определения экзосом человека в небольших объемах жидкостей организма человека с использованием сэндвич-ELISA-теста.

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике персистенции онкогенных типов вируса папилломы человека в цервикальном эпителии. Изобретение может быть использовано в гинекологии, дерматовенерологии.
Изобретение относится к медицине и касается способа получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения, включающего иммунизацию животных клетками вилочковой железы человека, истощение полученной иммунной плазмы обработкой ее человеческой плазмой АВ(IV) группы, 3-этапное фракционирование белков плазмы полиэтиленгликолем-6000 (ПЭГ-6000), удаление из фракционированной смеси антител к нелимфоидным антигенам последовательной двукратной обработкой смесью отмытых донорских эритроцитов и однократной обработкой концентратом тромбоцитов всех четырех групп крови, очистку целевого продукта путем осаждения ПЭГ-6000, растворение полученных иммуноглобулинов в физиологическом растворе, добавление глицина и осветляющую и стерилизующую фильтрацию.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа определения в образце индивидуума белка нейтрофильного происхождения липокалина, связанного с желатиназой (NGAL), для определения острого повреждения почек у индивидуума, где преобладающее количество мономерной и/или гетеродимерной форм белка NGAL, по сравнению с димерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из почек индивидуума и что у индивидуума наблюдается острое повреждение почек, тогда как равное или преобладающее количество димерной формы белка NGAL, по сравнению с мономерной или гетеродимерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из нейтрофилов индивидуума и что указанный индивидуум не имеет острого повреждения почек; набора для определения в образце относительных количеств мономерной, димерной и гетеродимерной форм NGAL; применения набора в указанном способе.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа определения в образце индивидуума белка нейтрофильного происхождения липокалина, связанного с желатиназой (NGAL), для определения острого повреждения почек у индивидуума, где преобладающее количество мономерной и/или гетеродимерной форм белка NGAL, по сравнению с димерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из почек индивидуума и что у индивидуума наблюдается острое повреждение почек, тогда как равное или преобладающее количество димерной формы белка NGAL, по сравнению с мономерной или гетеродимерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из нейтрофилов индивидуума и что указанный индивидуум не имеет острого повреждения почек; набора для определения в образце относительных количеств мономерной, димерной и гетеродимерной форм NGAL; применения набора в указанном способе.

Изобретение относится к устройству и способу для количественного измерения аналита с использованием камеры. В частности, для сбора данных идентификационного кода, необходимых для получения точного результата анализа аналита.

Группа изобретений относится к индикаторным агентам для тестирования психических состояний посредством логистического регрессионного анализа, включающим по крайней мере три вида молекул, выбранных из группы, состоящей из IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, эотаксина, основного FGF, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IFN-α, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, PDGF-BB, RANTES, TNF-α, VEGF, CSF-2, TGF-β, нейротрофина 5, MCP-3, β-2-микроглобулина, ангиотензина II, CSF-3, CXC-хемокинового лиганда 1, CXC-хемокинового лиганда 5 и HGF; агентам для тестирования интенсивности психических расстройств, включающим по крайней мере три вида молекул, выбранных из вышеуказанной группы; а также к способу измерения психических состояний, включающему стадии измерения уровня факторов в биологическом образце с использованием тестового агента и сравнения количества, полученного в стадии измерения, с количеством индикаторного агента посредством пропорционального взвешивания; способу измерения психических расстройств, включающему стадии измерения уровня факторов в биологическом образце с использованием тестового агента и сравнения количества, полученного в стадии измерения, с количеством индикаторного агента посредством пропорционального взвешивания.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для оценки локального иммунитета эндометрия. Для этого на исследование проводят забор эндометриальной ткани у женщин с патологией эндометрия на 7-9-й день менструального цикла путем пайпель-биопсии.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для обнаружения злокачественных опухолей, включая рак молочной железы, рак почек. Для этого проводят измерение экспрессии полипептида, обладающего способностью связываться посредством реакции антиген-антитело с антителом против белка CAPRIN-1, имеющего любую из аминокислотных последовательностей с четными номерами SEQ ID NO:2-30 списка последовательностей, в образце, полученном из живого организма, посредством реакции антиген-антитело в образце, выделенном из живого организма.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и может быть использовано для прогнозирования развития системного воспалительного ответа у больных с инфекционным эндокардитом. Для этого в предоперационном периоде в крови пациентов определяют уровень интерлейкинов 1β, 4, 10. При одновременных значениях интерлейкина 1β более 2,0 пг/мл, интерлейкина 4 более 0,5 пг/мл и интерлейкина 10 менее 25 пг/мл прогнозируют развитие системного воспалительного ответа. Использование данного метода позволяет прогнозировать осложнения в раннем послеоперационном периоде у пациентов с инфекционным эндокардитом, оперированных в условиях искусственного кровообращения. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно способу получения противоопухолевого вакцинного препарата для лечения солидных опухолей. Способ получения противоопухолевого вакцинного препарата для лечения солидных опухолей, заключающийся в том, что производят отбор первоначального опухолевого материала, смешение и гомогенизацию в буферном растворе, неоднократное центрифугирование с отбором образующего осадка, осадок суспендируют в кислом буфере, перемешивают, нейтрализуют, центрифугируют, супернатат собирают, осуществляют обогащение и очистку полученного супернатата с помощью комбинации солевого осаждения и хроматографии на иммобилизованном протеине А или G, полученный раствор пропускают через колонки с иммобилизованными иммуноглобулинами человека класса IgG и иммобилизованными белками плаценты человека, получившиеся антитела подвергают ферментативной обработке для получения Fab- или F(ab)2-фрагментов, которыми иммунизируют животных, получают иммунные антисыворотки, выделяют из них суммарную фракцию иммуноглобулинов, пропускают ее через колонки, с иммобилизованными иммуноглобулинами человека класса IgG и иммобилизованными белками плаценты человека, прошедший через колонки раствор подвергают иммуноаффинной хроматографии на колонках с иммобилизованными иммуноглобулинами, полученными ранее на этапе очистки и обогащения, целевые продукты, специфически связываемые последними видами колонок, элюируют раствором, диссоциирующим комплексы антиген-антитело, концентрируют, фильтруют через антимикробные фильтры, смешивают с адьювантом. Препарат полученный вышеописанным способом позволяет повысить эффективность лечения солидных опухолей. 2 пр.
Изобретение относится к медицине и касается способа получения референс-панели образцов сывороток, предназначенной для оценки специфичности результатов серологической диагностики социально значимых заболеваний, включающего: исследование образцов доноров и пациентов на наличие инфекционного материала, отбор для отрицательной части референс-панели образцов, не содержащих антитела к вирусу гепатита С (ВГС), поверхностного антигена HBsAg вируса гепатита В (ВГВ), раннего белка р24 и антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ), а также антитела к Treponema pallidum, отбор для положительной части референс-панели образцов, содержащих антитела к ВИЧ, ВГС, HBsAg и Treponema pallidum и введение в отобранные образцы стабилизирующего состава. Изобретение обеспечивает создание такого способа получения референс-панели сывороток, который обеспечивает изготовление отрицательных сывороток панели, не содержащих HBsAg ВГС и антител к Treponema pallidum и к вирусам ВГС и ВИЧ, и позволяет сохранить специфические характеристики всех образцов панели сывороток в течение длительного времени (не менее 18 месяцев) при температуре хранении от 2 до 8°C. 3 з.п. ф-лы, 4 пр., 2 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу ранней диагностики аутоиммунного оофорита у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников. Сущность способа состоит в том, что у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников и неуточненной олигоменореей определяют методом ИФА в сыворотке крови уровень неоптерина. При значениях сывороточного содержания неоптерина 9,86 нмоль/л и более диагностируют аутоиммунный оофорит. Использование заявленного способа позволяет улучшить раннюю диагностику аутоиммунного оофорита c нормогонадотропной гипофункцией яичников и неуточненной олигоменореей. 1 табл., 3 прим.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике и касается способа прогнозирования развития плацентарной недостаточности с ранних сроков беременности. Способ включает: определение в сыворотке крови в ранние сроки беременности содержания интерлейкина 6 (IL-6), интерлейкина 8 (IL-8), растворимой сосудистой молекулы межклеточной адгезии (sVCAM), васкуло-эндотелиального фактора роста (VEGF) и big-эндотелина. Затем определяют прогностический индекс (PI) по формуле: PI=0,63697Х1-0,02367Х2+0,00235Х3-0,03931Х4-15,99295Х5-2,11547, где X1 - концентрация IL-6, пг/мл; Х2- концентрация IL-8, пг/мл; Х3 - концентрация sVCAM, нг/мл; Х4- концентрация VEGF, пг/мл; Х5 - концентрация big-эндотелина, фмоль/мл. При РI>0 прогнозируют развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности, а при РI<0 делают заключение о низком риске развития данного патологического состояния. Предлагаемый способ является малоинвазивным, позволяет с ранних сроков гестации выявить группу риска по развитию плацентарной недостаточности, что дает возможность осуществления превентивных мероприятий, направленных на профилактику формирования данного патологического состояния. Чувствительность предлагаемого способа составляет 77,4% специфичность - 85,6%. Эффективность способа - 81,5%. 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом. Для этого проводят определение содержания CD16+ нейтрофилов в костном мозге больного. При содержании CD16+ нейтрофилов в костном мозге менее 50% прогнозируют развитие инфекционного синдрома с клиническими проявлениями. Использования данного способа позволяет прогнозировать развитие инфекционного синдрома при манифестации острого лейкоза до проведения химиотерапии. 2 пр.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ иммунологического анализа белка CXCL1 человека. Измеряют CXCL1 человека или его фрагмент в образце, используя два или более типов моноклональных антител к CXCL1 человека или их фрагменты. Каждый из двух или более типов моноклональных антител к CXCL1 человека или их фрагментов специфично распознают любой из участков последовательности аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO:1-3, которые представляют собой частичные последовательности аминокислотной последовательности, составляющей белок CXCL1 человека. При этом два или более типов моноклональных антител к CXCL1 человека или их фрагментов специфично распознают участки последовательности, отличающиеся друг от друга. Представлены моноклональные антитела или их фрагменты, каждый из которых специфично распознает любой участок аминокислотной последовательности, представленный в SEQ ID NO:1-3, и имеет новую аминокислотную последовательность. Изобретение позволяет определять с высокой чувствительностью белок CXCL1 человека. 6 н. и 9 з.п. ф-лы, 9 ил., 1 табл., 21 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии и ортопедии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований костной системы. Для этого в образцах сыворотки крови методом иммуноферментного анализа определяют количественные значения уровней неоптерина NP, молекулы адгезии сосудистого эндотелия vCAM, молекулы межклеточной адгезии ICAM, фактора некроза опухоли TNF-α, интерлейкина-6 IL-6. Рассчитывают коэффициент К по формуле: K = N P + v C A M I C A M + T N F − α I L − 6 . При значении К≤12,5 диагностируют доброкачественный процесс, при значении К>12,5 - злокачественный процесс. Использование данного способа позволяет повысить объективность способа дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований костной системы путем использования комплекса выбранных иммунологических маркеров. 2 пр.

Группа изобретений относится к области медицинской диагностики, иммунологии и онкологии, в частности к новым онкомаркерам и способам диагностики онкологических заболеваний. Предложены новые антигены для проведения иммуноферментного анализа для выявления аутоантител, ассоциированных со злокачественными новообразованиями, а именно фрагменты плазминогена, содержащие кринглы. Предложен также способ выявления диагностического признака при онкологических заболеваниях, заключающийся в выявлении аутоантител типа IgA, IgG, IgM к следующим фрагментам плазминогена: тяжелая цепь (Glu-H), тяжелая цепь (Lys-H), легкая цепь (L), K1-4 (Tyr80-Ala440), K1-3 (Tyr80-Val338), K1-3 (Tyr80-Val354), K1-4 (Asn60-Pro447), K1-4 (Lys78-Pro447), K1-4 (Lys78-Pro446), K1-4 (Lys78-Lys468), K1-4,5 (Lys78-Arg530), K4-5 (Val355-Phe546), K1 (Tyr80-Glul64), K2-3 (Cysl65-Val338), K4 (Val354-Ala440), K5 (Ser441-Fhe546), K5 (Val442-Arg561), мини-плазмин в образце плазмы крови человека. Настоящая группа изобретений эффективна в ранней диагностике онкологических заболеваний. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно, к области биохимических исследований в нефрологии и может быть использовано для диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями (НСМИ). Способ включает оценку биологически значимых показателей у детей с первичным нефротическим синдромом без нарушения функций почек, для чего в моче методом твердофазного энзим-связанного иммуносорбентного анализа определяют содержание ИЛ-18. При его уровне от 74,7 до 540 пг на 1 мг креатинина диагностируют НСМИ у детей. Быстрая дифференциальная диагностика НСМИ с другими морфологическими формами гломерулопатий, позволит сразу проводить терапевтическое назначение более сильных, чем преднизолон иммуносупрессивных препаратов, например циклоспорина А. 2 пр.
Наверх