Способ диагностики спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности у детей с первичным перитонитом


 


Владельцы патента RU 2527332:

государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности у детей с первичным перитонитом. Способ заключается в том, что в пробе венозной крови определяют относительное содержание активированных классических моноцитов с фенотипом CD14bright CD16-HLA-DR+ от общего количества моноцитов с фенотипом CD14bright методом многоцветной проточной цитометрии и при его значении более 68,8% диагностируют спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности. Использование заявленного способа позволяет с высокой специфичностью и чувствительностью диагностировать спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, педиатрии и детской хирургии, и может быть использовано для диагностики спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности у детей с первичным перитонитом.

Вторичная иммунная недостаточность (ВИН) - это нарушение иммунной системы, которое развивается в позднем постнатальном периоде или у взрослых и не является результатом генетического дефекта. ВИН клинически проявляется часто рецидивирующими или хроническими бактериальными, грибковыми, вирусными инфекциями бронхолегочного аппарата, придаточных пазух носа, урогенитального тракта, глаз, кожи, мягких тканей, вызванных оппортунистическими и условно-патогенными микроорганизмами. Для ВИН характерен недостаточный ответ на адекватно проводимую терапию и другие традиционные методы лечения. Для спонтанной формы ВИН характерно отсутствие видимой причины, вызвавшей нарушение и/или недостаточность защитной функции иммунной системы. Наиболее трудными для диагностики являются спонтанные формы ВИН, протекающие без явных изменений базовых показателей иммунной системы (Сетдикова Н.Х., Латышева Т.В., Пинегин Б.В., Ильина Н.И.. Иммунодефициты: принципы диагностики и лечения. ФАРМАРУС ПРИНТ Москва - 2006, 20 с.).

Первичный перитонит (Primary peritonitis) - острое воспаление брюшины при отсутствии источников воспаления в брюшной полости. Распространенность первичного перитонита (ПП) в настоящее время составляет от 1 до 4% всех случаев острого живота, потребовавших хирургического вмешательства. Причины возникновения ПП не известны. Развитие ПП наиболее вероятно при наличии очагов хронической инфекции, частых заболеваниях верхних дыхательных путей, органов мочевыделительной и половой систем, острой кишечной инфекции и сенсибилизации организма. По нашим данным примерно за месяц до возникновения ПП дети переносят острое хроническое заболевание или его обострение. Наиболее часто ПП выявляют у девочек в возрасте от 5 до 10 лет. Признаки ПП развиваются стремительно за несколько часов на фоне здоровья - у ребенка появляются классические признаки перитонита (лихорадка, боль в животе, симптомы раздражения брюшины). На современном этапе наиболее объективным и точным методом диагностики и дифференциальной диагностики ПП является лапароскопия. Хирургическое вмешательство проводят в ближайшие 10 часов от начала заболевания, объем вмешательства заключается в ревизии брюшной полости и ее санации от воспалительного выпота. После операции пациенты получают антибиотикотерапию, на фоне которой происходит быстрое выздоровление, чаще всего без осложнений. Однако пациентам с ПП необходимо тщательное обследование для выявления хронических очагов инфекции и заболеваний, предрасполагающих к воспалению, в частности, пузырно-мочеточниково-лоханочный рефлюкс. В послеоперационном периоде при длительном наблюдении у большей части детей выявляют боли в животе, частые инфекции верхних дыхательных путей, инфекции мочевыводящих путей, т.е. сохранение жалоб, которые были до операции, что означает неэффективность проведенного хирургического вмешательства и сохранение основного патогенетического пускового механизма развития воспаления брюшины.

Отсутствие единства в трактовке причин возникновения ПП ставит перед исследователями актуальную задачу выявления особенностей иммунного ответа у детей, перенесших ПП.

Известен способ диагностики состояния иммунной системы у детей с ПП, который стандартно и широко выполняют в практике хирургических стационаров до и после операции: у всех пациентов с перитонитом, как первичным, так и другой этиологии, оценивают показатели клинического анализа крови. В подавляющем большинстве случаев выявляют лейкоцитоз в пределах 15000-20000×109/л, за счет нейтрофилов и сдвигом формулы влево (Баиров Г.А. "Срочная хирургия детей", СПб: Питер, 1997. - 464 с., С.-333).

Первыми лабораторными критериями, позволяющими заподозрить у больного иммунодефицитное состояние, являются содержание лейкоцитов, в частности, лимфоцитов и нейтрофилов и концентрация общего белка и его фракций. При более углубленном исследовании состояния иммунной системы оценивают содержание иммуноглобулинов основных классов (IgG, IgA, IgM); компоненты комплемента, субпопуляционный состав лимфоцитов.

Методически для формализации проведения оценки состояния иммунной системы диагностические исследования могут быть условно разделены на тесты 1-го и 2-го уровней (Сетдикова Н.Х., Латышева Т.В., Пинегин Б.В., Ильина Н.И.. Иммунодефициты: принципы диагностики и лечения. ФАРМАРУС ПРИНТ Москва - 2006, 20 с.). Тесты 1-го уровня - ориентировочные и направлены на выявление грубых дефектов иммунной системы; тесты 2-го уровня - функциональные и направлены на идентификацию конкретной патологии иммунной системы. Тесты 1-го уровня включают оценку:

A) фагоцитарного звена: абсолютное содержание нейтрофилов и моноцитов, их фагоцитарная и окислительная активность интенсивности поглощения микробов нейтрофилами и моноцитами (индекс фагоцитоза 2,3-3,0);

Б) системы гуморального иммунитета: концентрация иммуноглобулинов G, А, М, Е и абсолютное и относительное содержание В-лимфоцитов (по маркерам CD 19 и/или CD20) в периферической крови;

B) клеточного иммунитета: абсолютное и относительное содержание лимфоцитов, зрелых Т-лимфоцитов (CD3) и их основных субпопуляций и пролиферативного ответа на действие митогенов: фитогемагглютинина и конканавалина А.

Совокупность тестов 1-го уровня, применяемая для оценки функционирования основных компонентов иммунной системы, принята авторами за прототип.

Недостатком прототипа является отсутствие оценки субпопуляционного состава моноцитов и невозможность выявления особенности иммунного ответа у детей с первичным перитонитом.

Техническим результатом изобретения является создание способа диагностики спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности у детей (преимущественно девочек от 5 до 10 лет) с первичным перитонитом, обладающего высокой точностью и специфичностью, позволяющего выявить особенность иммунного ответа и предупредить возникновение рецидива.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности у детей с первичным перитонитом, включающем исследование венозной крови, согласно изобретению определяют относительное содержание активированных классических моноцитов с фенотипом CD14bright CD16-HLA-DR+ от общего количества моноцитов с фенотипом CD14bright методом многоцветной проточной цитометрии и при его значении более 68,8% диагностируют спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности.

Впервые детям с первичным перитонитом проведено иммунологическое обследование, оценена особенность иммунного ответа путем оценки субпопуляций моноцитов.

В иммунологическое обследование были включены 53 ребенка в возрасте от 3 до 13 лет, составивших четыре группы:

1 группа (n=13, девочки) - больные ПП через 4-20 дней после операции с клинически подтвержденными хроническими, рецидивирующими инфекциями, что позволило заподозрить спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности;

2 группа (n=14, соотношение мальчики: девочки = 8:6) - пациенты с вторичным перитонитом (гангренозно-перфоративный аппендицит, перитонит, аппендикулярный перитонит, АП) через 5-9 дней после операции, без хронических, рецидивирующих инфекций, что позволило клинически исключить спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности;

3 группа (n=15, соотношение мальчики: девочки = 7:8) - пациенты, не подвергавшиеся хирургическому вмешательству, без признаков воспаления, поступившие для планового оперативного лечения;

4 группа (девочки, n=11) - пациенты с первичным перитонитом через 180-1095 дней (3 месяца - 3,5 года) после операции с клинически подтвержденными хроническими, рецидивирующими инфекциями, что позволяет заподозрить спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности.

Оценку состояния иммунной системы пациентов с первичным перитонитом (1 группа) проводили в сравнении со 2, 3, 4 группами сопоставления:

2 группа - для сопоставления параметров состояния иммунной системы у пациентов с вторичным перитонитом, обусловленным наличием четкого очага воспаления в брюшной полости, то есть перитонитом другой этиологии, в краткосрочном послеоперационном периоде;

3 группа - для сопоставления параметров состояния иммунной системы детей без признаков воспаления и с отсутствием хронических заболеваний инфекционно-воспалительной природы в анамнезе;

4 группа - для сопоставления состояния иммунной системы пациентов ПП в краткосрочном и долгосрочном послеоперационном периодах.

Все пациентки 1 и 4 групп, оперированные с послеоперационным диагнозом первичный перитонит, из социально благополучных семей, желанные, любимые и ухоженные дети. В большинстве случаев родители девочек безуспешно пытаются справиться с их частыми воспалительными заболеваниями.

После получения информированного согласия родителей детей был проведен комплекс исследований образцов периферической крови:

1. Клинический анализ крови (гематологический анализатор UniCel D×H 800 Beckman Coulter) с определением показателей красной крови, а также содержание лейкоцитов, в том числе нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов, базофилов;

2. Развернутый анализ клеточного состава крови по протоколу Hematoflow с определением относительного и абсоютного содержания Т-лимфоцитов и НК клеток в зависимости от экспрессии маркера CD 16; В-лимфоцитов, незрелых гранулоцитов; моноцитов в зависимости от экспрессии маркера CD 16;

3. Анализ субпопуляционного состава лимфоцитов, включая относительное и абсолютное содержание Т-лимфоцитов и их субпопуляций (Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов), В-лимфоцитов, НК и Т-НК клеток, активированных и неактивированных лимфоцитов;

4. Анализ субпопуляционного состава моноцитов, включая определение относительного содержания (от CD 14 bnght моноцитов) CD16+и CD 16" моноцитов в зависимости от экспрессии HLA-DR.

5. Параметры гуморального иммунитета, включая уровень иммуноглобулинов основных классов (IgM, IgA и IgG), компоненты комплемента C3 и C4, антистрептолизин и ревматоидный фактор были оценены методом кинетической нефелометрии (Immage 800, Beckman Coulter), а также оценен уровень циркулирующих иммунных комплексов и антистрептокиназы;

6. Оценка функциональной активности клеток включала:

а) определение фагоцитарной активности нейтрофилов с использованием частиц латекса и учетом результатов исследования с применением световой микроскопии;

б) определение способности клеток к хемотаксису проведено с помощью реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) с фитогемагглютинином (ФГА).

Было проведено исследование информативности полученных показателей с точки зрения различения 4-х групп пациентов с использованием программы Statistica 6.0. Был проведен однофакторный дисперсионный анализ ANOVA. В случае выявления значимых различий было проведено попарное сравнение групп с помощью критерия множественных сравнений Шеффе.

Наиболее высокий уровень статистически значимых различий 1 группы (ПП) от 2 и 3 групп выявлен по показателям, описывающим классические активированные моноциты CD14bright CD16-HLA-DR+: относительное содержание указанных клеток от всех моноцитов (CD14bright), F=6,42; р=0,01 (табл.).

Для определения чувствительности и специфичности описываемого способа использован ROC-анализ, проведенный с помощью MedCalc Software. Способ обладает высокой чувствительностью - 72,7% и специфичностью - 93,3%.

Специфичность способа заключается в том, что повышение относительного содержания активированных классических моноцитов показывает высокую вероятность неадекватного иммунного ответа на патогены.

Чувствительность способа заключается в том, что у детей 3-13 лет с хроническими часто рецидивирующими заболеваниями высока вероятность повышенного относительного содержания активированных классических моноцитов, что является иммунологическим признаком спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности и может быть предрасполагающим фактором к развитию первичного перитонита.

В таблице представлена сравнительная характеристика содержания классических активированных моноцитов у пациентов 1-4 групп.

Показатель Группы Отличия групп, F=6,42; р=0,01
1 n=13 2 n=14 3 n=15 4 n=11
Классические активированные моноциты, относительное количество (CD16-DR+, % от общего количества CD14bright моноцитов) 80,8±14,3 51,7±26,9 43,3±1 9,3 51,1±27,5 1 vs 2; 1 vs 3

Как видно из таблицы, при первичном перитоните происходит повышение относительного содержания классических активированных CD14brightCD16- HLA-DR+ моноцитов и соответственно значительно уменьшается относительное содержание классических неактивированных CD14brightCD16-HLA-DR- моноцитов.

Таким образом, при первичном перитоните можно говорить об изменении соотношения субпопуляций моноцитов относительно пациентов с выраженным гнойным воспалением (аппендикулярный перитонит, 2 группа) и здоровых детей (3 группа) и о спонтанной форме вторичной иммунной недостаточности по отношению именно к этому виду моноцитов.

HLA-DR - белок, принадлежащий к молекулам гистосовместимости II класса. Этот белок экспрессируется в основном на антиген-презентирующих клетках (АПК), таких как: моноциты, макрофаги, дендритные клетки, В-клетки. Повышение экспрессии HLA-DR+ происходит при воспалительных процессах под действием цитокинов.

Проведенные исследования показали, что наиболее информативной для данного способа является оценка экспрессии HLA-DR+ на классических моноцитах (CD14brightCD16-). При сравнительном анализе исследуемых групп пациентов было выявлено пороговое значение, равное 68,8%, моноцитов с фенотипом CD14bright CD16-HLA-DR+ относительно общего количества моноцитов с фенотипом CD14bright, при котором выявляется спонтанная форма вторичной иммунной недостаточности у детей с первичным перитонитом.

Способ выполняют следующим образом.

Для определения относительного содержания активированных классических моноцитов (CD14brightCD16-HLA-DR+) венозной крови используют метод иммунофенотипирования на проточном цитометре.

Предварительно производят подготовку пробирки с пробой венозной крови. Для этого в пробирку вносят аликвоту периферической крови из пробирки с ЭДТА и реактивы: диагностические моноклональные антитела CD14-FITC, CD16-PE, CD45-ECD и HLADR-PC5. После перемешивания на вортексе образец инкубируют 10-15 минут при комнатной температуре в защищенном от света месте. После этого в пробирку добавляют необходимый объем лизирующего раствора в объемном соотношении 1:10 (кровь: лизирующий раствор). После перемешивания на вортексе образец инкубируют не менее 10 минут при комнатной температуре в защищенном от света месте.

Вторым этапом метода образцы анализируют на проточном цитофлуориметре. Получаемые данные представляют графически - на цитограммах и в числовом отражении - как относительное содержание популяций моноцитов. Таким образом, получают процентное содержание активированных классических моноцитов с фенотипом CD14bright CD16-HLA-DR+ относительно общего количества моноцитов с фенотипом CD14bright. Если полученное значение превышает 68,8%, диагностируют спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности.

Способ иллюстрируется следующим клиническим примером.

Пример. Пациентка А., 3 года. Поступила в стационар с подозрением на острый аппендицит, острый гастроэнтерит.

Анамнез заболевания: поступила через 5 часов от появления интенсивной постоянной боли в животе без четкой локализации, которая не иррадиировала и не уменьшалась от приема спазмолитиков. Также отмечалась тошнота, рвота 2 раза без патологических примесей, оформленный стул. Лихорадила максимально до 38°С.

Анамнез жизни: доношенная полновесная девочка родилась с весом 3100 г., оценкой по Апгар 7/8 баллов. Прививки по календарю. Состоит на диспансерном учете у офтальмолога с диагнозом гиперметропический астигматизм и у хирурга с диагнозом гемангиома передней брюшной стенки и спины.

Перенесенные заболевания (выписка из амбулаторной медицинской карты). Впервые заболела в 9 месяцев острым бронхитом. До 3х лет перенесла острый гастроэнтерит; ОРВИ (ринит, фарингит, трахеит) 9 раз, в одном случае осложнившийся риносинуситом, тубоотитом; инфекционно-аллергический конъюнктивит. С 3х лет ставились диагнозы: за 6 мес до операции крапивница (без положительного эффекта от приема антигистаминных препаратов), за 5 мес - вирусная экзантема, за 4 мес - аллергодерматит, за 2 мес ОРВИ, острый ринофарингит, за 1 мес - лакунарная ангина.

В стационаре через 15 часов после поступления выполнена операция - лапаротомия, доступ в правой подвздошной области поперечный. Выпот мутный, липкий в умеренном количестве. При ревизии брюшной полости и малого таза патологии не выявлено. Червеобразный отросток не изменен, однако из-за аппендэктомического доступа выполнено его удаление. Операционная рана ушита наглухо. Послеоперационный диагноз - первичный перитонит. Получала клафоран и амикацин в возрастной дозировке одним курсом, после - флагил ректально. Послеоперационный период без осложнений, лихорадила субфебрильно. Госпитализация в отделение реанимации не потребовалась. Девочка выписана из стационара на 8 сутки.

Бактериологическое обследование. В посеве выпота из брюшной полости - E.coli. В посеве из носа, зева S.aureus. Мазки из вульвы: лейкоциты 3-11 в поле зрения, эпителиальные клетки, плоский эпителий в умеренном количестве, слизь, флора отсутствует. Посев кала на дизентерийную группу и РИГА с кишечной группой отрицательные.

Лабораторное обследование. При поступлении клинический анализ крови: гемоглобин (Hb) 122 г/л, эритроциты (Er) 4* 1012/л, гематокрит (Ht) 34%, тромбоциты (Тц) 347* 1012/л, СОЭ 4 мм/час, лейкоциты 12*109/л: палочкоядерные 20%, сегментоядерные 68%, эозинофилы 1%, моноциты 3%, лимфоциты 8%.

Проведено иммунологическое обследование. На 4 сутки после операции по стабилизации состояния взята кровь из вены (в 1000, натощак). Все показатели в норме.

Относительное от общего числа моноцитов (CD14+) содержание классических, HLA-DR позитивных моноцитов (CD14+CD16-HLA-DR+)=85,5%. Таким образом, в соответствии с предлагаемым способом у девочки выявлена спонтанная форма вторичной иммунной недостаточности.

Предлагаемый способ позволяет диагностировать спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности у детей, перенесших первичный перитонит, и принять своевременные меры для предупреждения рецидива. Способ обладает высокой специфичностью и чувствительностью.

Способ диагностики спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности у детей с первичным перитонитом, включающий исследование венозной крови, отличающийся тем, что определяют относительное содержание активированных классических моноцитов с фенотипом CD14bright CD16-HLA-DR+ от общего количества моноцитов с фенотипом CD14bright методом многоцветной проточной цитометрии и при его значении более 68,8% диагностируют спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой способ прогнозирования развития пороговой стадии ретинопатии недоношенных у детей без офтальмоскопических признаков заболевания, отличающийся тем, что на сроке по 33 неделю гестационного возраста в сыворотке крови определяют содержание фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и при уровне VEGF, равном или превышающем 1300 пг/мл, прогнозируют развитие пороговой стадии ретинопатии недоношенных.
Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения функциональной активности ионизированного кальция (ФАИ Ca2+) в сыворотке крови человека.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и представляет собой способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень липопротеинов высокой плотности и при величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз.
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, может быть использовано для титрования групповых антител системы АВО. Для определения титра естественных антител в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений сыворотки крови.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии и гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики аутоиммунного поражения различных структур вегетативной нервной системы (ВИС), регулирующих моторику желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).

Изобретение относится к медицине и описывает способ детекции поврежденных влажностью влагочувствительных реагентов, где указанные реагенты приводят в контакт с образцом, содержащим воду, и далее выявляется присутствие в образце анализируемого вещества, по его реакции с указанными влагочувствительными реагентами, причем указанный способ включает: (a) измерение отражения света при длине волны, характерной для продуктов указанной реакции указанных влагочувствительных реагентов с анализируемым веществом в двух заданных временных точках после контакта указанных реагентов с указанным образцом; (b) измерение в тех же двух заданных временных точках отражения света при длине волны, характерной для эталонного инфракрасного красителя, причем указанный краситель объединен с указанными влагочувствительными реагентами и имеет характерную длину волны, отличающуюся от длины волны, измеряемой в п.(a), по меньшей мере на 120 нм; (c) расчет соотношения показателей отражения, измеренных при длинах волн согласно пп.(a) и (b), и заключение о том, что реагенты имеют сниженную, чем ожидалось, активность и повреждены влажностью, на основании различия в указанном соотношении для указанных двух заданных временных точек.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения интерферон-γ-продуцирующих Т-лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе. Сущность способа состоит в том, что осуществляют ингибирование внутриклеточного транспорта - брефелдином А в клеточной культуре, далее подвергают немедленной обработке флуоресцеинизотиоционат-меченными анти-СD3 антителами, затем проводят стимуляцию синтеза интерферона-γ, фиксацию, пермеабилизацию, окраску фикоэритрин-меченными анти-интерферон-γ моноклональными антителами и осуществляют цитометрию, наблюдают совпадение флуоресцентной метки СD3-маркера в клеточной культуре с таковой, определяемой на основании контролируемого метода.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования задержки внутриутробного роста плода. Для этого в венозной крови женщины на ранних сроках беременности определяют относительное содержание CD3+CD16+56+-лимфоцитов, уровня С3-компонента комплемента и растворимого рецептора фактора некроза опухоли (sTNF-R).

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования течения и исходов бактериальных гнойных менингитов (БГМ) различной этиологии у детей.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости. Способ включает исследование ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител, с последующим анализом результатов исследований, при этом ротовую жидкость забирают у пациента для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости, в качестве биомаркера выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера ММП 8 в ротовой жидкости группы клинического контроля принимают уровень 23,85-39,65 нг/мл, и при содержании ММП 8 в количестве 611,32-792,00 нг/мл диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента, а при содержании ММП 8 в количестве 496,86-570,33 нг/мл диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента, также определяют количественное содержание матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера ММП 9 группы клинического контроля принимают уровень 108,14-180,47 нг/мл, и при содержании ММП9 в количестве 326,43-458,23 нг/мл диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента, а при содержании ММП 9 в количестве 782,13-906,60 нг/мл диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента. Способ обеспечивает значительное повышение точности, чувствительности дифференциальной экспресс-диагностики, достижение высокой вероятности выявления процессов доброкачественных и злокачественных новообразований в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, а также значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала. 2 з.п. ф-лы, 6 пр.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности, к патологической гистологии. Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят включает морфологическую оценку мазков крови и пунктата костного мозга больных цыплят. В мазках крови и пунктата костного мозга выявляют вирусиндуцированные апоптозные тельца, и при наличии в поле зрения 3-5 и более апоптозных телец ставят диагноз на инфекционную анемию цыплят. Изобретение обеспечивает снижение трудоемкости способа и сроков постановки диагноза, а также позволяет диагностировать скрытое течение инфекции. 9 табл., 3 пр., 6 ил.

Группа изобретений относится к области биотехнологии, а именно к исследованию биомолекулярных взаимодействий и детектированию биомолекул с использованием поверхностного плазмонного резонанса. Описаны биологический сенсор, а также способ создания биологического сенсора с использованием тонких пленок на основе графена, оксида графена или однослойных или многослойных углеродных нанотрубок. Биологический сенсор состоит из подложки, металлической пленки, на поверхность которой нанесен промежуточный связующий слой, выполненный из тонкой пленки из графена, или тонкой пленки оксида графена, или тонкой пленки из углеродных нанотрубок. На поверхность промежуточного связующего слоя конформно и однородно адсорбирован биоспецифический слой. В качестве биоспецифического слоя может выступать слой молекул связывающего партнера анализируемого вещества или слой из комплекса биологических молекул, способных химически взаимодействовать с молекулами связывающего партнера и образовавших с ними комплекс. Также в качестве биоспецифического слоя может выступать слой гидрогеля, на который осаждены молекулы связывающего партнера и/или комплекс из молекул связывающего партнера и биологических молекул, которые могут образовывать химическую связь с молекулами связывающего партнера. Описанный способ получения биологического сенсора включает в себя стадии нанесения металлической пленки, промежуточного связующего слоя и биоспецифического слоя. Достигается высокая чувствительность биосенсора в сочетании с высокой биоспецифичностью; расширение спектра применения устройства; защита металлической пленки от воздействий внешней среды; возможность детектирования крупных биологических объектов. 2 н. и 25 з.п. ф-лы, 9 ил.
Настоящее изобретение относится к иммунологическому тесту для обнаружения и специфического определения аутоантител против антигенов семенников, которые присутствуют при воспалительных заболеваниях половой системы самцов млекопитающих, в биологическом образце самца млекопитающего, в частности для обнаружения тестикулярных аутоантител к ER-60 и/или трансферриновых аутоантител. Представленный иммунологический тест позволяет эффективно и просто определить наличие иммунологического и связанного с инфекцией бесплодия у самцов млекопитающих, в частности у людей. 2 н. и 4 з.п.ф-лы, 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической лабораторной диагностике. Предложен биологический микрочип для выявления и многопараметрического анализа противохолерных антител в сыворотке крови человека, содержащий массив дискретно нанесенных и иммобилизованных на поверхности подложки O-антигенов V. cholerae и холерного токсина, сгруппированных в отдельные зоны. Изобретение обеспечивает проведение параллельного иммунологического анализа нескольких образцов сыворотки крови человека на наличие противохолерных антител к широкому спектру антигенов возбудителя холеры с определением иммуноглобулинов класса G и M за короткое время. 2 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования развития гематогенных метастазов после комбинированного лечения при раке почки. Для этого в ткани опухоли определяют экспрессию NF-kB p50, HIF-1α содержание сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF. Рассчитывают дискриминантные функции Y1, Y2 по уравнениям: Y1=-3,2+0,026·Х1+0,03·Х2-0,02·Х3+0,34·Х4+0,3·Х5; Y2=-33,3-0,01·Х1+0,11-Х2-1,2·Х3+1,57·Х4+1,8·Х5, где X1 - тотальная активность протеасом ·10-3 МЕ/мг белка; Х2 - содержание VEGF, пг/мг белка ; Х3 - экспрессия HIF-1, УЕ/мг белка в лунке; Х4 - экспрессия NF-kВ p50, УЕ/мг белка в лунке. При значениях Y1>Y2 прогнозируют отсутствие, а при Y1<Y2 - развитие гематогенных метастазов. Использование данного способа позволяет прогнозировать прогрессирование рака почки, а следовательно, назначить своевременное назначение наиболее адекватных лечебных мероприятий. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному полипептиду, который является биологической мишенью для ингибирования клетки-метанопродуцента, а также к выделенному полинуклеотиду, который кодирует этот полипептид. Раскрыты вектор экспрессии и клонирующий вектор, содержащие этот полинуклеотид, и клетки-хозяева, содержащие указанный вектор экспрессии. Описаны молекула-конъюгат или слитая молекула для ингибирования клетки-метанопродуцента, а также антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается с вышеуказанным полипептидом. Изобретение также охватывает фармацевтическую композицию и способы ингибирования и идентификации клетки-метанопродуцента с использованием описанных молекулы-конъюгата или слитой молекулы и антитела или его фрагмента. Изобретение позволяет эффективно ингибировать клетки-метанопродуценты. 13 н. и 6 з.п. ф-лы, 9 ил., 6 пр.
Изобретение относится к медицинской психологии и психиатрии, может быть использовано для прогноза развития психической дезадаптации. Задачей предлагаемого изобретения является возможность прогнозирования развития психической дезадаптации на раннем донозологическом этапе. Поставленная задача решается путем определения в периферической крови испытуемых иммунологических показателей, и при одновременном содержании В-лимфоцитов CD72+ - фенотипа 7% и менее, лимфоцитов с маркерами поздней активации HLADR 14% и менее, концентрации сывороточного IgA 1,96 г/л и менее прогнозируют формирование психодезадаптационного состояния на стадии психоадаптационного состояния. Техническим результатом является возможность прогнозировать переход психоадаптацонного состояния как раннего этапа напряжения адаптационных механизмов без признаков их истощения в психодезадаптационное состояние со снижением адаптивных возможностей индивида, наличием признаков психического истощения и вероятного предболезненного состояния. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, иммунохимии, и касается диагностики вируса простого герпеса первого типа методом твердофазного иммуноферментного анализа. Изобретение представляет собой способ получения иммуносорбента для диагностики вируса простого герпеса 1 типа, включающий предварительную обработку полимерного твердофазного носителя, на который сорбируется антиген вируса герпеса 1 типа, водным 20% раствором полиэтиленгликоля (ПЭГ-20), с последующей адсорбцией на носителе в 0,2M карбонат-бикарбонатном буферном растворе с pH 9,6 лизатного высокоочищенного антигена вируса герпеса 1 типа, приготовленного из штамма вируса простого герпеса 1 типа - АТСС VR-539, отмывку, лиофильную сушку, инкубацию сорбированных антигенов с блокирующим раствором. Использование натурального лизатного высокоочищенного антигена вируса герпеса 1 типа АТСС-VR-539 позволяет значительно повысить чувствительность анализа, система блокировки на основе триса позволяет нейтрализовать нежелательные неспецифические реакции. Также использование изобретения приводит к улучшению условий сохранения активности реагентов на поверхности твердофазного носителя, уменьшению расхода реагентов. Использование полиэтиленгликоля при обработке планшета повышает специфичность и чувствительность набора. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии и детской неврологии, и может использоваться для прогнозирования риска развития поражения центральной нервной системы (ЦНС) у новорожденных детей с различным сроком гестации в неонатальном периоде. Сущность способа: определяют уровень васкулоэндотелиального фактора роста и нейроспецифической енолазы в сыворотке крови. Затем рассчитывают вероятность риска развития тяжелого поражения центральной нервной системы р по формуле: p=1/(1+e-F), где е - основание натурального логарифма = 2,718; F - разделяющая функция, которую рассчитывают по формуле: F=0,0235·VEGF-4,5·NSE-2,46, где VEGF - содержание васкулоэндотелиального фактора роста в сыворотке крови; NSE - содержание нейроспецифической енолазы в сыворотке крови. При p равном либо более 0,5 прогнозируют низкий риск, а при p менее 0,5 прогнозируют высокий риск развития тяжелого поражения ЦНС. Способ обеспечивает высокую чувствительность, диагностическую точность и информативность способа, дает возможность расширить область применения, в частности, для новорожденных с различным сроком гестации. 2 пр.
Наверх