Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят



Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят
Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят
Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят
Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят
Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят
Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят

 


Владельцы патента RU 2527696:

Селиханова Марина Константиновна (BY)
Алиев Алаутдин Серажутдинович (RU)
Алиева Айзанат Кадыровна (RU)
Громов Игорь Николаевич (BY)
Бурлаков Максим Викторович (RU)

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности, к патологической гистологии. Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят включает морфологическую оценку мазков крови и пунктата костного мозга больных цыплят. В мазках крови и пунктата костного мозга выявляют вирусиндуцированные апоптозные тельца, и при наличии в поле зрения 3-5 и более апоптозных телец ставят диагноз на инфекционную анемию цыплят. Изобретение обеспечивает снижение трудоемкости способа и сроков постановки диагноза, а также позволяет диагностировать скрытое течение инфекции. 9 табл., 3 пр., 6 ил.

 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к патологической морфологии, и может быть использовано в ветеринарной практике при проведении прижизненной диагностики инфекционной анемии цыплят.

Инфекционная анемия цыплят (ИАЦ, цирковирусная инфекция, «синее крыло») - высококонтагиозная вирусная болезнь птиц раннего возраста, характеризующаяся поражением кроветворной и иммунной систем, серозно-геморрагическими отеками подкожной клетчатки, кровоизлияниями и некрозами кожи [3]. Данная болезнь впервые была зарегистрирована в Японии в 1979 году [1]. В настоящее время вспышки инфекционной анемии регистрируются во многих странах с развитым птицеводством, в том числе и в России [3, 5]. Инфекционная анемия наносит значительный экономический ущерб, который обусловлен гибелью птицы, низкими приростами и оплатой корма, снижением категорийности тушек, повышенной выбраковкой, расходами на лечение вторичных инфекций и проведение соответствующих ветеринарно-санитарных мероприятий.

Проявление болезни у цыплят чаще всего является следствием первичного инфицирования серонегативных родителей в начале или на пике яйценоскости. При этом у кур-несушек болезнь клинически не проявляется, сохраняются высокие показатели яйценоскости, оплодотворяемости и выводимости инкубационных яиц. Однако в течение 3-6 недель инкубационное яйцо, полученное от инфицированного поголовья, служит потенциальным источником заражения потомства. За этот период у инфицированных родителей вырабатывается достаточное количество антител к вирусу ИАЦ, которые препятствуют дальнейшей вертикальной передаче возбудителя [7, 13]. Цыплята с пассивным иммунитетом устойчивы как к экспериментальному, так и естественному заражению вирусом ИАЦ при условии, если у них отсутствуют признаки иммуносупрессии, вызванные действием других вирусов [12]. Кроме того, инфекционная анемия очень часто протекает в ассоциации с другими вирусными инфекциями с развитием тяжелого комбинированного иммунодефицита [13, 14, 17]. В таких случаях доминируют морфологические признаки осложняющих болезней - инфекционной бурсальной болезни (ИББ), а также реовирусной инфекции. В результате своевременная диагностика инфекционной анемии оказывается весьма затруднительной [6].

Известны способы диагностики инфекционной анемии цыплят, основанные на использовании различных лабораторных тестов [6, 8, 9, 11, 13]. Способы выделения и идентификации вируса инфекционной анемии цыплят имеют недостатки, прежде всего связанные с недостаточной чувствительностью (иммунофлуоресцентный метод), большой длительностью, трудоемкостью, неуниверсальностью процедуры (культуральный метод). Выявление антител к вирусам в сыворотке цыплят с помощью твердофазного ИФА является ретроспективным методом (выявляет не самого возбудителя, а регистрирует ответ организма на инфекцию). Выявление методом ИФА вирусного антигена в биологических образцах ограничено недостаточной чувствительностью. Следовательно, традиционные методы, в силу перечисленных ограничений, не позволяют своевременно и с высокой чувствительностью выявлять вируса инфекционной анемии цыплят в исследуемых образцах.

В настоящее время для диагностики инфекционной анемии цыплят используют полимеразная цепная реакция (ПЦР), для выполнения которой (помимо одинаковых для всех ПНР наборов реагентов, отличающихся высокой стоимостью) при диагностике определенной инфекции необходимо наличие специфических праймеров. Обычно эти короткие олигонуклеотиды, длиной порядка двадцати оснований, получаемые в результате химического синтеза. Они комплементарны искомой ДНК-мишени, гибридизуются с ней, а затем копируются полимеразой. Однако ПЦР имеет неоспоримые недостатки, заключающиеся в ряде его преимуществ. И в первую очередь, высокая чувствительность метода (позволяет выявить всего лишь одну молекулу нуклеиновой кислоты в пробе) нередко приводит к получению ложноположительного результата, связанного либо с персистенцией вирусов, либо с контаминацией образцов на разных этапах диагностического процесса (забор материала, хранение и транспортировка, пробоподготовка и т.д.) [15, 16]. Поэтому ПЦР требует для своего выполнения несколько специальных помещений для разделения разных этапов диагностического процесса, снабженных отдельными комплектами оборудования, материалов, лабораторной одежды. Во-вторых, спектр применения ПЦР в условиях практической ветеринарии пока ограничивается и достаточно высокой стоимостью препаратов, квалификацией исследователей и необходимостью специального оборудования.

Наиболее близким решением, принятым за прототип, является известный способ диагностики инфекционной анемии цыплят, основанный на выявлении морфологических изменений в органах и тканей больной и павшей птицы [10]. Метод включает в себе отбор кусочков органов, фиксация их в 10%-ном растворе формалина, обезвоживание в этиловом спирте, заключение в парафин. Объектами для оценки морфологических изменений служат гистосрезы органов и тканей, окрашенные гематоксилин-эозином. Критериями для постановки диагноза на ИАЦ по морфологическим изменениям являются: резкое уменьшение гемоцитопоэтических и увеличение числа жировых клеток в костном мозге, наличие в кроветворных клетках внутриядерных базофильных включений, атрофия и делимфатизация паренхимы тимуса, фабрициевой бурсы, селезенки, слепокишечных миндалин, апоптоз гепатоцитов печени. Результаты гистологического исследования сочетаются с данными патологоанатомического вскрытия (общая анемия, гидремия, аплазия и ожирение костного мозга, атрофия тимуса и бурсы Фабрициуса, острая венозная гиперемия кожи в области крыльев - «синее крыло») и дополняются результатами гематологического исследования (панцитопения, снижение уровня гемоглобина, уменьшение показателей гематокрита).

Диагностика болезни известным способом, предусматривающим анализ гистологических срезов, является трудоемкой и занимает достаточно длительный срок, необходима квалификация и опыт исследователя. Кроме того, и главное: перечисленные выше морфологические признаки характерны для острого (классического) течения инфекционной анемии, которое проявляется у восприимчивых цыплят до 14-дневного возраста и не позволяет диагностировать скрытое течение инфекции.

Выбранный нами способ выявления специфических апоптозных телец в мазках крови и пунктата костного мозга больных цыплят ранее не использовался для диагностики инфекционной анемии цыплят, так как явление вирусиндуцированного апоптоза при латентном течении болезни ранее не было описано.

Цель изобретения - разработка способа прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят, включающего морфологическую оценку мазков крови и пунктата костного мозга больных цыплят, отличающего тем, что выявляют вирусиндуцированные апоптозные тельца, и при наличии в поле зрения 3-5 и более апоптозных телец ставят диагноз на инфекционную анемию цыплят.

Технический результат изобретения заключается в проведении анализа на наличие в мазках крови и пунктата костного мозга больных цыплят специфических апоптозных телец в световом микроскопе.

Нами были проведены предварительные исследования по изучению морфологической картины крови и пунктата костного мозга птиц, инфицированных и неинфицированных вирусом ИАЦ. Инфицированность цыплят вирусом ИАЦ определяли в ПЦР. Исследования показали, что морфологические показатели у инфицированных и неинфицированных цыплят имели достоверные различия, характеризующиеся с выявлением вирусиндуцированных апоптозных телец у инфицированных цыплят.

Способ осуществляется следующим образом. У больной или с подозрением на болезнь птицы осуществляют забор проб крови из Крыловой вены, а пунктат костного мозга - из верхней части диафиза плюсневозаплюсневой кости с латеральной ее поверхности, готовят мазки на тонких обезжиренных предметных стеклах, высушивают на воздухе, фиксируют в метаноле и окрашивают по Романовскому-Гимза [2, 4]. Изучение мазков проводят в световом микроскопе с использованием иммерсионного объектива с большим увеличением.

При изучении пунктатов костного мозга, полученных от больных цыплят, установлен ряд специфических изменений, не зависимо от состояния птицы, которые послужили критериями для постановки диагноза на ИАЦ. Так, уже на 5 день после заражения в гистологических срезах костного мозга цыплят отмечены признаки апоптоза гемопоэтических клеток, относящихся главным образом к эритроидному и гранулоцитарному росткам кроветворения. Вначале в пораженных клетках происходила конденсация и маргинация хроматина в ядре, которое становилось изрезанным или фрагментированным (фиг.1). В последующем (на 7-14 дни после заражения) отмечалось сморщивание клеток и образование апоптозных телец, состоящих из фрагментов цитоплазмы и ядра. При световой микроскопии сформированные апоптозные тельца имели вид округлых или овальных частиц с оксифильной цитоплазмой и темно-синими фрагментами хроматина ядра (фиг.2). В более поздние сроки отмечены деструкция и лизис апоптозных телец (фиг.3).

В мазках крови птиц апоптозные тельца выявлялись на 7-14 дни после инокуляции вируса ИАЦ. Вначале они представляли собой сферические образования диаметром от 6 до 10 мкм. Цитоплазма просматривалась в виде тонкого неравномерного ободка, отличалась базофильностью, окрашиваясь в цвета от светло-голубого до темно-синего (фиг.4). Большую часть таких образований занимало ядро с фрагментированным хроматином. Дефинитивные формы апоптозных телец представляли собой более крупные структуры округло-овальной формы. Цитоплазма таких телец была слабо базофильной. Фрагменты ядра отличались выраженной базофильностью, имели округлую форму, размеры варьировали от 0,4 до 2-3 мкм (фиг.5, 6).

Пример 1. Птицепредприятие мясного направления. Согласно анамнестическим данным в хозяйстве наблюдается повышение заболеваемости и падежа птиц различных возрастных групп. У цыплят с 14-дневного возраста отмечалось отставание в росте и развитии, взъерошенность перьевого покрова, апатия, общая анемия. Данные патологоанатомического вскрытия: постовариальная гипотрофия, дистрофия печени и почек, острая венозная гиперемия легких, признаки анемии.

Для оценки эффективности предлагаемого способа прижизненной диагностики инфекционной анемии в трех корпусах, где содержится птица 15, 25 и 35 дневного возраста из общего стада для исследования произвольно (по принципу случайной выборки) отобрали по 10 голов в каждой группе.

Индивидуально у цыплят осуществляли забор крови из Крыловой вены а также пунктат костного мозга из верхней части диафиза плюсно заплюсневой кости с латеральной ее поверхности. Затем готовили по 3 мазка от каждого цыпленка на обезжиренных предметных стеклах, высушивали на воздухе, фиксировали в метаноле и окрашивали по Романовскому-Гимза. Готовые мазки изучали в световом микроскопе с использованием иммерсионного объектива с большим увеличением (×100). Результаты исследований мазков приведены в таблицах 1, 2 и 3.

Для подтверждения диагноза исследуемых цыплят подвергали эвтаназии и отбирали биоматериал для проведения молекулярно-биологических исследований путем постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с целью выявления генома цирковируса. Результаты исследований показали, что при обнаружении в мазках крови и пунктата костного мозга цыплят 3-5 и более апоптозных телец было подтверждено наличие вируса ИАЦ с помощью ПЦР.

Пример 2. Птицепредприятие мясного направления. Весной 2010 года среди цыплят-бройлеров наблюдали клинические признаки и патологоанатомические изменения, характерные для инфекционной анемии: общее угнетение, отказ от корма, бледность слизистых оболочек и кожи. Подкожные, внутрикожные и внутримышечные кровоизлияния различных форм и размеров с признаками отека наблюдались в области груди, бедра, голени, брюшины и на внутренней стороне крыльев. На плюсне и подошве лап отмечались подкожные кровотечения и язвенно-некротические поражения. Из пораженных участков кожи выделялся кровянисто-серозный экссудат. Продолжительность болезни составила 7-10 суток. Максимальный отход был на 3-й день с начала появления симптомов ИАЦ. Отход птицы за 10 суток клинической манифестации болезни составил около 7,0%. Установить этологию инфекции вирусологическими методами исследования не удалось. Диагноз был подтвержден исследованиями сывороток крови переболевшей птицы в ИФА на 40-сутки их выращивания.

В последующем клинические случаи проявления болезни не отмечались. Для оценки эпизоотического состояния предприятия проведены сравнительная оценка морфологических изменений в мазках крови и пунктата костного мозга цыплят в возрасте 20, 30 и 40 суток и биоматериала на наличие генома вируса ИАЦ с помощью ПЦР как описано ранее (пример 1).

Результаты морфологических исследований мазков представлены в таблицах 4, 5 и 6.

Из данных таблиц следует, что скрытое течение ИАЦ согласно морфологическим изменениям наблюдается во всех исследованных группах птицы. Результаты исследований мазков на наличие аппотозных телец по предлагаемому способу и биоматериала на вирус ИАЦ в ПЦР полностью совпадают.

Пример 3. Птицепредприятие яичного направления. Ранее и на начало данных исследований предприятие считался благополучным по инфекционной анемии, хотя при исследовании сывороток крови птицы в ИФА выявляются специфические антитела к вирусу ИАЦ в высоких титрах.

Для оценки эпизоотического состояния предприятия проведены сравнительная оценка морфологических изменений в мазках крови и пунктата костного мозга цыплят в возрасте 30, 60 и 120 суток и биоматериала на наличие генома вируса ИАЦ с помощью ПЦР как описано ранее (пример 1).

Результаты морфологических исследований мазков представлены в таблицах 7, 8 и 9. Данные, представленные в таблицах, свидетельствуют об эффективности предлагаемого способа прижизненной диагностики ИАЦ путем выявления апоптозных телец в мазках крови или пунктата костного мозга цыплят, которые согласуются с результатами исследования биоматериала в ПЦР и указывают на латентное течение инфекции на данном предприятии.

Технической задачей заявляемого решения является упрощение способа и эффективности диагностики болезни, так как позволяет выявлять латентное инфекционной анемии непосредственно в производственных условиях и независимо от возраста исследуемой птицы.

Таблица 1
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга цыплят 15-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка Количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 0 0 Отрицательный
2 2 3 3 Положительный
3 3 5 4 Положительный
4 4 1 0 Отрицательный
5 5 4 3 Положительный
6 6 6 3 Положительный
7 7 3 4 Положительный
8 8 4 3 Положительный
9 9 2 2 Сомнительный
10 10 0 0 Отрицательный
Таблица 2
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга цыплят 25-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка Количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 5 3 Положительный
2 2 0 0 Отрицательный
3 3 4 3 Положительный
4 4 2 0 Отрицательный
5 5 3 3 Положительный
6 6 4 3 Положительный
7 7 5 4 Положительный
8 8 1 0 Отрицательный
9 9 4 3 Положительный
10 10 5 3 Положительный
Таблица 3
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга цыплят 35-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка Количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ,
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 4 3 Положительный
2 2 3 3 Положительный
3 3 4 3 Положительный
4 4 5 4 Положительный
5 5 6 4 Положительный
6 6 5 4 Положительный
7 7 5 3 Положительный
8 8 4 3 Положительный
9 9 5 3 Положительный
10 10 6 4 Положительный
Таблица 4
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга цыплят 20-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка Количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 0 0 Сомнительный
2 2 1 1 Отрицательный
3 3 4 4 Положительный
4 4 1 0 Отрицательный
5 5 1 1 Отрицательный
6 6 2 1 Сомнительный
7 7 3 1 Положительный
8 8 4 3 Положительный
9 9 5 3 Положительный
10 10 4 2 Положительный
Таблица 5
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга цыплят 30-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка Количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 4 3 Положительный
2 2 5 3 Положительный
3 3 4 3 Положительный
4 4 1 1 Отрицательный
5 5 3 3 Положительный
6 6 4 3 Положительный
7 7 5 3 Отрицательный
8 8 1 0 Отрицательный
9 9 4 3 Положительный
10 10 5 3 Положительный
Таблица 6
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга цыплят 40-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка Количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 4 2 11оложительный
2 2 3 1 Положительный
3 3 4 2 Положительный
4 4 5. 3 Положительный
5 5 4 3 Положительный
6 6 4 2 Положительный
7 7 3 2 Положительный
8 8 4 3 Положительный
9 9 5 3 Положительный
10 10 6 4 Положительный
Таблица 7
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга цыплят 30-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка Количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 0 0 Отрицательный
2 2 3 2 Положительный
3 3 4 3 Положительный
4 4 5 3 Положительный
5 5 2 0 Отрицательный
6 6 1 1 Отрицательный
7 7 3 2 Положительный
8 8 4 3 Положительный
9 9 5 3 Положительный
10 10 6 3 Положительный
Таблица 8
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга цыплят 60-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка Количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 4 3 Положительный
2 2 5 3 Положительный
3 3 4 4 Положительный
4 4 5 2 Положительный
5 5 6 3 Положительный
6 6 5 4 Положительный
7 7 5 3 Положительный
8 8 1 0 Отрицательный
9 9 4 3 Положительный
10 10 4 2 Положительный
Таблица 9
Результаты изучения мазков крови и пунктата костного мозга молодняка птиц 120-дневного возраста на наличие апоптозных телец.
№ п/п Номер цыпленка количество апоптозных телец Диагноз на ИАЦ
в мазках крови в мазках пунктата костного мозга
1 1 4 3 Положительный
2 2 5 4 Положительный
3 3 6 3 Положительный
4 4 4 3 Положительный
5 5 5 3 Положительный
6 6 4 2 Положительный
7 7 3 3 Положительный
8 8 4 3 Положительный
9 9 5 3 Положительный
10 10 6 3 Положительный

Источники информации

1. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц / Б.У.Кэлнек [и др.]; под ред. Б.У.Кэлнека, X.Джона Барнса, Чарльза У.Биерда и др.; пер. с англ. И.Григорьева, С.Дорош, Н.Хрущева, И.Суровцев. - М.: АКВАРИУМ БУК, 2003. - С.850-870.

2. Болотников И.А. Гематология птиц / И.А.Болотников, Ю.В.Соловьев. - Л.: Наука, 1980. - 115 с.

3. Инфекционная анемия цыплят / А.С.Алиев [и др.] // Ветеринарная медицина. - 2011. - №1. - С.49-53.

4. Карпуть И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных / И.М.Карпуть. - Минск: Ураджай, 1986. - 183 с.

5. Серологический мониторинг инфекционной анемии цыплят и молекулярно-биологическая характеристика изолятов вируса / В.А.Лобанов [и др.] // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2003. - №2. - С.66-69.

6. Bulow V.V. Untersuchungen uber den Erreger der infektiosen Anamie bei Huhnerkuken (CAA) in vitro: Vermehrung Titration Semm Neutralisationstest und indirekter Immunofluoreszentest / V.V.Bulow, M.B.Bertram // Zentralblatt fur Veterinarmedizin. - 1985. - Vol.32. - P. 679-693.

7. Chettle N.J. An outbreak of disease due to chicken anaemia agent in broiler chickens in England / N.J.Chettle // Vet. Rec. - 1989. - Vol.124. - P.211-215.

8. Detection of chicken anemia virus in the gonads and in the progeny of broiler breeder hens with high neutralizing antibody titer / L.Brentano [et al.] // Vet. Microbiol. - 2005. - Vol.105. - P.65-72.

9. Development of ELISA to detect serum antibody to chicken amenta agent / D. Todd [et al.] // Avian Diseases. - 1990. - Vol.34. - P.359-363.

10. Hegazy A.M. Chicken infectious anemia virus (CAV) in broilers and laying hens in Sharkia province, Egypt / A.M.Hegazy, F.M.Abdallah, L.K.AbdEl Sarnie, A.A.Nazim // Journal of American Science. - 2010. - Vol.6(9). - P.752-761.

11. Hoop R.K. The use of immunofluorescence and imrnunoperoxidase straining in studying the pathogenesis of chicken anemia agent in experimentally infected chickens / R.K.Hoop, R.L.Reece // Avian Pathol. - 1991.- Vol.20. - P.349-355.

12. Matemal antibody and its effects on the susceptibility to chicken anemia agent / N.Yuasa [et al.] // Avian Dis. - 1980. - Vol.24. - P.197-201.

13. McNulty M.S. Chicken anaemia agent: a review / M.S. McNulty // Avian Pathology. - 1991. - Vol.20, №1. - P.187-203.

14. Miles A.M. Coinfection of specific-pathogen-free chickens with Marek's disease virus (MDV) and chicken infectious anemia virus: effect of MDV pathotype / A.M.Miles, S.M.Reddy, R.W.Morgan // Avian Dis. - 2001. - Vol.45. - P.9-18.

15. Standardization and application of polymerase chain reaction and indirect immunofluorescent technique for detection of chicken infectious anaemia virus / K.Dhama [et al.] // J.Camp. Microbiol. Immunol. Infect. Dis. - 2002. - Vol.23. - P.11-22.

16. Van Santen V.L. Biological characteristics of chicken anemia virus regenerated from clinical specimen by PCR / V.L.van Santen, H.Toro, F.J.Hoerr // Avian Dis. - 2007. - Vol.51. - P.66-77.

17. Vielitz E. Anaemia-dermatitc of broilers: field observations on its occurrence, transmission and Prevention / E.Vielitz, H.Landgraf // Avian Pathol. - 1988. - Vol.17. - P.113-120.

Обозначения чертежей:

Фиг.1 - Начало формирования апоптозного тельца в пунктате костного мозге цыпленка на 5 день после инокуляции цирковируса.

Фиг.2 - Пунктат костного мозга цыпленка на 10 день после заражения вирусом ИАЦ. Наличие апоптозного тельца в группе клеток эритроидного ростка.

Фиг.3 - Деструкция и лизис апоптозных телец в пунктате костного мозга цыпленка на 21 день после заражения вирусом инфекционной анемии.

Фиг.4 - Мазок крови цыпленка на 14 день после заражения вирусом ИАЦ. Начальные этапы формирования апоптозных телец.

Фиг.5 - Морфологическая картина мазка крови цыпленка на 21 день после инокуляции цирковируса.

Фиг.6 - Мазок крови цыпленка на 21 день после заражения вирусом ИАЦ. Дефинитивные формы апоптозных телец.

Ссылочные обозначения:

1 - апоптозные тельца

2 - оксифильные нормоциты

3 - эозинофильные гранулоциты

4 - тромбоциты

5 - клетки лимфоидного ростка

6 - эритроциты

7 - макрофаги

Способ прижизненной диагностики латентного течения инфекционной анемии цыплят, включающий морфологическую оценку мазков крови и пунктата костного мозга больных цыплят, отличающийся тем, что выявляют вирусиндуцированные апоптозные тельца, и при наличии в поле зрения 3-5 и более апоптозных телец ставят диагноз на инфекционную анемию цыплят.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности у детей с первичным перитонитом. Способ заключается в том, что в пробе венозной крови определяют относительное содержание активированных классических моноцитов с фенотипом CD14bright CD16-HLA-DR+ от общего количества моноцитов с фенотипом CD14bright методом многоцветной проточной цитометрии и при его значении более 68,8% диагностируют спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности.

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой способ прогнозирования развития пороговой стадии ретинопатии недоношенных у детей без офтальмоскопических признаков заболевания, отличающийся тем, что на сроке по 33 неделю гестационного возраста в сыворотке крови определяют содержание фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и при уровне VEGF, равном или превышающем 1300 пг/мл, прогнозируют развитие пороговой стадии ретинопатии недоношенных.
Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения функциональной активности ионизированного кальция (ФАИ Ca2+) в сыворотке крови человека.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и представляет собой способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень липопротеинов высокой плотности и при величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз.
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, может быть использовано для титрования групповых антител системы АВО. Для определения титра естественных антител в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений сыворотки крови.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии и гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики аутоиммунного поражения различных структур вегетативной нервной системы (ВИС), регулирующих моторику желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).

Изобретение относится к медицине и описывает способ детекции поврежденных влажностью влагочувствительных реагентов, где указанные реагенты приводят в контакт с образцом, содержащим воду, и далее выявляется присутствие в образце анализируемого вещества, по его реакции с указанными влагочувствительными реагентами, причем указанный способ включает: (a) измерение отражения света при длине волны, характерной для продуктов указанной реакции указанных влагочувствительных реагентов с анализируемым веществом в двух заданных временных точках после контакта указанных реагентов с указанным образцом; (b) измерение в тех же двух заданных временных точках отражения света при длине волны, характерной для эталонного инфракрасного красителя, причем указанный краситель объединен с указанными влагочувствительными реагентами и имеет характерную длину волны, отличающуюся от длины волны, измеряемой в п.(a), по меньшей мере на 120 нм; (c) расчет соотношения показателей отражения, измеренных при длинах волн согласно пп.(a) и (b), и заключение о том, что реагенты имеют сниженную, чем ожидалось, активность и повреждены влажностью, на основании различия в указанном соотношении для указанных двух заданных временных точек.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения интерферон-γ-продуцирующих Т-лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе. Сущность способа состоит в том, что осуществляют ингибирование внутриклеточного транспорта - брефелдином А в клеточной культуре, далее подвергают немедленной обработке флуоресцеинизотиоционат-меченными анти-СD3 антителами, затем проводят стимуляцию синтеза интерферона-γ, фиксацию, пермеабилизацию, окраску фикоэритрин-меченными анти-интерферон-γ моноклональными антителами и осуществляют цитометрию, наблюдают совпадение флуоресцентной метки СD3-маркера в клеточной культуре с таковой, определяемой на основании контролируемого метода.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи.

Группа изобретений относится к области биотехнологии, а именно к исследованию биомолекулярных взаимодействий и детектированию биомолекул с использованием поверхностного плазмонного резонанса. Описаны биологический сенсор, а также способ создания биологического сенсора с использованием тонких пленок на основе графена, оксида графена или однослойных или многослойных углеродных нанотрубок. Биологический сенсор состоит из подложки, металлической пленки, на поверхность которой нанесен промежуточный связующий слой, выполненный из тонкой пленки из графена, или тонкой пленки оксида графена, или тонкой пленки из углеродных нанотрубок. На поверхность промежуточного связующего слоя конформно и однородно адсорбирован биоспецифический слой. В качестве биоспецифического слоя может выступать слой молекул связывающего партнера анализируемого вещества или слой из комплекса биологических молекул, способных химически взаимодействовать с молекулами связывающего партнера и образовавших с ними комплекс. Также в качестве биоспецифического слоя может выступать слой гидрогеля, на который осаждены молекулы связывающего партнера и/или комплекс из молекул связывающего партнера и биологических молекул, которые могут образовывать химическую связь с молекулами связывающего партнера. Описанный способ получения биологического сенсора включает в себя стадии нанесения металлической пленки, промежуточного связующего слоя и биоспецифического слоя. Достигается высокая чувствительность биосенсора в сочетании с высокой биоспецифичностью; расширение спектра применения устройства; защита металлической пленки от воздействий внешней среды; возможность детектирования крупных биологических объектов. 2 н. и 25 з.п. ф-лы, 9 ил.
Настоящее изобретение относится к иммунологическому тесту для обнаружения и специфического определения аутоантител против антигенов семенников, которые присутствуют при воспалительных заболеваниях половой системы самцов млекопитающих, в биологическом образце самца млекопитающего, в частности для обнаружения тестикулярных аутоантител к ER-60 и/или трансферриновых аутоантител. Представленный иммунологический тест позволяет эффективно и просто определить наличие иммунологического и связанного с инфекцией бесплодия у самцов млекопитающих, в частности у людей. 2 н. и 4 з.п.ф-лы, 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической лабораторной диагностике. Предложен биологический микрочип для выявления и многопараметрического анализа противохолерных антител в сыворотке крови человека, содержащий массив дискретно нанесенных и иммобилизованных на поверхности подложки O-антигенов V. cholerae и холерного токсина, сгруппированных в отдельные зоны. Изобретение обеспечивает проведение параллельного иммунологического анализа нескольких образцов сыворотки крови человека на наличие противохолерных антител к широкому спектру антигенов возбудителя холеры с определением иммуноглобулинов класса G и M за короткое время. 2 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования развития гематогенных метастазов после комбинированного лечения при раке почки. Для этого в ткани опухоли определяют экспрессию NF-kB p50, HIF-1α содержание сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF. Рассчитывают дискриминантные функции Y1, Y2 по уравнениям: Y1=-3,2+0,026·Х1+0,03·Х2-0,02·Х3+0,34·Х4+0,3·Х5; Y2=-33,3-0,01·Х1+0,11-Х2-1,2·Х3+1,57·Х4+1,8·Х5, где X1 - тотальная активность протеасом ·10-3 МЕ/мг белка; Х2 - содержание VEGF, пг/мг белка ; Х3 - экспрессия HIF-1, УЕ/мг белка в лунке; Х4 - экспрессия NF-kВ p50, УЕ/мг белка в лунке. При значениях Y1>Y2 прогнозируют отсутствие, а при Y1<Y2 - развитие гематогенных метастазов. Использование данного способа позволяет прогнозировать прогрессирование рака почки, а следовательно, назначить своевременное назначение наиболее адекватных лечебных мероприятий. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному полипептиду, который является биологической мишенью для ингибирования клетки-метанопродуцента, а также к выделенному полинуклеотиду, который кодирует этот полипептид. Раскрыты вектор экспрессии и клонирующий вектор, содержащие этот полинуклеотид, и клетки-хозяева, содержащие указанный вектор экспрессии. Описаны молекула-конъюгат или слитая молекула для ингибирования клетки-метанопродуцента, а также антитело или его функциональный фрагмент, которое связывается с вышеуказанным полипептидом. Изобретение также охватывает фармацевтическую композицию и способы ингибирования и идентификации клетки-метанопродуцента с использованием описанных молекулы-конъюгата или слитой молекулы и антитела или его фрагмента. Изобретение позволяет эффективно ингибировать клетки-метанопродуценты. 13 н. и 6 з.п. ф-лы, 9 ил., 6 пр.
Изобретение относится к медицинской психологии и психиатрии, может быть использовано для прогноза развития психической дезадаптации. Задачей предлагаемого изобретения является возможность прогнозирования развития психической дезадаптации на раннем донозологическом этапе. Поставленная задача решается путем определения в периферической крови испытуемых иммунологических показателей, и при одновременном содержании В-лимфоцитов CD72+ - фенотипа 7% и менее, лимфоцитов с маркерами поздней активации HLADR 14% и менее, концентрации сывороточного IgA 1,96 г/л и менее прогнозируют формирование психодезадаптационного состояния на стадии психоадаптационного состояния. Техническим результатом является возможность прогнозировать переход психоадаптацонного состояния как раннего этапа напряжения адаптационных механизмов без признаков их истощения в психодезадаптационное состояние со снижением адаптивных возможностей индивида, наличием признаков психического истощения и вероятного предболезненного состояния. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, иммунохимии, и касается диагностики вируса простого герпеса первого типа методом твердофазного иммуноферментного анализа. Изобретение представляет собой способ получения иммуносорбента для диагностики вируса простого герпеса 1 типа, включающий предварительную обработку полимерного твердофазного носителя, на который сорбируется антиген вируса герпеса 1 типа, водным 20% раствором полиэтиленгликоля (ПЭГ-20), с последующей адсорбцией на носителе в 0,2M карбонат-бикарбонатном буферном растворе с pH 9,6 лизатного высокоочищенного антигена вируса герпеса 1 типа, приготовленного из штамма вируса простого герпеса 1 типа - АТСС VR-539, отмывку, лиофильную сушку, инкубацию сорбированных антигенов с блокирующим раствором. Использование натурального лизатного высокоочищенного антигена вируса герпеса 1 типа АТСС-VR-539 позволяет значительно повысить чувствительность анализа, система блокировки на основе триса позволяет нейтрализовать нежелательные неспецифические реакции. Также использование изобретения приводит к улучшению условий сохранения активности реагентов на поверхности твердофазного носителя, уменьшению расхода реагентов. Использование полиэтиленгликоля при обработке планшета повышает специфичность и чувствительность набора. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии и детской неврологии, и может использоваться для прогнозирования риска развития поражения центральной нервной системы (ЦНС) у новорожденных детей с различным сроком гестации в неонатальном периоде. Сущность способа: определяют уровень васкулоэндотелиального фактора роста и нейроспецифической енолазы в сыворотке крови. Затем рассчитывают вероятность риска развития тяжелого поражения центральной нервной системы р по формуле: p=1/(1+e-F), где е - основание натурального логарифма = 2,718; F - разделяющая функция, которую рассчитывают по формуле: F=0,0235·VEGF-4,5·NSE-2,46, где VEGF - содержание васкулоэндотелиального фактора роста в сыворотке крови; NSE - содержание нейроспецифической енолазы в сыворотке крови. При p равном либо более 0,5 прогнозируют низкий риск, а при p менее 0,5 прогнозируют высокий риск развития тяжелого поражения ЦНС. Способ обеспечивает высокую чувствительность, диагностическую точность и информативность способа, дает возможность расширить область применения, в частности, для новорожденных с различным сроком гестации. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к аллергологии, иммунологии и дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите у детей. Согласно способу, во время лечения младенческой формы и детской формы атопического дерматита в стадии обострения проводят определение содержания в сыворотке крови ребенка компонента комплемента С3, интерлейкина 6 и интерлейкина 10. При содержании в сыворотке крови компонента комплемента С3 меньше 0,8 мг/мл, интерлейкина 6 больше 20,9 нг/мл и интерлейкина 10 больше 5,6 нг/мл прогнозируют развитие инфекционного осложнения атопического дерматита у ребенка. Применение изобретения обеспечивает возможность прогнозирования развития инфекционных осложнений младенческой формы и детской формы атопического дерматита в стадии обострения в период лечения. 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан набор праймеров для амплификации фрагментов гена CFTR. Представлены биочип и набор мишеней для биочипа. Описан способ идентификации мутаций в гене CFTR человека, вызывающих муковисцидоз, включающий использование описанных праймеров. Представлена тест-система, которая содержит описанные праймеры и биочип. Изобретение расширяет арсенал технических средств, используемых для диагностики муковисцидоза, позволяя быстро и специфично диагностировать соответствующие мутации. 5 н. и 5 з.п. ф-лы, 2 ил, 4 табл., 6 пр.
Наверх