Способ спектрофотометрического количественного определения в листьях крапивы двудомной при совместном присутствии хлорофилла, каротиноидов и гидроксикоричных кислот

Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию и анализу медицинских препаратов, и может быть использовано при стандартизации лекарственного растительного сырья. Способ идентификации и количественного определения хлорофилла, каротиноидов и гидроксикоричных кислот при совместном присутствии в листьях крапивы двудомной включает дробную экстракцию в течение часа по 30 мин каждая измельченного сырья с размером частиц 1,0 мм на водяной бане при температуре 100°C 70% этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:100, объединение извлечений и доведение используемым растворителем до 100 мл, с последующим разведением полученного раствора в соотношении 2:25 96% этанолом, измерение оптической плотности раствора относительно 96% этанола в максимумах поглощения 328±1 нм, 442±1 нм и 667±1 нм, вычисление содержания суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту, каротиноидов в пересчете на виолоксантин и хлорофилла в процентах в пересчете на абсолютно сухую массу сырья по формулам. Способ обеспечивает доступность, простоту выполнения, экономичность и малую ошибку определения. 3 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию и анализу медицинских препаратов, и может быть использовано при стандартизации лекарственного растительного сырья, например, крапивы двудомной, а также лекарственных препаратов на его основе по содержанию основных групп биологически активных веществ (БАВ), а также использовано в фармацевтической, косметологической и пищевой промышленности для идентификации и количественного определения в лекарственном растительном сырье крапивы двудомной и лекарственных препаратов на его основе хлорофиллов, каротиноидов и гидроксикоричных кислот при совместном присутствии.

Известны способы отдельного определения хлорофиллов, каротиноидов и гидроксикоричных кислот в различных видах лекарственного растительного сырья методами бумажной и тонкослойной хроматографии, фотоэлектроколориметрии, хроматомасс-спектроскопии и спектрофотометрии.

Известен способ определения состава липофильной фракции настоек гомеопатических матричных крапивы двудомной и крапивы жгучей, полученных из свежесобранного и высушенного сырья по методике общей фармакопейной статьи Государственной Фармакопеи, используя в качестве экстрагента 86 и 62% (по массе) этанол соответственно (Лапинская Е.С., Копытько Я.Ф. Изучение состава липофильной фракции настоек гомеопатических матричных крапивы двудомной и крапивы жгучей. Хим. - фарм. журн. - 2008. - Том 42. - №12. - СС.26-29). Способ заключается в следующем: в делительную воронку вместимостью 50 мл помещают 10 мл настойки и 20 мл н-гексана, встряхивают в течение 10 мин. Гексановое извлечение сливают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл. Экстракцию проводят повторно с таким же количеством растворителя. Извлечения объединяют и отгоняют досуха на вакуум-выпарном ротационном аппарате при температуре около 50°C. Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацетата. Для анализа вводят 0,2 мкл пробы в испаритель хроматомасс-спектрометра. Идентификацию разделенных компонентов проводили с использованием библиотеки масс-спектров NIST 98 и алгоритмов сравнения программного обеспечения Saturn V/S (Varian). Количественную оценку содержания БАВ осуществляли методом внутренней нормализации по площади пиков (полный ионный ток) идентифицированных соединений с использованием автоматической системы обработки данных.

Известен способ определения пигментов (хлорофилла и каротиноидов) в свежем растительном материале (Струсовская О.Г. Определение пигментного состава Cochlearia officinalis, произрастающей на островах соловецкого архипелага. Материалы V международной конференции «Фармация и общественное здоровье». Екатеринбург, 2012. - сс.184-187. 3. Землянухин А.А., Землянухин Л.А. Большой практикум по физиологии и биохимии растений: Учебн. пособие. - Воронеж: ВГУ, 1996. - 188 с.), включающий измельчение сырья и обработку его раствором аммиака с концентрацией 1 моль/л и 10-кратным объемом ацетона с последующим фильтрованием и спектрометрическим измерением при длинах волн 440,5 нм, 644, 649, 662 и 665 нм, в которых находятся основные максимумы поглощения каротиноидов, хлорофилла «а», «ф» и «б» и расчетом данных БАВ по Хольму-Ветштейну (для 100% ацетона) или по Вертону (для 80% ацетона).

Известен способ совместного определения гидроксикоричных кислот и флавоноидов в листьях крапивы узколистной (Матющенко Н.В. Влияние условий сушки на содержание флавоноидов и гидроксикоричных кислот в листьях крапивы узколистной. Сборник научных трудов: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - Пятигорск. - Вып.67. - 2012. - С.78-79), включающий измельчение сырья и обработку его 70% этанолом спиртом с последующим прямым спектрометрическим определением гидроксикоричных кислот в пересчете на кофейную кислоту при длине волны 328 нм. Определение флавоноидов проводится отдельно методом дифференциальной спектрофотометрии по реакции с алюминия хлоридом.

В литературе (Лупинская С.М., Орехова С.В., Васильева О.Г. Изучение биологически активных веществ липы, крапивы и душицы и сывороточных экстрактов на их основе. Химия раст. сырья. - 2010.- №3. сс.143-145; Юдина Н.В., Иванов А.А., Лоскутова Ю.В. и др. Влияние параметров диспергирования крапивы двудомной на изменения степени измельчения, выходов и свойств экстрактивных веществ. Химия растит. сырья. - 2012. - №1. - СС.137-142.) приведены методики качественного совместного определения хлорофиллов и каротиноидов в различных растительных объектах методом хроматографии на бумаге или в тонком слое с использованием отличных условий хроматографирования. Однако работ по определению каротиноидов, гидроксикоричных кислот и хлорофиллов при совместном присутствии методом ТСХ не обнаружено.

Известен способ определения хлорофилла в растениях гречихи (RU 2244916, G01N 21/25, C09B 61/00, 2005), включающий измельчение сырья и обработку его спиртом с последующим спектрометрическим измерением при двух длинах волн 665 и 649 нм, в которых находятся основные максимумы поглощения хлорофилла «а» и «б» и расчетом хлорофилла по формулам. Используют 96% спирт. Экстракцию проводят в герметически закрытых емкостях в течение 24-48 часов.

Недостатками указанных способов являются громоздкость и длительность выделения биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья, использование различных экстрагентов и режимов экстракции, применение дорогостоящих стандартных образцов.

В научно-фармацевтической, медицинской и патентной литературе способов, позволяющих за одну процедуру экстракции лекарственного растительного сырья проводить одновременное спектрофотометрическое определение гидроксикоричных кислот, каротиноидов и хлорофилла в листьях крапивы двудомной без предварительного разделения данных групп биологически активных веществ, не выявлено.

Задача изобретения - разработка способа одновременного определения подлинности и количественного содержания хлорофиллов, каротиноидов и гидроксикоричных кислот в листьях крапивы двудомной методом спектрофотометрии при совместном присутствии для стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов, изделий пищевой и косметологической промышленностей.

Технический результат заключается в доступности, простоте выполнения, экономичности и малой ошибкой определения.

Технический результат заключается в том, что способ спектрофотометрического количественного определения в листьях крапивы двудомной при совместном присутствии хлорофилла, каротиноидов и гидроксикоричневых кислот включает дробную экстракцию в течение 1 ч по 30 мин каждая измельченного сырья со степенью измельчения 1,0 мм на водяной бане 70% этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:100, объединение извлечений и доведение используемым растворителем до 100 мл, с последующим разведением полученного раствора в соотношении 2:25 96% этанолом, измерение оптической плотности раствора относительно 95% этанола в максимумах поглощения 328±1 нм, 442±1 нм и 667±1 нм, вычисление содержания суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту, каротиноидов в пересчете на виолоксантин и хлорофилла в процентах в пересчете на абсолютно сухую массу сырья по формулам.

Статистическая обработка результатов эксперимента показала, что средняя ошибка определения не превышает 6,17%.

На фиг.1 представлен спектр поглощения извлечения из листьев крапивы двудомной; на фиг.2 представлено влияние состава экстрагента на извлечение изучаемых групп БАВ; на фиг.3 представлена Таблица с метрологическими характеристиками методики количественного определения БАВ (%) (n=9; f=8; P=95%).

Способ иллюстрируется следующим примером.

В качестве объекта исследования использовали готовое измельченное сырье листьев крапивы двудомной отечественного производителя. Электронные спектры поглощения измеряли на спектрофотометре СФ-2000 (РФ) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм в диапазоне волн 200-800 нм.

При изучении спектральных характеристик извлечений из листьев крапивы двудомной, полученных с применением различных экстрагентов (вода, водно-спиртовые смеси различной концентрации, ацетон), наблюдали основные поглощения в области 323±5 нм, характерные для гидроксикоричных кислот; 442±2 нм, характерные для каротиноидов (виолоксантин) и 667±3 нм, свойственные для хлорофилла (фиг.1).

Так как максимумы поглощения исследуемых биологически активных веществ не накладываются (фиг.1), то возможно проводить одновременное определение гидроксикоричных кислот, каротиноидов и хлорофилла в листьях крапивы прямым спектрофотометрическим методом без предварительного разделения.

При разработке методики изучены и установлены оптимальные параметры извлечения гидроксикоричных кислот, каротиноидов и хлорофилла из сырья: степень измельчения сырья - 1,0 мм; экстрагент - 70% этанол (спирт этиловый); соотношение сырье:экстрагент 1:100; время экстракции - 1 ч (дробно по 30 мин). Выбор экстрагента осуществляли на основании полученных данных по влиянию полярности растворителя на извлечение БАВ (фиг.2). Установлено, что с увеличением полярности до 6,0 единиц происходит повышение экстрагируемости всех изучаемых групп БАВ. Дальнейшее увеличение полярности экстрагента нецелесообразно ввиду снижения их содержания в извлечении (фиг.2).

Пример.

Около 0,5 г (точная навеска) сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали в плоскодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл и экстрагировали 50 мл 70% спирта этилового в течение 30 мин. После охлаждения извлечение декантировали и фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Остаток в колбе заливали 50 мл 70% спирта этилового и экстрагировали еще раз в течение 30 мин. Объединенные извлечения в мерной колбе доводили 70% спиртом этиловым до метки (раствор А). 2 мл раствора А переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем 95% спиртом этиловым до метки (раствор Б). Оптическую плотность полученного раствора измеряли на спектрофотометре СФ-2000 (РФ) в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 328±1 нм, 442±1 нм и 667±1 нм. Раствором сравнения служил 95% спирт этиловый. Содержание суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту, каротиноидов в пересчете на виолоксантин и хлорофилла в процентах (X) в пересчете на абсолютно сухую массу сырья вычисляли по формулам (1-3)

X = A 25 100 100 100 m 507 2 100 ( 100 W ) = A 250000 m 507 2 ( 100 W )                         ( 1 )

X = A 25 100 100 100 m 2500 2 100 ( 100 W ) = A 100 m 2 ( 100 W )                                  ( 2 )

X = A 25 100 100 100 m 944,5 2 100 ( 100 W ) = A 250000 m 944,5 2 ( 100 W )                         ( 3 )

где А - оптическая плотность раствора Б в соответствующем максимуме поглощения; m - масса сырья, г; W - потеря в массе при высушивании сырья, %; 507 - удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты при 327±1 нм; 2500 - удельный показатель поглощения виолоксантина при 442±2 нм; 944,5 - удельный показатель поглощения хлорофилла при 663±5 нм.

Результаты количественного определения изучаемых групп БАВ в листьях крапивы двудомной и метрологическая характеристика методики представлена в таблице (фиг.3).

Статистическая обработка результатов эксперимента показала, что средняя ошибка определения не превышает 6,17% (табл. фиг.3), что свидетельствует о возможности ее использования и включения в современную нормативную документацию для стандартизации и оценки качества листьев крапивы двудомной.

Способ позволяет одновременно проводить определение подлинности и количественного содержания биологически активных веществ в листьях крапивы двудомной методом прямой спектрофотометрии, и стандартизировать лекарственное растительное сырье и лекарственные препараты по содержанию хлорофиллов, каротиноидов и гидроксикоричных кислот при совместном присутствии. Разработанный способ отличается доступностью, простотой выполнения, экономичностью и малой ошибкой определения.

Способ спектрофотометрического качественного и количественного определения хлорофилла, каротиноидов и гидроксикоричных кислот при совместном присутствии в листьях крапивы двудомной, включающий дробную экстракцию в течение часа по 30 мин каждая измельченного сырья с размером частиц 1,0 мм на водяной бане при температуре 100°C 70% этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:100, объединение извлечений и доведение используемым растворителем до 100 мл, с последующим разведением полученного раствора в соотношении 2:25 96% этанолом, измерение оптической плотности раствора относительно 96% этанола в максимумах поглощения 328±1 нм, 442±1 нм и 667±1 нм, вычисление содержания суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту, каротиноидов в пересчете на виолоксантин и хлорофилла в процентах в пересчете на абсолютно сухую массу сырья по формулам:
X = A 25 100 100 100 m 507 2 100 ( 100 W ) = A 125000 m 507 ( 100 W )                         ( 1 )
X = A 25 100 100 100 m 2500 2 100 ( 100 W ) = A 50 m ( 100 W )                                  ( 2 )
X = A 25 100 100 100 m 944,5 2 100 ( 100 W ) = A 125000 m 944,5 ( 100 W )                         ( 3 )
где А - оптическая плотность объединенного раствора в соответствующем максимуме поглощения; m - масса сырья, г; W - потеря в массе при высушивании сырья, %; 507 - удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты при 327±1 нм; 2500 - удельный показатель поглощения виолоксантина при 442±2 нм; 944,5 - удельный показатель поглощения хлорофилла при 663±5 нм.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах.
Заявленное изобретение относится к области контроля качества лекарственных препаратов и представляет собой способ определения подлинности и количественного содержания бензэтония хлорида в лекарственных препаратах, включающий разделение компонентов препарата с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, где в качестве элюента используют смесь ацетонитрила, гидрофосфата тетрабутиламмония, двузамещенного фосфата калия и воды, при содержании гидрофосфата тетрабутиламмония в количестве 2,5 мМ, двузамещенного фосфата калия в количестве 5 мМ, при этом разделение компонентов препарата проводят при длине колонки 125 мм.

Изобретение относится к способу скрининга нетератогенного вещества, который включает приведение испытуемого вещества в контакт с цереблоном или фрагментом цереблона, оценку способности испытуемого вещества связываться с цереблоном или фрагментом цереблона и отбор испытуемого вещества, не связывающегося с цереблоном или фрагментом цереблона, или испытуемого вещества, характеризующегося более низкой способностью связываться с цереблоном или фрагментом цереблона по сравнению с талидомидом.
Изобретение относится к медицине, а именно мембранологии, и может быть использовано для тестирования мембранотоксичности ксенобиотиков, применяемых в терапевтической и ортопедической стоматологии в качестве пломбировочных и реконструктивных материалов, а также в токсикологии и фармакологии наряду с традиционными методами оценки токсичности веществ, лекарственных препаратов.

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к вольтамперометрическому способу определения молочной кислоты, используемой во многих областях пищевой промышленности, ветеринарии, косметологии и играющей огромную роль в физиологическом процессе человека.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии. Способ заключается в использовании в качестве тест-объектов ферментов глутатионредуктазы и каталазы для определения антиоксидантной активности по соотношению скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества, которое должно быть больше 1, причем предварительно перед добавлением в инкубационную среду образцы эфирного масла пихты сибирской разводят диметилсульфоксидом в соотношении 1:1.

Изобретение относится к способу ранней детекции мышечных дегенеративных заболеваний и к способу прогнозирования и/или определения терапевтической эффективности терапевтического средства и/или способа терапии заболеваний посредством измерения тетранор-PGDM (11,15-диоксо-9α-гидрокси-2,3,4,5-тетранорпростан-1,20-диовой кислоты) в образце мочи субъекта и сравнения его содержания относительно образца, выделенного у здорового индивидуума.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой средство для вовлечения мезенхимальной стволовой клетки костного мозга в периферическую кровь из костного мозга, которое вводят в кровеносный сосуд или мышцу и которое содержит любой из компонентов: (a) белок HMGB1; (b) клетка, которая секретирует белок HMGB1; (c) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB1; (d) белок HMGB2; (e) клетка, которая секретирует белок HMGB2; (f) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB2; (g) белок HMGB3; (h) клетка, которая секретирует белок HMGB3; и (i) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB3.

Изобретение относится к медицине и описывает способ тестирования предполагаемого или известного иммуномодулирующего лекарственного средства для активации Т-клеток, который включает стадию приведения в контакт культуры мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) с предварительно определяемым количеством предполагаемого или известного иммуномодулирующего лекарственного средства in vitro и наблюдение активации Т-клеток в культуре РВМС, используя систему считывания, при контакте с предполагаемым или известным иммуномодулирующим лекарственным средством, где плотность клеток культуры РВМС во время стадии предварительного культивирования составляет по меньшей мере 2×106/мл, предпочтительно по меньшей мере 5×106/мл, более предпочтительно по меньшей мере 107/мл, или по меньшей мере 4×105/cм2, предпочтительно по меньшей мере 106/см2, наиболее предпочтительно по меньшей мере 2×106/cм2, при этом предварительную культуру РВМС культивируют в течение по меньшей мере 12 ч.

Изобретение относится к мониторингу окружающей среды и биологических объектов на предмет определения содержания ионов металлов в жидких средах с использованием фотохромных соединений.

Изобретение относится к области обнаружения газов и касается системы спектрального анализа для определения газов с использованием обработанной ленты. Система включает в себя обработанную ленту, источник регулируемого цвета, фотодиод, датчик для определения цвета и микропроцессор.

Изобретение относится к новым цинковым комплексам стириловых красителей для оптических сенсоров и спектрофотометрических датчиков. Описываются 15-краун-5- и дитиа-18-краун-6-содержащие 2-метил-9-стирилфенантролины формулы: где ; , в качестве оптических сенсоров на катионы кальция, бария и свинца.

Способ дистанционного определения деградации почвенного покрова. Способ включает зондирование подстилающей поверхности, содержащей тестовые участки многоканальным спектрометром, установленнЫм на аэрокосмическом носителе с одновременным получением изображений на каждом канале; расчет методом зональных отношений амплитуд сигналов в каналах частных индексов деградации, а именно процентного содержания гумуса (Н), индекса засоленности (NSI) и индекса влагопотерь (W); определение интегрального показателя деградации D по многопараметрической регрессивной зависимости, вида: D = ( H 0 H ) 1,9 ⋅ ( N S I N S I 0 ) 0,5 ⋅ ( W 0 W ) 0,3 пересчет значениЙ пикселей яркости изображений в масштабе вычисленного показателя деградации каждого пикселя; выделение контуров их результирующих изображений с установленными градациями степени деградации.

Настоящее изобретение относится к способу термической стабилизации полимера, получаемого полимеризацией с раскрытием кольца, а также к способу получения полигидроксикислот, способу анализа остатков металла в полимере и к полилактиду.

Изобретение относится к анализу веществ и может быть использовано при мониторинге состояния окружающей среды. .

Изобретение относится к анализу веществ и может быть использовано при мониторинге состояния окружающей среды. .

Изобретение относится к области термометрии и может быть использовано для определения температуры водосодержащей среды, а именно пульсирующей крови внутри тела. .

Изобретение относится к области аналитического контроля материалов методом спектроскопии комбинационного рассеяния света (СКРС) и может быть использовано при исследовании и контроле порошков, керамики и изделий на их основе, например материалов высокотемпературных электрохимических устройств на основе твердых растворов оксидов со структурным типом флюорита (пространственной группы ) на основе CeO2, ThO2, ZrO2 , HfO2, Bi2O3 с добавками оксидов с трех- или двухвалентными катионами.
Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии. Устройство состоит из источника света, излучение от которого направлено на прозрачную подложку с иммобилизованными на ее поверхности олигонуклеотидами и расположенной под ней системой детекции интенсивности света, прошедшего через подложку. Подложка содержит не менее двух зон, на поверхности одной из которых иммобилизован слой олигонуклеотидов, неспецифических к исследуемой последовательности нуклеотидов, а на поверхности другой зоны иммобилизован слой олигонуклеотидов, специфических к исследуемой последовательности нуклеотидов. Причем система детекции содержит не менее двух фоточувствительных независимых секций, каждая из которых освещена излучением, прошедшим только через одну зону. Устройство позволяет проводить качественный и количественный анализ последовательностей нуклеотидов, повышает точность идентификации последовательностей нуклеотидов. 2 з.п. ф-лы, 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию и анализу медицинских препаратов, и может быть использовано при стандартизации лекарственного растительного сырья. Способ идентификации и количественного определения хлорофилла, каротиноидов и гидроксикоричных кислот при совместном присутствии в листьях крапивы двудомной включает дробную экстракцию в течение часа по 30 мин каждая измельченного сырья с размером частиц 1,0 мм на водяной бане при температуре 100°C 70 этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:100, объединение извлечений и доведение используемым растворителем до 100 мл, с последующим разведением полученного раствора в соотношении 2:25 96 этанолом, измерение оптической плотности раствора относительно 96 этанола в максимумах поглощения 328±1 нм, 442±1 нм и 667±1 нм, вычисление содержания суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту, каротиноидов в пересчете на виолоксантин и хлорофилла в процентах в пересчете на абсолютно сухую массу сырья по формулам. Способ обеспечивает доступность, простоту выполнения, экономичность и малую ошибку определения. 3 ил., 1 пр.

Наверх