Способ диагностики мембранотоксичности


 


Владельцы патента RU 2527698:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно мембранологии, и может быть использовано для тестирования мембранотоксичности ксенобиотиков, применяемых в терапевтической и ортопедической стоматологии в качестве пломбировочных и реконструктивных материалов, а также в токсикологии и фармакологии наряду с традиционными методами оценки токсичности веществ, лекарственных препаратов. Сущность заявляемого способа состоит в том, что в вакуумную пробирку Vakutainer с напылением 2,2 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты берется кровь из расчета 1 мл на пробу; затем из общего объема отбирают по 1,0 мл в пробирки эппендорф, контрольную и содержащие навески ксенобиотиков; после 30-минутной инкубации по унифицированной методике готовят мазки крови путем нанесения на сухое предметное стекло капли крови с получением мазка и окрашивания его по методу Лейшмана; затем проводят исследование форменных элементов крови с помощью светового микроскопа «Zeiss» при увеличении 1500. Появление в поле зрения эхиноцитов - эритроцитов с шиловидными выростами мембраны, отсутствующих в контроле, является показателем мембранотоксичности ксенобиотика. Изобретение позволяет провести экспресс-оценку мембранотоксичности вещества.

 

Изобретение относится к медицине, а именно мембранологии, и может быть использовано для тестирования мембранотоксичности ксенобиотиков, применяемых в терапевтической и ортопедической стоматологии в качестве пломбировочных и реконструктивных материалов, а также в токсикологии и фармакологии наряду с традиционными методами оценки токсичности веществ, лекарственных препаратов.

Существует метод определения потенциальной цитотоксичности биоматериала на культуре клеток мышиных фибробластов (L 929), основанный на определении качественных и количественных изменений в культуре клеток после инкубации с пломбировочным материалом.

Недостатком данного метода является то, что он трудоемкий, дорогостоящий и не достаточно специфичный.

Известен «Способ определения мембранотоксичных свойств ксенобиотиков» (Патент РФ №2073244, дата публикации - 10.02.1997) с использованием реакции спонтанного розеткообразования лимфоцитов до и после введения тестируемых веществ экспериментальным животным, который близок по оцениваемому эффекту и достигаемому результату.

Недостатком данного принятого за прототип способа является длительность, трудоемкость, многоэтапность, необходимость использования экспериментальных животных с последующей обработкой тканей, получение только отсроченного результата.

Целью изобретения является разработка способа оценки мембранотоксичности ксенобиотиков, позволяющего провести экспресс-оценку вещества.

Поставленный технический результат достигается тем, что в вакуумную пробирку Vakutainer с напылением 2,2 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты берется кровь из расчета 1 мл на пробу, затем из общего объема отбирают по 1,0 мл в пробирки эппендорф, контрольную и содержащие навески ксенобиотиков, после 30-минутной инкубации по унифицированной методике готовят мазки крови - на сухое предметное стекло наносят каплю крови, получают мазок и окрашивают его по методу Лейшмана и проводят исследование форменных элементов крови с помощью светового микроскопа «Zeiss» при увеличении 1500. Показателем мембранотоксичности ксенобиотика является появление в поле зрения эхиноцитов - эритроцитов с шиловидными выростами мембраны, отсутствующих в контроле.

Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является разработка быстрого, специфичного, минимально затратного способа определения мембранотоксичности ксенобиотиков.

Способ осуществляется следующим образом: в вакуумную пробирку Vakutainer с напылением 2,2 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты брали 4 мл крови, затем отбирали по 1,0 мл в 4 пробирки эппендорф: контрольную (1) и содержащие по 25 мг навесок полимеризованных стоматологических композитов и адгезива - Filtek Ultimate (2), Filtek Bulk Fill (3) и Single Bond Universal (4). После 30-минутной инкубации по унифицированной методике готовили мазки крови - на сухое предметное стекло наносили каплю исследуемой крови и распределяли ее с помощью чистого шлифовального стекла, держа под углом 45°. Мазок крови при этом располагался на расстоянии 1,0-1,5 см от краев стекла, занимая почти всю его длину, и заканчивался «метелочкой». Полученные препараты (1-4) высушивали на воздухе, маркировали, окрашивали по методу Лейшмана, смывали дистиллированной водой, высушивали на воздухе. Критериями хорошей окраски являлись розовый цвет эритроцитов, фиолетовое окрашивание зернистости нейтрофилов на розовом фоне, нежная азурофильная зернистость моноцитов. Морфологическое исследование форменных элементов крови проводили с помощью светового микроскопа «Zeiss» при увеличении 1500. Показателем мембранотоксичности ксенобиотика является появление в поле зрения эхиноцитов - эритроцитов с шиловидными выростами мембраны, отсутствующих в контроле. В пробе 2 с Filtek Ultimate их количество составило 1%, в пробе 3 с Filtek Bulk Fill - 3%, а пробе 4 с Single Bond Universal количество эхиноцитов составило 12%. Таким образом, подлежавший исследованию адгезив обладает достаточно выраженным мембранотоксичными свойствами, что требует его герметичной изоляции от соприкосновения с тканями полости рта.

Способ может применяться для экспресс-оценки мембранотоксичности различных ксенобиотиков.

Литература

1. ГОСТ РИСО 10993-5-2009.

2. «Способ определения мембранотоксичных свойств ксенобиотиков» (Патент РФ №2073244, дата публикации - 10.02.1997).

Способ экспресс-оценки мембранотоксичности ксенобиотиков, включающий исследование мембранных структур реагирующих клеток под влиянием исследуемого вещества, отличающийся тем, что в вакуумную пробирку Vakutainer с напылением 2,2 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты берется кровь из расчета 1 мл на пробу, затем из общего объема отбирают по 1,0 мл в пробирки эппендорф, контрольную и содержащие навески ксенобиотиков, после 30-минутной инкубации по унифицированной методике готовят мазки крови - на сухое предметное стекло наносят каплю крови, получают мазок, окрашивают его по методу Лейшмана и проводят исследование форменных элементов крови с помощью светового микроскопа «Zeiss» при увеличении 1500, появление в поле зрения эхиноцитов - эритроцитов с шиловидными выростами мембраны, отсутствующих в контроле, является показателем мембранотоксичности ксенобиотика.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики злокачественных новообразований. Из образца клеток крови готовят слайды из нескольких слоев агарозы, один из которых содержит индивидуальные неделимые ядросодержащие клетки.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования развития лимфогенных метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи после проведения комбинированного лечения.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniaea. Способ включает проведение серологических исследований и определение положительно реагирующих животных.

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой способ прогнозирования развития пороговой стадии ретинопатии недоношенных у детей без офтальмоскопических признаков заболевания, отличающийся тем, что на сроке по 33 неделю гестационного возраста в сыворотке крови определяют содержание фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и при уровне VEGF, равном или превышающем 1300 пг/мл, прогнозируют развитие пороговой стадии ретинопатии недоношенных.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и представляет собой способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень липопротеинов высокой плотности и при величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз.

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой ткани кальмара (ПХЭ), а именно в оценке процента угнетения активности ПХЭ в растворах малой - 0,04 Е/мл и высокой - 4 Е/мл концентрации.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается диагностики функционального класса хронической сердечной недостаточности (ХСН). Диагностику осуществляют по разработанной формуле, учитывающей оценку значений изменения конечного диастолического объема левого желудочка сердца и толщины межжелудочковой перегородки в диастолу, определяемых при проведении эхокардиографии, а также изменения значений NT-концевого фрагмента предшественника мозгового натрийуретического пептида.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения больных неходжкинскими лимфомами с поражением костного мозга.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для автоматического анализа образцов кала. Автоматический анализатор образцов кала содержит автоматический контроллер, контейнер для образцов, разжижающее устройство, перемешивающее и смешивающее устройство, анализирующее устройство, устройство всасывания и очистки, соединенное трубопроводами с анализирующим устройством.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики паразитозов желудочно-кишечного тракта животных в молочный период. Пробу помещают в стакан, заливают флотационной жидкостью, размешивают, процеживают, дают взвеси отстояться в течение 15-20 минут для обнаружения ооцист простейших или в течение 40 минут для обнаружения яиц гельминтов.

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к вольтамперометрическому способу определения молочной кислоты, используемой во многих областях пищевой промышленности, ветеринарии, косметологии и играющей огромную роль в физиологическом процессе человека.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии. Способ заключается в использовании в качестве тест-объектов ферментов глутатионредуктазы и каталазы для определения антиоксидантной активности по соотношению скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества, которое должно быть больше 1, причем предварительно перед добавлением в инкубационную среду образцы эфирного масла пихты сибирской разводят диметилсульфоксидом в соотношении 1:1.

Изобретение относится к способу ранней детекции мышечных дегенеративных заболеваний и к способу прогнозирования и/или определения терапевтической эффективности терапевтического средства и/или способа терапии заболеваний посредством измерения тетранор-PGDM (11,15-диоксо-9α-гидрокси-2,3,4,5-тетранорпростан-1,20-диовой кислоты) в образце мочи субъекта и сравнения его содержания относительно образца, выделенного у здорового индивидуума.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой средство для вовлечения мезенхимальной стволовой клетки костного мозга в периферическую кровь из костного мозга, которое вводят в кровеносный сосуд или мышцу и которое содержит любой из компонентов: (a) белок HMGB1; (b) клетка, которая секретирует белок HMGB1; (c) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB1; (d) белок HMGB2; (e) клетка, которая секретирует белок HMGB2; (f) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB2; (g) белок HMGB3; (h) клетка, которая секретирует белок HMGB3; и (i) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB3.

Изобретение относится к медицине и описывает способ тестирования предполагаемого или известного иммуномодулирующего лекарственного средства для активации Т-клеток, который включает стадию приведения в контакт культуры мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) с предварительно определяемым количеством предполагаемого или известного иммуномодулирующего лекарственного средства in vitro и наблюдение активации Т-клеток в культуре РВМС, используя систему считывания, при контакте с предполагаемым или известным иммуномодулирующим лекарственным средством, где плотность клеток культуры РВМС во время стадии предварительного культивирования составляет по меньшей мере 2×106/мл, предпочтительно по меньшей мере 5×106/мл, более предпочтительно по меньшей мере 107/мл, или по меньшей мере 4×105/cм2, предпочтительно по меньшей мере 106/см2, наиболее предпочтительно по меньшей мере 2×106/cм2, при этом предварительную культуру РВМС культивируют в течение по меньшей мере 12 ч.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Настоящее изобретение относится к аналитической химии ауксинов, в частности к способам определения индолил-уксусной кислоты в верхушках концевых приростов побегов и листьев яблони, груши, сливы, черешни, винограда и проростков пшеницы.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Изобретение относится к химической и фармацевтической промышленности и может быть использовано для извлечения новокаина из водных сред с целью его дальнейшего определения.

Изобретение относится к способу скрининга нетератогенного вещества, который включает приведение испытуемого вещества в контакт с цереблоном или фрагментом цереблона, оценку способности испытуемого вещества связываться с цереблоном или фрагментом цереблона и отбор испытуемого вещества, не связывающегося с цереблоном или фрагментом цереблона, или испытуемого вещества, характеризующегося более низкой способностью связываться с цереблоном или фрагментом цереблона по сравнению с талидомидом. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 19 ил., 8 пр.
Наверх