Способ определения антиоксидантной активности эфирного масла растительного происхождения in vitro


 


Владельцы патента RU 2526125:

Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений Россельхозакадемии (ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии) (RU)

Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии. Способ заключается в использовании в качестве тест-объектов ферментов глутатионредуктазы и каталазы для определения антиоксидантной активности по соотношению скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества, которое должно быть больше 1, причем предварительно перед добавлением в инкубационную среду образцы эфирного масла пихты сибирской разводят диметилсульфоксидом в соотношении 1:1. Достигается повышение точности определения. 2 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии.

Совершенствование и создание новых методов экспериментальной оценки фармакологических веществ, а также новые источники получения потенциальных лекарственных средств, значительно расширяют принципиальные возможности фармакотерапии основных заболеваний человека.

Эфирные масла - это вещества сложного химического состава, широко использующиеся в производстве косметических товаров, средств гигиены и медицинских препаратов, что обусловлено наличием в них биологически активных компонентов. Например, противокашлевое действие эфирного масла багульника болотного связано с содержанием в эфирном масле сесквитерпенового спирта ледола.

Компонентный состав является важнейшей характеристикой эфирного масла и определяет все его полезные свойства антифунгальные, гипотензивные, цитотоксические, противовоспалительные, противомикробные, рострегулирующие, инсектицидные.

В литературе редко встречается совместное описание состава эфирного масла и его биологического действия, упоминается эфирное масло как таковое и идет речь о его биологических свойствах, при этом полностью отсутствуют данные о химическом составе того образца, с которым проводились те или иные испытания [Белоусова Н.И. Химический состав эфирного масла багульников / Белоусова Н.И., Хан В.А., Ткачев А.В. // Химия растительного сырья. - 1999. - №3. - С.5-38]. Между тем выявление биологической активности эфирных масел, в том числе, выделенного из древесной зелени пихты (Abies Sibirica), осуществимо лишь при условии детального изучения химического состава и его влияния на фармакологическую активность на этапе экспериментальных исследований.

Пихта сибирская является одним из самых распространенных эфироносов в России, при переработке хвои которой можно получить высококачественное эфирное масло, способное влиять на концентрации легких отрицательных ионов, благоприятно действующих на человека, и выполняющее функцию по "обеспечению" атмосферного воздуха биологически активным кислородом.

В настоящее время имеются способы исследования определения биологических свойств эфирных масел, в том числе с использованием микроорганизмов.

Известен стандартный микробиологический метод хемолюминесценции, позволяющий выявлять вещества, обладающие антиоксидантной активностью, с помощью тест-объекта, в качестве которого используют перитонеальные макрофаги [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, Минздрав РФ, 2000 г.].

Известен способ определения антиоксидантной активности (пат. РФ №2144674) супероксиддисмутазы и химических соединений путем оценки их способности ингибировать скорость реакции аутоокисления адреналина в щелочной среде, которую оценивали спектрофотометрически по величине оптической плотности продукта аутоокисления адреналина, образующегося в отсутствии и присутствии исследуемых препаратов. Антиоксидантную активность определяют по накоплению продукта аутоокисления адреналина, поглощающего при длине волны 347 нм (волновое число 28,8). Добавляют адреналин, используя готовую аптечную форму 0,1% раствора адреналин гидрохлорида pH среды, в которой проводят реакцию, составляет не менее 10,65 ед. Реакцию проводят при любой комнатной температуре, но не ниже 15°C. Опытным путем было установлено, что коммерческий препарат СОД, гемолизат эритроцитов, известные антиоксиданты (аскорбат, цистеин) способны ингибировать процесс накопления этого соединения, что позволяет использовать этот способ измерения как тест-систему для экспресс оценки антиоксидантных свойств различных препаратов и химических соединений. Существенным преимуществом предлагаемого подхода является возможность использования легкодоступных, недорогих химических реактивов: 0,1% аптечного раствора гидрохлорид адреналина и 0,2 М карбонатного буфера, pH 10,65.

Исследование биологической активности БАВ из экстрактов растительного сырья описано в пат. РФ №2115425. Так, например, исследования по изучению антиоксидантной активности БАВ проводилось на нейтрофилах крови. Индуцировался зимозаном процесс кислородного взрыва и исследовался процесс его ингибирования исследуемым препаратом. Препараты, ингибирующие индуцированный кислородный взрыв, по литературным данным, обладают антиоксидантной и противовоспалительной активностью. Исследование проводилось на цельной крови донора. Гепаринизированная кровь, полученная из локтевой вены, в количестве 0,1 мл добавлялась в анализатор хемолюминометра, затем добавлялось по 0,1 мл растворов люминола и зимозана (для индуцированного кислородного взрыва в нейтрофилах крови). В клетках крови нарастал кислородный взрыв, что регистрировалось по увеличению хемолюминесценции. На пике кислородного взрыва в анализатор вводился препарат в конечной концентрации 0,5% и замерялось изменение люминесценции. Контролем служила кровь, к которой не добавлялся препарат. В результате было установлено, что БАВ достоверно ингибирует в клетках крови активные формы кислорода, участвующие в воспалительных реакциях в организме. Фоновая люминесценция сыворотки крови и препарата ничтожно мала и не влияет на полученный результат. Так как растительный экстракт БАВ достоверно ингибирует индуцированный зимозаном кислородный взрыв, его можно отнести к группе препаратов, обладающих антиоксидантной, противовоспалительной активностью, и он может быть использован в качестве профилактического средства при воздействии повышенных температур.

Недостатком этих способов выявления веществ, обладающих антиоксидантной активностью, является большая трудоемкость и необходимость постоянного контроля за сохранностью и чистотой стандартных тест-объектов, что значительно увеличивает экономические и временные затраты на первичный скрининг.

Наиболее близким способом к заявляемому относится известный способ выявления веществ (пат. РФ №2181892), обладающих антиоксидантными свойствами, in vitro, заключающийся в использовании тест-объектов. В качестве тест-объекта используют ферменты глутатионредуктазу (ГР) и один из антиоксидантных ферментов супероксиддисмутаза (СОД), глутатионпероксидаза (ГП) и каталаза (КАТ), определяют скорость ферментативной реакции веществ на тест-объектах, при этом соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть больше 1.

Так как эфирные масла - это вещества сложного химического состава, то недостатком прототипа является невозможность определения биологической активности эфирного масла пихты сибирской, в том числе антиоксидантной активности.

Выявление биологической активности эфирных масел должно сопровождаться детальным исследованием химического состава, изучением биологической активности отдельных фракций эфирного масла.

Использование высокочувствительных ферментных тест-систем in vitro позволяет определять не только антиоксидантную активность эфирного масла в целом, но и фракций, отобранных в процессе отгонки, что позволяет контролировать наличие биологической активности в многокомпонентных эфирных маслах растительного происхождения, в том числе их фракций, т.к. не всегда известно сочетанное действие компонентов и направленность их биологического действия.

Целью данного изобретения является повышение точности определения антиоксидантной активности эфирного масла растительного происхождения с помощью тест-объектов, таких как ГР и КАТ.

Поставленная цель достигается за счет использования способа определения антиоксидантной активности эфирного масла растительного происхождения in vitro, заключающийся в использовании в качестве тест-объектов ферментов ГР и КАТ для определения антиоксидантной активности по соотношению скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества, которое должно быть больше 1, при этом предварительно перед добавлением в инкубационную среду образцы эфирного масла разводят диметилсульфоксидом в соотношении 1:1.

Предлагаемый способ позволяет определить биологическую активность таких химически сложных смесей, как эфирные масла растительного происхождения in vitro.

В доступных источниках научно-технической и патентной информации не выявлены сведения об определении биологической активности эфирного масла растительного происхождения с помощью тест систем in vitro. Поэтому предлагаемое техническое решение способа обладает новизной и соответствует критерию патентоспособности "изобретательский уровень".

Способ определения биологической активности эфирного масла растительного происхождения в соответствии с изобретением осуществляется на примере эфирного масла пихты сибирской следующим образом.

Эфирное масло получали известным способом из древесной зелени пихты сибирской (Abies Sibirica) методом исчерпывающей гидропародистилляции в течение 20 часов с использованием цельнометаллической установки с насадкой Клевенджера. Разовая загрузка воздушно сухого исходного сырья составляла не менее 1,00 кг. Фракции эфирного масла отбирали в процессе получения эфирного масла следующим образом: первую фракцию получали в течение 30 минут от начала выделения масла; вторую - после двух часов; третью - через четыре часа; четвертую - после 5 часов; пятую - через восемь часов.

Состав эфирного масла в его отдельных фракциях определяли методом хроматомасс-спектрометрии на приборе Agilent Technologies 6890.

Биологическую активность исследуемого эфирного масла определяли с помощью молекулярных тест-систем in vitro, в которых в качестве тест-объектов использовали ферменты системы антиоксидантной защиты: ГР и КАТ [пат. РФ №2181892].

Использованы молекулярные тест-системы in vitro прототипа, в которых в качестве тест-объектов применяли ферменты системы антиоксидантной защиты: ГР и КАТ. Эти ферменты играют ключевую роль в обеспечении регуляции свободно радикального окисления клетки и могут служить мишенью для лекарственных средств. Ингибирование ферментов антиоксидантной защиты способствует накоплению радикалов в патогенной клетке, что вызывает пероксидацию белков и нуклеиновых кислот и приводит к остановке роста и гибели клетки, поэтому способность активировать КАТ и ГР связано с наличием антиоксидантных свойств изучаемого эфирного масла, в том числе и пихты сибирской.

Каталитическую активность каталазы определяли по скорости разложения субстрата - перекиси водорода (H2O2). В состав реакционной смеси входил фосфатный буфер (pH 7,8), H2O2 в концентрации - 0,03%, концентрация фермента составляла 0,2 мкг/мл. Продолжительность реакции разложения субстрата (H2O2) ферментом 5-10 мин. Реакцию останавливали добавлением в реакционную смесь аммонния молибденовокислого ((NH4)6Mo7O24·4H2O). Оставшуюся перекись водорода измеряли в виде комплекса с (NH4)6Mo7O24·4H2O на спектрофотометре Shimadzu MPS-2000 при λ=410 нм.

Скорость глутатионредуктазной реакции (ГР) определяли в кварцевых кюветах при спектрофотометрической регистрации убыли НАДФН при λ=340 нм. Инкубационная среда состояла из буфера 0,05М трис-(оксиметил)-аминометан - HCl, содержащего 0,25 mM ЭДТА -Na, pH - 7,4 и 0,033М глутатиона окисленного (Г-SS-Г). Реакцию запускали добавлением 2 mM НАДФН. Продолжительность записи реакции - 1-1,5 мин.

Для эффективного определения биологической активности эфирного масла необходимо провести пробоподготовку. Для улучшения смешиваемости эфирного масла с компонентами инкубационной пробы, эфирное масло разводили в диметилсульфоксиде (ДМСО) перед добавлением в инкубационную среду. Как выяснилось в результате эксперимента, ДМСО в наименьшей степени оказывает влияние на указанные ферменты, что позволяет более точно проводить анализ. Количество ДМСО при разведении эфирного масла, позволяющего в полной мере выявлять биологическую активность эфирного масла определено в соотношении 1:1, что в пробе соответствует количеству - 10 мкл/мл. Также были проведены опыты с использованием спирта и ПАВа в качестве разбавителя тест-объектов. Но при этом выбранные разбавители оказывали влияние на указанные ферменты, что не позволяло объективно определить их биологическую активность.

Сопоставляя полученные данные отобранных фракций эфирного масла и изменения антиоксидантной активности, характеризующиеся скоростями реакции ферментов КАТ, ГР, можно определить влияние химического состава на фармакологическое действие эфирного масла не только пихты сибирской, но и других эфирных масел.

В работе использовали лиофилизированные препараты ферментов - ГР, КАТ.

Ниже приведены примеры с использованием эфирного масла пихты сибирской.

Пример 1. Каталитическая активность каталазы (КАТ)

Каталитическую активность каталазы определяли по скорости разложения субстрата - перекиси водорода (H2O2) ферментом КАТ в реакционной смеси. Реакционная смесь состояла из фермента, растворенного в фосфатном буфере (pH 7,8), концентрация которого составляла 0,2 мкл/мл., субстрата (H2O2) в концентрации - 0,03% и исследуемого эфирного масла - 10 мкл/мл. При этом для улучшения смешиваемости эфирного масла с компонентами инкубационной пробы, эфирное масло разводили растворителем перед добавлением в инкубационную среду. В качестве растворителя использовали ДМСО (диметилсульфоксид), который в наименьшей степени оказывает влияние на фермент, что позволяет более точно проводить анализ. Количество ДМСО при разведении эфирного масла, позволяющего в полной мере выявлять биологическую активность, определено в соотношении 1:1, что в пробе соответствует количеству - 10 мкл/мл. Продолжительность реакции разложения субстрата ферментом (H2O2) 5-10 мин.

Реакцию останавливали путем добавления в реакционную смесь аммонния молибденовокислого ((NH4)6Mo7O24·4H2O). Оставшуюся после реакции разложения ферментом КАТ перекись водорода измеряли в виде комплекса с (NH4)6Mo7O24·4H2O путем определения оптической плотности на спектрофотометре при λ=410 нм (опыт). Расчет скорости каталазной реакции (КАТ) осуществлялся по следующей формуле:

КАТ=ΔAD(холостая-опыт)/(ε*10 мин*b)/4, где холостая - оптическая плотность пробы без добавления фермента; опыт - оптическая плотность оставшейся перекиси водорода после реакции разложения; ε - коэффициент поглощения перекиси водорода; b - концентрация фермента в реакционной смеси (мкг).

Пример 2. Скорость глутатионредуктазной реакции (ГР)

Скорость глутатионредуктазной реакции (ГР) определяли в кварцевых кюветах при спектрофотометрической регистрации убыли НАДФН при λ=340 нм на двулучевом спектрофотометре Shimadzu MPS-2000. Инкубационная среда состояла из буфера 0,05М трис-(оксиметил)-аминометан - HCl, содержащего 0,25 mM ЭДТА - Na, pH-7,4 и 0,033М глутатиона окисленного (Г-SS-Г). Реакцию запускали добавлением 2 mM ИАДФН и включали запись. Продолжительность записи - 1-1,5 мин. ГР реакцию записывали без добавления испытуемого вещества (контроль) и в присутствии разбавленного эфирного масла в концентрации 10 мкл/мл (опытная проба). Скорость ГР реакции рассчитывали по формуле

v=(ΔD)/(α*t*β), где v - скорость реакции, мкмоль/мин.мг белка; ΔD - измеренная убыль оптической плотности за период измерения; α - коэффициент миллимолярной экстинкции, равный 6,22 mM; β - количество фермента в пробе, мкг/мл.

В качестве растворителя также использовали ДМСО (диметилсульфоксид) в соотношении 1:1, что в пробе соответствует количеству - 10 мкл/мл.

Скорость ферментативных реакций в % для всех анализируемых ферментов рассчитывали по соотношению скорости реакции в опытной пробе и скорости реакции в контроле.

При добавлении в инкубационную среду первых трех фракций эфирного масла пихты сибирской активность ферментов является наивысшей, постепенно снижаясь в 4-й и 5-й фракции. Максимально высокая скорость ферментативных реакций КАТ и ГР составляет соответственно 165,70 и 908,02% и по мере процесса отгонки эфирного масла снижается не значительно, в то время как последние отобранные фракции резко снижают активацию ферментов до 111,41% (КАТ) и 191,44% (ГР) (см. табл.1).

Аналогичные примеры были проведены на эфирном масле багульника болотного, сосны обыкновенной, тысячелистника. Предварительное разбавление тест-объекта в ДМСО позволило определить антиоксидантную активность исследуемых эфирных масел.

Корреляция изменения химического состава и активности ферментов в процессе выделения эфирного масла, определяемая с помощью тест-систем in vitro, позволяет в дальнейшем при наличии значительной базы данных оптимизировать и упростить технологический процесс получения целевой биологической активности, определяя компонентный состав фракций эфирного масла и используя только дешевые и высокоэффективные ферментные тест-системы in vitro.

Таким образом, специфические ферментные биотест-системы in vitro могут быть использованы при оценке антиоксидантной активности различных эфирных масел и их отдельных фракций. Причем биотест-системы позволяют проводить сравнительную оценку биологической активности вместе с предварительным определением химического состава изучаемого объекта, что особенно важно при тестировании веществ сложного химического состава.

Выводы

1. Состав эфирного масла пихты сибирской изменяется в зависимости от времени выделения масла.

2. Показана возможность применения тест-систем in vitro для анализа биологической активности цельного эфирного масла и фракций с измененным количественным составом компонентов эфирного масла пихты сибирской.

3. Данный способ оценки биологически активных веществ позволяет находить новые источники получения потенциальных лекарственных средств и значительно расширять принципиальные возможности фармакотерапии основных заболеваний человека.

Таблица 1
Влияние эфирного масла пихты сибирской на скорость ферментативных реакций
Эфирное масло пихты сибирской ГР КАТ
нмоль мин мг % отн Отношение скорости ферментативной реакции нмоль мин мг % отн Отношение скорости ферментативной реакции
Контроль без эфирного масла 7,3±0,22 100,0 - 3,6±0,01 100,0 -
1-ая фракция 66,3±1,65 908,0±27,2 9.08 5,9±0,018 165,7±6,1 1,65
2-ая фракция 63,1±1,70 864,4±25,9 8.64 5,7±0,015 167,8±7,0 1.67
3-ая фракция 22,7±0,70 310,2±9,3 3.10 5,9±0,019 164,8±7,9 1.64
4-ая фракция 22,4±0,56 306,1±9,2 3.06 4,06±0,101 113,5±3,4 1.13
5-ая фракция 14,0±0,40 191,4±5,7 1.91 3,98±0,103 111,4±3,3 1.11
Цельное эфирное масло 63,8±1,60 873,9±31,1 8.73 8,27±0,03 231,6±7,2 2.31

Способ определения антиоксидантной активности эфирного масла пихты сибирской (Abies Sibirica) in vitro, заключающийся в использовании в качестве тест-объектов ферментов глутатионредуктазы и каталазы для определения антиоксидантной активности по соотношению скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества, которое должно быть больше 1, отличающийся тем, что предварительно перед добавлением в инкубационную среду образцы эфирного масла пихты сибирской разводят диметилсульфоксидом в соотношении 1:1.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу ранней детекции мышечных дегенеративных заболеваний и к способу прогнозирования и/или определения терапевтической эффективности терапевтического средства и/или способа терапии заболеваний посредством измерения тетранор-PGDM (11,15-диоксо-9α-гидрокси-2,3,4,5-тетранорпростан-1,20-диовой кислоты) в образце мочи субъекта и сравнения его содержания относительно образца, выделенного у здорового индивидуума.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой средство для вовлечения мезенхимальной стволовой клетки костного мозга в периферическую кровь из костного мозга, которое вводят в кровеносный сосуд или мышцу и которое содержит любой из компонентов: (a) белок HMGB1; (b) клетка, которая секретирует белок HMGB1; (c) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB1; (d) белок HMGB2; (e) клетка, которая секретирует белок HMGB2; (f) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB2; (g) белок HMGB3; (h) клетка, которая секретирует белок HMGB3; и (i) вектор, в который встроена ДНК, кодирующая белок HMGB3.

Изобретение относится к медицине и описывает способ тестирования предполагаемого или известного иммуномодулирующего лекарственного средства для активации Т-клеток, который включает стадию приведения в контакт культуры мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) с предварительно определяемым количеством предполагаемого или известного иммуномодулирующего лекарственного средства in vitro и наблюдение активации Т-клеток в культуре РВМС, используя систему считывания, при контакте с предполагаемым или известным иммуномодулирующим лекарственным средством, где плотность клеток культуры РВМС во время стадии предварительного культивирования составляет по меньшей мере 2×106/мл, предпочтительно по меньшей мере 5×106/мл, более предпочтительно по меньшей мере 107/мл, или по меньшей мере 4×105/cм2, предпочтительно по меньшей мере 106/см2, наиболее предпочтительно по меньшей мере 2×106/cм2, при этом предварительную культуру РВМС культивируют в течение по меньшей мере 12 ч.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Настоящее изобретение относится к аналитической химии ауксинов, в частности к способам определения индолил-уксусной кислоты в верхушках концевых приростов побегов и листьев яблони, груши, сливы, черешни, винограда и проростков пшеницы.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Изобретение относится к химической и фармацевтической промышленности и может быть использовано для извлечения новокаина из водных сред с целью его дальнейшего определения.

Изобретение относится к области фармакологии и касается способов оценки их противовоспалительной активности. Способ оценки противовоспалительной активности препарата включает введение исследуемого препарата экспериментальному животному, последующую индукцию воспаления каррагенином и исследование крови экспериментального животного спустя 3 часа после индукции воспаления.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу специфического отбора высокоаффинных молекул ДНК (ДНК-аптамеров) к рекомбинантному белку-мишени. Указанный способ включает синтез единой полипептидной цепи рекомбинантного белка, содержащего в своем составе фрагмент глютатион-S-трансферазы, целевой белок-мишень, пептидную последовательность, расщепляемую летальным фактором B.

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к вольтамперометрическому способу определения молочной кислоты, используемой во многих областях пищевой промышленности, ветеринарии, косметологии и играющей огромную роль в физиологическом процессе человека. Задачей заявляемого изобретения является определение концентрации молочной кислоты методом вольтамперометрии. Молочную кислоту переводят из пробы в раствор и проводят вольтамперометрическое накопление молочной кислоты в перемешиваемом растворе при барботировании инертным газом в течение 30 с при потенциале электронакопления 1,2÷1,4 В, относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода на фоновом электролите - 0,1 М Na2HPO4 с последующей регистрацией катодных пиков в дифференциальном режиме съемки вольтамперограмм при скорости развертки потенциала 30÷40 мВ/с, концентрацию молочной кислоты определяют по высоте пика в диапазоне потенциалов 0,25÷0,40 В методом добавок аттестованных смесей. Предложенный способ прост, не требует большого количества реактивов и трудозатрат. 2 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно мембранологии, и может быть использовано для тестирования мембранотоксичности ксенобиотиков, применяемых в терапевтической и ортопедической стоматологии в качестве пломбировочных и реконструктивных материалов, а также в токсикологии и фармакологии наряду с традиционными методами оценки токсичности веществ, лекарственных препаратов. Сущность заявляемого способа состоит в том, что в вакуумную пробирку Vakutainer с напылением 2,2 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты берется кровь из расчета 1 мл на пробу; затем из общего объема отбирают по 1,0 мл в пробирки эппендорф, контрольную и содержащие навески ксенобиотиков; после 30-минутной инкубации по унифицированной методике готовят мазки крови путем нанесения на сухое предметное стекло капли крови с получением мазка и окрашивания его по методу Лейшмана; затем проводят исследование форменных элементов крови с помощью светового микроскопа «Zeiss» при увеличении 1500. Появление в поле зрения эхиноцитов - эритроцитов с шиловидными выростами мембраны, отсутствующих в контроле, является показателем мембранотоксичности ксенобиотика. Изобретение позволяет провести экспресс-оценку мембранотоксичности вещества.

Изобретение относится к способу скрининга нетератогенного вещества, который включает приведение испытуемого вещества в контакт с цереблоном или фрагментом цереблона, оценку способности испытуемого вещества связываться с цереблоном или фрагментом цереблона и отбор испытуемого вещества, не связывающегося с цереблоном или фрагментом цереблона, или испытуемого вещества, характеризующегося более низкой способностью связываться с цереблоном или фрагментом цереблона по сравнению с талидомидом. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 19 ил., 8 пр.
Заявленное изобретение относится к области контроля качества лекарственных препаратов и представляет собой способ определения подлинности и количественного содержания бензэтония хлорида в лекарственных препаратах, включающий разделение компонентов препарата с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, где в качестве элюента используют смесь ацетонитрила, гидрофосфата тетрабутиламмония, двузамещенного фосфата калия и воды, при содержании гидрофосфата тетрабутиламмония в количестве 2,5 мМ, двузамещенного фосфата калия в количестве 5 мМ, при этом разделение компонентов препарата проводят при длине колонки 125 мм. Изобретение обеспечивает повышение точности и сокращение времени анализа, так как не требует специальной пробоподготовки. 9 пр.

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах. Способ определения жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии включает выделение жирорастворимых витаминов из субстанции экстракцией 96%-ным этанолом, отделение спиртового экстракта витаминов с помощью делительной воронки, последовательное хроматографирование с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» ПТСХ-П-А на полимерной подложке при участии двух элюентов с различной величиной пробега, время насыщения камеры парами элюента - 20 мин, время элюирования - 55 мин; высушивание при температуре не менее 80°C пластин в термостате в течение 3-5 мин, обработку пластины проявителем - 5%-ным спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой, согласно изобретению в качестве элюентов использованы гексан:хлороформ (19:1) и гексан:хлороформ (3:1), а детектирование хроматографической зоны β-каротина проводят до обработки пластины проявителем при дневном свете. Способ обеспечивает упрощение и ускорение процесса определения жирорастворимых витаминов. 10 ил., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию и анализу медицинских препаратов, и может быть использовано при стандартизации лекарственного растительного сырья. Способ идентификации и количественного определения хлорофилла, каротиноидов и гидроксикоричных кислот при совместном присутствии в листьях крапивы двудомной включает дробную экстракцию в течение часа по 30 мин каждая измельченного сырья с размером частиц 1,0 мм на водяной бане при температуре 100°C 70% этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:100, объединение извлечений и доведение используемым растворителем до 100 мл, с последующим разведением полученного раствора в соотношении 2:25 96% этанолом, измерение оптической плотности раствора относительно 96% этанола в максимумах поглощения 328±1 нм, 442±1 нм и 667±1 нм, вычисление содержания суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту, каротиноидов в пересчете на виолоксантин и хлорофилла в процентах в пересчете на абсолютно сухую массу сырья по формулам. Способ обеспечивает доступность, простоту выполнения, экономичность и малую ошибку определения. 3 ил., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и заключается в проведении хроматографического анализа образца биопробы. Для этого образец наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр наносят радиально стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл. Фильтр обрабатывают реагентом-проявителем, содержащим 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1, и термостатируют при 100°С до появления окрашенных пятен. Интенсивность окраски пятна пробы сравнивают с окраской пятен стандартных калибровочных растворов, по которым и устанавливают концентрацию метронидазола в анализируемом образце. Способ позволяет быстро и достоверно проводить мониторинг содержания метронидазола и, тем самым, своевременно корректировать процесс лечения. 3 пр.

Изобретение относится к области аналитической химии. Способ характеризуется тем, что электрохимически концентрируют бензойную кислоту на поверхности графитового электрода в течение 90 с при потенциале электролиза (-0,500) В на фоне 0,1 моль/л натрия гидрофосфата, затем регистрируют поляризационные кривые при линейной скорости развертки потенциала 25 мВ/с и по высоте пика в диапазоне потенциалов 0,5-1,6 В относительно хлорсеребряного электрода определяют концентрацию бензойной кислоты. Способ позволяет с высокой чувствительностью и экспрессностью определить бензойную кислоту в лекарственных препаратах. 3 пр., 6 табл.

Изобретение относится к биологии, токсикологической и аналитической химии, а именно к способам определения прокаина в плазме крови. В плазму крови, содержащую прокаин, вводят фторид натрия для создания концентрации 10 мг/мл, полученную смесь обрабатывают ацетоном, извлечение отделяют от выпавшего осадка путем фильтрования, ацетон из фильтрата испаряют в токе воздуха при комнатной температуре, водный остаток разбавляют путем прибавления воды, образующийся раствор насыщают сульфатом аммония, подщелачивают аммонийным буферным раствором до pH 9,0-9,5, экстрагируют двукратно порциями органического экстрагента, в качестве которого используется 30% раствор камфоры в метилацетате, при соотношении водной и органической фаз 1:1 по объему, органические экстракты отделяют, объединяют, растворитель из объединенного экстракта испаряют в токе воздуха при комнатной температуре, остаток хроматографируют в тонком слое силикагеля СТХ-1А на пластинах «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ, применяя подвижную фазу дихлорметан-этанол в соотношении 6:4 по объему, хроматограмму проявляют в УФ-свете, анализируемое вещество элюируют из сорбента смесью ацетонитрил-метанол-0,025 М раствор дигидрофосфата калия с pH 3,0 в соотношении 10:10:90 по объему, хроматографируют методом ВЭЖХ с применением обращеннофазового сорбента «Nucleosil C18», полярной подвижной фазы ацетонитрил-метанол-0,025 М раствор дигидрофосфата калия с pH 3,0 в соотношении 10:10:90 по объему и УФ-детектора, регистрируют оптическую плотность при длине волны 298 нм и вычисляют количество анализируемого соединения по площади хроматографического пика. Способ обеспечивает повышение чувствительности определения. 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии. Заявлено применение жировой эмульсии для парентерального питания в качестве растворителя для малорастворимых в воде соединений. Жировая эмульсия содержит в 1 л раствора: 30 г масла соевого рафинированного, 30 г триглицеридов со средней длиной цепи, 25 г масла оливкового рафинированного, 15 г рыбьего жира очищенного. Технический результат заключается в получении растворителя для малорастворимых в воде соединений, позволяющего определять показатели и спектр биологической активности новых соединений химической природы на этапах доклинических и клинических испытаний, не изменяющего основные биологические константы и обладающего биологической инертностью. 2 табл., 2 пр.
Наверх