Способ моделирования генерализованного амилоидоза у животных



Способ моделирования генерализованного амилоидоза у животных
Способ моделирования генерализованного амилоидоза у животных
Способ моделирования генерализованного амилоидоза у животных
Способ моделирования генерализованного амилоидоза у животных

 


Владельцы патента RU 2536556:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Минздрава Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной нефрологии, и может быть использовано для моделирования генерализованного амилоидоза у животных для изучения патогенеза, профилактики и лечения амилоидоза. Способ включает введение сирийским хомякам нативной овечьей плазмы подкожно через день из расчета 0,025 мл/г массы тела. Введение осуществляют в течение 30 дней эксперимента. Способ, являясь легко воспроизводимым, обеспечивает сокращение сроков моделирования указанной патологии за счет большей антигенности выбранного белкового препарата для данного вида животных. При этом способ позволяет успешно изучать функциональное состояние системы почек, минерального обмена и других показателей организма животных. 1 пр., 2 табл., 4 ил.

 

Данное изобретение относится к медицине, экспериментальной патологии и может быть использовано для моделирования экспериментального амилоидоза у животных, изучения патогенеза, профилактики и лечения амилоидоза, особенно при исследовании функционального состояния почек.

Амилоидоз (амилоидная дистрофия) - нарушение белкового обмена, сопровождающееся образованием и отложением в тканях специфического белково-полисахаридного комплекса - амилоида.

Развитие амилоидоза связано с извращением белково-синтетической функции ретикуло-эндотелиальной системы, накоплением в плазме крови аномальных белков, служащих аутоантигенами. В результате взаимодействия антигена с антителом происходит осаждение грубодисперсных белков, участвующих в образовании амилоида. Откладываясь в тканях (например, в стенках сосудов, железистых и т.п.), амилоид вытесняет функционально специализированные элементы органа.

Амилоид является сложным гликопротеидом, в котором фибриллярные и глобулярные белки тесно связаны с полисахаридами. Амилоид состоит из полипептидных цепей, что определяет двойное лучепреломление при окраске конго красным, свойственное амилоиду. Кроме фибриллярного белка, в состав амилоида входит другой белок - так называемый Р-компонент, который одинаков при всех формах амилоидоза.

Установлено, что амилоид содержит альбумины, глобулины, фибриноген, фибрин; среди плазменных белков преобладает γ-глобулин (Dammacco F. Amyloidosis: clinical picture, immunological and biomolecular features, treatment prospects // Ann. Ital. Med. Int. -1991. - Jan-Mar. - 6 (1 Pt 2). - P.107-116.

Однако механизмы формирования амилоидных отложений и нарушения функций органов при этом изучены крайне слабо.

Известен классический способ моделирования экспериментального амилоидоза (Грицман А.Ю. Некоторые вопросы экспериментальной терапии амилоидоза и резорбции амилоида // Автореф. дисс. на соиск. уч. ст. канд. мед. наук. М., 1974), заключающийся во введении белым мышам через день по 0,5 мл 5% казеината натрия подкожно в течение 60 дней. Недостатком его является то, что приготовление раствора казеината связано с определенными сложностями, такими как поиск чистого казеина, необходимость растворения его точной навески в кипящем 0,25% растворе гидроокиси натрия, фильтрование, стерилизация, хранение. Готовый раствор казеината натрия имеет щелочную реакцию, высокое содержание натрия, что резко ограничивает применение данной модели при исследовании функционального состояния почек, системы кровообращения, минерального обмена и других показателей, связанных с влиянием натрия и его определением.

Также известен способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных (патент РФ на изобретение №2269825, Заалишвили Т.В., Козырев К.М., зарегистрированный 20.02.2009 г., заявка №2004127649/14 от 15.09.2004 г., МПК' G09B 23/28), заключающийся во введении белым мышам через день по 1 мл нативного яичного альбумина подкожно в течение 30 дней эксперимента.

Недостатком способа является то, что белые мыши являются мелкими животными, что значительно усложняет исследование функционального состояния различных систем экспериментальных животных. Учитывая то, что у белых мышей объем получаемой крови после декапитации не превышает 1,0 мл, затрудняется ее использование для нужд биохимических и патофизиологических исследований. Также затруднено исследование функционального состояния почек из-за малых физиологических объемов и анатомических размеров, а также сложность и длительность воспроизведения модели амилоидоза.

За прототип взят способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных (патент РФ на изобретение №2347279, Пухова И.У., Козырев К.М., Брин В.Б., зарегистрированный 20.02.2009 г. заявка №2007135901/14 от 27.09.2007 г., МПК' G09B 23/28), заключающийся во введении сирийским хомякам нативной свиной плазмы через день подкожно из расчета 0,025 мл/г массы тела в течение 60 дней эксперимента.

Недостатком прототипа является то, что в эксперименте используется свиная плазма, обладающая меньшей антигенностью и вводимая в течение 60 дней.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи, заключающейся в разработке способа моделирования генерализованного амилоидоза у животных.

Решение этой задачи обеспечивает расширение возможностей моделирования генерализованного амилоидоза у животных, особенно при исследовании функционального состояния системы почек, минерального обмена и других показателей экспериментальных животных.

Предлагаемый способ отличается от прототипа тем, что для моделирования генерализованного амилоидоза используется нативная овечья плазма (обладающая большими антигенными свойствами) из расчета 0,025 мл/г массы тела в течение 30 дней эксперимента с целью получения и возможности изучения патогенеза, профилактики и лечения амилоидоза, особенно при исследовании функционального состояния почек. Введение нативной овечьей плазмы приводит к развитию системного вторичного амилоидоза с преимущественным поражением почек, селезенки, печени и миокарда в течение 30 дней эксперимента.

Поставленная задача достигается тем, что способ моделирования генерализованного амилоидоза у животных включает введение сирийским хомякам белкового препарата подкожно через день из расчета 0,025 мл/г массы тела и отличается тем, что в качестве белкового препарата сирийским хомякам вводят нативную овечью плазму в течение 30 дней эксперимента.

Заявленный способ является эффективным, экономически выгодным и легко воспроизводимым.

По имеющимся у автора сведениям совокупность существенных признаков, характеризующих сущность заявляемого изобретения, не известна, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «новизна».

Экспериментальным животным (сирийские хомяки-самцы массой тела 100-120 г) в качестве белкового препарата вводят нативную овечью плазму (белки которой обладают наибольшей антигенностью) через день из расчета 0,025 мл/г массы тела в течение 30 дней эксперимента, что обеспечивает расширение возможностей моделирования генерализованного амилоидоза у животных, благодаря более быстрому развитию патологии, особенно при исследовании функционального состояния почек, системы кровообращения, минерального обмена и других показателей экспериментальных животных, что позволяет сделать вывод о соответствии критерию «изобретательский уровень».

Совокупность существенных признаков, характеризующих сущность изобретения, в принципе может быть многократно использована в медицине с получением результата, заключающегося в эффективном и быстро воспроизводимом способе моделирования генерализованного амилоидоза у животных, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».

Данный способ осуществляется следующим образом.

Для получения генерализованного амилоидоза в качестве экспериментальных животных выбраны половозрелые сирийские хомяки-самцы массой 100-120 г.

Для моделирования генерализованного амилоидоза экспериментальным животным проводятся подкожные инъекции нативной овечьей плазмы через день из расчета 0,025 мл/г массы тела в течение 30 дней. Нативная овечья плазма получается из крови овец, забиваемых на бойне. Кровь из сонной артерии собирается в стерильный сосуд с предварительным добавлением гепарина из расчета 5000 Ед./л крови. Сосуд накрывается стерильной полиэтиленовой крышкой. Стабилизированная кровь разливается в центрифужные пробирки и центрифугируется при скорости 2500 оборотов в минуту в течение 15 мин. Далее полученная плазма собирается с помощью стерильного шприца емкостью 20 мл и разливается в пластиковые пробирки и замораживается при температуре -10°C. Перед проведением инъекций плазма размораживается при температуре 30°C.

У контрольных и опытных животных исследуется 6-часовой спонтанный диурез. Клубочковая фильтрация определяется по клиренсу эндогенного креатинина, рассчитывается канальцевая рабсорбция воды. Содержание натрия и калия в моче определяется методом пламенной фотометрии, содержание кальция - спектрофотометрически. Основные процессы мочеобразования и экскреция электролитов определяются по истечении 15 и 30 дней эксперимента.

По истечении времени эксперимента (1 мес) животные забиваются под наркозом. Морфологическому исследованию на предмет выявления амилоидоза (окраска гематоксилином и эозином, конго-красным) подвергаются внутренние органы. Образцы тканей фиксируются в 10% нейтральном формалине с последующим приготовлением парафиновых срезов толщиной 5-6 микрон. Срезы окрашиваются гематоксилином и эозином, Конго красным. Изучение срезов проводится в проходящем свете при помощи микроскопа Микмед-1 под увеличением х 80, х 200, х 400. Сущность заявляемого способа подтверждается функционально и морфологически.

Исследования показали, что в условиях спонтанного диуреза на фоне подкожного введения нативной овечьей плазмы отмечается увеличение диуреза через 1 месяц (табл. 1). Увеличение диуреза обусловлено снижением канальцевой реабсорбции воды.

Таблица 1
Изменения объема спонтанного диуреза и основных процессов мочеобразования при формировании амилоидной нефропатии
Условия опыта Статистич. показатель Процессы мочеобразования Содержание белка мг/мл
Диурез мл/час/100 СКФ м/час/100 Реабсорбция
%
Фон М±m 0,15±0,007 21,89±1,065 99,32±0,026 0,89±0,096
1 мес. эксперимента М±m 0,21±0,007 22,0±0,905 99,03±0,031 1,79±0,046

Экскреция калия и кальция под влиянием амилоидогена в условиях спонтанного 6-часового диуреза повышается на протяжении эксперимента более чем в 1,5 раза (табл.2).

Таблица 2
Изменения экскреции электролитов с мочой при формировании амилоидной нефропатии
Условия опыта Статистич. показатель Электролитовыделительная функция
Экскреция Na Экскреция К Экскреция Са
Фон М±m 11,18±0,389 6,76±0,394 0,55±0,043
1 мес эксперимента М±m 10,82±0,805 11,67±0,492 0,99±0,093

Под влиянием введения нативной овечьей плазмы отмечалось прогрессивное увеличение протеинурии в 2 раза на 30 день эксперимента (табл. 1).

Морфологически отмечалось:

Фиг.1. Плазматическое пропитывание стенок центральных артерий лимфоидных фолликулов, периваскулярный отек (1), переходящий на межклеточные пространства с накоплением конгофильных субстанций (2).

Фиг.2. Конгофилия сосудистого клубочка (1), базальных мембран канальцев (2) и стромально-сосудистых структур почки (3). Окраска Конго красным.

Фиг.3. Набухание кардиомиоцитов, очаговое исчезновение поперечной исчерченности (1) и очаговая конгофилия отдельных групп кардиомиоцитов (2).

Фиг.4. Конгофилия сосудистой стенки (1), мелкокапельная жировая дистрофия и некроз гепатоцитов (2), периваскулярный лимфогистиоцитарный инфильтрат (3).

Пример

Проведены серии опытов из 2-х групп:

1-я группа (10 сирийских хомяков-самцов) - контрольная,

2-я группа (10 сирийских хомяков-самцов) - амилоидная - животным проводились подкожные инъекции нативной овечьей плазмой через день из расчета 0,025 мл/г массы тела сирийских хомяков-самцов в течение 30 дней.

Морфологическому исследованию на предмет выявления амилоидоза (окраска конго-красным) подвергнуты внутренние органы, кровеносные сосуды.

В результате проведенных исследований получены морфологические доказательства эффективности применения нативной овечьей плазмы для моделирования экспериментального амилоидоза у сирийских хомяков-самцов.

Гистологически у 2-й группы животных в почках (фиг.2) при окраске срезов Конго-красным отмечалась очаговая конгофилия микроциркуляторного русла, сосудов и стромальных структур коркового и мозгового слоев почки, гиперемия, плазматическое пропитывание и периваскулярный отек, наиболее выраженный в корковом слое. Гипертрофия отдельных клубочков со сдавлением набухшими капиллярами мальпигиева тельца капсулы Шумлянского-Боумена. Таким образом, морфологически документируются начальные проявления модели системного амилоидоза, полученного путем подкожного введения нативной овечьей плазмы в течение 30 дней.

Исходя из полученных результатов исследования обосновывается использование нативной овечьей плазмы для моделирования амилоидоза у сирийских хомяков.

Подводя итог, следует отметить, что подкожное введение сирийским хомякам нативной овечьей плазмы является эффективным способом моделирования экспериментального амилоидоза.

Способ моделирования генерализованного амилоидоза у животных, включающий введение сирийским хомякам белкового препарата подкожно через день из расчета 0,025 мл/г массы тела, отличающийся тем, что в качестве белкового препарата сирийским хомякам вводят нативную овечью плазму в течение 30 дней эксперимента.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицинской технике. Устройство содержит ударный механизм, выполненный в виде маятника с регулируемым усилием удара, содержащего две штанги с крепежными отверстиями с двумя ударными площадками, с продольным пазом, в котором размещена подвижная, фиксируемая на задаваемом радиусе грузовая платформа со стержнем, несущим сменные грузы, подвижную каретку для установки объекта повреждения, фрикционный тормоз, совмещенный с подвижной кареткой и выполненный в виде упругой разрезной втулки, охватывающей направляющую ось, вдоль которой перемещается каретка.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине. Осуществляют однократное тестирование белых крыс в установке «открытое поле».

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования в эксперименте интоксикации мелких лабораторных животных газообразными продуктами горения веществ с низкой и средней температурой горения на примере древесных опилок.

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для изучения физиологических функций всасывания различных веществ и моторики в изолированном участке тонкого кишечника по Тири-Велла в эксперименте.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для изучения вопросов лечения сахарного диабета. Способ включает введение инсулин-продуцирующих клеток в дозе 500 тыс.
Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине, а именно к возможности экспериментального изучения патогенеза профессиональных заболеваний, в частности - антракосиликоза.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к радиобиологии и комбустиологии, и может быть использовано для изучения механизмов патогенеза сочетанных радиационных поражений (СРП), включая феномен взаимного отягощения, а также испытания новых способов и средств профилактики и лечения СРП.

Изобретение относится к медицине. При осуществлении способа представляют звуковой сигнал в виде суперпозиции отдельных составляющих тонов входного сложномодулированного колебания, образованного наложением нескольких звуковых колебаний.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для изучения сахарного диабета, а также при разработке новых методов лечения изменений, вызванных сахарным диабетом I типа.

Изобретение относится к моделированию в медицине и может быть применимо для моделирования заболеваний женских половых органов в эксперименте. Для моделирования эндометриоза для аутотрансплантации берут прямоугольные участки эндометрия размером 2×3 мм и подшивают их микрохирургическими инструментами атравматическим синтетическим нерассасывающимся монофиламентным шовным материалом 9/0 четырьмя швами по углам участка эндометрия двумя двойными узлами в каждом шве.
Изобретение относится к медицине, в частности к вопросу изучения антиадгезивной активности противохолерных иммуноглобулинов и усиления ее для совершенствования специфической профилактики холеры. Для оценки местного гуморального противохолерного белых мышей иммунизируют 5×107 микробными клетками Vibrio cholerae 5879, через 10 дней выделяют общий пул противохолерных Ig из тонкокишечных промывных жидкостей. Дополнительно получают первичную культуру энтероцитов тонкой кишки от интактных мышей. Затем противохолерные Ig в двукратном разведении наносят в объеме 3 мл на монослой энтероцитов, сформированных в лунках культуральных панелей. В последние наносят живые холерные вибрионы штамма Vibrio cholerae 5879, 40 м.к. на 1 энтероцит и инкубируют в течение 3 часов. После панели трижды отмывают, фиксируют этанолом в течение 20 минут и окрашивают по Романовскому - Гимза. Оценку местного гуморального противохолерного иммунитета проводят под микроскопом по количеству вибрионов, окрашенных в темно-синий цвет и прикрепившихся к одному энтероциту. Способ позволяет оценить специфический местный гуморальный иммунитет и усилить антиадгезивную активность общего пула противохолерных иммуноглобулинов. 3 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальным исследованиям в онкологии, и может быть использовано при воспроизведении метастатического процесса в печени. Способ включает оперативное выведение селезенки под кожу у белых беспородных крыс. После заживления операционной раны в ткань селезенки имплантируют суспензию опухолевых клеток саркомы 45 в физиологическом растворе в объеме 0,1 мл в разведении 1×106. Через 2,5-3 недели проводят морфологическое исследование печени. При исключении влияния стрессорных факторов на процесс метастазирования злокачественной опухоли и приближении этого процесса к естественному предлагаемый способ позволяет отслеживать динамику роста первичного опухолевого узла и обеспечивает распространение метастазов в печень только наиболее значимым - гематогенным путем. 5 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной морфологии, и касается изучения вопросов коррекции тестикулярной дисфункции, индуцированной адаптацией организма к низким температурам. Для этого в эксперименте крысам осуществляют ежедневное пероральное введение дигидрокверцитина в дозе 5 мг/кг массы тела перед охлаждением. При этом охлаждение проводят при температуре -15°C по 3 часа в день в течение четырех недель. Способ обеспечивает восстановление тестикулярной функции и повышение резистентности организма к неблагоприятным факторам среды. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной морфологии, и касается изучения вопросов коррекции тестикулярной дисфункции, индуцированной адаптацией организма к низким температурам. Для этого в эксперименте крысам осуществляют ежедневное пероральное введение моллюскама в дозе 10 мг/кг массы тела перед охлаждением. При этом охлаждение проводят при температуре -15°C по 3 часа в день в течение четырех недель. Способ обеспечивает восстановление тестикулярной функции и повышение резистентности организма к неблагоприятным факторам среды. 4 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к исследованиям в области ортопедии, и касается моделирования дефект-псевдоартроза большеберцовой кости. Способ включает резекцию участка кости, фиксацию костных отломков аппаратом для остеосинтеза. Формирование дефекта осуществляют в проксимальном метадиафизе большеберцовой кости размером от 1,5 до 2,5 см. При этом дополнительно повреждают a.nutricia в месте вхождения ее в кость, создавая условия нарушения магистрального кровотока по ее бассейну в дистальном отломке. Затем осуществляют компрессию в режиме 2 мм в сутки. При достижении диастаза между отломками 4-5 мм переходят в режим нейтральной фиксации. Способ обеспечивает создание адекватной модели дефект-псевдоартроза, что позволяет изучать особенности регенерации костной ткани при лечении ложного сустава в условиях комбинированного остеосинтеза. 1 пр., 3 ил.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемических состояний сетчатки. Способ включает моделирование патологии сетчатки и профилактику ее введением лабораторному животному рекомбинантного эритропоэтина в качестве прекондиционирующего агента. Эритропоэтин вводят однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в дозе 50 МЕ/кг, за 30 минут до моделирования патологии. Способ приводит к выраженной коррекции ишемии сетчатки за счет механизма открытия АТФ-зависимых К+-каналов и последующего индуцирования механизмов метаболической адаптации при реализации эффекта прекондиционирования. 1 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемических состояний сетчатки. Для этого в условиях моделирования указанной патологии проводят фармакологическое прекондиционирование. Для этого используют никорандил в дозе 0,86 мг/кг массы тела, который вводят лабораторному животному однократно в виде крахмального раствора внутрижелудочно через зонд. Через 30 минут проводят моделирование ишемии сетчатки путем оказания механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут. Способ обеспечивает выраженную коррекцию ишемических повреждений глаза за счет открытия АТФ-зависимых K+-каналов и дальнейшего включения механизмов метаболической адаптации. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к нейрохирургии, сосудистой хирургии, эндоваскулярной хирургии, микрохирургии, и может быть использовано при проведении обучающих курсов и тренингов. Моделирование артериальной аневризмы проводят путем ремоделирования стенки сосуда. Используют плаценту человека, с которой удаляют амниотическую оболочку и отрезают пуповину, сосуды катетеризируют и промывают. Затем в артерию вводят баллонный катетер, проводят его эндоваскулярно дистальнее бифуркации. После этого баллон катетера расширяют и выдерживают в таком состоянии не менее 6 часов. На это время плаценту погружают в изотонический раствор при температуре +4+10°С, после чего баллон извлекают. К артериям и вене подключают системы для внутривенного вливания, через которые осуществляют постоянную инфузию подкрашенных изотонических растворов. Способ позволяет получить анатомически схожие модели аневризм при возможности увеличения в 5-10 раз их числа на одном объекте. 7 ил.
Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и остеологии и представляет собой способ коррекции микроциркуляции в костной ткани при экспериментальном остеопорозе и переломах на его фоне, включающий введение лабораторному животному комбинации фармакологических средств после моделирования остеопороза с помощью билатеральной овариэктомии и остеопоротических переломов бедренной кости у самок крыс линии Wistar, отличающийся тем, что в качестве таких средств используют комбинацию рекомбинантного эритропоэтина в субэритростимулирующей дозе 50 МЕ/кг, который вводят лабораторному животному один раз в неделю подкожно однократно в сутки, и розувастатина в дозе 0,86 мг/кг, который ежедневно внутрижелудочно вводят лабораторному животному однократно в сутки, на фоне моделирования остеопороза в течение восьми недель, а при переломах на фоне моделирования остеопороза - в течение двенадцати недель. Изобретение обеспечивает синергизм в отношении положительного воздействия на показатели микроциркуляции в костной ткани. 1 пр.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования панкреатопатии, вызванной нестероидным противовоспалительным препаратом (НПВП-панкреатопатии). Способ включает пероральное введение лабораторной крысе в течение 21 дня препарата Найз® в разовой дозе 5 мг/кг массы тела животного. Способ обеспечивает создание модели НПВП-панкреатопатии, приближенной к реальным клиническим условиям при использовании терапевтических доз препарата, приводя при этом к развитию патоморфологических изменений, характерных для токсического лекарственного поражения поджелудочной железы. 3 пр.
Наверх