Способ получения суммарной фракции внеклеточных нуклеиновых кислот из крови



Способ получения суммарной фракции внеклеточных нуклеиновых кислот из крови
Способ получения суммарной фракции внеклеточных нуклеиновых кислот из крови
Способ получения суммарной фракции внеклеточных нуклеиновых кислот из крови

 


Владельцы патента RU 2554746:

Общество с ограниченной ответственностью "ЦСБ Геномика" (ООО "ЦСБ Геномика") (RU)

Изобретение относится к области биохимии и диагностической медицины. Способ включает сбор крови в антисвертывающий раствор, добавление равного объема элюирующего буфера, содержащего 1 М NaCl, 0,2 М NaHCO3 (pH 9,3), 20 мМ ЭДТА или буфера, содержащего 1 М NaCl, 20 мМ ЭДТА. Полученную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение 4-6 минут при перемешивании с последующим разделением собранной крови на плазму и клеточную фракцию крови при помощи центрифугирования и сбором супернатанта, из которого выделяют суммарную фракцию внеклеточных нуклеиновых кислот (внНК). Использование изобретения позволяет сократить время получения суммарной фракции внНК, повысить выход внНК крови, повысить чувствительность детекции маркерных НК, специфичных для онкозаболеваний и патологий беременности. 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к области диагностической медицины, а именно к молекулярно-генетической диагностике, и направлено на повышение диагностической эффективности аналитических систем, основанных на использовании циркулирующих внеклеточных нуклеиновых кислот (свободно циркулирующих в плазме и связанных с поверхностью клеток крови).

Актуальной задачей диагностической медицины является своевременное и точное выявление у пациентов специфических последовательностей нуклеиновых кислот, ассоциированных с различными заболеваниями. Особенно интенсивные исследования ведутся в области разработки тестов, основанных на анализе циркулирующих внеклеточных нуклеиновых кислот крови (внНК), поскольку кровь непосредственно контактирует со всеми органами/тканями, и ряд процессов, таких как беременность, нарушение функций клеток и тканей, развитие опухолей сопровождается изменением состава циркулирующих нуклеиновых кислот крови даже на самых ранних этапах развития этих процессов, в частности, когда опухоль трудно/невозможно локализовать физическими методами (1).

Ранее было показано, что использование в диагностике внНК, связанных с поверхностью клеток крови нуклеиновых кислот (спкНК), наряду с широко используемыми внНК, свободно циркулирующими в плазме крови (2), позволяет существенно повысить чувствительность диагностических систем (3).

Известен способ выделения внДНК, связанной с поверхностью клеток крови (4), включающий следующие стадии: сбор крови самотеком в пробирки с фосфатным буфером (10 мМ) и ЭДТА (50 мМ ЭДТА pH 7.5); разделение крови на плазму и клеточную фракцию при помощи центрифугирования (20 мин при 400 g); разделение клеточной фракции крови на эритроциты и лейкоциты; получение ДНК, связанной с поверхностью эритроцитов и ДНК, связанной с поверхностью лейкоцитов при помощи инкубации клеток с фосфатным элюирующим буфером (5 мин инкубация с последующим осаждением клеток центрифугированием 20 мин при 400 g); получение внДНК из эритроцитатрой и лейкоцитарной фракций при помощи инкубации клеток с раствором трипсина и затем ингибитора трипсина (5 мин инкубация с раствором трипсина, добавление ингибитора трипсина, перемешивание раствора, осаждение клеток центрифугированием 20 мин при 400 g). ВнДНК выделяли из плазмы крови и полученных элюатов с поверхности клеток крови при помощи мелкодисперсного стекла.

Недостатками известного способа являются трудоемкая процедура получения фракций, содержащих внДНК крови; а также использование трипсина в процессе получения внДНК, что требует тщательности при выполнении протоколов и контроля за активностью препарата.

Известен способ выделения внРНК, связанных с поверхностью клеток крови (5), включающий следующие стадии: сбор крови самотеком в пробирки с фосфатным буфером (10 мМ) и ЭДТА (50 мМЭДТА pH 7.5); разделение крови на плазму и клеточную фракцию при помощи центрифугирования (20 мин при 400 g); получение внРНК клеток крови при помощи инкубации клеток с фосфатным элюирующим буфером (5 мин инкубация с последующим центрифугированием 20 мин при 400 g); получение внРНК клеток крови при помощи инкубации клеток с раствором трипсина и затем ингибитором трипсина (5 мин инкубация с раствором трипсина, добавление ингибитора трипсина, перемешивание и осаждение клеток центрифугированием 20 мин при 400 g). Выделение внРНК из плазмы проводили на стекловолокнистых фильтрах.

Этому методу присущи ранее перечисленные недостатки, общее время получения фракций, содержащих внРНК составляет 2 часа 42 минуты (время рассчитано для обработки 2 образцов крови объемом 8 мл), метод не может быть автоматизирован.

Наиболее близким к заявленному способу - прототипом, является способ выделения внДНК из крови, включающий следующие стадии: сбор крови в вакутейнеры; разделение крови на плазму и клеточную фракцию при помощи центрифугирования (20 мин при 400 g); получение внДНК в результате последовательной обработки клеток крови фосфатным элюирующим буфером (5 мин инкубация с последующим центрифугированием 20 мин при 400 g); затем обработки клеток крови раствором трипсина (5 мин инкубация с раствором трипсина, добавление ингибитора трипсина, перемешивание и осаждение клеток центрифугированием 20 мин при 400 g). ВнДНК крови из полученных супернатантов выделяли на стекловолокнистых фильтрах при помощи набора «Blood DNA isolation Kit» (BioSilica Ltd, Россия) (6).

Недостатками способа являются трудоемкость и длительность получения фракций, содержащих внДНК крови: общее время получения фракций, содержащих внДНК составляет 2 часа 42 минуты. Кроме того, известный способ требует постоянного контроля эффективности протеазной обработки. Способ содержит много стадий, требует постоянного фиксирования объемов, его крайне сложно автоматизировать. При этом анализируются две фракции внДНК: отдельно - внДНК плазмы крови и отдельно внДНК из клеточной фракции крови, что увеличивает вдвое расходы на выделение внДНК и ПЦР-анализ образцов.

Задачей изобретения является разработка простого, быстрого и воспроизводимого способа получения суммарной фракции внНК крови, содержащей одновременно внНК из плазмы крови и внНК из клеточной фракции крови для последующего использования внНК в качестве диагностического материала.

Технический результат: упрощение, сокращение длительности способа и повышение выхода внНК.

Поставленная задача достигается предлагаемым способом, заключающимся в следующем.

Проводят сбор крови при помощи вакутейнера или других пробирок для сбора и консервирования крови (например, Cell-Free DNA BCT, Streck, США). К аликвоте крови добавляют равный объем элюирующего буфера (DDB), содержащего 1 М NaCl, 0,2 М NaHCO3 (pH 9,3), 20 мМ ЭДТА или буфера, содержащего 1 М NaCl, 20 мМ ЭДТА, инкубируют смесь при комнатной температуре в течение 4-6 минут, осторожно перемешивая. Далее смесь крови и элюирующего буфера DDB разделяют на супернатант и клеточную фракцию при помощи двукратного центрифугирования (5 мин при 1000 g и 5 минут при 1200 g). Полученный супернатант содержит суммарную фракцию внНК, включающую внНК плазмы и внНК клеточной фракции. Далее из супернатанта внНК выделяют любым пригодным методом выделения нуклеиновых кислот, а именно: методом, основанном на экстракции фенол-хлороформом; гуанидин-фенольным методом; методом выделения нуклеиновых кислот при помощи мелкодисперсного стекла или стекловолокнистых фильтров в присутствии хаотропных солей. Количественный анализ внНК крови также проводят любым известным методом исследования нуклеиновых кислот, как то: количественная ПЦР и ОТ-ПЦР; метил-специфичная количественная ПЦР, метод измерения концентрации НК при помощи флуоресцентных красителей (Hoechst 32258, SYBR Green II, DAPI и т.д.).

Определяющим отличием предлагаемого способа по сравнению с прототипом является то, что к образцу исследуемой крови добавляют равный объем элюирующего буфера, содержащего 1 М NaCl, 0,2 М NaHCO3 (pH 9,3), 20 мМ ЭДТА или буфера, содержащего 1 М NaCl, 20 мМ ЭДТА, инкубируют смесь при комнатной температуре в течение 4-6 минут при перемешивании, что обеспечивает получение суммарной фракции, содержащей внНК из плазмы крови и внНК из клеточной фракции крови, что в свою очередь позволяет упростить способ, сократить его длительность и повысить выход нуклеинового материала, позволяющего увеличить чувствительность детекции маркерных последовательностей ДНК и РНК.

Предлагаемый способ имеет следующие преимущества по сравнению с прототипом:

- обеспечивает лизис меньшего количества клеток крови, чем прототип, и устойчив к отклонениям от регламента не более чем на 20%, что делает его пригодным для применения в клинических лабораториях для выполнения рутинных исследований и позволяет автоматизировать процесс;

- позволяет сократить время получения суммарной фракции внНК более чем в 4 раза (с 2 часов 42 минут до 34 минут);

- позволяет почти в 4 раза снизить суммарный объем получаемой фракции (с 44,5 мл до 12 мл), что приводит к уменьшению трудоемкости, снижению расходов реактивов на выделение НК, что в свою очередь уменьшает стоимость тестов, основанных на использовании внНК крови.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения способа.

Пример 1

В группе здоровых доноров (n=10) было проведено выделение суммарной фракции внДНК, полученной способом-прототипом (6) и предлагаемым способом. У всех здоровых доноров-добровольцев была взята кровь при помощи вакутейнера с антикоагулянтом. Собранную кровь делили на 2 равные части, одну часть обрабатывали в три стадии по протоколу-прототипу, а оставшуюся часть обрабатывали в одну стадию заявляемым способом: к аликвоте крови добавляли равный объем элюирующего буфера (DDB), содержащего 1 М NaCl, 0,2 М NaHCO3 (pH 9,3), 20 мМ ЭДТА и инкубировали смесь при комнатной температуре в течение 4 минут, осторожно перемешивая, далее смесь крови и элюирующего буфера DDB разделяли на супернатант и клеточную фракцию при помощи двукратного центрифугирования (5 мин при 1000 g и 5 минут при 1200 g), а из полученного супернатанта внДНК выделяли с помощью мелкодисперсного стекла в присутствии хаотропных солей (4). Концентрацию ДНК определяли при помощи TaqMan-ПЦР на LINE-1 повторы (7).

Результаты исследования представлены в Таблице 1. Как видно из таблицы 1, использование предлагаемого способа получения суммарной фракции внДНК крови позволяет увеличить выход внДНК в среднем на 20,07%. При этом экономия времени составляет 2 часа 8 минут.

Данный пример иллюстрирует возможность использования разработанного способа в клинических лабораториях, применяющих поточные методы с высокой воспроизводимостью.

Пример 2

В группе больных раком легких (n=10) было проведено выделение суммарной фракции внДНК, полученной при помощи способа-прототипа (6) и предлагаемым способом. У всех принимающих в исследовании людей была взята кровь при помощи вакутейнера. Собранную кровь делили на 2 равные части, одну часть обрабатывали в три стадии по протоколу-прототипу, а вторую часть обрабатывали в одну стадию - с использованием предлагаемого способа, а именно: к аликвоте крови добавляли равный объем элюирующего буфера (DDB), содержащего 1 М NaCl, 20 мМ ЭДТА и инкубировали смесь при комнатной температуре в течение 6 минут, осторожно перемешивая, далее смесь крови и элюирующего буфера DDB разделяли на супернатант и клеточную фракцию при помощи двукратного центрифугирования (5 мин при 1000 g и 5 минут при 1200 g), а из полученного супернатанта внДНК выделяли с помощью наборов БиоСилика (ООО Биосилика, Россия). Концентрацию опухолеспецифичной ДНК определяли при помощи метил-специфической SYBR-Green ПЦР на метилированный фрагмент гена RARbeta2 (8).

В Таблице 2 представлена концентрация метилированной формы гена RARβ2 в составе внДНК в крови больных раком легкого, где Протокол 1 - способ-прототип. Протокол 2 - предлагаемый способ.

Как видно из таблицы 2, использование предлагаемого способа получения суммарной фракции внДНК из крови онкологических больных позволяет значительно увеличить выход опухолеспецифичной внДНК в среднем на 58%, при этом время, затрачиваемое на выполнение предлагаемого способа, снижается более чем в 4 раза (с 2 часов 42 минут до 34 минут).

Пример 3

В группе беременных RhD-отрицательных женщин, ждущих RhD-положительного ребенка (n=20), было проведено сравнительное исследование концентраций суммарной фракции внДНК и генетического маркера резус-принадлежности (RHD) в образцах, полученных при помощи способа-прототипа (6) и предлагаемого способа аналогично примеру 1. У всех пациенток была взята кровь при помощи вакутейнера. Собранную кровь делили на 2 равные части, одну часть обрабатывали по протоколу-прототипу до стадии использования элюирующих буферов (получали только образцы плазмы крови), а вторую часть обрабатывали с использованием предлагаемого способа аналогично примеру 1, при этом внДНК из полученного супернатанта выделяли с помощью автоматической станции QIAsymphony (Qiagen, США). Концентрации ДНК были исследованы при помощи TaqMan-ПЦР для фрагмента гена домашнего хозяйства GAPDH и для генетического маркера резус-принадлежности RHD (9) (Таблица 3).

Как видно из таблицы 3, использование предлагаемого способа позволяет в среднем в 6,5 раз увеличить концентрацию внДНК. При этом концентрация плодной ДНК при использовании предлагаемого способа увеличивается в среднем на 18%. Этот факт может быть очень важен при анализе плодной ДНК у женщин с ранним сроком беременности, когда концентрация плодной ДНК очень мала. Использование предлагаемого способа обработки крови может позволить проводить RhD типирование плода на более ранних сроках беременности.

Пример 4

В группах больных раком легких (n=10) и здоровых доноров (n=10) был исследован уровень экспресии в крови циркулирующих микроРНК (миРНК) на примере миРНК-21 и 155, уровень экпрессии которых повышается при развитии онкопатологии (10). Получение фракций внРНК проводили при помощи способа-прототипа (6) и предлагаемым способом. У всех принимающих участие в исследовании людей была взята кровь при помощи вакутейнера. Собранную кровь делили на 2 равные части, одну часть обрабатывали в три стадии по протоколу-прототипу, а вторую часть обрабатывали в одну стадию аналогично примеру 1, при этом внРНК из полученного супернатанта выделяли с помощью гуанидин фенольной экстракции (11). Уровень экспрессии миРНК мишеней определяли при помощи количественной ОТ-ПЦР (12). Было показано, что использование предлагаемого способа получения суммарной фракции внРНК крови позволяет увеличить выход внРНК мишеней в среднем на 32%.

Использование предлагаемого способа позволит упростить и сократить длительность процедуры, а также повысить количество диагностического материла, что позволит повысить чувствительность детекции маркерных НК, специфичных для онкозаболеваний и патологий беременности.

Источники информации

1. Jung K., Fleischhacker M Rabien A. Cell-free DNA in the blood as a solid tumor biomarker-a critical appraisal of the literature // Clin Chim Acta. - 2010. - V. 411. P. 1611-1624.

2. Pinzani P., Salvianti F., Pazzagli M. et al. Circulating nucleic acids in cancer and pregnancy. // Methods. - 2010. - V. 50(4). P. 302-307.

3. Rykova E.Y., Morozkin E.S., Ponomaryova A.A. et al. Cell-free and cell-bound circulating nucleic acid complexes: mechanisms of generation, concentration and content // Expert Opin Biol Ther. - 2012. - V. 12. P. 141-153.

4. Skvortsova Т.Е., Rykova E.Y., Tamkovich S.N., et al. Cell-free and cell-bound circulating DNA in breast tumours: DNA quantification and analysis of tumour-related gene methylation // Br J Cancer. - 2006. - V. 94. P. 1492-1495.

5. Рыкова Е.Ю., Скворцова Т.Э., Хоффман А-Л. и др. // Циркулирующие внеклеточные ДНК и РНК крови в диагностике онкопатологий молочной железы. Биомедицинская химия. 2008, Том 54, Выпуск 1, С. 94-103.

6. Лактионов П.П., Тамкович С.Н., Рыкова Е.Ю. и др. Способ ранней диагностики и мониторинга онкологических заболеваний. Патент RU 2251696 С2, опубл. 10.05.2005 г.

7. Morozkin E.S., Babochkina T.I., Vlassov V.V., Laktionov P.P. The effect of protein transport inhibitors on the production of extracellular DNA // Ann N Y Acad Sci. - 2008. - V. 1137. - P. 31-35.

8. Ponomaryova A.A., Rykova E.Y., Cherdyntseva N.V. et al. / RARβ2 gene methylation level in the circulating DNA from lung cancer patient blood // Eur J Cancer Prev. - 2011 V. - 20, N. 6. - P. 453-455.

9. Clausen F.B., Jakobsen T.R., Rieneck K. et al. Pre-analytical conditions in non-invasive prenatal testing of cell-free fetal RHD // PLoS One. - 2013. - V. 8(10). e76990.

10. Jones K., Nourse J.P., Keane С. et al. Plasma microRNA are disease response biomarkers in classical Hodgkin lymphoma // Clin Cancer Res. - 2014. - V. 20. - P. 253-64.

11. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal Biochem. - 1987. - V. 162. - P. 156-159.

12. Chen С., Ridzon D.A., Broomer A.J. et al. Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR // Nucleic Acids Res. - 2005. - V. 33. - P. e179.

1. Способ выделения суммарной фракции внеклеточных нуклеиновых кислот из крови (внНК), включающий сбор крови в антисвертывающий раствор, разделение собранной крови на плазму и клеточную фракцию крови при помощи центрифугирования, выделение внНК из полученного супернатанта с последующим измерением концентрации внНК, отличающийся тем, что к образцу крови, перед разделением ее на фракции, добавляют равный объем элюирующего буфера, содержащего 1 М NaCl, 0,2 М NaHCO3 (pH 9,3), 20 мМ ЭДТА или буфера, содержащего 1 М NaCl, 20 мМ ЭДТА, полученную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение 4-6 минут при перемешивании.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что внНК выделяют из супернатанта методом, выбранным из: экстракция фенол-хлороформом; экстракция гуанидин-фенольным методом; выделение при помощи мелкодисперсного стекла или стекловолокнистых фильтров в присутствии хаотропных солей.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что измерение концентрации внНК проводят методом, выбранным из: количественная ПЦР и ОТ-ПЦР, метил-специфичная количественная ПЦР, метод измерения концентрации НК при помощи флуоресцентных красителей.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для оценки риска развития рака эндометрия. У пациенток с гиперпластическими процессами эндометрия определяют клинико-анамнестические показатели и проводят гистероскопию с биопсией эндометрия.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу дифференциальной диагностики генерализованной формы внутриутробной моно- и микст-цитомегаловирусной инфекции у новорожденных.

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии. Способ позволяет прогнозировать вероятность развития гестоза беременных.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ, включающий определение наличия или отсутствия мутации K-rasG12D.

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для выявления симптомов эндогенной интоксикации (ЭИ) пациентов, страдающих колоктеральным раком.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и аритмологии, и может быть использовано для прогнозирования развития нарушений ритма сердца у пациентов с синдромами преждевременного возбуждения желудочков.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и предназначено для диагностирования нарушения репродуктивной функции у пациенток с миомой матки.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для выявления атипичных форм трихомонад. Способ включает взятие биологического ткани, введение в нее биологически активного вещества, выдержку полученной смеси в термостате при 37°C с последующей инкубацией, проведение микроскопического исследования для выявления форм трихомонад.
Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики обострения цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Способ включает определение в крови беременных титра антител к цитомегаловирусу и активности глутатионредуктазы в эритроцитах рожениц с цитомегаловирусной инфекцией.

Группа изобретений относится к медицине, косметологии, производству продуктов питания, витаминов, БАДов, лекарственных средств и описывает варианты устройства для реализации неинвазивного потенциометрического определения оксидантной/антиоксидантной активности биологических тканей, включающего прибор для измерения потенциалов и двухсторонний электрод, выполненный в виде пластины с одинаковыми рабочими поверхностями, покрытыми электропроводящим гелем, содержащим медиаторную систему.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения степени тяжести детского церебрального паралича у детей. Способ состоит в том, что выявляют клинические признаки заболевания, определяют в периферической крови ребенка уровень эритроцитов с микроядрами, выявляют клинические признаки заболевания по шкале Ривермид, дополнительно с помощью иммуноферментного анализа определяют количественное содержание фактора некроза опухоли (TNF-α) в сыворотке периферической крови у детей, больных детским церебральным параличом, сопоставляют с клиническими признаками и при значении эритроцитов с микроядрами 0,55±0,14% и повышении уровня TNF-α сыворотки до 6,14±3,025 пг/мл устанавливают среднюю степень тяжести заболевания, а при значениях эритроцитов с микроядрами 1,27±0,47% и выше и уровне TNF-α сыворотки 9,58±0,39 пг/мл и выше - тяжелую степень заболевания. Использование заявленного способа позволяет получить ускоренный и менее инвазивный способ определения степени тяжести детского церебрального паралича. 5 ил., 8 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к гидрофилизации поверхности и иммобилизации антител на поверхности сополимера циклоолефина. Представлен способ изготовления аналитического устройства капиллярного действия, включающий в себя этапы: а) обеспечения капиллярной подложки, b) изменения гидрофильности поверхности подложки, с) смешивания матрицы и иммобилизованной молекулы в виде раствора для получения раствора, включающего в себя иммобилизованные молекулы, ковалентно связанные с матрицей, и d) осаждения раствора на четко очерченную область в этой по меньшей мере одной зоне для сохранения. Также описано аналитическое устройство капиллярного действия, изготавливаемое этим способом. Достигается возможность изменения подложки посредством химической обработки поверхности и возможности осаждения иммобилизованных молекул в оптимальной матрице на заданных областях. При этом расходуется меньше матричного материала, и тем самым на одном чипе может быть использовано несколько различных матричных материалов. 2 н. и 31 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к кардиологии и представляет собой способ определения вероятности сохранения миокарда от инфарктного повреждения, для чего создается «база данных» на основе исследования на момент поступления 7 параметров периферической крови, 11 параметров биохимического анализа крови и 6 параметров стандартной 12-канальной электрокардиограммы у 200 больных с Q-инфарктом миокарда и 200 больных, у которых развитие инфаркта миокарда не происходило. Параметры стратифицируют соответственно 7 интервалам, в которых путем расчета отношения больных, у которых не развивается инфаркт миокарда, ко всем больным с острым коронарным синдромом находят величины, связанные с вероятностью сохранения миокарда от инфарктного повреждения. Расчет вероятности у конкретного больного осуществляют путем исследования указанных выше параметров, поиска в «базе данных» соответствующих интервалов и величин, связанных с вероятностью сохранения миокарда. Суммируя найденные величины, рассчитывают интегральный показатель, который нормализуют, приводят к размерности от 0 до 100%. Изобретение позволяет повысить точность прогноза сохранения миокарда у больных с острым коронарным синдромом. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования развития приобретенной близорукости у школьников. Сущность способа состоит в том, что измеряют концентрации гемоглобина крови у школьников 6-8 лет и определяют дефицит гемоглобина по разности между оптимальным значением концентрации гемоглобина для данного возраста и фактической концентрацией гемоглобина у ребенка. При отсутствии дефицита гемоглобина в 6-8 лет прогнозируют низкий риск развития приобретенной близорукости. При дефиците гемоглобина до 1,7 г/л прогнозируют риск развития близорукости слабой степени. При дефиците гемоглобина от 1,7 г/л и более прогнозируют высокий риск развития близорукости с прогрессирующим течением с развитием близорукости средней и высокой степени. Использование заявленного способа позволяет создать достоверный и доступный способ прогнозирования развития близорукости у детей 6-8 лет. 2 табл., 1 ил., 6 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и описывает способ диагностики нейросифилиса, включающий микроскопическое исследование образцов спинномозговой жидкости, причем проводят краевую дегидратацию образцов спинномозговой жидкости, а их микроскопическое исследование проводят в поляризованном свете и при выявлении анизотропных структур в виде дендритов либо сферолитов, внутри которых расположены образования в форме овалов, содержащих липиды, диагностируют раннюю форму нейросифилиса, а при выявлении множества овалов, сгруппированных в форме шаров, включенных в анизотропные структуры и/или отдельно расположенных, диагностируют поздний менинговаскулярный нейросифилис. Задачей изобретения является получение объективных критериев для диагностики нейросифилиса, обеспечение ранней, в том числе доклинической диагностики заболевания, сокращение сроков получения данных, снижение затрат на проведение исследований. Предлагаемый способ в ряде случаев является единственным, позволяющим получить обоснованные критерии диагностики в виде картины разрушения структур мозга, что позволяет уверенно поставить диагноз нейросифилиса и своевременно назначить специфическую терапию. 4 ил., 3 пр.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии, гигиене, стоматологии, медицинской экологии, может быть использовано для выявления степени адаптации к производственным условиям при взаимодействии с вредными и опасными факторами. Определяют значения спонтанного свечения, периода индукции и амплитуды быстрой вспышки за 5 мин регистрации, рассчитывают коэффициент адаптационного риска (КАР) по формуле: КАР=Сn-А/π, где: КАР - коэффициент адаптационного риска; Сn - спонтанное свечение; А - амплитуда быстрой вспышки; π - период индукции. При значении КАР 0,066-3,85 усл.ед. адаптацию оценивают как удовлетворительную или компенсированную, при значении КАР 3,88-6,5 усл.ед. адаптацию оценивают как напряженную, при значении КАР 6,6-9,5 усл.ед. адаптацию оценивают как неудовлетворительную, при значении КАР 9,6 усл.ед. и более - как срыв адаптации. Использование изобретения повышает точность оценки за счет определения критериев для отнесения обследуемых в группы по уровню адаптации. 1 табл., 8 пр.

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет способ оценки степени локальной холодовой травмы в раннем реактивном периоде, включающий выделение лимфоцитов периферической крови, оценку выраженности повреждения плазматической мембраны лимфоцитов в состоянии блеббинга с помощью фазово-контрастной микроскопии из расчета на 100 клеток, вычисление индекса блеббинга лимфоцитов - ИБЛ по формуле: , полученный показатель ИБЛ умножают на уровень аспартатаминотрансферазы - ACT, измеренный в ммоль/ч*л, и получают коэффициент степени отморожения - КСО, при значениях КСО с 3,96 до 7,7 усл. ед. диагностируют II степень локальной холодовой травмы, с 7,7 до 17,4 усл. ед. - III степень, более 17,4 усл. ед. - IV степень. Изобретение обеспечивает упрощение и повышение объективности определения степени локальной холодовой травмы в раннем реактивном периоде. 1 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки. Изобретение направлено на упрощение дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки с нормальным строением эндометрия. Сущность способа состоит в том, что супернатант менструальных выделений в количестве 0,2 мл наносят на поверхность предметного стекла в форме капли, накрывают покровным стеклом, высушивают при комнатной температуре, после чего полученные образцы микроскопируют и при наличии в них параллельных структур диагностируют быстрорастущую миому матки, а при обнаружении переходных форм - простую миому матки. Изобретение обеспечивает упрощение дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки с нормальным строением эндометрия, осуществление дифференциальной диагностики в короткие сроки с использованием малых объемов биологических жидкостей и с минимальными материальными затратами. 2 ил., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству. Изобретение представляет способ прогнозирования плацентарной недостаточности во 2 триместре беременности путем иммунно-ферментного исследования сыворотки крови беременных, отличающийся тем, что предварительно известным методом УЗИ определяют пол плода, затем в венозной крови беременных определяют уровни ангиогенных факторов и цитокинов и если установлено повышение уровня ИЛ-12 более 3,2 пг/мл, ЭФР более 310 пг/мл, снижение уровня ФРП менее 40,0 пг/мл у беременных, вынашивающих плоды мужского пола, и повышение ЭТ-1 более 0,42 пг/мл, ИЛ-1β более 17,6 пг/мл, ФНО-α более 6,5 пг/мл у беременных, вынашивающих плоды женского пола, то прогнозируют у данных беременных развитие плацентарной недостаточности. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования плацентарной недостаточности во II триместре беременности с учетом пола вынашиваемого плода. 4 пр.

Изобретение относится к портативному анализатору для исследования пробы биологической жидкости на предмет значимой с медицинской точки зрения составляющей и может быть использовано в медицине. Анализатор включает корпус с магазином, имеющим отделения для размещения используемых для анализа диагностических полосок или тест-полосок, имеющих зону для биологической жидкости и контактные элементы для передачи сигнала на процессор анализирующего устройства. Анализирующее устройство выполнено с щелевидным приемником для используемой диагностической или тест-полоски. Также анализатор содержит индикаторное устройство для отображения не менее одного результата анализа. Магазин или диагностические полоски или тест-полоски в магазине выполнены с электронными элементами, содержащими сведения о маркировке номера партии и калибровочных параметрах. В корпусе размещен ретранслятор для считывания указанных параметров с электронных элементов и передачи их в процессор анализирующего устройства. Магазин выполнен в виде закрываемого крышкой понижения задней стенки корпуса, образующего плоскую поверхность, на которой выполнены выступы, разделяющие плоскую поверхность понижения на отделения для размещения диагностических полосок или тест-полосок, расположенных параллельно не менее чем в один ряд. Магазин может быть выполнен в виде параллелепипедной формы блока, закрепляемого на поверхности понижения задней стенки корпуса или на задней части корпуса. При этом в закрываемом крышкой блоке выполнены выступы, разделяющие дно блока на отделения для размещения диагностических полосок или тест-полосок, расположенных параллельно не менее чем в один ряд. Магазин также может быть выполнен в виде параллелепипедной формы блока, помещаемого в выполненной в корпусе полости, загрузочное отверстие которой выведено в боковую или заднюю стенку и оснащено крышкой. При этом в этом блоке выполнены выступы, разделяющие дно блока на отделения для размещения диагностических полосок или тест-полосок. Причем в корпусе размещено приемо-передающее устройство ближнего радиуса действия, выполненное с функцией получения сигналов от ретранслятора и процессора анализирующего устройства для передачи-приема данных в беспроводном режиме на оснащенное блоком приема-передачи медицинское оборудование или компьютеризированное средство, или средство мобильной связи, или мобильный телефон. Достигаемый технический результат заключается в более эффективном использовании пространства портативного анализатора, обеспечении простого обращения с подаваемыми диагностическими полосками и простой реализации их хранения внутри прибора. 12 ил.
Наверх