Способ выявления форм урогенитальных трихомонад

Изобретение относится к области медицины и предназначено для выявления атипичных форм трихомонад. Способ включает взятие биологического ткани, введение в нее биологически активного вещества, выдержку полученной смеси в термостате при 37°C с последующей инкубацией, проведение микроскопического исследования для выявления форм трихомонад. В качестве биологической ткани осуществляют забор материала со слизистых оболочек мочеполовых органов, который инкубируют в течение суток в питательной среде. Отделяют полученный осадок и добавляют к нему в качестве биологически активного вещества нитрозогуанидин в количестве 500 мкг/мл. Инкубируют 15 мин при температуре +37°C, добавляют подогретый до температуры +37°C фосфатный буфер с pH 5,6 с последующим двойным центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин. Затем помещают в питательную среду для выращивания трихомонад, инкубируют не менее суток и при микроскопии выявляют атипичные безжгутиковые и типичные округлые и амебовидные формы трихомонад. Использование заявленного изобретения позволяет эффективно, быстро и достоверно выявлять типичные измененные и атипичные формы трихомонад. 3 ил., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно венерологии, урологии, акушерству и гинекологии, паразитологии, медицинской микробиологии.

Известен способ выявления типичных форм трихомонад, в котором после получения патологического материала со слизистых оболочек мочеполовых органов проводят его посев способом инокуляции в жидкую питательную среду, с последующим инкубированием при температуре +37°C в течение 3-17 суток (Приложение №2 к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12 июля 1985 года №936 «Методические указания по применению унифицированных клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза», п.2.6).

Недостатком этого способа является то, что не представляется возможным выявить атипичные формы трихомонад, которые, проявляя низкую метаболическую активность, с трудом размножаются на питательных средах. Исследование длительное, не дающее возможность проведения экспресс-диагностики.

Известен способ выявления форм трихомонад, включающий посев крови в питательную среду Тераса с добавлением инактивированной в течение 5-10 мин при температуре 56°C сыворотки крови человека или лошади и антибиотиков в количестве 500 ЕД/мл. Осуществляют инкубацию культуры в течение 2 сут при температуре 37°C. Затем дважды повторяют эти циклы с различными питательными средами и режимами воздействия, после чего выявляют формы трихомонад (Патент РФ 2289813, МПК G01N 33/48, опубл. 2006).

Недостатками этого способа являются его сложность, длительность выполнения, высокий риск получения сомнительных или отрицательных результатов ввиду исследования патологического материала - крови, которая является несвойственной средой обитания для трихомонад. Режим центрифугирования 3000 об/мин в течение 20-30 мин является грубым стрессовым фактором, приводящим к разрушению простейших. При этом округлые и амебовидные формы трихомонад, а также возможные другие формы являются скорее не атипичными клетками, а вариантами адаптации простейших к изменению условий внешней среды.

Наиболее близким является способ выявления форм трихомонад (Патент РФ 2262104, МПК G01N 33/48, опубл. 2005), включающий взятие биологического материала, добавление к нему биологически активного вещества, выдержку полученной смеси в термостате при 37°C с последующей инкубацией в течение 24-48 ч, проведение микроскопического исследования для выявления форм трихомонад. В результате неоднократной обработки через каждые 12 ч новой дозой биологически активного вещества (фермент) смеси происходит разрушение клеток крови, микроскопически проявляющееся в виде обломков клеточных элементов, среди которых заметны измененные и атипичные формы трихомонад.

Недостатками этого способа являются его сложность, длительность выполнения, высокий риск получения сомнительных и отрицательных результатов ввиду исследования патологического материала (кровь), не являющегося привычной средой обитания для трихомонад, и длительного неоднократного воздействия на смесь протеолитическим ферментом, а также неадекватный режим центрифугирования (3000 об/мин, 20-30 мин), что способствует разрушению и гибели клеток простейших.

Задачей предлагаемого изобретения является устранение указанных недостатков, повышение достоверности выявления всех имеющихся в патологическом материале форм трихомонад, уменьшение времени, необходимого для получения результата, выявление измененных типичных и атипичных форм трихомонад за счет добавления нитрозогуанидина к осадку суточной культуры простейших с последующим отмыванием и добавлением питательной среды, что вызывает изменения в ядре (полиморфизм: округлые, удлиненные - 2/3 длины простейшего, изогнутые, уменьшенные в размере ядра); опорном аппарате (аксостиле) - укорочение, утолщение, изогнутый аксостиль, отсутствие шипика; потерю органов движения - жгутиков; изменение метаболизма простейшего - повреждение гидрогеносом (аналогов митохондрий), активацию пино- и фагоцитоза, образование гигантских вакуолей.

Для этого в способ выявления форм трихомонад, включающий взятие биологической ткани, введение в нее биологически активного вещества, выдержку полученной смеси в термостате при 37°C с последующей инкубацией, проведение микроскопического исследования для выявления атипичных форм трихомонад, предложено в качестве биологического материала использовать соскоб со слизистых оболочек мочеполовых органов. Эту биологическую ткань инкубируют в течение суток в питательной среде, отделяют полученный осадок и добавляют к нему в качестве биологически активного вещества нитрозогуанидин в количестве 500 мкг/мл, инкубируют 15 мин при температуре +37°C, добавляют подогретый до температуры +37°C фосфатный буфер с pH 5,6 с последующим двойным центрифугированием при 1000 об/мин по 10 мин, затем помещают в питательную среду для выращивания трихомонад, инкубируют не менее суток и при микроскопии выявляют атипичные безжгутиковые и типичные округлые и амебовидные формы трихомонад.

На фиг.1 представлена безжгутиковая форма трихомонады (пример 1); на фиг.2 - округлая форма трихомонады (пример 2); на фиг.3 - амебовидная форма трихомонады (пример 3).

Предлагаемый способ обеспечивает культуральную диагностику типичных измененных и атипичных форм трихомонад. Это происходит под действием нитрозогуанидина, который является химическим мутагеном (стрессовым фактором), что вызывает активацию пино- и фагоцитоза, активную фиксацию простейших к поверхности эпителиальных клеток и друг к другу, образование колоний простейших с целью самосохранения.

Способ осуществляется следующим образом.

Материал, взятый из сводов влагалища (у женщин) или уретры (у мужчин) стерильным ватным дакроновым тампоном, погружали в 5 мл питательной среды для выращивания трихомонад, тампон ополаскивали в среде. Инкубировали в течение 24 ч при температуре +37°C. При выращивании на жидких питательных средах урогенитальные трихомонады дают придонный рост в виде плотного белесоватого осадка.

Для приготовления питательной среды использовали «Основу питательной среды для выделения влагалищных трихомонад (сухую)» (производство ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ», кат. № C01). Состав основы в г/л: экстракт кормовых дрожжей, Д-мальтоза, натрия хлорид, калий хлористый, натрий углекислый (pH 6,3±0,3). Способ приготовления: 28,5 г препарата размешивали в 1 л дистиллированной воды, кипятили 1-2 минуты и разливали во флаконы. Среду стерилизовали автоклавированием при t +112°C в течение 20 мин. К охлажденной до t +45-50°C питательной среде добавляли 20% сыворотку крупного рогатого скота, тщательно перемешивали и разливали по 5 мл в стерильные пробирки. Поверхность среды в пробирках заливали стерильным вазелиновым маслом высотой слоя 3-5 мм. Пробирки с питательной средой выдерживали в термостате при t +36±1,0°C в течение 22-24 ч для контроля стерильности среды.

Для получения атипичных форм урогенитальных трихомонад осадок суточной культуры доводили физиологическим раствором до объема 1,0 мл и добавляли нитрозогуанидин в количестве 500 мкг/мл. Согласно данным литературы, о воздействии мутагена на простейших указывает их 50% гибель в культуре (Пименова М.Н., Гречушкина Н.Н., Азова Л.Г., Нетрусов А.И. Руководство к практическим занятиям по микробиологии/ Под ред. Егорова Н.С. - 3-е изд.; перераб. и доп. - М.: Изд-во ИГУ, 1995. - С. 173-179).

После окончания времени экспозиции (15 мин) при температуре +37°С добавляют 3 мл подогретого до температуры +37°С фосфатного буфера с рН 5,6 с последующим двойным центрифугированием при 1000 об/мин по 10 мин.

После отмывки к культуре простейших добавляли 5,0 мл питательной среды для выращивания трихомонад и инкубировали в течение 24 ч при +37°С. Такое выращивание мутированной культуры влагалищных трихомонад позволяет выявить различные типичные, измененные и атипичные (безжгутиковые) формы в виде придонного плотного белесоватого осадка.

Наличие вышеуказанных форм трихомонад позволяет подтвердить диагноз трихомониаз, а при их отсутствии исключить этот диагноз.

Пример 1

Больная М., 45 лет, поступила с диагнозом трихомониаз.

Исследован патологический материал из заднего и боковых сводов влагалища. Проведено исследование по предлагаемому способу.

После воздействия нитрозогуанидином на осадок суточной культуры трихомонад обнаружены безжгутиковые формы трихомонад.

Диагноз подтвержден - урогенитальный трихомониаз.

Проведено лечение: метронидазолом по известной схеме. После окончания лечения - полное выздоровление.

Пример 2

Больная О., 27 лет, поступила с диагнозом трихомониаз.

Исследован патологический материал из заднего и боковых сводов влагалища. После воздействия нитрозогуанидином на осадок суточной культуры трихомонад обнаружены округлые формы трихомонад.

Диагноз: урогенитальный трихомониаз.

Проведено лечение метронидазолом до полного излечения.

Пример 3

Больная Ф., 30 лет.

Исследован патологический материал из заднего и боковых сводов влагалища.

По вышеописанной методике осуществлено воздействие нитрозогуанидином на осадок суточной культуры трихомонад, обнаружены амебовидные формы трихомонад.

Диагноз: урогенитальный трихомониаз.

Проведено лечение метронидазолом.

Предлагаемый способ применен у 2245 пациентов, выявление форм позволило подобрать адекватную медикаментозную терапию и добиться полной этиологической излеченности пациентов.

Данный способ имеет большое значение для диагностики урогенитального трихомониаза, когда инфекция протекает асимптомно и латентно, а возбудитель имеет амастиготную (безжгутиковую) форму, которую трудно обнаружить при обычных культуральных способах диагностики. С помощью данной методики подтверждено существование атипичных (безжгутиковых) форм простейших, выявлен феномен сбрасывания жгутиков и превращения трихомонад в безжгутиковые формы (амастиготы).

Способ выявления форм трихомонад, включающий взятие биологического ткани, введение в нее биологически активного вещества, выдержку полученной смеси в термостате при 37°C с последующей инкубацией, проведение микроскопического исследования для выявления форм трихомонад, отличающийся тем, что в качестве биологической ткани осуществляют забор материала со слизистых оболочек мочеполовых органов, который инкубируют в течение суток в питательной среде, отделяют полученный осадок и добавляют к нему в качестве биологически активного вещества нитрозогуанидин в количестве 500 мкг/мл, инкубируют 15 мин при температуре +37°C, добавляют подогретый до температуры +37°C фосфатный буфер с pH 5,6 с последующим двойным центрифугированием при 1000 об/мин по 10 мин, затем помещают в питательную среду для выращивания трихомонад, инкубируют не менее суток и при микроскопии выявляют атипичные безжгутиковые и типичные округлые и амебовидные формы трихомонад.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики обострения цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Способ включает определение в крови беременных титра антител к цитомегаловирусу и активности глутатионредуктазы в эритроцитах рожениц с цитомегаловирусной инфекцией.

Группа изобретений относится к медицине, косметологии, производству продуктов питания, витаминов, БАДов, лекарственных средств и описывает варианты устройства для реализации неинвазивного потенциометрического определения оксидантной/антиоксидантной активности биологических тканей, включающего прибор для измерения потенциалов и двухсторонний электрод, выполненный в виде пластины с одинаковыми рабочими поверхностями, покрытыми электропроводящим гелем, содержащим медиаторную систему.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Изобретение представляет способ прогнозирования преэклампсии во втором триместре беременности путем исследования крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови женщин в 7-8 недель беременности определяют активность кислых и нейтральных протеиназ и при значении активности кислых протеиназ выше 5,6 мкмоль/л и активности нейтральных протеиназ выше 3,9 мкмоль/л прогнозируют развитие преэклампсии во втором триместре беременности.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу автоматизированной морфометрической диагностики миелофиброза. Сущность способа состоит в том, что выполняют обзорные изображения биологической ткани с выделением на таких изображениях зон с различными оптическими свойствами c определяемыми фиброзными и гемопоэтическими свойствами биологической ткани.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки эффективности коррекции сперматогенеза у животных в условиях воздействия микроволнового излучения.
Изобретение относится к области медицины, в частности гепатологии. Способ количественной оценки гистологической активности в биоптатах печени при хронических диффузных заболеваниях печени приводит к протоколу подсчета в абсолютных числах, процентах и баллах патологических признаков, выявленных при морфологическом изучении биоптатов печени больных хроническими диффузными заболеваниями печени, по разделам: некроз гепатоцитов, крупнокапельная и мелкокапельная жировая, гидропическая дистрофия гепатоцитов, мелкоклеточная дисплазия гепатоцитов, портальная, перипортальная, внутридольковая и центральная инфильтрация.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для неинвазивной экспресс-диагностики воспалительного процесса в кишечнике у телят. Способ включает определение в кале лейкоцитов, белка, гемоглобина и pH-реакции кала.
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения больных с перфорацией язвы желудка и двенадцатиперстной кишки. Выполняют лапаротомию, производят оперативное пособие по поводу перфорации язвы, во время операции берут экссудат из брюшной полости, определяют pH экссудата.

Изобретение относится к медицине и касается диагностики урогенитального трихомониаза на основе цитоморфотипа возбудителя. Способ включает комплексное клинико-лабораторное и микробиологическое исследование отделяемого урогенитального тракта пациентов с определением цитоморфотипа возбудителя при культуральном методе исследования и оценки степени выраженности воспаления или лейкоцитоза в урогенитальном тракте обследуемых.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения клеток и неклеточных элементов атеросклеротической бляшки. Сущность способа состоит в том, что после выполнения баллонной ангиопластики с поверхности баллонного катетера производят смыв клеток и неклеточных элементов, затем полученную суспензию клеток и неклеточных элементов подвергают центрифугированию, удаляют надосадочную жидкость, осуществляют ресуспензирование клеток и неклеточных элементов, затем суспензии клеток и неклеточных элементов помещают в заряженные цитобакеты, которые центрифугируют, после чего полученные препараты используют для дальнейших исследований.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и предназначено для диагностирования нарушения репродуктивной функции у пациенток с миомой матки. Способ заключается в определении количества пиноподий в поверхностном эпителии, уровня экспрессии рецепторов прогестерона и эстрогена-альфа в строме эндометрия, их соотношения, а также уровня экспрессии имплантационного фактора LIF на 21-24 день менструального цикла (в «окно имплантации»). При количестве пиноподий менее 35%, уровне соотношения экспрессии прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в строме эндометрия менее 3,5, а также уровне экспрессии LIF менее 2 баллов диагностируют нарушение фертильности, связанное с миомой матки. Данный метод позволяет применять дифференцированный подход к ведению пациенток, планирующих беременность, с миомой матки, не деформирующей полость матки, а также с размерами миоматозных узлов до 5,0 см в диаметре. 2 пр., 4 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и аритмологии, и может быть использовано для прогнозирования развития нарушений ритма сердца у пациентов с синдромами преждевременного возбуждения желудочков. Для этого в плазме крови больного определяют концентрацию матриксной металлопротеиназы-9 (ММП-9) и при ее значении менее 90,6 нг/мл прогнозируют благоприятное течение заболевания без развития нарушений ритма сердца (НРС), при значении концентрации ММП-9 более 90,6 нг/мл прогнозируют развитие НРС. Способ позволяет прогнозировать развитие НРС у пациентов с синдромами преждевременного возбуждения желудочков за счет высокой чувствительности и специфичности метода при малой инвазивности способа и отсутствии противопоказаний. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для выявления симптомов эндогенной интоксикации (ЭИ) пациентов, страдающих колоктеральным раком. Для этого исследуют клинический анализ крови и расчитывают интегральный показатель интоксикации (ИПИ) по формуле: И П И = ( Ю н + П а л + С е г + М и е л + П л а з ) * 10 ( Б а з + Э о з + Л и м + М о н ) * Э р * Ц п где ИПИ - интегральный показатель интоксикации, Юн - юные лейкоциты в %, Пал - палочкоядерные нейтрофилы в %, Сег - сегментоядерные нейтрофилы в %, Миел - миелоциты в %, Плаз - плазматические клетки в %, Баз - базофилы в %, Эоз - эозинофилы в %, Лим - лимфоциты в %, Мон - моноциты в %, Эр - эритроциты в абсолютном значении в 1012 степени, ЦП - цветовой показатель в абсолютном значении. Изобретение обеспечивает диагностику отсутствия (при ИПИ=4,6) или наличия (при ИПИ=10,4) симптомов ЭИ и ассоциированных с нею дыхательных расстройств и позволяет оценить эффективность проводимой терапии.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ, включающий определение наличия или отсутствия мутации K-rasG12D. Наличие мутации K-rasG12D указывает на то, что пациент не ответит на лечение ингибитором В-Raf. Изобретение обеспечивает эффективный способ идентификации пациента, не отвечающего на лечение ингибитором B-Raf. 5 з.п. ф-лы, 34 ил., 12 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии. Способ позволяет прогнозировать вероятность развития гестоза беременных. Задачей представленного изобретения является комплексная оценка белковых факторов риска с учетом клинической картины и значимости каждого фактора в числовом эквиваленте. Поставленная задача в изобретении решается тем, что для прогнозирования гестоза беременных предлагается определять уровни плацентарной щелочной фосфатазы и лактоферрина в суточной моче беременных на 20-22 неделе беременности и повторно через 2 недели и по суммам концентраций плацентарной щелочной фосфатазы и концентраций лактоферрина выше 16,0 нг/мл судить о возможности развития гестоза. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу дифференциальной диагностики генерализованной формы внутриутробной моно- и микст-цитомегаловирусной инфекции у новорожденных. Сущность способа состоит в том, что у новорожденных с генерализованной формой внутриутробной моно-цитомегаловирусной инфекции или микст-цитомегаловирусной инфекции в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата определяют концентрацию серомукоида. При концентрации серомукоида 0,110-0,140 единиц оптической плотности диагностируют раннюю стадию развития генерализованной формы внутриутробной моно-цитомегаловирусной инфекции. При концентрации серомукоида 0,141-0,171 единиц оптической плотности диагностируют раннюю стадию генерализованной формы внутриутробной микст-цитомегаловирусной инфекции, обусловленной сочетанием вируса цитомегалии и простого герпеса 1 типа. Использование заявленного способа позволяет эффективно осуществить дифференциальную диагностику генерализованной формы внутриутробной моно- и микст-цитомегаловирусной инфекции у новорожденных. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для оценки риска развития рака эндометрия. У пациенток с гиперпластическими процессами эндометрия определяют клинико-анамнестические показатели и проводят гистероскопию с биопсией эндометрия. В эндометрии определяют активность кальпаинов, тотальную активность протеасом, активность 20S протеасом. Учитывая возраст пациентки, рассчитывают значения дискриминантных функций Y1 и Y2 по формулам. При Y1>Y2 пациентку относят к группе с низким риском развития рака эндометрия. При Y1<Y2 пациентку относят к группе с высоким риском развития рака эндометрия. Изобретение позволяет с высокой долей чувствительности и специфичности прогнозировать развитие рака эндометрия у пациенток с гиперпластическими процессами эндометрия. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биохимии и диагностической медицины. Способ включает сбор крови в антисвертывающий раствор, добавление равного объема элюирующего буфера, содержащего 1 М NaCl, 0,2 М NaHCO3 (pH 9,3), 20 мМ ЭДТА или буфера, содержащего 1 М NaCl, 20 мМ ЭДТА. Полученную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение 4-6 минут при перемешивании с последующим разделением собранной крови на плазму и клеточную фракцию крови при помощи центрифугирования и сбором супернатанта, из которого выделяют суммарную фракцию внеклеточных нуклеиновых кислот (внНК). Использование изобретения позволяет сократить время получения суммарной фракции внНК, повысить выход внНК крови, повысить чувствительность детекции маркерных НК, специфичных для онкозаболеваний и патологий беременности. 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения степени тяжести детского церебрального паралича у детей. Способ состоит в том, что выявляют клинические признаки заболевания, определяют в периферической крови ребенка уровень эритроцитов с микроядрами, выявляют клинические признаки заболевания по шкале Ривермид, дополнительно с помощью иммуноферментного анализа определяют количественное содержание фактора некроза опухоли (TNF-α) в сыворотке периферической крови у детей, больных детским церебральным параличом, сопоставляют с клиническими признаками и при значении эритроцитов с микроядрами 0,55±0,14% и повышении уровня TNF-α сыворотки до 6,14±3,025 пг/мл устанавливают среднюю степень тяжести заболевания, а при значениях эритроцитов с микроядрами 1,27±0,47% и выше и уровне TNF-α сыворотки 9,58±0,39 пг/мл и выше - тяжелую степень заболевания. Использование заявленного способа позволяет получить ускоренный и менее инвазивный способ определения степени тяжести детского церебрального паралича. 5 ил., 8 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к гидрофилизации поверхности и иммобилизации антител на поверхности сополимера циклоолефина. Представлен способ изготовления аналитического устройства капиллярного действия, включающий в себя этапы: а) обеспечения капиллярной подложки, b) изменения гидрофильности поверхности подложки, с) смешивания матрицы и иммобилизованной молекулы в виде раствора для получения раствора, включающего в себя иммобилизованные молекулы, ковалентно связанные с матрицей, и d) осаждения раствора на четко очерченную область в этой по меньшей мере одной зоне для сохранения. Также описано аналитическое устройство капиллярного действия, изготавливаемое этим способом. Достигается возможность изменения подложки посредством химической обработки поверхности и возможности осаждения иммобилизованных молекул в оптимальной матрице на заданных областях. При этом расходуется меньше матричного материала, и тем самым на одном чипе может быть использовано несколько различных матричных материалов. 2 н. и 31 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для выявления атипичных форм трихомонад. Способ включает взятие биологического ткани, введение в нее биологически активного вещества, выдержку полученной смеси в термостате при 37°C с последующей инкубацией, проведение микроскопического исследования для выявления форм трихомонад. В качестве биологической ткани осуществляют забор материала со слизистых оболочек мочеполовых органов, который инкубируют в течение суток в питательной среде. Отделяют полученный осадок и добавляют к нему в качестве биологически активного вещества нитрозогуанидин в количестве 500 мкгмл. Инкубируют 15 мин при температуре +37°C, добавляют подогретый до температуры +37°C фосфатный буфер с pH 5,6 с последующим двойным центрифугированием при 1000 обмин в течение 10 мин. Затем помещают в питательную среду для выращивания трихомонад, инкубируют не менее суток и при микроскопии выявляют атипичные безжгутиковые и типичные округлые и амебовидные формы трихомонад. Использование заявленного изобретения позволяет эффективно, быстро и достоверно выявлять типичные измененные и атипичные формы трихомонад. 3 ил., 3 пр.

Наверх