Способ дифференциальной диагностики аутоиммунных заболеваний печени



Способ дифференциальной диагностики аутоиммунных заболеваний печени
Способ дифференциальной диагностики аутоиммунных заболеваний печени

 


Владельцы патента RU 2566723:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова Министерства здравоохранения Российской Федерации" (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно гастроэнтерологии и патологической анатомии, и предназначено для дифференциальной диагностики различных нозологических форм аутоиммунных заболеваний печени (АИЗП). Для дифференциальной диагностики аутоиммунных заболеваний печени осуществляют клинико-лабораторные, морфологические и иммуноморфологические исследования с иммуногистохимическим определением экспрессии bcl-2 в ткани печени. Проводят сравнительный анализ содержания bcl-2 позитивных клеток и определяют уровень процентного содержания bcl-2. Дифференциальную диагностику проводят между первичным билиарным циррозом при значении 66%-100% и перекрестным синдромом - аутоиммунный гепатит/первичный билиарный цирроз - менее 66%; между аутоиммунным гепатитом - 33%-66% и первичным билиарным циррозом - 66%-100%; между аутоиммунным гепатитом - 33%-66% и хроническим вирусным гепатитом С - 0%-33%. Использование изобретения позволяет повысить достоверность дифференциальной диагностики перекрестных синдромов аутоиммунных заболеваний печени, с последующей оптимизацией терапии в зависимости от установленного диагноза. 1 ил., 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно гастроэнтерологии и патологической анатомии, может быть использовано для дифференциальной диагностики различных нозологических форм аутоиммунных заболеваний печени (АИЗП), а также аутоиммунных поражений печени при их сочетании.

Актуальность проблемы АИЗП определяется их возрастающей распространенностью, быстрой прогрессией заболевания при отсутствии своевременной диагностики и выбора оптимальной тактики терапии с высокой инвалидизацией и летальностью, а также наличием сочетанных форм аутоиммунных поражений печени, затрудняющих клиническую и морфологическую дифференциальную диагностику при отсутствии унифицированных подходов к ней [A.J. Czaja, 1996, EASL, 2009, K.M. Boberg с соавт., 2011].

Аутоиммунные заболевания печени - хронические воспалительные заболевания, ведущие к этиологически неидентифицированной иммунной атаке, направленной на гепатоциты, мелкие желчные протоки, или весь билиарный тракт. Выделяют три основных вида АИЗП - аутоиммунный гепатит (АИГ), первичный билиарный цирроз (ПБЦ) и первичный склерозирующий холангит, которые не только различаются клиническими, патогенетическими и морфологическими особенностями, но и требуют различного диагностического подхода, стратегий терапевтического лечения и отличаются по его эффективности. Все они рассматриваются как самостоятельные заболевания печени, но часто у пациентов отмечаются признаки сразу нескольких АИЗП. Сложность постановки диагноза у таких пациентов привела к появлению термина «перекрестный синдром». Наиболее частый из перекрестных синдромов - аутоиммунный гепатит / первичный билиарный цирроз (АИГ/ПБЦ) - состояние, которое характеризуется синхронным или метахронным проявлением патологических признаков АИГ и ПБЦ, он наблюдается у 2,1-19% больных с ПБЦ [K.M. Boberg с соавт., 2011, Н. Ohira, 2012].

Номенклатура и диагностические критерии перекрестных синдромов не стандартизированы.

Диагностика перекрестного синдрома остается нерешенной проблемой. Возможность выявления клинических, лабораторных и гистологических признаков одних АИЗП при других затрудняет вычленение истинных перекрестных синдромов.

На сегодняшний день в клинической практике диагноз ставится на сочетания комбинации биохимических, серологических и гистологических особенностей двух заболеваний. Однако ни один диагностический тест при АИЗП не обладает абсолютной специфичностью и многое зависит от субъективной оценки значения отдельных критериев [J. Woodward, J. Neuberger, 2001, EASL 2009].

Известно применение комплексных систем диагностики аутоиммунного гепатита для определения его наличия при холестатических заболеваниях [J.A. Talwalkar с соавт., 2002, М. Kaya с соавт., 2000], однако Международная рабочая группа по аутоиммунному гепатиту категорически возражает против такого подхода, поскольку данные системы разработаны для изолированного течения аутоиммунного гепатита и соответственно не подходят для выявления его комбинации с холестатическими заболеваниями.

Известен способ комплексной клинико-лабораторной и морфологической диагностики перекрестного синдрома АИГ/ПБЦ Chazouilleres, О. Primary biliary cirrhosis - autoimmune hepatitis overlap syndrome: clinical features and response to therapy / O. Chazouilleres, D. Wendum, L. Serfaty [et al.] // J. Hepatol. - 1998. - V. 28, №2. - P. 296-301. Необходимо наличие 2 из 3-х типичных лабораторных и морфологических признаков как аутоиммунного гепатита (повышение аланиновой аминотрансферазы (АЛТ); IgG и/или выявление антигладкомышечных антител, умеренные или тяжелые перипортальные или перисептальные лимфоцитарные ступенчатые некрозы), так и первичного билиарного цирроза (повышение щелочной фосфатазы или γ-глутамил-транспептидазы; выявление антимитохондриальных антител; наличие «цветущих» желчных протоков при биопсии). Однако данные критерии могут давать ошибочные заключения при поздних стадиях первичного билиарного цирроза, когда выраженность лабораторных и морфологических изменений затрудняет интерпретацию данных.

Известен способ (патент RU 2477486 G01N 33/53, 2013 г.) выявления перекрестных форм АИЗП, заключающийся в определении концентрации аутоантител, характерных для ПБЦ. Сущность способа заключается в определении концентрации АМА-М2, ANA, АМА-M2+LKM, AMA-M2+sp100, AMA-M2+gp210, AMA-M2+F-Actin, AMA-M2+Desmin. При значении АМА-М2 - 172-200 Ед/мл, ANA - 3,4-5,8 Ед/мл, AMA-M2+LKM 1,8-2,8 Ед/мл, AMA-M2+sp100 - 2,7-4,5 Ед/мл, AMA-M2+gp210 - 1,6-2,4 Ед/мл, AMA-M2+F-Actin -1,0±1,4 Ед/мл и AMA-M2+Desmin - 0,8-1,2 Ед/мл диагностируют перекрестную форму аутоиммунных заболеваний печени. Способ направлен на повышение точности диагностики признаков ПБЦ. Однако из-за того, что он может быть использован только при достаточном количестве других признаков перекрестного синдрома, данный способ обладает низкой эффективностью и точностью дифференциальной диагностики АИЗП.

Известны способы определения антиапоптозной способности эпителиальных клеток желчных протоков, основанные на иммуногистохимическом изучении экспрессии bcl-2 клетками билиарного эпителия с использованием мышиных моноклональных антител, когда при ПБЦ наблюдается повышение экспрессии bcl-2 холангиоцитами, особенно при прогрессировании заболевания (Talwalkar, J. A. Overlap of autoimmune hepatitis and primary biliary cirrhosis: an evaluation of a modified scoring system / J.A. Talwalkar, J. Keach C.P. Angulo, K.D. Lindor // Am. J. Gastroenterol. - 2002. - V. 97, №5. - P. 1191-1197.), а также при хроническом гепатите C. Однако эти исследования были направлены на преимущественное изучение экспрессии bcl-2 на непаренхиматозных клетках печени, для дифференциальной диагностики аутоиммунных заболеваний печени эти способы не применимы.

Наиболее близкими к предлагаемому является способ определения экспрессии bcl-2 в ткани печени у больных ПБЦ и хроническим вирусным гепатитом, изложенный в работе Н. Koga с соавт. [1997] (Koga, Н. Nuclear DNA fragmentation and expression of Bcl-2 in primary biliary cirrhosis / H. Koga, S. Sakisaka, M. Ohishi [et al.] // Hepatol. - 1997. - V. 25, №5. - 1077-1084.). Авторы наблюдали повышение экспрессии bcl-2 клетками желчного эпителия при ПБЦ по сравнению с больными хроническим гепатитом C и здоровыми людьми. В этом исследовании определение экспрессии bcl-2 клетками билиарного эпителия проводилось иммуногистохимическим методом с использованием моноклональных мышиных антител к bcl-2 и авидин-биотин-пероксидазного комплекса. Оценивалась степень экспрессии bcl-2 в зависимости от интенсивности окрашивания (как сильная, слабая и отрицательная). Однако данный способ предполагает субъективизм при оценке полученных данных. Кроме того, данный способ не ставит своей задачей дифференциальную диагностику, а только оценку экспрессии bcl-2 на фоне проводимой терапии. В этой работе не было проведено изучение экспрессии bcl-2 при аутоиммунном гепатите и первичном билиарном циррозе с признаками аутоиммунного гепатита, что не позволяет осуществлять дифференциальную диагностику этих заболеваний, а следовательно, проводить точную диагностику.

Таким образом, сравнительные данные по экспрессии bcl-2 холангиоцитами при аутоиммунном гепатите и различными фенотипами первичного билиарного цирроза до сего времени отсутствуют, и все имеющиеся работы об экспрессии bcl-2 при АИЗП затрагивают только группы больных с ПБЦ и ХГС, не предполагают изучения ее различий при аутоиммунном гепатите, а также при первичном билиарном циррозе с признаками аутоиммунного гепатита, то есть не применимы для дифференциальной клинико-морфологической диагностики различных аутоиммунных заболеваний печени.

С целью устранения вышеуказанных недостатков авторы предлагают принципиально новый способ дифференциальной диагностики аутоиммунных заболеваний печени, технический результат, достигаемый в данном способе, заключается в повышении точности проводимой диагностики благодаря определению процентного содержание bcl-2-позитивных эпителиальных клеток в желчных протоках при различных АИЗП.

Это достигается тем, что путем проведения клинико-лабораторных, морфологических и иммуноморфологических исследований с иммуногистохимическим определением экспрессии bcl-2 в ткани печени проводят сравнительный анализ содержания bcl-2 позитивных клеток, определяют уровень процентного содержания bcl-2 и дифференциальную диагностику проводят:

- между первичным билиарным циррозом при значении 66%-100% и перекрестным синдромом - аутоиммунный гепатит/первичный билиарный цирроз - менее 66%;

- между аутоиммунным гепатитом - 33%-66% и первичным билиарным циррозом - 66%-100%,

- между аутоиммунным гепатитом - 33%-66% и хроническим вирусным гепатитом С - 0%-33%.

Многолетний опыт работы с АИЗП свидетельствует о сложности клинико-морфологической диагностики перекрестных синдромов, когда у одного пациента имеется сочетание дифференциально-диагностических клинико-лабораторных и морфологических признаков различных АИЗП, требующих разного подхода к терапии, адекватность которой определяет прогноз течения заболевания.

Авторы для повышения точности клинико-морфологической диагностики перекрестных синдромов при АИЗП использовали метод ИГХ, позволяющий определять уровень экспрессии bcl-2 эпителиальными клетками желчных протоков, отличающийся при разных нозологических формах.

Авторами показана ценность использования ИГХ метода с определением экспрессии bcl-2, блокирующего апоптоз, эпителиальными клетками желчных протоков в комплексной клинико-лабораторной и морфологической дифференциальной диагностике перекрестных синдромов при АИЗП.

Установлено, что лишь совокупность клинико-лабораторных, морфологических и иммуноморфологических критериев, характеризующих каждый из компонентов патологического процесса, обеспечивает точность диагностики перекрестных синдромов у больных с АИЗП.

Авторами анализировалась экспрессия противоапоптозного фактора bcl-2 паренхиматозными (эпителиальные клетки желчных протоков) и непаренхиматозными (клетки воспалительного инфильтрата паренхимы печени) клетками печени у больных с АИЗП, в том числе и с перекрестным синдромом, а также у больных ХГС. Показано, что имеется положительная взаимосвязь между выраженностью некровоспалительной активности и экспрессией bcl-2 в непаренхиматозных клетках печени при разных вариантах АИЗП, а экспрессия bcl-2 в клетках эпителия желчных протоках при разных вариантах АИЗП и при ХГС имеет существенные различия.

Многочисленными исследованиями показана важная роль апоптоза в патогенезе повреждения при хронических диффузных заболеваниях печени, в том числе при различных вариантах АИЗП и при ХГС. В физиологических условиях апоптоз является регулируемой формой программированной гибели клеток, одним из естественных механизмов клеточной смерти, важнейшим механизмом поддержания клеточного состава организма. В условиях патологии часто наблюдаются нарушения в системе апоптоза клеток при АИЗП и ХГС. Выявление клеток в состоянии апоптоза ввиду их быстрой элиминации и сложностей визуализации, затруднительно, в связи с чем в изучении апоптоза наибольшее значение придается исследованию про- и антиапоптотических факторов, баланс которых и характеризует процесс апоптоза.

Клинико-лабораторный и морфологический анализ различных форм АИЗП и ХГС показывает существенные патогенетические отличия этих заболеваний, во многом обусловленные особенностями апоптоза клеток при них. Проявления клеточно-опосредованного иммунного повреждения, лежащие в основе патогенеза этих заболеваний, являются составной частью клинико-лабораторных и морфологических критериев дифференциальной диагностики этих заболеваний. Перекрестным синдромам, патогенез которых еще более сложен, тем не менее присущи характерные особенности апоптоза, свойственные конкретным нозологическим формам, таким как ПБЦ или АИГ.

Авторами для повышения точности дифференциальной диагностики перекрестных синдромов при АИЗП и ХГС использована конституциональная способность эпителиальных клеток желчных протоков печени экспрессировать антиапоптозный фактор bcl-2.

Таким образом, авторами установлена диагностическая ценность определения уровня содержания противоапоптозного фактора bcl-2 эпителиальными клетками желчных протоков печени. Авторами обнаружено, что различный уровень экспрессии bcl-2 эпителиальными клетками желчных протоков, то есть различное содержание bcl-2-позитивных клеток в желчных протоках характерно для разных нозологических форм АИЗП и ХГС, что является патогенетической основой для дифференциальной диагностики перекрестных синдромов при АИЗП и ХГС.

Клинико-морфологические сопоставления при АИЗП и ХГС, проведенные авторами, позволили установить в качестве дифференциально-диагностического критерия уровень экспрессии bcl-2 эпителиальными клетками желчных протоков печени. Установлено, что при проведении дифференциальной диагностики между ПБЦ и перекрестным синдромом АИГ/ПБЦ в пользу наличия ПБЦ свидетельствует наличие 66%-100% bcl-2-позитивных эпителиальных клеток в желчных протоках, в пользу перекрестного синдрома АИГ/ПБЦ - наличие менее 66% bcl-2-позитивных эпителиальных клеток в желчных протоках; при проведении дифференциальной диагностики между АИГ и ПБЦ в пользу АИГ свидетельствует наличие от 33% до 66% bcl-2-позитивных эпителиальных клеток в желчных протоках, в пользу ПБЦ - наличие более 66% bcl-2-позитивных эпителиальных клеток в желчных протоках; при проведении дифференциальной диагностики между АИГ и ХГС в пользу АИГ свидетельствует наличие от 33% до 66% bcl-2-позитивных эпителиальных клеток в желчных протоках, в пользу ХГС - наличие менее 33% bcl-2-позитивных эпителиальных клеток в желчных протоках.

Авторами показано, что определение дифференциально-диагностического критерия, основой которого является одно из основополагающих звеньев патогенеза АИЗП и ХГС, позволяет проводить достоверную дифференциальную диагностику перекрестных синдромов с последующей оптимизацией терапии в зависимости от установленного диагноза.

Таким образом, предложенный авторами способ отличается новизной, неочевидностью, изобретательским уровнем, что обеспечивает положительный результат. В доступной нам литературе подобного способа дифференциальной диагностики заболеваний печени не обнаружено, а совокупность предложенных авторами признаков позволяет нам заявить способ как заявочный материал на изобретение.

Под нашим наблюдением находились 33 пациента с верифицированными заболеваниями печени и лабораторными признаками их активности: 7 - с аутоиммунным гепатитом (АИГ), 10 - с первичным билиарным циррозом (ПБЦ), 6 - с перекрестным синдромом АИГ/ПБЦ и 10 - с ХГС. Проведена гистологическая оценка биоптатов печени и иммуногистохимическое определение экспрессии bcl-2 в эпителиальных клетках желчных протоков печени. Диагноз АИЗП устанавливался на основании комплексного обследования согласно рекомендациям ведущих гепатологических ассоциаций. Нами получены достоверные различия по повышению количества bcl-2 позитивных клеток билиарного эпителия при всех видах АИЗП в сравнении с ХГС, при котором у всех больных отмечена экспрессия bcl-2 менее, чем в 33% эпителиальных клеток желчных протоков (p<0,05) (таблица 1, фиг. 1 Экспрессия bcl-2 в клетках желчного эпителия при АИГ (а), ПБЦ (б), ХГС (в) и АИГ/ПБЦ (г). Увеличение 400х). При ПБЦ у большинства больных bcl-2 экспрессировали более 66% эпителиальных клеток желчных протоков, в то время как при АИГ и АИГ/ПБЦ bcl-2+ реакция достоверно чаще отмечалась в 33-66%) эпителиальных клеток желчных протоков (p<0,05 при сравнении с каждой из групп). Различий между АИГ и АИГ/ПБЦ в экспрессии эпителиальными клетками желчных протоков bcl-2 не наблюдалось.

Из представленных данных следует, для ПБЦ характерна экспрессия bcl-2 в подавляющем большинстве клеток желчного эпителия (>66% от них), для АИГ и АИГ/ПБЦ bcl-2 позитивность менее чем 66% клеток желчного эпителия, а при ХГС экспрессия bcl-2 в клетками желчного эпителия наименее выражена (менее 33% bcl-2 позитивных клеток).

Способ осуществляется следующим образом:

Для реализации предлагаемого метода полученная при пункционной биопсии ткань печени фиксировалась в 10% нейтральном растворе формалина, подвергалась спиртовой проводке и заливке в парафин по общепринятым методикам. Парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм окрашивали обзорными гистологическими красителями (гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону или трихромом по Массону). Иммуногистохимическое исследование выполнялось с использованием моноклональных мышиных антител (анти-bcl-2, Novocastra Lab, UK) и системы EnVision (DAKO, Germany).

В качестве оптически плотной метки, визуализирующей продукт реакции ангиген-антитело в ткани, использовался диаминобензидин. После проведения ИГХ реакции иммуногистохимические препараты докрашивали гематоксилином и заключали под покровные стекла. Bcl-2-позитивные клетки имели отчетливое трансмембранное коричневое окрашивание, тогда как остальные (негативные) эпителиальные клетки желчных протоков окрашивались гематоксилином. Изучение гистологических и иммуногистохимических препаратов, а также учет результатов ИГХ исследования проводились с использованием светооптического микроскопа Zeiss AxioScope Al. Определение экспрессии bcl-2 проводилось в эпителии желчных протоков и выполнялось полуколичественным методом (отсутствует, выявляется менее чем в 33%, в 33-66%, более чем в 66% холангиоцитов).

Эффективность предлагаемого способа дифференциальной диагностики может быть подтверждена клиническими примерами.

Пример 1. Больная О., 54 года. Обратилась в связи с периодически возникающим малоинтенсивным кожным зудом, отмечающимся в течение 2 лет. При физикальном обследовании определялось увеличение печени, подтвержденное в дальнейшем результатами ультразвукового исследования. В анализах крови: повышение СОЭ 48 мм/ч, гипергаммаглобулинемия 19 г/л, повышение активности ACT 119 E/л, АЛТ 103 Е/л, щелочной фосфатазы 418 Е/л и гамма-глутамилтранспептидазы 285 Е/л, повышение содержания иммуноглобулина G 17,6 мг/л и иммуноглобулина М 8,7 мг/л. Маркеры вирусных гепатитов отрицательны. В реакции непрямой иммунофлуоресценции выявлен антинуклеарный фактор в титре 1:1280, антимитохондриальные антитела не выявлены. Выполнена пункционная биопсия печени. По данным гистологического исследования, картина поражения желчных протоков, дуктопении в сочетании с единичными перипортальными ступенчатыми некрозами, выраженным фиброзом. Гистологическая картина соответствовала III стадии первичного билиарного цирроза, возможно в сочетании с аутоиммунным гепатитом. Однозначная постановка диагноза «первичный билиарный цирроз» была невозможна в связи с отсутствием антимитохондриальных антител. Также больная критериально не соответствовала диагнозу аутоиммунного гепатита. Существующие критерии постановки диагноза перекрестного синдрома не позволяли подтвердить данный диагноз перекрестный синдром в связи с отсутствием антимитохондриальных антител и недостаточно высоким уровнем повышения щелочной фосфатазы и гамма-глутамилтранспептидазы. Проведено иммуногистохимическое исследование экспрессии bcl-2 в ткани печени с полуколичественной оценкой и определена экспрессия bcl-2 более чем в 66%клеток желчного эпителия. Установлен диагноз «Первичный билиарный цирроз», больная получала терапию урсодезоксихолевой кислотой с хорошим клинико-лабораторным ответом. В дальнейшем, через 1 год, в ходе повторного обследования у больной выявлены антитела к структурам митохондрий методом иммуноблота, что окончательно подтвердило диагноз.

Пример 2. Больная К., 39 лет. Обратилась в связи с повышением аминотрансфераз при планово выполненном анализе крови. Из жалоб отмечаются слабость, артралгии. Из анамнеза известно, что 6 лет назад в крови были выявлены антитела к вирусу гепатита C (анти-HCV), при повторных двухкратных обследованиях наличие анти-HCV не было подтверждено. При физикальном обследовании определялось увеличение печени и селезенки, подтвержденные в дальнейшем результатами ультразвукового исследования. В анализах крови: тромбоцитопения 110 в мкл, повышение СОЭ 27 мм/ч, гипергаммаглобулинемия 24 г/л, повышение активности ACT 105 Е/л, АЛТ 156 Е/л, щелочной фосфатазы 128 Е/л, повышение содержания иммуноглобулина G 18,5 г/л. В реакции непрямой иммунофлуоресценции выявлен антинуклеарный фактор в титре 1:640. Выполнена пункционная биопсия печени. По данным гистологического исследования, картина хронического гепатита с выраженной активностью в стадии цирроза печени, которая может соответствовать как аутоиммунному гепатиту, так и хроническому гепатиту C. Согласно критериям, рекомендованным международной рабочей группой по аутоиммунному гепатиту, данная клиническая ситуация может быть при наличии маркеров вирусного гепатита оценена в 4 балла (исключение аутоиммунного гепатита), а при их отсутствии в 6 баллов (вероятный диагноз аутоиммунного гепатита). Проведено иммуногистохимическое исследование с целью определения наличия антигенов HCV в ткани печени. Экспрессия NS3 HCV - слабоположительная, что могло быть расценено и как наличие вирусной инфекции, и как неспецифическая реакция. Проведено иммуногистохимическое исследование в ткани печени с полуколичественной оценкой и определена экспрессия bcl-2 более чем в 33% и менее чем в 66% клеток желчного эпителия в разных портальных трактах. Пациентке был установлен диагноз «Аутоиммунный гепатит» и назначена терапия преднизолоном и азатиоприном, приведшая к нормализации лабораторных показателей и ремиссии заболевания.

Пример 3. Больная C., 61 год. В течение 4 лет наблюдалась в поликлинике по месту жительства с диагнозом «Первичный билиарный цирроз», установленным на основании жалоб на интенсивный кожный зуд, повышения уровня щелочной фосфатазы, аминотрансфераз, выявления антимитохондриальных антител. Проводимое лечение урсодезоксихолевой кислотой не привело к улучшению. При физикальном обследовании - гиперпигментация кожных покровов, эскориации, увеличение печени, селезенки. В анализах крови: анемия (гемоглобин 112 г/л), тромбоцитопения (82 в мкл), повышение СОЭ 41 мм/ч, гипергаммаглобулинемия 22 г/л, повышение активности ACT 216 Е/л, АЛТ 244 Е/л, щелочной фосфатазы 528 Е/л и гамма-глутамилтранспептидазы 643 Е/л, повышение содержания иммуноглобулина G 17,3 мг/л и иммуноглобулина М 9,5 мг/л. Маркеры вирусных гепатитов отрицательные. В реакции непрямой иммунофлуоресценции выявлен антинуклеарный фактор в титре 1:2560 и антимитохондриальные антитела в титре 1:1280. При ультразвуковом исследовании органов брюшной полости - гепатоспленомегалия, признаки портальной гипертензии. В связи с неэффективностью стандартной терапии и для решения вопроса о наличии компонента аутоиммунного гепатита выполнена пункционная биопсия печени. По данным гистологического исследования картина поражения желчных протоков с выраженной дуктопенией, в сочетании с тяжелыми перипортальными и перисептальными ступенчатыми некрозами, с формированием порто-портальных и портоцентральных септ. Гистологическая картина соответствовала IV стадии первичного билиарного цирроза, в сочетании с аутоиммунным гепатитом с выраженной активностью в стадии цирроза печени. Существующие критерии постановки диагноза перекрестного синдрома позволяли подтвердить наличие сочетания двух заболеваний. Однако имеющиеся признаки аутоиммунного гепатита (гипергаммаглобулинемия, выраженная некровоспалительная активность) могут наблюдаться и на поздних стадиях первичного билиарного цирроза, что заставило сомневаться в данном диагнозе. Проведено иммуногистохимическое исследование в ткани печени с полуколичественной оценкой и определена экспрессия bcl-2 более чем в 33% и менее чем в 66% клеток желчного эпителия в разных портальных трактах. Установлен диагноз: перекрестный синдром аутоиммунный гепатит первичный билиарный цирроз с признаками аутоиммунного гепатита (перекрестный синдром). Больной назначен преднизолон в сочетании с урсодезоксихолевой кислотой, что привело к улучшению состояния и к значительному снижению лабораторных показателей до уровня, определяемого как ответ на терапию.

Таким образом, применение предложенного способа дифференциальной диагностики аутоиммунных заболеваний печени позволяет проводить достоверную дифференциальную диагностику перекрестных синдромов с последующей оптимизацией терапии в зависимости от установленного диагноза.

Способ дифференциальной диагностики аутоиммунных заболеваний печени, включающий проведение клинико-лабораторных, морфологических и иммуноморфологических исследований с иммуногистохимическим определением экспрессии bcl-2 в ткани печени, отличающийся тем, что выявляют экспрессию bcl-2 в эпителиальных клетках желчных протоков биоптата печени, проводят сравнительный анализ содержания bcl-2 позитивных клеток, определяют уровень процентного содержания bcl-2 позитивных клеток и дифференциальную диагностику проводят между первичным билиарным циррозом при значении 66%-100% и перекрестным синдромом - аутоиммунный гепатит/первичный билиарный цирроз - менее 66%, между аутоиммунным гепатитом - 33%-66% и первичным билиарным циррозом - 66%-100%, между аутоиммунным гепатитом - 33%-66% и хроническим вирусным гепатитом С - 0%-33%.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, а именно может быть использовано для определения предрасположенности больных с хронической ишемической болезнью сердца к прогрессированию атеросклероза.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для диагностики наследственной оптической нейропатии (НОН). Для этого проводят клинические и цитологические исследования и дополнительно из кожи пациента получают культуру фибробластов плотностью 5000-10000 клеток на см2, окрашивают митохондриальным потенциалзависимым флюоресцентным красителем TMRE до конечной концентрации 25 нМ.
Изобретение относится к области медицины, педиатрии, инфекционным болезням и может быть использовано для оценки эффективности терапии хронической цитомегаловирусной инфекции у детей.
Предлагаемое изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения иммуноферментной тест-системы для определения эпитопов оболочечного белка вируса Пуумала протективной направленности в вакцинных препаратах против геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС).
Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии и репродуктологии, и описывает способ отбора пациенток с синдромом слабого ответа яичников, нуждающихся в переводе на программу лечения с использованием донорских ооцитов.
Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике заболеваний почек, и может быть использовано при обследовании больных для диагностики начальной и последующих стадий хронической болезни почек.
Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и гематологии, и может быть использовано для выявления и предотвращения нефротоксических эффектов на этапах полихимиотерапии у пациентов онкогематологического профиля.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ качественного определения адаптационной способности к мостовидным конструкциям ортопедических протезов по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области, причем, если определяют содержание в ротовой жидкости тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (ТИМП 1) в количестве 118,9-145,7 нг/мл и тканевого ингибитора металлопротеиназы 2 (ТИМП 2) в количестве 42,4-56,9 нг/мл, то диагностируют низкую адаптационную способность пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области к мостовидным конструкциям ортопедических протезов, а если определяют содержание в ротовой жидкости пациента ТИМП 1 в количестве 68,2-77,4 нг/мл и ТИМП 2 в количестве 21,9-37,7 нг/мл, то диагностируют полную функциональную адаптацию пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области к мостовидным конструкциям ортопедических протезов.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к определению наличия антител к бактериальным антигенам в сыворотке крови животных. Для этого антиген смешивают с тестируемой сывороткой крови в различных разведениях в лунках микропланшета с V-образным дном с последующей визуализацией результатов реакции агглютинации с использованием источника ультрафиолетового излучения, преимущественно трансиллюминатора.

Изобретение относится к медицине и описывает способ удаления CO2 из содержащей мочевину пробы плазмы, содержащий следующие стадии: a) получение пробы плазмы, b) добавление кислоты, чтобы частично удалить CO2, c) лиофилизация пробы, чтобы дополнительно удалить CO2 и получить сухую пробу, d) повторное растворение высушенной пробы и нейтрализация буферным раствором до значения pH 4-7.

Изобретение относится к биохимии. Описаны способы определения наличия или метастазов опухоли, скрининга наличия опухоли среди популяции высокого риска, прогноза для пациента, имеющего опухоль, определения эффективности хирургического вмешательства, радиационной терапии или химиотерапии. Способы включают обнаружение уровня полипептида с указанной последовательностью в плазме с помощью антитела, где Thr90 полипептида является фосфорилированным. Также описаны диагностические наборы для определения наличия метастазов опухоли, для скрининга наличия опухоли среди популяции высокого риска, для определения прогноза для пациента, для определения эффективности хирургического вмешательства, радиационной терапии или химиотерапии в отношении пациента, имеющего опухоль, и/или определения того, когда лечение должно быть прекращено. Диагностические наборы включают полипептид с приведенной в материалах последовательностью, где Thr90 полипептида является фосфорилированным. 12 н. и 15 з.п. ф-лы, 20 ил., 18 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и оториноларингологии, и может быть использовано для диагностики воспалительных и не воспалительных процессов в глоточной миндалине у детей. Для этого в венозной крови определяют субпопуляции Т-лимфоцитов, несущих маркеры CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+/CD8+, CD3+CD16+CD56+, CD3+HLA-DR+, В-лимфоцитов, естественных киллерных лимфоцитов с маркером CD3-CD16+CD56+, иммуноглобулины классов А, М, G (IgA, IgM, IgG), фагоцитарный индекс (ФИ), фагоцитарное число (ФЧ), циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), определяют в секреции фракции лимфоцитов уровни концентраций интерлейкина-1β (ИЛ-1β) и интерлейкина-4 (ИЛ-4), фактора некроза опухолей-α (ФНО-α) и определяют суммарный воздушный поток (F1 R+L), суммарное сопротивление воздушному потоку (Res R+L). Задают три канонические дискриминантные функции и оценивают нормированные коэффициенты канонических дискриминантных функций для показателей (bji) и константы линейной модели дискриминантной функции (aj0) для пациентов с прогнозируемой гипертрофией глоточной миндалины I, II и III степени: Dj=aj0+bj1x1+bj2x2+…+bjpxp, где D - линейная дискриминантная функция; j - индикатор группы, j=1…, k-1, k - количество групп; xi - дискриминантные переменные; i - индикатор переменной, i=1…, p; р - количество дискриминантных переменных; aj0 - константа дискриминации; bji - коэффициент i-й дискриминантной переменной для j-й группы. Пациента относят к группе, для которой линейная дискриминантная функция принимает максимальное значение. При максимальном показателе линейной дискриминантной функции среди показателей трех линейных дискриминантных функций в пределах 79,495-104,965 диагностируют у пациента гипертрофию глоточной миндалины I степени, что соответствует не воспалительному процессу в глоточной миндалине. При максимальном показателе в пределах 120,222-132,774 диагностируют гипертрофию глоточной миндалины II степени, что соответствует воспалительному процессу. При максимальном показателе D в пределах 135,360-296,243 диагностируют гипертрофию глоточной миндалины III степени, что соответствует воспалительному процессу в глоточной миндалине с признаками обострения хронического аденоидита. В промежуточных интервалах 104,965-120,222 и 132,774-135,360 проводят диагностирование воспалительных и не воспалительных процессов в глоточной миндалине у детей через 30-90 суток. 6 ил., 3 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложено гуманизированное антитело и его фрагмент, способные специфически связывать бета-амилоид, охарактеризованные фрагментами последовательностей на основе антитела мыши 8F5, и Fc-областью человеческого IgG1, содержащей аминокислотную замену D265A; а также кодирующая нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, продуцирующие антитело или его фрагмент клетки, способ продуцирования антитела или его фрагмента; композиция, применение антитела и его фрагмента для изготовления лекарственного средства, способ предупреждения, лечения или облегчения эффектов амилоидоза; способ диагностики амилоид-ассоциированных заболеваний или состояний, способ определения степени нагрузки амилоидогенных бляшек и тест-набор для выявления и диагностики амилоид-ассоциированных бляшек. Предложенное антитело обладает способностью специфически связываться с мономерами бета-амилоида и высокомолекулярными полимерами бета-амилоида, что может найти применение в терапии амилоидозов. 12 н. и 17 з.п. ф-лы, 20 ил., 6 табл., 16 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и касается способа прогнозирования риска прерывания беременности в раннем сроке после экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов у пациенток с бесплодием трубно-перитонеального генеза. Способ включает определение в венозной крови абсолютного количества лейкоцитов и лимфоцитов, CD3+-, CD4+-, CD3-CD16,56+-популяций лимфоцитов методом проточной цитометрии, с последующим вычислением прогностического индекса (PI). При PI менее -0,1 делают заключение о благоприятном прогнозе вынашивания беременности после экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов у пациенток с бесплодием трубно-перитонеального генеза, при PI более 0,1 прогнозируют высокий риск прерывания беременности в первом триместре, а при PI более -0,1, но менее 0,1 пациентку относят в группу риска по раннему прерыванию беременности. Предлагаемый способ позволяет определить вероятность сохранения беременности у каждой конкретной пациентки в результате ЭКО и ПЭ. Очевидным преимуществом метода является возможность ранней диагностики угрозы прерывания беременности в раннем сроке. Специфичность предлагаемого способа составляет 83,3% чувствительность - 81,3%. Эффективность способа - 82,3%. 3 пр.

Изобретение относится к области биохимии и медицины, в частности к аналитической химии и иммунохимическому анализу, и описывает способ обработки образца сыворотки или плазмы крови. Способ характеризуется тем, что перед проведением иммуноанализа производят удаление иммуноглобулинов G из образца, в частности, путем взаимодействия образца с сорбентом, специфически связывающим иммуноглобулины G, затем проводят иммунологический анализ аллерген-специфических и общих иммуноглобулинов Е с использованием аллергенов или смесей аллергенов и антител против иммуноглобулинов Е, иммобилизованных в элементах биологического микрочипа, представляющего собой массив трехмерных гидрогелевых элементов, содержащий элементы с ковалентно иммобилизованными аллергенами и антителами против иммуноглобулина Е, при этом элементы массива представляют собой микрокапли, полученные методом полимеризационной иммобилизации. Предложенный способ характеризуется снижением неспецифических сигналов, увеличением соотношения «сигнал/фон», увеличением воспроизводимости измеряемых специфических сигналов и увеличением чувствительности и воспроизводимости при проведении анализа определения общих и аллерген-специфических иммуноглобулинов. Изобретение может использоваться в аналитической биохимии, иммунологии и медицине, в частности при проведении диагностики и мониторинга лечения аллергий. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах у женщин при эстрогендефицитных состояниях. Способ включает забор слюны, определение концентрации в смешанной слюне эстрогенов (гормонов). При этом дополнительно осуществляют индексную оценку изменения состояния органов и тканей полости рта, определяют скорость саливации слюны и ее вязкость, оценивают состояние микроциркуляторного русла слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта методом лазерной допплеровской флоуметрии. Затем по уровню снижения концентрации эстрогенов прогнозируют риск развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах женщин при эстрогендефицитных состояниях. Если концентрации эстрогенов больше 10,7±1,2 пг/мл риск патологических изменений незначительный, при концентрации эстрогенов от 10,7±1,2 пг/мл до 1,95±0,4 пг/мл средний, при концентрации эстрогенов меньше 1,95±0,4 пг/мл - высокий. Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью прогнозировать риск патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах у женщин при различных эстрогендефицитных состояниях, выявить эти изменения на ранней стадии при начальных клинических проявлениях и осуществить соответствующее лечение. 4 з.п. ф-лы, 12 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в нейрохирургии для прогнозирования направленности патологического процесса у пациентов со зрелыми внемозговыми интракраниальными опухолями. Способ прогнозирования развития направленности патологического процесса у больных с опухолями головного мозга включает проведение хирургического лечения по удалению опухоли и последующее лабораторное исследование, при этом на 5-е сутки после проведенного хирургического лечения определяют степень радикальности проведенной операции, при этом иммуноферментным методом в плазме крови до операции и на 5-е сутки после оперативного лечения определяют уровень нейротрофического фактора мозга (BDNF) и при повышении уровня BDNF после оперативного лечения от 2260 пг/мл и выше по сравнению с исходным определяют субтотальное удаление опухоли и прогнозируют неблагоприятную патологическую направленность процесса, при уровне BDNF ниже 2259 пг/мл определяют тотальное удаление новообразования и прогнозируют благоприятную направленность процесса. Предлагаемый способ позволяет своевременно определить радикальность выполненного хирургического лечения и получить прогноз о направленности развития патологического процесса, своевременно скорректировать тактику ведения больного в послеоперационном периоде и принять адекватные меры для разработки патогенетической терапии с целью предотвращения развития продолженного роста опухоли мозга, а также помогает повысить точность и специфичность данного прогноза. 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для прогноза неблагоприятных исходов псевдотуберкулезной (ПСТ) инфекции у детей. Для этого определяют в остром периоде псевдотуберкулезной инфекции концентрацию IgA и CD38+ у детей и сравнивают с иммунологическими показателями у детей, перенесших ПСТ инфекцию, которая закончилась полным выздоровлением без формирования неблагоприятных последствий в период длительного диспансерного наблюдения (контрольная группа). При повышении количества CD38+ до 54,07±0,60% и отсутствии статистически достоверных изменений в показателях IgA в остром периоде ПСТ инфекции по сравнению с контрольной группой детей прогнозируют возникновение желудочно-кишечных заболеваний. При повышении концентрации CD38+ до 53,89±1,79% и снижении количества IgA до 142,58±20,14 мг/мл в остром периоде ПСТ инфекции прогнозируют в период диспансерного наблюдения развитие аллергического синдрома. Использование данного способа позволяет по изменению показателей в остром периоде заболевания судить о развитии патологического процесса в период диспансерного наблюдения за детьми. 3 пр., 1 табл.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования ишемически-геморрагических церебральных осложнений у новорожденных. Сущность способа состоит в том, что в пуповинной крови определяют уровни 6-keto-простагландина F1α (6-KetoPGF-1α) и тромбоксана В2 (ТХВ2) и рассчитывают их соотношение К=6-KetoPGF-1α/TXB2. При значении коэффициента К равном 0,04 и менее прогнозируют возникновение ишемически-геморрагических церебральных осложнений. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность прогнозирования ишемически-геморрагических церебральных осложнений у новорожденных из группы высокого перинатального риска. 2 пр.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики этиологии рецидивирующих острых ринофарингитов и аденоидитов у детей раннего и дошкольного возраста, включающий определение в назальном секрете провоспалительных и проаллергических интерлейкинов, а именно интерлейкина-1-бэта (IL-1beta), интерлейкина-4 (IL-4), рецепторного антагониста интерлейкина-1 (IL-1RA), интерферона-альфа (INF-alpha) и фактора некроза опухоли - альфа (TNF-alpha), отличающийся тем, что увеличение содержания INF-alpha, TNF-alpha и IL-1beta более чем в 2 раза по отношению к нормальным значениям является диагностическим критерием вирусной этиологии рецидивирующих острых ринофарингитов и аденоидитов, а увеличение содержания IL-4 выше 26 нг/мл и IL-1RA выше 1000 нг/мл является диагностическим критерием для инфекционно-аллергической этиологии рецидивирующих острых ринофарингитов и аденоидитов. Осуществление изобретения обеспечивает повышение эффективности диагностики. 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 табл., 2 пр.
Наверх