Способ очистки гозерелина


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2578414:

Михайлов Олег Ростиславович (RU)

Изобретение относится к медицине и касается способа очистки гозерелина, включающего растворение гозерелина-сырца в водном растворе уксусной кислоты, фильтрование полученного раствора и последующую трехстадийную хроматографическую очистку: жидкостную хроматографию низкого давления на колонне с полистиролдивинилбензольным сорбентом, ионообменную хроматографию низкого давления и ВЭЖХ. Изобретение обеспечивает получение высокоочищенного целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 ил.

 

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и медицины.

Гозерелин Goserelin-6-[0-(1,1-Диметилэтил)-D-серин]-10-деглицинамидорилизинг фактора лютеинизирующего гормона (свиного) 2-(аминокарбонил)гидразид.

Гозерелин является синтетическим аналогом природного ЛГРГ (гонадотропин-рилизинг гормона). При постоянном применении препарат ингибирует (подавляет) выделение гипофизом лютеинизирующего (вызывающего образование желтого тела в яичнике) гормона, что ведет к снижению концентраций тестостерона (мужского полового гормона) в сыворотке крови у мужчин и концентраций эстрадиола (женского полового гормона) в сыворотке крови у женщин. В начальной стадии курса лечения гозерелин, подобно другим агонистам лютеинизирующего гормона, может вызвать временное увеличение концентрации тестостерона в сыворотке крови у мужчин и эстрадиола - у женщин. У мужчин примерно к 21 дню после первой инъекции концентрации тестостерона снижаются до кастрационных уровней (уровень гормона, который наблюдается у пациентов с удаленными половыми железами) и продолжаются оставаться сниженными при постоянном лечении, проводимом каждые 28 дней. У большинства больных при этом наблюдается регресс (обратное развитие) опухоли предстательной железы и симптоматическое улучшение (улучшение состояния). У женщин концентрации эстрадиола в сыворотке крови снижаются также примерно к 21 дню после первой инъекции и при постоянном лечении, проводимом каждые 28 дней, остаются сниженными до уровней, сопоставимых с теми, которые наблюдаются у женщин в постклимактерическом периоде. Этот эффект связан с положительной ответной реакцией гормонально зависимых форм рака, молочной железы, эндометриоза (появившихся в различных органах участков ткани, сходных по строению с внутренней оболочкой матки, и подвергающихся циклическим изменениям соответственно менструальному циклу) и фибром (доброкачественных опухолей, развивающихся из соединительной ткани) матки. При лечении эндометриоза гозерелин уменьшает выраженность симптомов, включая боль, и уменьшает размеры и количество эндометриальных поражений. При лечении фибром гозерелин, используемый в качестве вспомогательного средства при оперативных вмешательствах, сокращает области поражения, уменьшает кровопотери при операции, улучшает гематологический статус (показатели состояния крови) больных. Гозерелин обладает почти полной биологической доступностью. Введение препарата депо каждые 4 недели обеспечивает поддержание эффективных концентраций. Кумуляции (накопления) в тканях при этом не происходит. Период полувыведения из сыворотки крови составляет 2-4 ч.

Показания к применению:

Лечение рака предстательной железы, чувствительного к гормональному воздействию; лечение чувствительного к гормональному воздействию рака молочной железы у женщин в предклимактерическом и климактерическом периодах; эндометриоз; фибромы матки (в качестве вспомогательного средства в комплексе с хирургическим лечением).

Для применения в медицине и для медико-биологических исследований необходимы гомогенные высокоочищенные препараты. Поэтому исследователи в данной области большое внимание уделяют разработке новых эффективных способов очистки гормональных препаратов.

Патент на получение субстанции US 5510460 (А) описывает способ твердофазного синтеза пептидов, содержащих аза-аминокислоты, например декапептида гозерелина, который включает: (I) сборку всех аминокислот пептида, кроме С-концевой аза-аминокислоты синтеза традиционной твердой фазы; (II) расщепление пептида с подложки с гидразином или замещенным гидразином; и (III) взаимодействие гидразида. Гозерелин очищают методом хроматографии на колонке Dynamax 60 с градиентным элюированием раствором ацетонитрила в воде.

CN 102690329 А, опубл. 2012.09.26, касается способа очистки гозерелина, который включает следующие этапы: выполнение градиентного элюирования на хроматографической колонке, затем преобразование гозерелин трифторацетата в ацетат с помощью анионообменных смол. Процесс подходит для крупномасштабных методов очистки гозерелина в промышленности.

В решении согласно ЕР 2119724 А1 сырой продукт очищают хроматографией на колонке с Сефадексом G-25 (выпускаемого фирмой Pharmacia Упсала, Швеция), окончательный пептид очищали ионообменной хроматографией.

В качестве ближайшего аналога может быть указан CN 102863517А, опубл. 2013.01.09, который раскрывает метод очистки гозерелина в том числе по этапам: 1) растворение неочищенного пептида в водном растворе уксусной кислоты в объемном соотношении 5%-20% и метанола в объемном соотношении 15%-40% в зависимости от концентрации 50 г/л -100 г/л; 2) использование октадецилсилан химически связанного силикагеля в качестве неподвижной фазы; 3) преобразование не-ацетатного гозерелина в ацетат обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией.

Задачей настоящего изобретения является разработка нового эффективного способа очистки гозерелина.

Задача решается способом очистки гозерелина, который включает растворение гозерелина-сырца в водном растворе уксусной кислоты, фильтрование полученного раствора и последующую трехстадийную хроматографическую очистку.

На первой стадии раствор сырца пропускают через гидрофобный сорбент. Наносят раствор трипторелина-сырца на колонну из расчета 20-70 г гозерелина-сырца на 1 л упакованного сорбента. Элюируют водным раствором изопропилового спирта с уксусной кислотой. Проводят градиентное элюирование. Линейный градиент от 1-5% ИПС+0,3-2% УК до 8-15% ИПС+0,5-2% УК за 2,5 объема колонки, затем изократическое элюирование раствором, содержащим 8-15% ИПС+0,6% УК.

На второй стадии полученный раствор элюата подвергают очистке с помощью ионообменной хроматографии. Наносят раствор после первой стадии очистки на колонну из расчета 20-30 г гозерелина на 1 л упакованного сорбента. Элюируют водным раствором ацетата аммония. Концентрация ацетата аммония до 0,4М. Концентрация уксусной кислоты - 0,6%. Предпочтительно элюирование включает изократическое элюирование 0,1-0,3 М раствором ацетата аммония за 8 объемов колонны, затем линейный градиент от 0,2М до 0,3 М ацетатом аммония за 8 объемов колонки, затем изократическое элюирование 0,3 М ацетатом аммония.

На третьей стадии полученные фракции подвергают высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенно-фазовом сорбенте. Наносят раствор трипторелина на колонну из расчета 4-12 г гозерелина на 1 л упакованного сорбента. Элюируют водным раствором ацетонитрила с уксусной кислотой. Концентрация ацетонитрила 2-25%. Концентрация уксусной кислоты - 0,2-2%.. Фракции с содержанием гозерелина более 97,5% объединяют. Полученный раствор концентрируют в вакууме в 2 раза и проводят процедуру концентрирования на обращенно-фазовом сорбенте, элюируют водным раствором изопропилового спирта с уксусной кислотой. Полученный раствор упаривают на ротационном испарителе и лиофилизуют.

Блок-схема хроматографической очистки гозерелина

1. Взвешивание и ВЭЖХ-анализ гозерелина-сырца.

2. Растворение сырца.

3. Фильтрование.

4. Жидкостная хроматография низкого давления (ЖХ НД) на колонне с полистиролдивинилбензольным сорбентом марки LPS-500 (75-150 мкм).

5. Ионообменная хроматография низкого давления (ИОХ НД) на колонне с ионообменным сорбентом СПС-био-SP сульфопропил.

6. ВЭЖХ на колонке со сферическим силикагелем С18 Grace Vydac Denali.

7. Упаривание и лиофильная сушка.

Объектом настоящего изобретения является способ очистки гозерелина, включающий растворение гозерелина в водном растворе уксусной кислоты, фильтрование полученного раствора и последующую хроматографическую очистку, отличающийся тем, что для растворения используют 0,6% раствор уксусной кислоты (УК), добавляют к фильтрату изопропиловый спирт (ИПС) до концентрации 2%, затем перемешивают полученный раствор, хроматографическая очистка включает три стадии, где на первой стадии проводят жидкостную хроматографию низкого давления на колонне с полистиролдивинилбензольным сорбентом марки LPS-500 с размером 75-150 мкм, используя градиентное элюирование водным раствором, содержащим изопропиловый спирт и уксусную кислоту с линейным градиентом концентрации от 5% ИПС+0,6% УК до 10% ИПС+0,6% УК, затем изократическое элюирование водным раствором, содержащим 10% ИПС и 0,6% УК, на второй стадии полученный раствор элюата подвергают очистке методом ионообменной хроматографии на колонне, упакованной катионообменным сорбентом СПС-био-SP сульфопропил с размером частиц 70 мкм, с использованием в качестве элюирующего раствора водного раствора ацетата аммония с концентрацией ацетата аммония до 0,4М, на третьей стадии полученные фракции подвергают высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонне с обращенно-фазовом сорбентом - сферическим силикагелем Grace Vydac Denali с размером 10 мкм, с использованием в качестве элюирующего раствора водного раствора ацетонитрила с уксусной кислотой с концентрацией ацетонитрила 3,0-13% и уксусной кислоты - 0,25%, полученный раствор концентрируют в вакууме в 2 раза и проводят процедуру концентрирования на обращенно-фазовом сорбенте, элюируют водным раствором изопропилового спирта с уксусной кислотой, упаривают и лиофилизуют.

Сырец гозерелина представляет собой сухой порошка желтого цвета. Содержание гозерелина в сырце до 60% в сухом веществе.

Полученный сырец гозерелина анализируют с помощью ВЭЖХ (фиг. 1).

Пример хроматографической очистки гозерелина.

260 г сырца гозерелина растворяют в 4 л 0,6% водного раствора уксусной кислоты (УК), перемешивают 2 часа. При необходимости добавляют уксусную кислоту до рН=4-5.

Полученный раствор фильтруют через стеклянный фильтр пор. 3 с целлюлозным фильтром.

Если отфильтровать через стеклянный фильтр не удается, то проводят осветление раствора на установке проточной ультрафильтрации «Pellicon» с мембранами 100 кДа.

Уравновешивают колонну с сорбентом LPS-500 (сополимер стирола с дивинилбензолом марки LPS-500, диаметр колонны 150 мм, высота слоя сорбента 480 мм, диаметр частиц 75-150 мкм), прокачивая 20 л водного раствора, содержащего 1-5% изопропилового спирта (ИПС)+0,5-2% уксусной кислоты.

Добавляют к раствору гозерелина-сырца изопропиловый спирт до концентрации 2%, затем перемешивают полученный раствор.

Раствор 260 г сырца гозерелина в 4 л раствора, содержащего 0,6% УК + 2% ИПС, содержащий 150 г гозерелина, наносят на колонну. Расход при нанесении 300 мл/мин.

Проводят градиентное элюирование. Линейный градиент от 5% ИПС+0,6% УК до 10% ИПС+0,6% УК за 2,5 объема колонки, затем изократическое элюирование раствором, содержащим 10% ИПС+0,6% УК. Расход подвижной фазы - 400 мл/мин. УФ-детектирование при 254 нм.

Собранные фракции анализируют с помощью ВЭЖХ. Фракции с чистотой по хроматограмме выше 70% объединяют. Выход по целевому продукту на стадии предварительной очистки составляет 94%.

Объединенные фракции после предварительной очистки на LPS-500 подвергают очистке с помощью ионообменной хроматографии на колонне, упакованной катионообменным сорбентом СПС-био-SP сульфопропил (размер частиц 70 мкм, диаметр колонны 150 мм, высота слоя сорбента 300 мм).

Уравновешивают колонну с СПС-био-SP сульфопропил (SPS-bio), прокачивая 20 л до стабилизации базовой линии «0,6% УК».

Раствор, полученный после предварительной очистки на LPS-500, содержащий 140 г гозерелина в 32 л, наносят на колонну с SPS-bio. Расход при нанесении 250 мл/мин.

Проводят элюирование следующим образом: изократическое элюирование 0,2 М раствором ацетата аммония за 8 объемов колонны, затем линейный градиент от 0,2 М до 0,3 М ацетатом аммония за 8 объемов колонки, затем изократическое элюирование 0,3 М ацетатом аммония. Расход подвижной фазы 300 мл/мин. УФ-детектирование при 254 нм.

Собранные фракции анализируют с помощью ВЭЖХ. Фракции с чистотой по хроматограмме выше 80% объединяют. Выход по целевому продукту на стадии ионообменной хроматографии составляет 85%.

Фракции после очистки на SPS-bio подвергают ВЭЖХ на колонне аксиального сжатия диаметром 101 мм и высотой слоя сорбента 300 мм, заполненную обращено-фазовым сорбентом Grace Vydac Denali 10 мкм 100А.

К объединенному раствору после SPS-bio добавляют ацетонитрил (ACN) до концентрации 3% об./об (v/v) и УК в таком количестве, чтобы pH раствора был ниже 5, перемешивают с одновременным барботированием гелием в течение 15 мин.

Уравновешивают колонну водным раствором, содержащим 3% ACN и 0,25%) УК до стабилизации базовой линии.

Вводят в колонку 5 л раствора после SPS-bio, содержащего 10 г гозерелина.

Проводят изократическое элюирование водным раствором, содержащим 13% ACN + 0,25% УК, регенерируют колонну, промывая ее водным раствором, содержащим 50% ACN + 0,25% УК, и уравновешивают водным раствором, содержащим 3% ACN и 0,25% УК перед последующим нанесением. Расход подвижной фазы - 300 мл/мин. УФ-детектирование при 254 нм. Собранные фракции анализируют с помощью ВЭЖХ. Фракции с чистотой по хроматограмме выше 97,5% объединяют. Выход по целевому продукту на стадии ВЭЖХ составляет 90%.

Полученный раствор концентрируют в вакууме в 2 раза и проводят процедуру концентрирования на обращенно-фазовом сорбенте, элюируют водным раствором, содержащим 25% ACN + 0,25% УК.

Целевые фракции после ВЭЖХ упаривают на вакуумном испарителе Buchi Rotavapor R220 при температуре бани не выше 40°С до концентрации примерно 100-200 г/л и лиофилизуют.

Получают 105,4 г высушенного гозерелина.

Степень очистки более 99,5%.

1. Способ очистки гозерелина, включающий растворение гозерелина в водном растворе уксусной кислоты, фильтрование полученного раствора и последующую хроматографическую очистку, отличающийся тем, что для растворения используют 0,3-2% раствор уксусной кислоты (УК), добавляют к фильтрату изопропиловый спирт (ИПС) до концентрации 1-5%, затем перемешивают полученный раствор, хроматографическая очистка включает три стадии, где на первой стадии проводят жидкостную хроматографию низкого давления на колонне с полистиролдивинилбензольным сорбентом марки LPS-500 с размером 75-150 мкм, используя градиентное элюирование водным раствором, содержащим изопропиловый спирт и уксусную кислоту с линейным градиентом концентрации от 1-5% ИПС+0,6% УК до 8-15% ИПС+0,5-2% УК, затем изократическое элюирование водным раствором, содержащим 8-15% ИПС и 0,5-2% УК, на второй стадии полученный раствор элюата подвергают очистке методом ионообменной хроматографии на колонне, упакованной катионообменным сорбентом СПС-био-SP сульфопропил с размером частиц 70 мкм, с использованием в качестве элюирующего раствора водного раствора ацетата аммония с концентрацией ацетата аммония до 0,4 М, на третьей стадии полученные фракции подвергают высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонне с обращенно-фазовом сорбентом - сферическим силикагелем Grace Vydac Denali с размером 10 мкм, с использованием в качестве элюирующего раствора водного раствора ацетонитрила с уксусной кислотой с концентрацией ацетонитрила 3,0-13% и уксусной кислоты - 0,2-2%, полученный раствор концентрируют в вакууме в 2 раза и проводят процедуру концентрирования на обращенно-фазовом сорбенте, элюируют водным раствором изопропилового спирта с уксусной кислотой, упаривают и лиофилизуют.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что на стадии очистки методом ионообменной хроматографии проводят элюирование, включающее изократическое элюирование 0,2 М раствором ацетата аммония за 8 объемов колонны, затем линейный градиент от 0,2 М до 0,3 М ацетатом аммония за 8 объемов колонки, затем изократическое элюирование 0,3 М ацетатом аммония.



 

Похожие патенты:

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования у пациента с влажной возрастной дегенерацией желтого пятна (AMD) повышенной вероятности эффекта от лечения высокоаффинным антителом против VEGF, в частности, ранибизумабом.

Изобретение относится к области клинико-лабораторной диагностики и предназначено для прогнозирования вероятности получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с использованием молекулярно-генетических маркеров.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики дисбиотических нарушений в биоптатах слизистых носа и глотки у детей раннего и дошкольного возраста с постоянно рецидивирующими острыми респираторными инфекциями.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины. Предложен набор с лиофилизированными праймерами, содержащий готовые к амплификации реакционные пробирки с лиофилизированными праймерами и праймерами-зондами для экзонов RHD-5 и RHD-7 гена RHD.

Изобретение относится к области онкологии и касается комплекса, включающего сочетания полиинозинполицитидиловой кислоты (pIC) и полиэтиленимина (PEI), и его применения в качестве средства для лечения рака, в частности меланомы.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу неинвазивной диагностики развития тубулоинтерстициального фиброза (ТИФ) у пациентов с фокально-сегментарным гломерулосклерозом (ФСГС).
Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии. Изобретение представляет cпособ диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза у больных с хронической ишемической болезнью сердца, включающий анализ образца для определения содержания интерлейкин-10-продуцирующих T-лимфоцитов, отличающийся тем, что из периферической венозной крови выделяют мононуклеарную фракцию клеток с последующей активацией клеток в культуре, фенотипированием лимфоцитов с использованием моноклональных антител к CD4 и интерлейкину-10 (ИЛ-10), меченных флуоресцентными метками, и цитофлуориметрией в потоке, при этом содержание ИЛ-10-продуцирующих T-лимфоцитов (CD4+ИЛ-10+ клеток), выраженное в процентном (%) отношении от CD4+ лимфоцитов, менее 3,5% свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ мониторинга экспрессии представляющего интерес гена полипептида CADM1, Rb, ZMYND10, RASSF5, PTEN, SERPINB5, EPB41L3 или DAPK1 для определения терапевтического эффекта соединения при лечении заболевания, связанного с экспрессией указанного представляющего интерес гена полипептида.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики возможности заражения новорожденных вирусными гепатитами В и С у беременных женщин, больных этой инфекцией или носителей вирусов.
Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к способу культивирования одиночной В-клетки, которая получена из популяции В-клеток экспериментального животного.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа получения удлиненного имплантата, где соотношение диаметра к длине по оси имплантата составляет между 1:20 и 1:40, для контролируемого и замедленного высвобождения аналога GnRH ацетата трипторелина.

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и может быть использовано как эффективное средство адресной доставки комплексов ДНК с молекулярными конъюгатами в определенные органы и ткани млекопитающих.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкоурологии, и может быть использовано для выбора тактики лечения местно-распространённого рака предстательной железы.

Группа изобретений касается композиции, содержащей терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, одного пептида, полипептида, белка, их аналога или производного и достаточное количество, по меньшей мере, одного стабилизирующего агента, и способа получения такой композиции.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии. Для лечения метастатической стадии рака предстательной железы у субъекта, имеющего исходный уровень сывороточной щелочной фосфатазы (S-ALP) приблизительно 150 МЕ/л (Международных единиц/л) или больше (до лечения), указанному субъекту вводят дегареликс (degarelix) в начальной дозе от 160 до 320 мг и затем вводят указанному субъекту дегареликс в поддерживающей дозе от 60 до 160 мг один раз в каждые 20-36 суток.

Группа изобретений относится к медицине, в частности к онкологии. Для лечения у субъекта рака предстательной железы осуществляют введение указанному субъекту дегареликса в начальной дозе от 160 до 320 мг и затем в поддерживающей дозе от 60 до 160 мг один раз в каждые 20-36 суток.

Изобретение относится к области медицины и фармакологии и представляет собой монолитный имплант, содержащий (i) аналог рилизинг-фактора лютеинизирующего гормона (=LH-RH аналог) или его фармацевтически приемлемую соль в количестве менее 25% от общего веса композиции, (ii) гомогенный полимер полилактид, устойчивый к деградации, вызванной гамма-облучением и/или температурным воздействием, где устойчивый к деградации полимер полилактида демонстрирует степень разложения менее чем на 1000 Дальтон относительно среднего молекулярного веса полимера, после гамма-облучения дозой от 25 до 40 кГр ионизирующей гамма-радиации и/или где устойчивый к деградации полимер полилактида демонстрирует степень разложения менее чем на 1000 Дальтон относительно среднего молекулярного веса полимера, после температурного воздействия, при температуре около 30°C в течение периода не менее 24 месяцев, где полимер полилактид, устойчивый к деградации, имеет средний молекулярный вес от 4800 до 8600 Дальтон.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для профилактики гормонорезистентности при гиперплазии эндометрия. .
Изобретение относится к фармацевтической области и касается композиции с замедленным высвобождением, не содержащей желатин, содержащей полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее или его соль и физиологически активное вещество, где полимер молочной и гликолевой кислот имеет среднюю молекулярную массу от 8000 до 15000 и молярное отношение молочной кислоты к гликолевой кислоте составляет от 70:30 до 80:20 и физиологически активное вещество представляет собой пептид формулы 5-оксо-Pro-His-Тrp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Рro-NН-С 2Н5 или его ацетат.
Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической промышленности, и касается твердой композиции пролонгированного действия для парентерального введения, содержащей имплантат для парентерального введения, содержащий ацетат трипторелина и один или несколько эксципиентов, содержащих полимер или сополимер молочной кислоты и/или гликолевой кислоты, или смесь сополимеров, при этом указанный имплантат содержит от 35 до 55 мас.% ацетата трипторелина при расчете на общую массу имплантата и его получают по способу, включающему плавление смеси ацетата трипторелина и эксципиента или эксципиентов во время плавления-экструдирования ацетата трипторелина совместно с эксципиентом или эксципиентами, где смесь ацетата трипторелина и полимерного или сополимерного эксципиента или эксципиентов высушивают перед плавлением-экструдированием таким образом, что уровень содержания воды в ней не превышает 8 мас.%, при этом указанный имплантат обеспечивает высвобождение ацетата трипторелина в течение, по меньшей мере, одной недели после введения имплантата пациенту парентеральным способом.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и медицины. Способ очистки трипторелина, заключающийся в том, что растворяют трипторелин в 0,6% водном растворе уксусной кислоты, фильтруют методом ультрафильтрации, к раствору добавляют изопропиловый спирт до концентрации 2% по объему и перемешивают, проводят жидкостную хроматографию низкого давления на колонке с сферическим полистиролом, сшитым дивинилбензолом типа LPS-500, используя градиентное элюирование водным раствором изопропилового спирта (ИПС) и уксусной кислоты (УК), затем полученный раствор полупродукта подвергают ионообменной хроматографии на колонне с сульфоэтильными группами на сшитом полиакрилате марки типа СПС-Био SP Сульфопропил (SPS-bio) с размером частиц 75 мкм, используя градиентное элюирование, проводят высокоэффективную жидкостную хроматографию на колонке с обращенно-фазным сорбентом на основе силикагеля с частицами сферической формы и размером 5 мкм типа Kromasil С18, используя в качестве элюента водный раствор, содержащий 5% ИПС и 0,25% УК, полученные фракции очищенного продукта с содержанием трипторелина более 98% подвергают концентрированию на гидрофобном сорбенте с последующим элюированием раствором, содержащим смесь изопропилового спирта и уксусной кислоты, упариванием элюата и его лиофильным высушиванием. Техническим результатом является высокий выход и чистота субстанции, которая имеет высокую биодоступность и может использоваться для получения медицинских препаратов.
Наверх