Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей



Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей
Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей
Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей
Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей
Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей

 


Владельцы патента RU 2602298:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" (ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова) (RU)

Изобретение относится к медицинской иммунологии и микробиологии, а именно к лабораторной диагностике и предназначено для определения совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах слюны, мочи, вагинального и кожного секретов. Для этого образцы термостатируют в течение 2 часов с суспензией клеток Candida albicans определенной оптической плотности с последующим центрифугированием и добавлением бромкрезолового пурпурного для окрашивания убитых клеток. Полученный осадок микроскопируют, фотографируют, переносят данные в компьютер и подсчитывают число убитых клеток по формуле: процент убитых клеток = (число мертвых клеток в образце/число мертвых клеток +число живых клеток в образце)×100 - (число мертвых клеток в образце/число мертвых клеток + число живых клеток в контроле)×100. Процент убитых клеток отражает совокупную активность АМП. Изобретение обеспечивает возможность определения совокупную активность АМП как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей и количественно оценить способность различных локусов противостоять инфекционным агентам. 2 з.п. ф-лы, 4 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии. Изобретение предназначено для определения совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах слюны, мочи, вагинального и кожного секрета посредством действия данных образцов на тест-культуру микроорганизмов и измерения числа убитых клеток в присутствии контроля. Данный подход позволяет установить уровень эндогенной иммунной защиты локуса и усовершенствовать тактику лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, а именно решить вопрос о необходимости проведения иммунокоррекции.

Инфекционно-воспалительные заболевания эпителиальных тканей обусловлены в большой степени снижением местного иммунитета, поэтому в данном случае анализ показателей, характеризующих общий иммунный статус организма, как правило, свидетельствует о норме. Традиционно для постановки диагноза и выработки тактики лечения клиницист руководствуется данными микробиологических исследований - выявлением возбудителя и in vitro подбором лекарственного препарата. Анализ данных литературы показывает, что уровень местных иммуноглобулинов отражает лишь небольшую часть из используемых организмом факторов защиты. Но даже при таком арсенале средств врач имеет мало информации о состоянии местного иммунитета пациента. Таким средством могут стать данные об уровне антимикробной защиты локуса, а именно о совокупной активности АМП - семейства катионных белков, призванных защищать эпителиальные ткани различной локализации. Со времени их открытия (около 15 лет назад) и до сих пор исследования в этой области касаются лишь фундаментального изучения их роли в патогенезе различных заболеваний, но не применения их свойств в клинической практике. При всем разнообразии АМП по аминокислотной последовательности, вторичной структуре и механизму действия на клетки микробов, результатом их воздействия является деструкция клеточных мембран. В каждом локусе секретируется целый спектр АМП, а результат их действия (зачастую синергичный) выражается в способности локуса противостоять инфекционным агентам. Именно поэтому для клинической диагностики более точным является анализ не количеств индивидуальных пептидов как таковых, а их совокупной активности.

Решением проблемы диагностики местного иммунитета является применение способа определения совокупной активности АМП, состоящего из следующих этапов:

- получение эпителиального секрета и его подготовка;

- подготовка тест-культуры клеток Candida albicans;

- соединение пробы эпителиального секрета с суспензией клеток С. albicans и инкубация смеси;

- окрашивание клеток в инкубированной смеси и подсчет процента убитых клеток по сравнению с контролем.

Известны научные публикации, в которых описано применение подобных методов для выявления активности АМП в образцах секрета различных типов эпителия. Например, известна работа в отношении водорастворимой фракции кожного секрета [J. Immunol., 2005; 174:8003-8010; J. Investigative Dermatology (2006) 126, 354-365]. Для этого метода характерно использование собственных бактерий, населяющих кожу пациента; использование более сложного и трудоемкого способа сбора секрета применением велоэргометра, использование определения активности единичного пептида - дермцидина, для которого применяется длительный и трудоемкий метод посевов. Известна работа в отношении слюны [Infection and immunity, 2003, p. 3251-3260, Vol. 71, No. 6; Antimicrobial agents and chemotherapy, 2005, p. 3883-3888 Vol. 49, No. 9]. В этом методе анализируют активность единичного пептида - гистатина; осуществляют использование количественного анализа дефензинов и кателицидина; для определения данных пептидов используется длительный и трудоемкий метод посевов. Известна работа в отношении урины [J. Biol. Chem., 2001, 16; 276(11):7806-10.; PLoS ONE 9(12): е114185. doi: 10.1371 / journal. pone. 0114185; Nienhouse, Vanessa, "Urinary Antimicrobial Peptides and the Urinary Microbiota in a UTI-Susceptible Population of Female Pelvic Floor Surgery Patients" (2012). Master′s Theses. Paper 727]. Методика характерна определением активности единичных пептидов, для чего используется длительный и трудоемкий метод посевов.

Наиболее близким аналогом является методика в отношении вагинального секрета [Am J Obstet Gynecol 2002; 187:561-8; Акушерство и гинекология - 2008. - №6. - С. 23-26.; A Search for Antibacterial Agents, - 2012, ISBN: 978-953-51-0724-8 Chapter 8. P. 125-146. DOI:

10.5772/34277].

В указанном прототипе смесь готовят следующим образом. В качестве образца осуществляют сбор вагинального секрета, затем образец освобождают от эпителиоцитов и бактерий путем фильтрации и/или центрифугирования, а затем аликвоту данного образца соединяют в определенном соотношении с заранее подготовленной суспензией клеток экспоненциальной культуры Candida albicans определенной оптической плотности. Недостатком прототипа является наличие стадии лиофильного высушивания после смыва с тампона. Также для определения совокупной активности АМП используется длительный и трудоемкий метод посевов.

Задачей изобретения является способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей, позволяющий за короткое время количественно оценить способность различных локусов противостоять инфекционным агентам.

Техническим результатом изобретения является возможность определить совокупную активность антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей, а также за короткое время количественно оценить способность различных локусов противостоять инфекционным агентам. К техническому результату заявленного способа также относятся:

- применение стандартной тест-культуры С. albicans;

- использование более быстрого и менее трудоемкого способа сбора секрета;

- использование определения совокупной активности АМПвместо активности какого-либо единичного пептида или количественного анализа нескольких;

- для определения совокупной активности АМП используется метод окрашивания клеток тест-культуры С.albicans вместо более длительного и трудоемкого метода посевов;

- отсутствие стадии лиофильного высушивания после смыва с тампона.

Указанные задача и технический результат решаются тем, что в способе определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей, заключающемся в том, что в качестве образца осуществляют сбор секрета эпителиальной ткани в виде слюны, либо мочи, либо вагинального секрета или осуществляют сбор водорастворимой фракции кожного секрета, затем образец освобождают от эпителиоцитов и бактерий путем фильтрации и/или центрифугирования, а затем аликвоту данного образца соединяют с заранее подготовленной суспензией клеток экспоненциальной культуры Candida albicans определенной оптической плотности, в таком соотношении, чтобы максимальная активность для образцов данного типа не превышала 95%, согласно изобретению приготовленную вышеуказанным способом смесь инкубируют в термостате 2 часа, центрифугируют и к полученному осадку добавляют раствор бромкрезолового пурпурного для окрашивания убитых клеток, затем вновь термостатируют и центрифугируют, а полученный осадок микроскопируют, фотографируют на цифровую камеру и после переноса полученного цифрового изображения в компьютер подсчитывают убитые клетки и рассчитывают совокупную активность АМП по формуле: % убитых клеток = (число мертвых клеток в образце/число мертвых клеток + число живых клеток в образце) × 100 - (число мертвых клеток в образце/число мертвых клеток + число живых клеток в контроле) × 100.

Предпочтительно полученный осадок микроскопируют при суммарном увеличении микроскопа не менее 1750×.

Предпочтительно подбор соотношений между объемами образца эпителиального секрета и суспензии клеток дрожжей Candida albicans осуществляют эмпирическим путем так, чтобы максимальная активность для образцов данного типа не превышала 95%. Практический пример такого подбора представлен в Таблице 1.

Осуществление изобретения

Способ был реализован для разных типов эпителия. Ниже показаны апробированные примеры реализации способа.

Пример 1. Водорастворимая фракция кожного секрета: на участок спины человека, не принимавшего душ и не наносившего на кожу никаких препаратов за 12 часов до анализа, ставят стеклянное кольцо, плотно прижимают и в него вносят 1,5 мл дистиллированной воды из пластикового шприца без иглы, содержащего 3 мл воды, растирают участок кожи внутри кольца в разных направлениях в течение 10 секунд, после чего воду собирают обратно в шприц без остатка, затем переставляют кольцо на соседний (сухой) участок кожи и вновь повторяют процедуру; таких повторов должно быть всего 4, то есть в сумме должно быть охвачено 4 участка кожи (общая площадь - 500 см2); собранный водный смыв фильтруют через мембранный фильтр "Amicon" с диаметром пор 0,22 мкм для удаления бактерий и эпителиоцитов в пробирку, из которой отбирают 1 мл в пробирку Эппендорфа и соединяют с 15 мкл суспензии клеток Candida albicans, полученной из 1 суточной культуры этих дрожжей, выращенной на среде Сабуро в течение 20 часов при 28 градусах и приготовленной из расчета 1 петля 1 мм, суспендированная в 50 мкл физраствора; после чего приготовленную смесь инкубируют 2 часа при 32 градусах, затем центрифугируют 5 мин со скоростью 10000 об/мин; контролем является 1 мл физраствора, соединенный с 15 мкл упомянутой смеси; затем к полученным осадкам добавляют по 300 мкл 0,2 мМ раствора бромкрезолового пурпурного, приготовленного на 0,1 М фосфатном буфере рН 4,6, и инкубируют 45 мин при 32 градусах, после чего пробирки вновь центрифугируют в том же режиме и полученные осадки микроскопируют при суммарном увеличении × 1750, фотографируют на цифровую камеру путем совмещения объектива камеры с окуляром микроскопа и, перенеся цифровое изображение в компьютер, подсчитывают клетки так, чтобы в конечном счете оказалось 400-500 клеток на один образец; при этом совокупная активность АМП выражается как процент клеток, убитых за счет АМП, а именно: % убитых клеток = (число желтых клеток в опытном образце/число желтых + число белых в опытном образце) × 100 - (число желтых клеток в контрольном образце /число желтых + число белых в контрольном образце) × 100, учитывая, что белые клетки - живые, а желтые клетки - мертвые.

Из таблицы 2 видно, что в группе больных акне вульгарис антимикробная активность кожи в среднем снижена в 1,6 раза по сравнению с группой контроля.

Пример 2. Слюна: после чистки зубов и языка и многократного полоскания ротовой полости порцию слюны собирают в контейнер, из которого отбирают 1,2 мл слюны в пробирку Эппендорфа, центрифугируют 5 мин со скоростью 10000 об/мин, отбирают 900 мкл супернатанта и соединяют с 50 мкл суспензии клеток Candida albicans, полученной из 1 суточной культуры этих дрожжей, выращенной на среде Сабуро в течение 20 часов при 28 градусах и приготовленной из расчета 1 петля 1 мм, суспендированная в 50 мкл физраствора (далее аналогично примеру 1).

Пример 3. Вагинальный секрет: тампон OBI "normal" ввести во влагалище на 10 минут, затем тампон вынуть и поместить его в новый пластиковый шприц объемом 10 мл, из которого предварительно удален поршень, эту заготовку поместить иглой вниз в отверстие резиновой пробки, вставленной в колбу Бунзена с пробиркой внутри, а отводную трубку колбы подключить к вакуумному насосу. На тампон, находящийся в шприце, нанести 7 мл дистиллированной воды двумя порциями, дать ей впитаться, после чего включить насос и, нажимая на тампон стеклянной палочкой, собрать в пробирку элюат и замерить его объем мерной пробиркой (около 5 мл). Полученный элюат профильтровать через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм (удаление микрофлоры и эпителиоцитов), для чего использовать одноразовый фильтр из нитроцеллюлозы, помещенный в фильтродержатель, который вставлен в ту же колбу Бунзена с новой пробиркой для сбора фильтрата. 800 мкл фильтрата соединить с 50 мкл суспензии тест-культуры (далее см. пример 1).

В исследование были включены 44 женщин с вульвовагинальным кандидозом (BBK), в возрасте от 22 до 35 лет. Для оценки тяжести течения BBK использовали совокупность следующих симптомов: зуд; жжение; характер и количество выделений; боли при мочеиспускании; диспареуния; дерматит перианальной зоны; отечность, гиперемия и эрозивные поражения стенок влагалища. Каждый симптом оценивали по трехбалльной шкале от 0 до 2, где за 0 принимали отсутствие симптома, за 1 - умеренную выраженность, а за 2 - яркую выраженность симптома.

Сравнительный анализ изученных параметров до и после лечения антимикотиками показал, что в результате лечения происходило уменьшение тяжести течения BBK, частоты положительных культуральных тестов на грибковую микрофлору, а также повышение местного противомикробного иммунитета.

Пример 4. Урина. Утреннюю порцию мочи высевали на чашки агаром Эндо, остальное центрифугировали 5 мин при 16000 об/мин и 1 мл супернатанта соединяли с 30 мкл суспензии тест-культуры (далее см. пример 1). Выросшие на чашках культуры были идентифицированы как Escherichia coli.

Из таблицы 5 видно, что отсутствие активности АМП в урине сопровождается появлением оппортунистических микроорганизмов.

1. Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей, заключающийся в том, что в качестве образца осуществляют сбор секрета эпителиальной ткани в виде слюны, либо мочи, либо вагинального секрета или осуществляют сбор водорастворимой фракции кожного секрета, затем образец освобождают от эпителиоцитов и бактерий путем фильтрации и/или центрифугирования, а затем аликвоту данного образца соединяют с заранее подготовленной суспензией клеток экспоненциальной культуры Candida albicans определенной оптической плотности в таком соотношении, чтобы максимальная активность для образцов данного типа не превышала 95%, отличающийся тем, что приготовленную вышеуказанным способом смесь инкубируют в термостате 2 часа, центрифугируют и к полученному осадку добавляют раствор бромкрезолового пурпурного для окрашивания убитых клеток, затем вновь термостатируют и центрифугируют, а полученный осадок микроскопируют, фотографируют на цифровую камеру и после переноса полученного цифрового изображения в компьютер подсчитывают убитые клетки, и рассчитывают совокупную активность АМП по формуле: % убитых клеток = (число мертвых клеток в образце/число мертвых клеток + число живых клеток в образце) × 100 - (число мертвых клеток в образце/число мертвых клеток + число живых клеток в контроле) × 100.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полученный осадок микроскопируют при суммарном увеличении микроскопа не менее 1750×.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что подбор соотношений между объемами образца эпителиального секрета и суспензии клеток дрожжей Candida albicans осуществляют эмпирическим путем так, чтобы максимальная активность для образцов данного типа не превышала 95%.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для определения концентрации глюкозы. Способ определения концентрации глюкозы содержит этапы, на которых прикладывают первое тестовое напряжение между контрольным электродом и вторым рабочим электродом и прикладывают второе тестовое напряжение между контрольным электродом и первым рабочим электродом; измеряют первый тестовый ток, второй тестовый ток, третий тестовый ток и четвертый тестовый ток на втором рабочем электроде после нанесения пробы крови, содержащей аналит, на тест-полоску; измеряют пятый тестовый ток на первом рабочем электроде; отображают концентрацию глюкозы, рассчитанную на основании первого, второго, третьего, четвертого и пятого тестовых токов.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и касается способа прогнозирования эффективности профилактики альбендазолом послеоперационного рецидива цистного эхинококкоза.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики развития эректильной дисфункции, включающий определение уровня тестостерона и эхокардиографическое исследование с анализом структурно-геометрических показателей левых камер сердца, отличающийся тем, что для мужчин в возрасте до 44 лет включительно, страдающих контролируемой гипертонической болезнью II стадии, дополнительно определяют в сыворотке крови уровень общего холестерина и триглицеридов и используют решающее правило: Z=0,04а+0,93b+0,84с-0,34d-8,38, где: а - индекс массы миокарда левого желудочка по данным ЭхоКГ (г/м2), b - общий холестерин в сыворотке крови (ммоль/л), с - триглицериды в сыворотке крови (ммоль/л), d - уровень тестостерона в сыворотке крови (нмоль/л), при Z>0 заключают, что пациент имеет эректильную дисфункцию, при Z<0 заключают, что пациент не имеет эректильную дисфункцию.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для ранней диагностики гибели эмбрионов у коров. На 28-40 дни гестации осуществляют забор венозной крови, в сыворотке которой определяют показатель активности гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ).

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогоноза развития гемморагических форм рожи у больных рожей нижних конечностей. Способ прогноза развития геморрагических форм рожи у больных рожей нижних конечностей (РНК), включающий биохимическое исследование крови, при этом у больных РНК в первые трое суток от появления клинических симптомов заболевания определяют в сыворотке крови уровень лептина, резистина и показателей коагулограммы: АЧТВ и фибриногена; критическим значениям уровней вышеуказанных показателей присваивают баллы: увеличение уровня лептина 51,7 до 57,9 нг/мл соответствует 1 баллу; от 58,0 нг/мл и выше - 2 баллам; повышение уровня резистина до 17,0 нг/мл соответствует 1 баллу, а 17,1-20,0 нг/мл соответствует 2 баллам; повышение параметров коагулограммы: АЧТВ 36 сек и более соответствует 0,5 баллам уровня фибриногена 7 г/л и более соответствует 0, 5 баллам; затем рассчитывают величину суммарного адипокинового коэффициента (Кс), равного сумме баллов для каждого показателя; и при величине Кс, равном 2-2,4 баллов, прогнозируют умеренный риск развития геморрагических форм (ГФ) рожи; при величине Кс, равном 2,5-2,9 баллам, прогнозируют высокий риск развития ГФ рожи; при величине Кс, равном 3,0 и более баллов, прогнозируют очень высокий риск развития ГФ рожи.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики степени тяжести атаки у пациентов с язвенным колитом путем оценки эндоскопической картины заболевания, отличающийся тем, что у больного дополнительно исследуют концентрацию васкулоэндотелиального фактора роста в сыворотке, определяют количество десквамированных эндотелиоцитов в плазме крови, и тяжесть атаки рассчитывают по формуле: TA=0,0121+0,0003ВЭФ+0,0338ДЭЦ+0,7476ЭА.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки состояния печени у больных хроническим вирусным гепатитом С. В цельной крови больного определяют количество тромбоцитов, в сыворотке крови определяют уровень аспартатаминотрансферазы и концентрацию фактора некроза опухоли альфа, рассчитывают по следующей формуле индекс фиброза печени: ИФ=1,52-0,0047*ТР+0,0091*АСТ+0,0429*ФНО-α, и при значении индекса фиброза в интервале от 0 до 0,5 определяют отсутствие фиброза (стадия F0), значение индекса фиброза в интервале от 0,6 до 2,5 соответствует умеренной стадии фиброза (F1-2), значение индекса фиброза более 2,5 соответствует выраженной стадии фиброза печени (F3-4).
Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики механической желтухи опухолевого генеза. В плазме крови больного определяют содержание меди.

Группа изобретений относится к детектированию загрязняющих примесей в биологических образцах. Представлена система для быстрого детектирования присутствия инфекционного агента в биологическом образце, содержащая: a.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования тяжести клинического течения красного плоского лишая слизистой оболочки рта (КПЛ СОР). Сущность способа состоит в том, что в ротовой жидкости определяют концентрацию цинка и меди методом атомно-абсорбционной спектрофотометрии.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для определения угрозы формирования в организме беременной анемии при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Для этого выполняют гистохимическую реакцию в эритроцитах периферической крови на магний с помощью инкубационного раствора, приготовленного из 500 мкл воды, 250 мкл 10% вольфрамата натрия и 250 мкл 0,67N серной кислоты, с последующим отбором 625 мкл его и добавлением капли индикатора метилового красного и 0,2N NaOH до установления желтой окраски с последующим внесением 250 мкл 2% гидроксиламингидросульфата, 250 мкл 0,075% титанового желтого и 500 мкл 1,5N NaOH, причем в 250 мкл полученного раствора вносят 250 мкл цельной крови с коагулянтом, которые инкубируют в течение 15 минут, центрифугируют и из осадка изготавливают монослойные мазки, которые изучают с помощью цифрового микроскопа в программе «Scion», и при повышении титра антител IgG к ЦМВ до 1:1600, увеличении содержания магния до 72,20±1,65 пикселей/ммк2 в отдельно выделенном эритроците автоматически по программе «Scion» и снижении оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови до 86,50±1,3% создается угроза формирования у беременной анемии. Способ позволяет оценить угрозу формирования в организме беременной анемии при простоте его исполнения. 3 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для доклинического определения противоаллергического действия пищевых продуктов, содержащих лактобациллы. Для этого проводят сенсибилизацию экспериментальных животных: в течение 7 дней в двух группах самцов половозрелых инбредных мышей BALB/c, состоящих из 10 особей в каждой группе, ежедневно внутрибрюшинно вводят по 10 мкг аллергена апельсина или аллергена лимона. Затем через 7 дней после последнего внутрибрюшинного его введения в течение 7 дней им вводят перорально по 10 мг того же аллергена. После этого в течение 5 дней животным одной из групп вводят перорально по 0,5 мл продукта с лактобациллами в концентрации 5×107 КОЕ, на 27 день эксперимента. Исследуют в сыворотке крови всех животных концентрацию гистамина, иммуноглобулина класса Е и определяют в гомогенате кишечника животных концентрации уксусной и масляной кислот. При концентрации у мышей, не получавших продукт с лактобациллами, гистамина 16,82-24,55 мкмоль/л, иммуноглобулина класса Е 15,9-21,2 нг/мл, уксусной кислоты 0,936-1,092 мкмоль/г, масляной кислоты 3,97-5,71 мкмоль/г, а у животных, получавших продукт с лактобациллами, при концентрации гистамина 11,42-14,44 мкмоль/л, иммуноглобулина класса Е 10,22-14,97 нг/мл, уксусной кислоты 1,42-1,48 мкмоль/г, масляной кислоты 3,852-3,878 мкмоль/г - устанавливают лечебные свойства пищевого продукта с лактобациллами при пищевой аллергии. Использование данного способа позволяет проводить доклиническое определение противоаллергического действия пищевых продуктов, содержащих лактобациллы, при манифестации пищевой аллергии. 6 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и иммунологии, и может использоваться для дифференциальной диагностики острого и хронического течения инфекционного мононуклеоза у детей. Для этого определяют содержание малонового диальдегида в сыворотке крови. При содержании малонового диальдегида в сыворотке крови, равном 3,3 мкмоль/л и выше, диагностируют острое течение инфекционного мононуклеоза. При содержании малонового диальдегида ниже 3,3 мкмоль/л диагностируют хроническое течение. Использование данного способа позволяет дифференцировать острое и хроническое течение инфекционного мононуклеоза у детей, что дает возможность своевременно изменить тактику лечения пациента. 3 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и нейрохирургии. Перед началом проведения лечебных мероприятий осуществляют клинический осмотр с оценкой неврологического статуса, клинико-интраскопическую диагностику с оценкой выраженности структурных изменений вещества головного мозга и положения его срединных структур, взятие венозной крови с определением методом иммуноферментного анализа концентрации молекул адгезии нервных клеток С. Анализируют полученные результаты и оценивают количеством баллов каждый из выявленных у больного показателей. Осуществляют подсчет суммы набранных баллов. При сумме баллов от 7 до 9 назначают медикаментозное лечение. При сумме баллов от 10 до 15 проводят комплексное лечение, включающее контактное лазерное воздействие на синокаротидную зону и фармакологическую нейропротекцию путем выполнения интраназального электрофореза. При сумме баллов от 16 и более осуществляют хирургическое лечение. Способ позволяет персонализировать выбор метода лечения, адекватного тяжести ушиба головного мозга, повысить его эффективность и улучшить исходы черепно-мозговой травмы за счет оценки комплекса наиболее значимых диагностических критериев. 5 пр.
Изобретение относится к ихтиологии и рыбоводству и представляет собой способ тестирования физиологического состояния осетровых рыб, включающий исследование сыворотки крови рыб, отличающийся тем, что сыворотку крови исследуют методом краевой дегидратаци в аналитических ячейках и производят морфологический анализ образовавшихся структур в режиме обычной микроскопии при различных увеличениях, при этом дендритные и переходные формы являются показателями нормы гомеостаза, а наличие пластинчатых структур указывает на изменения, происходящие в организме рыб. Осуществление изобретения обеспечивает повышение эффективности оценки физиологического состояния осетровых рыб. 1 з.п. ф-лы, 3 пр.

Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к способу оценки состояния микробиоты пищеварительного тракта у подростков 14-18 лет по микрофлоре ротовой жидкости. Способ оценки состояния микробиоты пищеварительного тракта у подростков 14-18 лет по микрофлоре ротовой жидкости, заключающийся в том, что проводят скрининговое бактериологическое исследование ротовой жидкости с выделением представителей нормальной и условно-патогенной микрофлоры и определяют варианты нормомикробиоценоза на этапе донозологической диагностики при проведении диспансеризации с последующим формированием групп риска и прогнозируют развитие дисбиотических состояний, первый вариант характеризуют присутствием Streptococcus spp., не обладающих гемолитической активностью, в количестве 5 lg КОЕ/мл, Lactobacillus spp. 3-4 lg КОЕ/мл и отсутствием условно-патогенной микрофлоры, при втором варианте происходит увеличение количества негемолитических Streptococcus spp. до 6 lg КОЕ/мл, снижение Lactobacillus spp. до 2 lg КОЕ/мл и появление условно-патогенной микрофлоры, такой как Staphylococcus spp., Candida spp., Bacillus spp. в количестве 1-2 lg КОЕ/мл, у лиц с третьим вариантом микробиоценоза полости рта наблюдают увеличение негемолитических Streptococcus spp. до 7 lg КОЕ/мл, более выраженное снижение Lactobacillus spp. до 1 lg КОЕ/мл или их полное отсутствие, повышение уровня условно-патогенной микрофлоры в Staphylococcus spp., Candida spp., Bacillus spp., коррелирующей с патогенностью в количестве до 4-5 lg КОЕ/мл, выявление первого и второго вариантов является прогностически благоприятными, а при выявлении третьего варианта микробиоценоза подростка относят в группу повышенного риска формирования у него дисбиотических изменений пищеварительного тракта. Вышеописанный способ эффективно оценивает состояние микробиоты пищеварительного тракта у подростков 14-18 лет по микрофлоре ротовой жидкости. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к субстрату для иммобилизации функциональных групп, а также к способам приготовления данного субстрата и картриджу с сорбентом для использования в устройстве диализа. Субстрат содержит соединения, предназначенные для иммобилизации функциональных молекул, при этом каждое соединение содержит цепочку, включающую: функциональную группу R, химически связанную с субстратом, при этом указанная функциональная группа R выбирается из группы, включающей: эфир, сложный эфир, карбонильную группу, сложный эфир карбоната, тиоэфир, дисульфид, сульфинил, сульфонил и карбонотиоил, амин, амид, карбамат, мочевины и гуанидины; и эпоксидсодержащую функциональную группу, соединенную с функциональной группой R сшивающим агентом, включающим, по крайней мере, одну нуклеофильную группу, выбранную из группы включающей амин, гидроксил и тиол; при этом функциональная молекула состоит из фермента, который выбирается из группы, включающей уреазу, уриказу, креатининазу, липазы, эстеразы, целлюлазы, амилазы, пектиназы, каталазы, ацилазу, каталазу, эстеразу, пенициллинамидазу, протеиназу К. 6 н. и 43 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения концентрации свинца в легких крупного рогатого скота черно-пестрой породы. Сущность способа заключается в определении в волосе концентрации Mn и/или Na методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. Затем рассчитывают уравнение регрессии, при этом по содержанию марганца или натрия определяют концентрацию свинца в легких по формуле y=0,0179х-0,0067, где х - содержание Mn (мг/кг) в волосе, где y - содержание Pb (мг/кг) в легких или по формуле y=0,0000334х+0,007551, где х - содержание Na (мг/кг) в волосе, y - содержание Pb (мг/кг) в легких. Использование способа позволяет с высокой точностью определить содержание свинца в легких крупного рогатого скота черно-пестрой породы. 3 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для микробиологической диагностики парапротезной инфекции. Для этого проводят микробиологическое исследование смывной жидкости с извлеченных имплантатов, забранных в операционной во время ревизионных операций при эндопротезировании суставов, после применения ультразвуковой обработки путем посева в педиатрические флаконы с высокопитательными средами для аэробных и анаэробных микроорганизмов и инкубирования в аэробных и анаэробных условиях с помощью автоматического анализатора, при этом педиатрические флаконы со смывной жидкостью с извлеченных имплантатов после ультразвуковой обработки помещают в микробиологический автоматический анализатор VersaTrek для инкубирования и автоматической манометрической детекции роста микроорганизмов. Способ позволяет повысить точность диагностики парапротезной инфекции за счет повышения его диагностической чувствительности.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки течения раневого процесса в ране стопы у больных с синдромом диабетической стопы в послеоперационный период. Осуществляют забор 0,3-0,5 мл капиллярной крови из центральной части раны. Определяют парциальное давление О2 в капиллярной крови в динамике: во время перевязок на 5, 10 и 15 сутки после операции. Оценивают «кислородный провал» - степень снижения уровня парциального давления О2 относительно нормы, равной 80 мм рт.ст. Принимают за 1 единицу «кислородного провала» снижение парциального давления в капиллярной крови раны на 5 мм рт.ст. При выявлении «кислородного провала» на 5, 10 сутки после операции течение оценивают как требующее корректировки послеоперационной терапии. При выявлении «кислородного провала» в 7 единиц и больше на 15 сутки после операции течение оценивают как требующее проведения дополнительной этапной некрэктомии или реампутации. Способ позволяет точно измерить уровень гипоксии в ткани, определить тактику лечения за счет определения величины парциального давления О2 в крови из центральной части раны и выявления «кислородного провала». 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.
Наверх