Способ скрининга веществ, имеющих регулирующее вес действие

Авторы патента:


Способ скрининга веществ, имеющих регулирующее вес действие
Способ скрининга веществ, имеющих регулирующее вес действие
Способ скрининга веществ, имеющих регулирующее вес действие
Способ скрининга веществ, имеющих регулирующее вес действие

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2603745:

НАКАДЗИМА Тосихиро (JP)

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к скринингу веществ, оказывающих регулирующее вес действие, и может быть использовано в медицине. Способ скрининга веществ, оказывающих регулирующее вес действие, включает приведение тестируемого вещества в контакт с клетками, экспрессирующими ген синовиолина, и идентификацию того, имеет или нет указанное тестируемое вещество ингибирующее влияние на экспрессию гена синовиолина. Фармацевтические композиции включают нуклеиновую кислоту, которая подавляет экспрессию гена синовиолина, или ингибитор активности убиквитинирования белка синовиолина. Изобретение позволяет воздействовать на снижение веса за счет ингибирования экспрессии гена или активности белка синовиолина. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Данное изобретение относится к способу скрининга веществ, имеющих регулирующее вес действие.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Синовиолин представляет собой белок, который был открыт как мембранный белок, который оверэкспрессируется в синовиальных клетках, полученных от пациентов, больных ревматоидным артритом (Патентный документ 1). Синовиолин был определен как молекула, которая является существенной для запуска ревматоидного артрита, согласно исследованиям, проведенным с использованием генетически модифицированных животных.

Предполагается, что синовиолин имеет мотив RING-пальца, основываясь на анализах с использованием системы предсказания структуры белка. Этот мотив обнаружен в большом количестве в ферменте, известном как E3 убиквитин лигаза, которая играет важную роль в убиквитинировании белка. В действительности показано, что синовиолин имеет самоубиквитинирующую активность, которая характерна для E3 убиквитин лигазы (Патентный документ 1). Однако многие функции синовиолина in vivo остаются неизвестными. Более конкретно, отсутствуют сообщения, касающиеся того, что повреждение гена синовиолина вызывает потерю веса.

Ожирение вызывается такими факторами, как отсутствие [физических] упражнений, пристрастие к перееданию или метаболические нарушения, приписываемые генетическим факторам или эндокринологическим заболеваниям. Ожирение представляет собой фактор риска, который индуцирует различные заболевания, возникающие во взрослом возрасте, такие как инфаркт миокарда или атеросклероз, и, поскольку это вносит вклад в усугубление этих заболеваний, их раннее лечение и предупреждение чрезвычайно важны. Хотя лечение, вовлекающее гормональные препараты или агенты, активирующие метаболизм, обычно используется в фармакотерапии ожирения, известно мало лекарств, которые способны безопасно уменьшать вес или тормозить рост веса.

ДОКУМЕНТЫ, ОТНОСЯЩИЕСЯ К ПРЕДШЕСТВУЮЩЕМУ УРОВНЮ ТЕХНИКИ

Патентные документы

[Патентный документ 1] Международная публикация № WO 02/052007

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Проблемы, которые решаются данным изобретением

Ввиду вышеизложенного, ведется разработка веществ, регулирующих вес.

Средства решения проблем

Автор данного изобретения впервые обнаружил с помощью мышей с условным нокаутом гена синовиолина, что повреждение гена синовиолина вызывает потерю веса, таким образом приведшее к завершению данного изобретения.

Конкретно, данное изобретение состоит в обозначенном ниже.

[1] Способ скрининга веществ, оказывающих регулирующее вес действие, включающий: приведение тестируемого вещества в контакт с клетками, экспрессирующими ген синовиолина, и идентификацию того, имеет или нет указанное тестируемое вещество влияние на экспрессию гена синовиолина.

[2] Способ, описанный в [1], где влияние на экспрессию гена синовиолина представляет собой ингибирование экспрессии гена синовиолина или инактивацию экспрессируемого им белка.

[3] Способ, описанный в [1], где влияние на экспрессию гена синовиолина представляет собой промотирование экспрессии гена синовиолина или активацию экспрессируемого им белка.

[4] Фармацевтическая композиция для регулирования веса тела, содержащая: нуклеиновую кислоту, состоящую из непрерывной последовательности оснований из 20-25 оснований, комплементарной продукту транскрипции гена синовиолина, где указанная нуклеиновая кислота подавляет экспрессию гена синовиолина.

[5] Фармацевтическая композиция для регуляции веса тела, содержащая: ингибитор убиквитинирующей активности белка синовиолина.

[6] Способ скрининга веществ, оказывающих регулирующее количество жировой ткани действие, включающий приведение тестируемого вещества в контакт с клетками, экспрессирующими ген синовиолина, и идентификацию того, имеет или нет указанное тестируемое вещество влияние на экспрессию гена синовиолина.

[7] Способ, описанный в [6], где влияние на экспрессию гена синовиолина представляет собой ингибирование экспрессии гена синовиолина или инактивацию экспрессируемого им белка.

[8] Способ, описанный в [6], где влияние на экспрессию гена синовиолина представляет собой промотирование экспрессии гена синовиолина или активацию экспрессируемого им белка.

[9] Фармацевтическая композиция для регуляции количества жировой ткани, содержащая: нуклеиновую кислоту, состоящую из непрерывной последовательности оснований из 20-25 оснований, комплементарной продукту транскрипции гена синовиолина, где указанная нуклеиновая кислота подавляет экспрессию гена синовиолина.

[10] Фармацевтическая композиция для регуляции количества жировой ткани, содержащая ингибитор убиквитинирования белка синовиолина.

[11] Способ скрининга веществ, оказывающих регулирующее индукцию дифференцировки адипоцитов действие, включающий приведение тестируемого вещества в контакт с клетками, экспрессирующими ген синовиолина, и идентификацию того, имеет или нет указанное тестируемое вещество влияние на экспрессию гена синовиолина.

[12] Способ, описанный в [11], где влияние на экспрессию гена синовиолина представляет собой ингибирование экспрессии гена синовиолина или инактивацию экспрессируемого им белка.

[13] Способ, описанный в [11], где влияние на экспрессию гена синовиолина представляет собой промотирование экспрессии гена синовиолина или активацию экспрессируемого им белка.

[14] Фармацевтическая композиция для регуляции индукции дифференцировки адипоцитов, содержащая: нуклеиновую кислоту, состоящую из непрерывной последовательности оснований из 20-25 оснований, комплементарной продукту транскрипции гена синовиолина, где нуклеиновая кислота подавляет экспрессию гена синовиолина.

[15] Фармацевтическая композиция для регуляции индукции дифференцировки адипоцитов, содержащая ингибитор активности убиквитинирования белка синовиолина.

Эффекты данного изобретения

Способом по данному изобретению вещество может быть признано имеющим новое регулирующее вес действие.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг.1 представляет собой дизайн направленного вектора гена.

Фиг.2 показывает изменения веса тела по отношению к числу дней содержания.

Фиг.3 показывает изменения в величине выживания по отношению к числу дней содержания.

Фиг.4 отображает патологические срезы жировой ткани, полученные от мышей с нокаутом по гену синовиолина и контрольных мышей на 16 день после введения тамоксифена. (1) Белая жировая ткань, (2) бурая жировая ткань.

Фиг.5 показывает эффекты подавления гена синовиолина, оказывающие регулирующее индукцию дифференцировки адипоцитов действие в клеточной линии 3T3-L1. ○: дифференцированные адипоциты, □: жировые капли, которые не являются нормальными адипоцитами.

ЛУЧШИЙ СПОСОБ РЕАЛИЗАЦИИ ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

В качестве тестируемого вещества в данном изобретении может быть использовано произвольное вещество. Какие-либо ограничения для типа тестируемого вещества отсутствуют, и оно может представлять собой низкомолекулярное синтетическое вещество, соединение, присутствующее в экстракте естественного продукта, или синтетический пептид. В качестве альтернативы тестируемое вещество может быть выбрано из библиотеки соединений, библиотеки фагов или комбинированной библиотеки.

В данном изобретении регулирующее вес действие относится к действию, которое вызывает изменение веса тела со значительной разницей до и после лечения. Регулирующее вес действие действует через, например, регуляцию количества жировой ткани или регуляцию индукции дифференцировки адипоцитов.

Синовиолин является E3 убиквитин лигазой, которая участвует в деградации, связанной с эндоплазматическим ретикулумом, и является универсально присутствующей у млекопитающих. В дополнение, последовательность оснований синовиолина может быть получена из известных баз данных. Например, номер доступа синовиолина человека - AB024690.

Мыши с нокаутом по гену синовиолина обозначают мышей, у которых нормальная экспрессия синовиолина ингибирована в результате искусственной модификации последовательности участка гена синовиолина и, в результате ее, предупреждения нормального функционирования синовиолина в организме.

В дополнение, часть или весь ген синовиолина могут быть модифицированы или делетированы. В данном документе «весь» ген синовиолина обозначает участок, простирающийся от 5'-конца экзона 1 до 3'-конца финального экзона геномной ДНК синовиолина. В дополнение, «часть» гена синовиолина обозначает часть этого участка с длиной, требующейся для ингибирования нормальной экспрессии гена синовиолина. Далее [термин] «модифицированный» обозначает изменение последовательности оснований участка-мишени геномной ДНК на другую последовательность оснований путем замены, делеции, встраивания и/или перемещения одного или множества нуклеотидов.

Нокаутное животное, у которого часть или весь ген синовиолина был модифицирован или делетирован, может быть получено известным способом. Например, нокаутное животное может быть получено с помощью направленного воздействия на ген способом, описанным в нижеследующих примерах. Таким способом путем замещения участка, по меньшей мере, содержащей старт-кодон экзона 1 гена синовиолина другой последовательностью оснований путем гомологичной рекомбинации нормальная экспрессия синовиолина может быть ингибирована. В дополнение, нокаутные животные могут быть использованы в способе скрининга по данному изобретению, включая в себя не только нокаутных животных, полученных по этому способу, но также их потомство.

Животные, предназначенные для использования как нокаутные животные по данному изобретению, не являются человекоподобными животными, и в этом отношении конкретные ограничения отсутствуют. Примеры включают в себя млекопитающих, таких как коровы, свиньи, овцы, козы, кролики, собаки, кошки, морские свинки, хомячки, мыши или крысы. Кролики, собаки, кошки, морские свинки, хомячки, мыши или крысы являются предпочтительными для использования в качестве экспериментальных животных. В частности, грызуны являются более предпочтительными, причем мыши и крысы являются особенно предпочтительными с учетом того, что создано большое количество инбредных линий, а также с учетом технологий, таких как культивирование оплодотворенных яйцеклеток или оплодотворение in vitro.

Часть гена синовиолина животного-мишени была выделена, чтобы сконструировать направленный вектор. Например, в случае получения нокаутных мышей, библиотека геномной ДНК была скринирована на ген синовиолина. Затем конструировали направленный вектор для гомологичной рекомбинации с использованием полученного клона геномной ДНК. Не требуется, чтобы клон геномной ДНК имел полный размер гена. Все, что требуется, - это клонирование участка, требующегося для подавления экспрессии синовиолина путем повреждения гена синовиолина. В дополнение, направленный вектор также может быть получен известным способом и, например, может быть получен с использованием коммерчески доступной плазмиды как основы, подходящим образом связывающей соответствующие фрагменты, состоящие из вышеупомянутого клона геномной ДНК, маркера положительного отбора, маркера негативного отбора и подобного.

Направленный вектор, полученный по вышеупомянутому способу, затем вводили в клетки, имеющие способность формировать индивид (тотипотентные), такие как оплодотворенные яйцеклетки, ранние зародыши или эмбриональные стволовые клетки (клетки ES), путем электропробоя мембраны и подобного, после чего следовал отбор тех клеток, в которых обнаруживается целевая гомологичная рекомбинация. Скрининг выполняли путем отбора клеток с помощью химического агента по способу позитивно-негативной селекции. После отбора тех клеток, в которых обнаруживается целевая гомологичная рекомбинация, это подтверждалось с помощью саузерн-блоттинга или полимеразной цепной реакции (PCR) или подобного. Наконец, клетки, в которых желаемая гомологичная рекомбинация была подтверждена, вводили в зародыш на стадии 8 бластомеров или бластоцисту, собранные из фаллопиевых труб или матки в ходе беременности.

Вышеупомянутый зародыш на стадии 8 бластомеров или бластоцисту трансплантировали суррогатной матери обычными способами. Путем скрещивания химерных животных зародышевой линии (предпочтительно самцов), рожденных от суррогатной матери, с животными дикого типа (предпочтительно самками), гомологичными по гену JLP дикого типа, может быть получено первое поколение (F1) в форме гетерозигот, в которых один из генов JLP на гомологичной хромосоме был поврежден гомологичной рекомбинацией. Далее путем скрещивания этих гетерозигот может быть получено второе поколение (F2) в форме гомозигот, в которых оба гена JLP гомологичной хромосомы были повреждены, то есть нокаутные по JLP животные по данному изобретению. Гомозиготы идентифицируются путем отделения части тела (такой как хвост), экстракции ДНК и определения генома путем саузерн-блоттинга или PCR и подобного.

Хотя нижеследующее представляет более подробное объяснение данного изобретения с помощью нижеследующих примеров, данное изобретение не ограничено этими примерами.

ПРИМЕРЫ

Чертеж дизайна направленного на ген вектора, использованного для получения нокаутных по синовиолину мышей по данному примеру, показан на фиг.1. На чертеже структуры нормального гена синовиолина (аллель дикого типа), направленного вектора для получения нокаутных по синовиолину мышей (направленный вектор), аллеля, который подвергается гомологичной рекомбинации (аллель-мишень), аллеля, содержащего последовательность loxP (аллель Flox), и аллеля, в котором делетированы экзоны от loxP-Exon 2 до 14-loxP (делетированный аллель), схематически показаны, соответственно, начиная сверху, в таком порядке.

Участок выше экзона 1 и ниже экзона 16 гена синовиолина мыши в форме участка гена 14,8 kb использовали для конструирования направленного вектора. Neo-резистентный ген, помещенный между последовательностями FRT, вставляли между экзоном 1 и экзоном 2. В дополнение, последовательности loxP вводили выше экзона 2 и ниже экзона 14.

Вышеупомянутый направленный вектор был введен в клетки ES. Клоны, имеющие аллель, в котором присутствует гомологичная рекомбинация, были отобраны на основании подтверждения удаления последовательности loxP-экзон-loxP путем обработки Cre и удаления последовательности FRT-неомицин-FRT путем обработки FLP с использованием длины продуктов PCR.

Химерные мыши были получены введением вышеупомянутых клонов ES клеток, которые подверглись гомологичной рекомбинации, в зародыши мыши, как описано в известном способе (например, EMBO J 16:1850-1857). Далее эти химерные мыши скрещивались с мышами дикого типа C57BL/6 для получения мышей, у которых удалена последовательность неомицина. В дополнение, поскольку последовательность loxP между экзонами и длинное плечо, включенные в направленный вектор, могут быть утрачены при гомологичной рекомбинации, их присутствие подтверждали с помощью PCR.

Полученных безнеомициновых мышей скрещивали с мышами CAG-CreER для получения мышей CAG-CreERsynof1/f1.

Тамоксифен вводили полученным мышам CAG-CreERsynof1/f1 (20 мг/мл (кукурузное масло), 5 мг/40 г веса тела, интраперитонеальным введением, последовательное введение в течение 5 дней - в дни 0-4), чтобы индуцировать удаление loxP-экзон-loxP (CAG-CreER(+)synof1/f1). Группа C57BL/6J (контроль носителя, введение тамоксифена) и группа CAG-CreER(-)synof1/f1 (контроль носителя, введение тамоксифена) использовались как контроли.

В результате уменьшение веса тела, зависящее от числа дней, в течение которых животные выдерживались, наблюдалось в группе, которой вводили CAG-CreER(+)synof1/f1 тамоксифен. С другой стороны, уменьшение веса тела не наблюдалось ни в одной из контрольных групп (фиг.2). Все животные из группы, которой вводили CAG-CreER(+)synof1/f1 тамоксифен, погибали на 18-й - 20-й день содержания (фиг.3). Вскрытие погибших животных показало слабые посмертные изменения в органах брюшной и грудной полостей. В дополнение, селезенка и желчный пузырь были уменьшены в размерах, и желчь, имеющая в норме желтоватый цвет, была бесцветной. Чрезвычайно тонким был подкожный, околопочечный и перитестикулярный жир.

Ткани мыши, полученные после содержания в течение 16 дней после введения тамоксифена, фиксировали в 4% формальдегиде и заключали в парафин, после чего на микротоме готовили среды жировой ткани.

В результате уменьшение белой жировой ткани и бурой жировой ткани наблюдалось у нокаутных по синовиолину мышей (CAG-CreER(+)synof1/f1) по сравнению с гетерозиготными нокаутными по синовиолину мышами (CAG-CreER(+)synof1/+) (фиг.4).

Клетки 3T3-L1 культивировали в течение 3 дней после достижения конфлюентного состояния в DMEM (10% фетальная бычья сыворотка (FBS), высокий уровень глюкозы). Дифференцировку индуцировали добавлением 500 мкМ IBMX (изобутилметилксантин), 1 мкМ дексаметазона и 5 мкг/мл инсулина. 10 мкМ LS-102 (ингибитор активности убиквитинирования синовиолина) или DMSO добавляли в то же самое время. После культивирования в течение 3 дней среду заменяли средой, содержащей 4 мкг/мл инсулина, после чего добавляли 10 мкМ LS-102 или DMSO. После повторного культивирования в течение 3 дней среду заменяли на DMEM (10% FBS, высокий уровень глюкозы), после чего культивировали в течение 3 дней. Что касается siPHK, 200 пмоль siPHK Syno770 были введены с помощью Lipofectamine 2000 за два дня до индуцирования дифференцировки.

Окрашивание масляным красным O

После отмывки клеток 3T3-L1 фосфатно-солевым буфером (PBS)(-), клетки фиксировали 10% формалином. Затем клетки отмывали PBS(-) и переносили в 60% изопропанол. Клетки окрашивали в течение 20 минут с помощью 18мг/мл масляного красного О/изопропанола, а затем отмывали 60% изопропанолом и PBS(-), после чего просматривали под микроскопом.

В результате в тех клетках, в которых активность гена синовиолина была ингибирована LI102 или siPHK Syno770, число дифференцированных адипоцитов было ниже по сравнению с контролем, предполагая, таким образом, что дифференцировка была подавлена (фиг.5). В дополнение, также наблюдались жировые капли, которые не являлись нормальными кольцеобразными адипоцитами.

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ

Способ по данному изобретению пригоден для скрининга веществ, имеющих регулирующее вес действие.

1. Способ скрининга веществ, оказывающих регулирующее вес действие, включающий приведение тестируемого вещества в контакт с клетками, экспрессирующими ген синовиолина, и идентификацию того, имеет или нет указанное тестируемое вещество ингибирующее влияние на экспрессию гена синовиолина.

2. Способ по п. 1, где ингибирующее влияние на экспрессию гена синовиолина представляет собой ингибирование экспрессии гена синовиолина или инактивацию экспрессируемого им белка.

3. Фармацевтическая композиция для регуляции веса тела, содержащая: нуклеиновую кислоту, состоящую из непрерывной последовательности оснований из 20-25 оснований, комплементарной продукту транскрипции гена синовиолина, где указанная нуклеиновая кислота подавляет экспрессию гена синовиолина.

4. Фармацевтическая композиция для регуляции веса тела, содержащая: ингибитор активности убиквитинирования белка синовиолина.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к микрофлюидной системе и может быть использовано для количественного определения отклика живых клеток на определенные молекулы. Микрофлюидная система для управления картой концентраций молекул, пригодных для возбуждения клеток-мишеней, включает: микрофлюидное устройство (1); камеру (8) или дополнительный микрофлюидный канал, содержащий основание (6), предназначенное для приема клетки-мишени; микропористую мембрану (5), покрывающую сеть отверстий (47, 470); одно или несколько средств снабжения для снабжения одного или каждого из микрофлюидных каналов текучей средой, причем по меньшей мере одна из этих текучих сред содержит стимулирующие молекулы клетки-мишени.
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и касается способа выбора длительности терапии Церулоплазмином у пациентов с бронхиальной астмой. Сущность способа заключается в том, что у пациентов с бронхиальной астмой определяют в крови супкроксиддисмутазу (СОД) и малоновый альдегид (МА) и их соотношения МДА/СОД после лечения Церулоплазмином в дозе 100 мг внутривенно 1 раз в сутки в течение 7 дней.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на скелет эритроцитов.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики предрасположенности к посттравматическому остеоартрозу коленного сустава. У пациентов существляют генотипирование полиморфизма rs2276109 (A-82G) гена ММР-12.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования ответа онкологического пациента с неходжкинской лимфомой на противораковую терапию, включающую бортезомиб и ритуксимаб, отличающийся тем, что способ включает определение уровня или количества первого прогностического фактора и определение присутствия или количества второго прогностического фактора, причем низкий уровень СD68 или присутствие полиморфизма PSMB1 (P11A) коррелирует по меньшей мере с одним положительным исходом.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения степени гетероплазмии мутаций митохондриального генома. Проводят полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени, вычисляют значение ΔCt, определяют коэффициент эффективности амплификации и рассчитывают степень гетероплазмии мутаций митохондриального генома по формуле.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки микробного спектра эндометрия для этиологической диагностики хронического эндометрита (ХЭ), заключающейся в том, что производят забор фрагмента слизистой оболочки полости матки, далее методом ПЦР в реальном времени количественно оценивают значение контроля взятия материала, при снижении данного показателя ниже 104 ГЭ/образец результат считают недостоверным, общей бактериальной массы, положительный результат при значении более 103 ГЭ/образец, определяют количество геном-эквивалентов микроорганизмов и сравнивают его с пороговым значением (ПЗ), применяя диагностическую панель, включающую Lactobacillus spp., абсолютно- или условно-патогенные микроорганизмы, такие как Eubacterium spp., Enterobacteriaceae, Escherichia coli, Streptococcus spp., Streptococcus agalactiae, Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus, Enterococcus spp., Peptostreptococcus spp., Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp., Candida spp., Trichomonas vaginalis, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, Herpes simplex 1 и 2 типов, Cytomegalovirus; при выявлении абсолютно- или условно-патогенных микроорганизмов в количестве, превышающем пороговое значение, делают заключение о потенциальном значении данного микроорганизма в этиологической диагностике хронического эндометрита.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной биологии и онкологии, и предназначено для прогнозирования развития острой почечной недостаточности (ОПН) после кратковременной ишемии почки.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ) с неэффективным местным гипотензивным лечением.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и представляет собой способ прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита (ХКХ) у мужчин русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, включающий забор крови, отличающийся тем, что после выделения ДНК из периферической венозной крови методом фенольно-хлороформной эстракции проводят анализ полиморфизмов генов интерлейкинов IL-1А -889Т>С, IL-1В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т и прогнозируют повышенный риск развития ХКХ в случае выявления генетических вариантов -511Т IL-1В, -511ТТ IL-1В, либо комбинации аллелей -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -511Т IL-1В и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -889Т IL-1А, -511Т IL-1В и -584Т IL-4, либо комбинации аллелей -889T IL-1А и -511T IL-1B, прогнозируют низкий риск развития данного заболевания у мужчин в случае выявления генетического варианта -511СС IL-1В.

Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к способу определения и секвенирования неизвестных последовательностей ДНК, которые фланкируют известные последовательности в выделенной ДНК.

Изобретение относится к области биохимии. Представлен набор синтетических олигодезоксирибонуклеотидов для детекции гена msp1α риккетсии Anaplasma marginale методом полимеразной цепной реакции в режиме «реального времени».

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ амплификации нуклеиновых кислот, в котором наночастицы в объеме реакционной смеси переносят тепло в окружающую их среду посредством возбуждения.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и диагностической медицины. Предложен способ выделения циркулирующих ДНК из плазмы или сыворотки крови.

Группа изобретений относится к области биотехнологии и представляет собой варианты способов создания совокупности смежных фрагментов исследуемой области генома.

Настоящее изобретение относится к способам и продуктам для локализованной или пространственной детекции нуклеиновой кислоты в образце ткани и, в частности, к способу локализованной детекции нуклеиновой кислоты в образце ткани, включающему: (а) предоставление чипа, содержащего подложку, на которой непосредственно или опосредованно иммобилизованы многочисленные разновидности захватывающих зондов, так что каждая разновидность занимает определенное положение на чипе и ориентирована таким образом, что имеет свободный 3′-конец, позволяющий указанному зонду действовать в качестве праймера в реакции удлинения или лигирования праймера, где каждая разновидность указанного захватывающего зонда содержит молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую в направлении от 5′ к 3′: (1) позиционную область, которая соответствует положению захватывающего зонда на чипе, и (2) захватывающую область; (б) приведение указанного чипа в контакт с образцом ткани таким образом, что положение захватывающего зонда на чипе может быть сопоставлено с положением в образце ткани, и предоставление возможности нуклеиновой кислоте образца ткани гибридизоваться с захватывающей областью в указанных захватывающих зондах; (в) синтез молекул ДНК на основе захваченных молекул нуклеиновой кислоты с использованием указанных захватывающих зондов в качестве праймеров удлинения или лигирования, где указанные удлиненные или лигированные молекулы ДНК являются мечеными благодаря позиционной области; (г) возможно синтез комплементарной нити указанной меченой ДНК и/или возможно амплификацию указанной меченой ДНК; (д) высвобождение по меньшей мере части меченых молекул ДНК и/или их комплементов или ампликонов с поверхности чипа, где указанная часть включает позиционную область или ее комплемент; и (е) прямой или опосредованный анализ последовательности высвобожденных молекул ДНК.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. В группу изобретений входят нуклеиновая кислота, которая кодирует флуоресцентный биосенсор для регистрации изменения рН, аминокислотная последовательность которого показана в SEQ ID No: 4, а также кассета экспрессии и эукариотическая клетка, продуцирующая биосенсор.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу идентификации растения, способного восстанавливать фертильность при цитоплазматической мужской стерильности С-типа, содержащего функциональный ген-восстановитель для цитоплазматической мужской стерильности С-типа кукурузы, включающему выделение молекул нуклеиновой кислоты из растения и скрининг выделенных молекул нуклеиновых кислот с использованием ПЦР в отношении молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-197 и маркеров, обозначаемых как полиморфизмы ID №№1-106 в таблице 3.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии, ветеринарии и медицине и касается способа идентификации РНК вирусов гриппа А и В с одновременным определением вариантов гемагглютинина и нейраминидазы вируса гриппа А, а также генетических маркеров патогенности и устойчивости к противогриппозным препаратам, на биологических микрочипах.

Изобретение относится к области медицины, и касается способа прогнозирования эффективности монотерапии пероральным сахароснижающим препаратом метформином у больных сахарным диабетом 2 типа.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для профилактики или снижения риска развития метаболических дисфункций, связанных с ожирением, содержащую Saccharomyces cerevisiae var boulardii в количестве между 106 и 109 колониеобразующих единиц (КОЕ) на суточное введение и фермент супероксиддисмутазу в количестве между 1 и 100 мг.
Наверх