Раствор для консервирования клеточных взвесей



Раствор для консервирования клеточных взвесей
Раствор для консервирования клеточных взвесей
A01N1/00 - Консервирование тел людей или животных, или растений или их частей; биоциды, например дезинфектанты, пестициды, гербициды (препараты для медицинских,стоматологических или гигиенических целей A61K; способы или устройства для дезинфекции или стерилизации вообще, или для дезодорации воздуха A61L); репелленты или аттрактанты (приманки A01M 31/06; лекарственные препараты A61K); регуляторы роста растений (соединения вообще C01,C07,C08; удобрения C05; вещества, улучшающие или стабилизирующие состояние почвы C09K 17/00)

Владельцы патента RU 2621295:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к физиологии, криобиологии и медицине, а именно к созданию раствора для консервирования клеточных взвесей. Раствор для консервирования клеточных взвесей содержит пектин каллуса раувольфии змеиной, глицерин, трилон Б и воду для инъекций. Раствор обеспечивает сохранность стабильно высокого процента физиологически активных ядерных клеток крови до 15 суток при температуре хранения -40°С. 2 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к физиологии, криобиологии и медицине, а именно к созданию раствора для консервирования лейкоцитов.

Из уровня техники известен криоконсервант для лейкоцитов (RU 2301524 С1, 27.06.2007), который содержит в оптимальном соотношении лемнан, глицерин, оксиметилэтилпиридина сукцинат, воду для инъекций и гидроксид натрия. Криоконсервант проявляет выраженное хдадоограждающее свойство при охлаждении лейкоцитов до -10°С.

Известен хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови (RU 2464991 С1, 27.10.2012), содержащий в оптимальном соотношении глицерин, растительный полисахарид - комаруман, трилон Б и воду для инъекций. Раствор позволяет сохранять клетки в течение одних суток при замораживании до -20°С.

Недостатками данных криоконсервантов является то, что они обеспечивают сохранность лейкоцитов на исходном уровне при температурах -10°С и -20°С не более 24 часов. Кроме того, в своих составах криозащитные растворы содержат пектиновые полисахариды лемнан и комаруман, которые были получены путем химического гидролиза в лабораторных условиях и в зависимости от времени сбора сырья отличаются молекулярным весом, качественным и количественным сахаридным составом (Оводова Р.Г. и др. Структурное исследование и физиологическая активность лемнана, пектина из Lemna minor L // Биоорганическая химия. - 2000. - Т. 26, №10. - С. 743-751).

Известен криоконсервант (Сведенцов Е.П. и др. Оценка влияния пектина раувольфии змеиной на функциональные показатели лейкоцитов, консервированных при -80°С // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2011. - №9. - С. 105), содержащий глицерин, трилон Б и пектиновый полисахарид - раувольфиан, выделенный из раувольфии змеиной (Ranvolfia serpentine L). Раствор позволяет сохранить лейкоциты в физиологически полноценном состоянии при -80°С в течение суток. Недостатком является отсутствие оптимального соотношения компонентов раствора и непродолжительное время хранения, кроме того, при -80°С происходит вымораживание в лед большого количества клеточной воды, данный раствор не способен в полной мере стабилизировать процесс кристаллизации.

Наиболее близким является раствор для консервирования клеток (T.V. POLEZHAEVA et al. USE OF PECTIC POLYSACCHARIDES FOR CRYOPRESERVATION OF BIOLOGICAL OBJECTS / Arch. Biol. Sci., Belgrade, 2014, 66 (3), pages 1025-1033), включающий (по объему) 7% глицерина, 0,2% пектинового полисахарида раувольфиана и 0,1% трилона Б. Недостатками раствора являются достаточно высокое содержание глицерина (в пересчете на массу 8,827 г) и, как следствие, непродолжительное время хранения до 1 сут при субумеренно-низкой температуре -20°С, а также содержание пектинового полисахарида, который был получен из раувольфии змеиной и в зависимости от времени сбора сырья отличается молекулярным весом, качественным и количественным сахаридным составом.

Это связано с тем, что растительная клеточная стенка (источник полисахаридов) является динамичной сложноорганизованной системой, состав которой может изменяться во время роста, дифференциации клеток, под влиянием внешних факторов. Необходима стабилизация условий для получения полисахарида с заданными свойствами.

Техническим результатом настоящего изобретения является понижение температуры и увеличение длительности хранения клеток крови, т.е. создание раствора для консервирования клеточных взвесей при умеренно-низкой температуре (-40°С), который обеспечивает сохранность стабильно высокого процента физиологически активных ядерных клеток крови в течение длительного времени (до 15 сут.).

Решить данную проблему позволяет уменьшение концентрации глицерина в растворе и изменение соотношения основных ингредиентов - пектинового полисахарида и глицерина до оптимальных показателей с 1: 44 (в прототипе) до 1: 35.

А также получение стандартизированных полисахаридов из стенок культивируемых in vitro клеток (Sims I.M., Middleton K., Lane A.G. et al. Characterization of extracellular polysaccharides from suspension cultures of members of the Poaceae // Planta. - 2000. - Vol. 210. - P. 261-268). Клеточные культуры подобно нативным растениям синтезируют аналогичные пектиновые вещества, при этом содержание полисахаридов в культурах клеток может значительно превышать таковое в нативных растениях. В настоящее время культуры растительных клеток являются объектом биотехнологии для получения целевых продуктов. Использование пектиновых полисахаридов из каллусных культур, обладающих криозащитным действием, в составе консервантов является перспективным направлением в криобиологии и медицине.

Технический результат достигается тем, что в предложенный раствор для консервирования клеточных взвесей включены следующие ингредиенты (масс. %): пектиновый полисахарид каллуса раувольфии змеиной - 0,2, глицерин - 7,0, трилон Б - 0,1 и вода для инъекций.

Клеточные культуры имеют ряд преимуществ перед нативными растениями: гомогенность системы, состоящей в основном из клеток с первичными клеточными стенками, независимость от климатических условий, высокая продуктивность по биомассе и полисахаридам, полисахариды стандартизованы по составу и биологической активности, возможность регуляции биосинтеза полисахаридов, сохранение природных популяций растений.

Пектиновый полисахарид каллуса раувольфии змеиной (раувольфиан) обладает как полисахарид (пектин) экзоцеллюлярным криопротекторным действием, что дополняет эндоцеллюлярное хладоограждающее влияние глицерина на клетки и делает комбинированный криоконсервирующий раствор более полноценным, дающим при замораживании лейкоцитов выраженный криобиологический (технический) эффект, а также иммуномодулирующим и противовоспалительным действием (Попов С.В. и др. Химическая характеристика и противовоспалительное действие раувольфиана, пектинового полисахарида каллуса раувольфии змеиной // Биохимия. - 2007. - Т. 72, №7. - С. 955-962) на клетки.

Глицерин высшего сорта - криопротектор эндоцеллюлярного действия (Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус A.M., Калугин Ю.В. Криопротекторы: Киев: Наукова думка, 1978. - с. 5-64) используется в нетоксичной для клеток концентрации, поэтому не требует отмывания перед применением, а антикоагулянт - трилон Б (динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты) имеет широкое применение в производстве медицинских препаратов и при консервировании.

Криоконсервант имеет рН среды 7,0-7,4, самый благоприятный для клеток крови. Его ингредиенты тропны лейкоцитарным клеткам.

Пример использования средства

Консервирующий раствор, содержащий, масс. %: глицерин - 7,0, пектиновый полисахарид каллуса раувольфии змеиной - 0,2, трилон Б - 0,1, вода для инъекций - остальное и имеющий рН 7,0-7,4, смешивают в соотношении 1:1 с концентратом лейкоцитов в полимерном контейнере «Компопласт». При приготовлении раствора использовали аналитические весы. Конечная концентрация веществ, входящих в состав раствора после смешивания с лейкоконцентратом оказывалась в 2 раза ниже исходной, при этом рН среды не изменялась, оставаясь в пределах 7,0-7,4.

Смесь выдерживают 20 мин при комнатной температуре и помещают в электрический морозильник с температурой -20°С на 15 мин в охлажденную спиртовую (96%) ванну, затем перекладывают для хранения в воздушную среду морозильника при -20°С, или -40°С, или -80°С. Размораживают биообъект в 20-литровой водяной ванне при температуре 37°С.

Затем определяют морфологическую сохранность размороженных лейкоцитарных клеток, их жизнеспособность по витальному красителю - эозину и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом (по Потаповой С.Г. и соавт. Ж. Проблемы гематологии и переливания крови. - 1977. - №9. - С. 58-59). Расчет выражают в процентах в сравнении с аналогичными показателями клеток до замораживания.

Экспериментальные исследования выполнены на базе лабораторий криофизиологии крови и отдела молекулярной биотехнологии Института физиологии Коми НЦ УрО РАН.

Изучены три варианта использования раствора для консервирования лейкоцитов, отличающихся температурой хранения (таблица 1).

Определены максимальные (показатель жизнеспособности выше 50% от исходного) сроки хранения лейкоцитов с предложенным криоконсервантом при различных отрицательных температурах (табл. 2).

Основным критерием оценки биологической полноценности лейкоцитов, прежде всего нейтрофилов, является определение их фагоцитарной активности. Этот тест, наиболее надежно характеризующий физиологические свойства клеток, замороженных с предложенным криоконсервантом, был лучшим после 15 суток хранения клеток при -40°С.

Готовый раствор криоконсерванта прозрачен, с желтоватым оттенком, без запаха, рН 7,0-7,4, хорошо смешивается во всех соотношениях с лейкоцитным концентратом, не вызывает конгломерацию клеток и обеспечивает функциональную и морфологическую сохранность при положительной температуре до замораживания. Криоконсервант проявляет выраженное хладоограждающее свойство при замораживании лейкоцитов до -40°С.

Таким образом, разработанный раствор для консервирования клеточных взвесей, содержащий пектиновый полисахарид каллуса раувольфии змеиной, с оптимальным соотношением ингредиентов позволил при замораживании лейкоконцентрата до -40°С обеспечить сохранность стабильно высокого процента физиологически активных ядерных клеток крови до 15 суток. Он может быть применен в учреждениях медицинского и биологического профиля.

Раствор для консервирования клеточных взвесей, характеризующийся тем, что он содержит пектин каллуса раувольфии змеиной, глицерин, трилон Б и воду для инъекций при следующем соотношении ингредиентов, масс. %:

Пектин каллуса раувольфии змеиной 0,2
Глицерин 7,0
Трилон Б 0,1
Вода для инъекций остальное



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтической композиции, обладающей противогрибковым действием. Фармацевтическая композиция, обладающая противогрибковым действием, выполнена в форме крема, содержащая анмарин, масло вазелиновое, триэтаноламин, воск эмульсионный, изопропилмиристат, кислоту бензойную, взятые при определенном соотношении компонентов.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и касается профилактики дислипидемии. Для этого ежедневно перорально вводят пищевые добавки «Маристим» и «Фуколам-С».

Группа изобретений относится к средству для чистки зубов, содержащему пигментную систему, включающую пигмент, который высвобождается во время чистки зубов и обеспечивает цветовой сигнал для пользователя при достаточном времени чистки зубов, и способу применения такого средства.

Группа изобретений относится к композициям для полоскания полости рта. Предлагаются противомикробные композиции для полоскания полости рта, включающие: масляную фазу, содержащую одно или несколько противомикробных эфирных масел; систему растворителей; по меньшей мере одно алкилсульфатное ПАВ; и водную фазу, содержащую воду; при этом композиции для полоскания полости рта представляют собой микроэмульсию, содержащую мицеллы с размерами менее чем приблизительно 200 нм, и композиция не содержит соединений, влияющих на биодоступность.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики постнатального заражения вирусом лейкоза крупного рогатого скота молодняка крупного рогатого скота.
Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой косметическую композицию для ухода за сухой и зрелой кожей лица, состоящую из перламутрового компонента, полученного из раковины пресноводных двустворчатых моллюсков, амарантового масла, масла виноградной косточки, фруктовых альфа-кислот, аскорбиновой кислоты, а также парафина и ланолина безводного.

Группа изобретений относится к области средств для ухода за полостью рта и способов их применения. Предлагаемая композиция для ухода за полостью рта содержит (i) отбеливающий комплекс, содержащий поперечносшитый поливинилпирролидон в комплексе с пероксидом водорода, и (ii) систему загустителей, содержащую диоксид кремния как первый загущающий агент и поперечносшитый поливинилпирролидон как второй загущающий агент.
Изобретение относится к области косметологии и представляет собой лечебно-косметическое средство для омоложения, увлажнения кожи, включающее стеарин, эмульсионный воск, глицерин дистиллированный, 1,2-пропиленгликоль, нипагин, нипазол, этиловый спирт, эфирные масла - мандарин, зверобой, подорожник, альпосомы, масло косточек винограда, масло зародышей пшеницы, а также биологически активную добавку: перламутровый компонент, полученный из створок речных двустворчатых моллюсков Unio pectorum и Anodonta.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству для лечения спаечной болезни брюшины. Средство для лечения спаечной болезни брюшины для приема вовнутрь, которое содержит водное извлечение из корневищ аира болотного, травы зверобоя продырявленного, корней солодки голой, полученное из корневищ аира болотного, травы зверобоя продырявленного, корней солодки голой, воды питьевой, взятое при определенном содержании компонентов.

Изобретение относится к композиции для личной гигиены для нанесения на кожу или волосы, содержащей комплекс хлорид X цинк и косметически приемлемую основу, где X является аминокислотой - лизин или аргинин, где комплекс хлорид X цинк имеет формулу ZnX2Hal2 или ZnX3Hal2, где Zn является двухвалентным ионом цинка, и Hal является хлорид-ионом, и где комплекс хлорид X цинк присутствует в количестве от 0,05 до 40% по массе композиции.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Композиция гербицида содержит водный настой натуральной хны в концентрации от 14 до 18% мас.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии, в частности к способу консервирования биологических материалов. Способ консервации биологических материалов включает иммобилизацию их на сухом носителе с последующим высушиванием.

Изобретение относится к средству для борьбы с грибковыми заболеваниями растений формулы где R1=Me, R2=Ph; R1=R2=Ph; R1=R2=OMe. 1 табл..

Изобретение относится к способу получения 3-[(фенилсульфанил)метил]пентан-2,4-диона формулы (1) Сущность способа заключается во взаимодействии смеси формальдегида и тиофенола с 2,4-пентандиом с участием катализатора NiCl2⋅6H2O при мольном соотношении формальдегид:тиофенол:2,4-пентандион:NiCl2⋅6H2O=1:1:1:(0,03-0,07) в смеси растворителей CHCl3-С2Н5ОН (1:1, об.), при комнатной температуре (~20°C) и атмосферном давлении в течение 6-8 ч.

Изобретение относится к устройствам для витрификации биообъектов. Автономное устройство для витрификации биообъектов с использованием криогенного хладагента имеет коаксиальную конструкцию, включающую цилиндрический корпус, внутри которого установлена цилиндрическая аксиально удлиняемая опора, конец которой соединен с цанговым зажимом, обеспечивающим фиксацию трубки контейнера с биообъектами, пусковую пружину, которая взаимодействует с цилиндрической опорой и обеспечивает перемещение контейнера с биообъектами в сосуд с криогенным хладагентом через его горловину, цилиндрический теплоизоляционный экран с подвижной крышкой, защитный дисковый экран, фиксируемый на наружных выступах цилиндрического корпуса, и расположенную в верхней части устройства управляющую кнопку.

Изобретение относится к криобиологии и медицине. Для получения мультипотентных стромальных клеток (МСК) из криозамороженных тканей фетоплацентарного комплекса (пуповины, плодной части плаценты, амниона) пуповину и плаценту, полученные в ходе операции кесарева сечения, в течение не более 24 часов транспортируют в культуральную лабораторию, где их нарезают на фрагменты толщиной не более 10 мм и выдерживают в течение 20-25 минут в криопротекторной среде на основе аутоплазмы, полученной из пуповинной крови, либо фосфатно-солевого буфера рН=7,4, дополненного тестированным человеческим альбумином до 15 г/л, содержащей 1,5 моль/л пропандиола и 0,1 моль/л сахарозы.
Изобретение относится к области медицины, преимущественно к нормальной и патологической анатомии, зоологии и эмбриологии. Для восстановления ранее фиксированных и бальзамированных анатомических препаратов используют 1-10%-ный раствор бензоата натрия.

Изобретение относится к области медицины, а именно к патологической анатомии. Для изготовления анатомического препарата полый орган или его фрагмент выделяют из эвисцерированного комплекса органов, промывают полость проточной водой, препарируют, после чего его полость заполняют универсальным водостойким клеем на основе акриловой водной дисперсии, например клеем «Момент монтаж», до тех пор, пока внешний рельеф полого органа, его консистенция и степень наполнения не будут соответствовать аналогичным прижизненным характеристикам.
Изобретение относится к области медицины, хирургии. Выполняют транзиторный забор комплекса органов брюшной полости и забрюшинного пространства путем эвисцерации с реплантацией в эксперименте на модели больного.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ стимулирования естественной защиты и индуцирования устойчивости к болезни, вызываемой Candidatus Liberibacter asiaticus, у цитрусовых растений (Huanglongbing), характеризующийся нанесением на растения соединения брассиностероида.

Изобретение относится к области медицины, а именно к трансфузиологии, и предназначено для заготовки тромбоцитов длительного хранения. Осуществляют отбор исходного тромбоцитного концентрата (ТК) с концентрацией 1×109/мл-1,5×109/мл, содержащих 40-70% тромбоцитов с гранулами и тромбоциты с адгезивной активностью 40-70%. Разделяют ТК на тромбоцитсодержащую часть и плазму центрифугированием. Готовят комбинированный криопротектор, содержащий 55% ДМСО и 5% декстран 40, разводя криопротектор плазмой до конечной концентрации ДМСО 10-15%. Ресуспендируют тромбоцитсодержащую часть разведенным криопротектором, который вводят в тромбоцитсодержащую часть по 1-3 мл с интервалами 1-3 мин до конечной концентрации ДМСО 5-7%. Замораживают суспензию тромбоцитов и плазму со скоростью 1-3°/мин при минус 80°С-минус 100°С и хранят их при минус 85°С-минус 196°С. Размораживают контейнеры нагреванием при 37-40°С в течение 2-10 мин. Ресуспендируют размороженные тромбоциты плазмой в соотношении 1:9 в течение 10 мин и хранят их при 20-24°С и постоянном перемешивании не более 4 часов до трансфузии. Использование изобретения позволяет повысить качество получаемых после размораживания криоконсервированных тромбоцитов. 6 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 2 пр.

Изобретение относится к физиологии, криобиологии и медицине, а именно к созданию раствора для консервирования клеточных взвесей. Раствор для консервирования клеточных взвесей содержит пектин каллуса раувольфии змеиной, глицерин, трилон Б и воду для инъекций. Раствор обеспечивает сохранность стабильно высокого процента физиологически активных ядерных клеток крови до 15 суток при температуре хранения -40°С. 2 табл., 1 пр.

Наверх