Антиалкогольное средство



Антиалкогольное средство
Антиалкогольное средство
Антиалкогольное средство
Антиалкогольное средство

 


Владельцы патента RU 2624482:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") (RU)

Изобретение относится к медицине и касается антиалкогольного средства, содержащего пептид молекулярной массой 6734 Да, созданный путем генно-инженерной (плазмидной) технологии. Изобретение обеспечивает снижение алкогольной мотивации и подкрепляющих свойств этанола за счет блокады специфических рецепторов орексина А в головном мозге. 3 пр., 2 ил., 3 табл.

 

Изобретение относится к медицине, к лекарственным средствам для лечения алкогольной зависимости.

Введение. Одной из важнейших социально значимых проблем современной медицины является разработка способов лечения алкогольной зависимости на основе определения патофизиологических и молекулярно-биологических основ ее развития. Возможность решения этой сложной задачи появилась с открытием полипептида орексина и системы орексин-содержащих нейронов, играющих важную роль в механизмах развития химической зависимости. Блокада восприятия сигналов, приходящих от орексин-содержащих нейронов к дофаминергическим клеткам вентральной области покрышки головного мозга, препятствует формированию химической зависимости. Разработка и применение новых эффективных препаратов, блокирующих восприятие сигналов, поступающих от орексин-содержащих нейронов, предположительно может подавлять алкогольную зависимость, корригируя патофизиологические механизмы ее развития.

Задачей настоящего исследования явилась разработка и изучение антиалкогольного средства на основе генно-инженерной (плазмидной) технологии.

Структурный анализ рецепторов орексина позволил осуществить сканирование пространственной конформационной структуры рецепторов к орексину A (Ox1) и орексину В (Ох2) с помощью Structural Biology Software Database. Изучена поверхность рецепторов, участвующая в связывании пептидов орексинов. С помощью программы AutoDock (The Scripps Research Institute) было создано несколько теоретических молекулярных пептидных структур, способных связываться с рецепторами ОХ1 и ОХ2 с афинностью, сравнимой с орексинами. С использованием программы 3D PSSM и процедуры Blast (www.ncbi.nlm.nih.gov) была отобрана структура, гомологичная существующим природным белкам и пептидам человека. Отбор структуры осуществлялся с использованием докинга - DockSearch, заключающегося в реализации процедуры геометрической стыковки двух молекул и работы с базой данных трехмерных структур молекул (в данном случае лигандов и рецепторов к орексинам) и програмного обеспечения GROMACS и HyperChem и оценки афинности взаимодействия созданных структур с рецепторами орексинов и их конкурентности с природными орексинами.

Применение генно-инженерной технологии позволило получить кандидатную рекомбинантную молекулу блокатора рецепторов орексина А (1-го типа), которая оказалась активной в отношении подавления алкогольной зависимости.

На фиг. 1 представлена структура заявляемого соединения 1, антагониста рецепторов орексина 1-го типа (OxR1).

Аминокислотная последовательность полученной пептидной структуры (SEQ ID No 1) представлена на фиг. 2.

Молекулярная масса заявляемого соединения составляет 6734 Да.

Фармакологическая часть

Фармакологические эффекты и специфическую активность пептидного антагониста рецепторов орексина А (соединения 1) изучали на крысах и мышах, используя его буферный раствор в форме 0,1%-ного раствора для закапывания в нос.

В экспериментах на крысах и мышах доказана безопасность соединения 1 при однократном и хроническом введении. Соединение 1 в диапазоне доз от 1 до 10 мг/кг, вводимых интраназально, существенно не влияло на поведение интактных крыс и мышей, не меняло их общего состояния, деятельности сердечно-сосудистой, пищеварительной, выделительной и центральной нервной систем. На фоне длительной алкогольной интоксикации (6 мес.) соединение 1 при интраназальном введении в дозе 0,1 мг/кг (20 мкг/крысу) обладало анксиолитическим, противострессорным и антиалкогольным действием, проявлявшимся нормализацией эмоционального и коммуникативного поведения животных, нарушенного хронической алкоголизацией. В методах оценки безусловных (первичных) подкрепляющих свойств (самостимуляции мозга) показано, что соединение 1, вводимое в желудочки мозга или внутриструктурно, проявляет антагонизм по отношению к психомоторным стимуляторам, таким как фенамин, в отличие от других антагонистов рецепторов орексина (SB-408124, классический антагонист рецепторов орексина 1-го типа). Также доказаны антиаддиктивные свойства соединения 1 и в тестах на условное (вторичное) подкрепление, когда интраназальное введение соединения 1 более чем вдвое уменьшает экспрессию и восстановление условной реакции предпочтения места, ассоциируемой с этанолом. Прямым доказательством антиалкогольного действия соединения 1 является уменьшение им потребления алкоголя в тесте свободного выбора между 10%-ным этанолом и водой после длительной (4 мес.) алкоголизации крыс. В качестве механизма антиалкогольного действия соединения 1 рассматривается изменение экспрессии мРНК орексинового рецептора 1-го типа в эмоциогенных структурах головного мозга (в частности, в гиппокампе, ответственном за формирование поведенческой реакции на контекстуальные стимулы, ассоциированные с алкоголем). Эти изменения, по-видимому, лежат в основе условнорефлекторных механизмов поддержания патологического влечения к алкоголю у длительно алкоголизированных животных. Результаты подтверждают перспективность выбора соединения 1 в качестве противоалкогольного средства.

Пример 1. Изучение условных подкрепляющих свойств соединения 1 в условнорефлекторной реакции предпочтения места этанола

Для выработки условной реакции предпочтения места (УРПМ) алкоголя у крыс использовали двухкамерную установку с гладким и решетчатым полами. В отличие от классической методики выработки УРПМ животных не подвергали адаптации к экспериментальной установке в течение нескольких первых дней. Во время выработки УРПМ крыс последовательно помещали в две камеры, разделенные между собой перегородкой на 30 минут с интервалом между посадками 1 ч в течение 4 дней. В течение 1 ч между посадками крысы содержались в общей клетке. Перед посадкой в 1-ую камеру крысы получали внутрибрюшинную инъекцию физиологического раствора, перед посадкой во 2-ую камеру животным внутрибрюшинно вводили этанол в дозах 0,75 г/кг. Контрольной группе во 2-ой камере вводили физиологический раствор. Для исключения влияния текстуры пола на выработку УРПМ на этанол животных одной экспериментальной группы разделяли на две подгруппы. Крысы 1-ой подгруппы первоначально помещались в отсек с решетчатым полом, 2-ой подгруппы - с гладким. Для оценки выработки УРПМ на этанол у животных на 5-й день эксперимента измеряли время нахождения в отсеках с различной текстурой пола в течение 15 минут в условиях беспрепятственного перемещения крыс в двухкамерной установке. Данные выражали как процент времени пребывания в отсеке, ассоциированном с введением алкоголя, к общему времени исследования. В контрольной группе животных за отсек, ассоциированный с введением алкоголя, принимали 2-ую камеру. Время пребывания животных в контрольной группе характеризовалось нормальным распределением и 95,5% величин укладывались в интервал от 30 до 70%. При введении алкоголя у крыс наблюдали значительный разброс времени пребывания в отсеке, ассоциированном с алкоголем, выходящий за пределы 70% и 30%. В последующих экспериментах использовали животных, которые проводили более 70% времени в отсеке, ассоциированном с алкоголем.

Влияние пептидного антагониста орексина соединения 1 на экспрессию (воспроизведение) УПРМ этанола оценивали у крыс на 6-ой день эксперимента, перед посадкой в камеру им интраназально вводили исследуемый антагонист орексина А. У животных определяли время пребывания в каждом из отсеков в течение 15 минут в условиях беспрепятственного перемещения крыс в установке. Влияние соединения 1 также оценивали на восстановление УРПМ этанола после 2-недельного угашения выработанной УРПМ. Для угашения УРПМ животных помещали в двухкамерную установку с беспрепятственным доступом в обе камеры пять раз в течение 2-недельного перерыва. На 15-й день после выработки УРПМ животным внутрибрюшинно вводили этанол в дозе 0,5 г/кг и определяли время нахождения в каждом отсеке в течение 15 минут в условиях беспрепятственного перемещения крыс в установке.

Интраназальное введение пептидного антагониста орексина соединения 1 в дозе 0,1 мг/кг (20 мкг/крысу) достоверно блокировало экспрессию УРПМ этанола на 41% (табл. 1). Восстановление УРПМ этанола после угашения также блокировалось антагонистом орексина соединением 1 0,1 мг/кг на 40%.

Таким образом, пептидный антагонист орексина соединение 1 участвует в механизмах патологического влечения к алкоголю и блокирует экспрессию и восстановление УРПМ этанола.

Пример 2. Влияние соединения 1 на алкогольную мотивацию в тесте свободного выбора между алкоголем и водой

Исследовали влияние интраназального введения соединения 1 в дозе 0,1 мг/кг на потребления 10%-ного алкоголя в тесте свободного выбора между алкоголем и водой у крыс со сформированной алкогольной зависимостью, получавших до этого 15%-ный алкоголь в качестве единственного источника жидкости в течение 4 месяцев. В эксперименте оценивали ежедневное потребление 10%-ного алкоголя, воды и общее потребление жидкости в миллилитрах. Препарат вводили ежедневно утром в дозе 0,1 мг/кг (20 мкг в 20 мкл) в течение 10 дней. Первоначально исследовали потребление алкоголя и воды у экспериментальных животных (10 дней), потом на фоне введения растворителя (контроль, 10 дней), после его отмены (10 дней), на фоне введения соединения 1 (10 дней) и после его отмены (10 дней).

Данные представлены в таблице 2.

Видно, что общее потребление жидкости в разных группах составило 31,5-38 мл (34±2). Длительная алкоголизация (4 мес.) привела к тому, что крысы потребляли 10%-ный этанол и воду приблизительно в равных объемах, тогда как в норме (без алкоголизации) предпочтение этанола, также как и предпочтение воды, регистрируется не чаще, чем в 9-10% случаев. Интересно отметить, что интраназальное введение растворителя (контроль) в течение 10 дней приводило к увеличению потребления воды в сравнении с алкоголем (с 15,74±1,37 мл до 22,90±2,84 мл). После отмены введения растворителя потребление этанола и воды выравнивалось.

Но более значительное уменьшение потребления этанола наблюдали после интраназального введения соединения 1 (0,1 мг/кг 10 дней). В этом случае уровень потребления этанола снизился с 16,32±1,31 мл до 10,16±0,63 мл (р<0,05), а потребление воды возросло с 18,21±2,54 мл до 22,64±1,28 мл.

Таким образом, интраназальное введение соединения 1 в дозе 0,1 мг/кг в течение 10 дней у крыс приводило к снижению потребления этанола в тесте свободного выбора между 10%-ным этанолом и водой.

Пример 3. Изучение влияния длительной алкоголизации и отмены алкоголя на функциональное состояние орексиновой системы в головном мозге (уточнение молекулярной мишени действия антагонистов орексина А)

В настоящей работе изучали экспрессию мРНК орексинового рецептора 1-го типа (к орексину А) в структурах мозга у крыс в условиях длительной алкоголизации и отмены алкоголя.

Животных подвергали полунасильственной алкоголизации 15%-ным раствором этанола в качестве единственного источника жидкости при свободном доступе к брикетированному сухому корму в течение 6 месяцев. Контролем служили 10 крыс, содержавшиеся на обычном водном режиме. Крыс декапитировали через 6 месяцев после хронической алкоголизации и на 1-й и 7-й дни после отмены алкоголя. Содержание мРНК орексинового рецептора 1-го типа определяли в фронтальной коре, гиппокампе и вентральной тегментальной области крыс методом обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией в режиме реального времени. Величину экспрессии орексинового рецептора 1-го типа в структурах мозга нормировали к уровню экспрессии гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы и рассчитывали в относительных единицах по отношению к величине экспрессии орексинового рецептора 1-го типа в группе интактных животных. Статистическую обработку полученных данных проводили при помощи метода однофакторного дисперсионного анализа с последующими множественными межгрупповыми сравнениями по критерию Ньюмана-Кейлса.

При хронической алкоголизации в течение 6 месяцев уровень экспрессии мРНК орексинового рецептора 1-го типа в фронтальной коре, гиппокампе и вентральной тегментальной области не изменялся. Отмена алкоголя вызвала изменения в содержании мРНК орексинового рецептора 1-го типа в гиппокампе. Уровень мРНК орексинового рецептора 1-го типа увеличивался в гиппокампе на 7-е сутки после отмены алкоголя по сравнению с контрольной группой и алкоголизированными животными. Уровень мРНК орексинового рецептора 1-го типа в фронтальной коре и вентральной тегментальной области на 1-е и 7-е сутки после отмены алкоголя не изменялся (табл. 3).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что орексиновая система мозга участвует в формировании патологической зависимости к алкоголю. Увеличение экспрессии мРНК орексинового рецептора 1-го типа после отмены алкоголя в гиппокампе, структуре, ответственной за формирование поведенческой реакции на контекстуальные стимулы, ассоциированные с алкоголем, возможно связано с условнорефлекторными механизмами поддержания патологического влечения к алкоголю у длительно алкоголизированных животных.

Антиалкогольное средство, содержащее пептид молекулярной массой 6734 Да, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID No 1, созданный путем генно-инженерной (плазмидной) технологии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу получения средства, обладающего седативной, противосудорожной и нейромодуляторной антиалкогольной активностью. Указанный способ включает экстрагирование растительного сырья - травы марьянника лесного 50% этанолом, методом реперколяции с равной загрузкой сырья, с законченным циклом в батарее из четырех перколяторов в соотношении сырье:экстрагент - 1:2, при настаивании на каждой ступени экстракции в течение шести часов, далее объединенные извлечения отстаивают, фильтруют, декантируют, упаривают до сухого остатка в ротационном вакуумном испарителе.

Изобретение относится к медицине, а именно к наркологии, и может быть использовано для профилактики похмелья. Для этого за 30-60 минут до приема алкоголя человек выпивает 100-250 мл питьевой воды, содержащей БАД «Ягель» в концентрации 0,7-1,3 мл/л.

Изобретение относится к медицине и касается применения биологически активного флавоноида 7-O-[6-O-(4-ацетил-α-L-рамнопиранозил)-β-D-глюкопиранозидо]-5-гидрокси-6-метокси-2-(4-метокси-фенил)-4Н-хромон-4-он (ацетилпектолинарин - АЦП) формулы I, выделенного из Linaria vulgaris Mill.

Изобретение относится к медицине и представлено фармацевтической композицией для лечения зависимости у человека. Композиция содержит два активных агента: соединение, обладающее антагонистической активностью в отношении 5-НТ2 рецепторов серотонина, выбранное из ципрогептадина; и соединение, обладающее антагонистической активностью в отношении альфа-1-норадренергических рецепторов, выбранное из празозина, альфузозина, теразозина, тамсулозина, силодозина и доксазозина.

Изобретение относится к соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, в котором R1, R5 независимо выбраны из Н; R2, R3 и R4 выбраны из Н и цикла А, причем один из R2, R3 или R4 обязательно представляет собой цикл А; цикл А представляет собой 6-членное моноциклическое или 10-членное бициклическое ароматическое кольцо, необязательно содержащее 1 гетероатом, представляющий собой N, при этом цикл А может быть необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из галогена, ОН, СООН, C1-С6-алкила, C1-С6-алкокси, -С(О)C1-С6-алкила, -NO2; цикл В представляет собой 5-6-членное неароматическое кольцо, необязательно содержащее 1 гетероатом, представляющий собой О, причем цикл В может быть необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из -C1-С6-алкила, -С(O)С1-С6-алкила, -C1-С6-алкокси; R6 выбран из Н или С1-С6-алкила, R7 представляет собой Н или -(Z)m-(D)p, где независимо друг от друга m=0-1, р=0-1, при этом не может быть m=р=0; Z выбран из С1-С6-алкила; D представляет собой 5-6-членное неароматическое кольцо, возможно содержащее один гетероатом N, причем цикл D может быть необязательно замещен одним заместителем, выбранным из С1-С6-алкила, C1-С6-алкокси.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой профилактическое и/или терапевтическое средство от похмельного синдрома, содержащее соединение формулы , где R1 представляет собой атом водорода, и R2 представляет собой атом водорода, или его сложный эфир, или его соль.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и касается нового применения известного вещества гидрохлорида N-2-адамантил-гексаметиленимина (гимантана) в качестве средства для снижения алкогольной мотивации при алкогольной зависимости.

Изобретение относится к медицине, а именно к физиологии и может быть использовано для устранения негативного последствия атрофии скелетных мышц, вызванной длительной алкогольной интоксикацией.

Предложено применение конъюгата глицина, иммобилизованного на частицах детонационного наноалмаза размером 2-10 нм, в качестве антиалкогольного средства для лечения и профилактики алкоголизма.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для предупреждения или лечения похмельного синдрома. Композиция для предупреждения или лечения похмельного синдрома, содержащая водный экстракт листьев лавра благородного {Laurus nobilis), спиртовой экстракт плодов опунции индийской (Opuntia ficus indica) и водный экстракт плодов шиповника Роксбурга (Rosa roxburghii) в качестве активных ингредиентов, взятых в определенном соотношении.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к офтальмологии, пластической хирургии и косметологии, и может быть использована для устранения ретракции верхнего и нижнего века при эндокринной офтальмомиопатии, развившейся при тиреотоксикозе или болезни Грейвса.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения вариантов плазминогена и плазмина. Получают вариант плазминогена, содержащий сайт активации и каталитический домен, в котором каталитический домен содержит замену валина на изолейцин в положении 1 каталитического домена плазмина человека или в положении, соответствующем таковому в каталитическом домене плазмина, отличном от плазмина человека, где указанный каталитический домен плазмина человека начинается с аминокислоты валин в положении 1, которая является той же аминокислотой валин, которая находится в положении 562 Glu-плазминогена человека с SEQ ID NO: 1.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения вариантов плазминогена и плазмина. Получают вариант плазминогена, содержащий в своем каталитическом домене замену глутаминовой кислоты на глутамин в положении 138 каталитического домена плазмина человека или в положении, соответствующем таковому в каталитическом домене плазмина, отличного от плазмина человека, где указанный каталитический домен плазмина человека начинается с аминокислоты валин в положении 1, которая является такой же аминокислотой валин, что встречается в положении 562 Glu-плазминогена человека с SEQ ID NO: 1.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, приемлемой для инъекции, содержащей анакинру в качестве активного соединения, а также ЭДТУ, Полисорбат-80, хлористый натрий, фосфат натрия, рН 6-7, маннит, в отсутствие цитрата.

Предложен бактериальный макромолекулярный комплекс для профилактики или лечения воспалительного ревматизма и остеоартрита. Комплекс продуцирован штаммом бактерий Bifidobacterium longum CNCM I-3994.

Изобретение относится к области медицины, а именно к нейробиологии, и может быть использовано для частичного восстановления активности нейронных сетей in vitro после гибели части функционально значимых нейронов под действием стресс-факторов.

Группа изобретений относится к области фармацевтики и молекулярной биологии и касается рекомбинантного химерного белка, связывающего VPAC2-селективный рецептор, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13 и имеющий N-концевой метионин и эластин-подобный полипептид на С-конце, который содержит по меньшей мере 60 повторов VPGXG, а также содержащих их фармацевтическую композицию.

Изобретение относится к биохимии. Описана молекула нуклеиновой кислоты для генетической терапии мукополисахаридозов.

Изобретение относится к области микробиологии и молекулярной генетики. Предложен комплекс рекомбинантных полипептидов для профилактики и лечения бактериальных инфекций, вызванных Streptococcus agalactiae и/или Streptococcus pyogenes.

Настоящие изобретения относятся к области ветеринарии и касаются иммуногенной композиции (варианты) и применения пептида рибосомального белка Р0 эктопаразитов. Охарактеризованная иммуногенная композиция содержит пептид рибосомального белка Р0 экстопаразитов, либо нуклеиновую кислоту, кодирующую такой полипептид.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для специфической пассивной профилактики вирусных инфекций бройлеров. Способ включает введение птице трансфер-фактора. Трансфер-фактор получают из лейкоцитов крови вакцинированных против одной или нескольких инфекций или переболевших ими цыплят или кур. Препарат вводят птице разного возраста аэрозольно мелкодисперсно из расчета одна доза на голову при экспозиции 20-25 минут. Аэрозоль готовят на дистиллированной воде с добавлением 10% глицерина к объему. Использование заявленного изобретения высокоэффективно для профилактики инфекционных болезней птиц и для повышения профилактического действия вакцин. 3 з.п. ф-лы, 2 табл., 3 пр.
Наверх