Способ количественного определения n-дифенилнитрозамина в мясных пробах пищевой продукции методом хромато-масс-спектрометрии

Изобретение относится к области пищевой промышленности и предназначено для определения N-дифенилнитрозамина в мясной продукции. Способ количественного определения N-дифенилнитрозамина в мясных пробах пищевой продукции методом хромато-масс-спектрометрии характеризуюется тем, что осуществляют пробоподготовку. К 5 г мясной пробы добавляют 10 мл метилата калия. Метилат калия получают предварительно путем смешивания гидроокиси калия с метанолом в массовом соотношении 1:4,9 соответственно. Производят последующий нагрев смеси пробы с метилатом калия при температуре 60-70°С в течение 2 ч. Затем смешивают ее с 10 мл гексана и подвергают центрифугированию в течение 20 мин при 4500 об/мин. Далее отделяют нижний слой и добавляют в него при интенсивном перемешивании воду до объема 45 мл. Смесь оставляют на выдержку при температуре 5-7°С в течение 12 ч и затем вновь центрифугируют в течение 20 мин при 4500 об/мин. Отделившийся при центрифугировании водный слой подвергают твердофазной экстракции (ТФЭ) на приборе ТФЭ, содержащем угольный картридж, при которой вначале производят промывку хлористым метиленом картриджа прибора ТФЭ, пропускают через него этилацетат с его задержкой в течение 30 с. Далее производят промывку водой. Затем загружают ранее полученный водный слой. Производят сушку картриджа в течение 20 мин. Осуществляют элюирование водного слоя с картриджа хлористым метиленом. Затем полученные элюенты анализируют методом хромато-масс-спектрометрии и с помощью градуировочного графика в режиме селективного ионного мониторинга определяют количество N-дифенилнитрозамина в мясной пробе. Заявленный способ позволяет быстро и точно определить N-дифенилнитрозамин в мясной продукции. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности, к санитарной токсикологии и может быть использовано для количественного определения N-дифенилнитрозамина в продуктах питания, а именно, в мясных продуктах, в мясных продуктах для детского питания (в консервах из мяса, консервах мясорастительных) и пр.

Нитрозамины обладают широким спектром токсического действия на организм человека. В первую очередь, их токсичность направлена на печень и почки, в результате чего происходит нарушение их функции и некрозы. При хранении пищевых продуктов происходит существенное повышение концентрации некоторых аминов, что может служить признаком их порчи. В связи с вышеизложенным, для решения проблемы канцерогенной безопасности пищи, необходимо усовершенствовать пищевые технологии, предупреждающие образование канцерогенных нитрозаминов в продуктах питания, особенно, детских, а также обеспечить их надежный контроль.

Известно, что, например, мясные консервы для детского питания представляют собой измельченное в различной степени мясо (говядину, свинину, баранину, телятину, мясо ягненка, кур, индеек и др.), к которому может быть добавлен соответствующий мясной бульон, смесь сливочного и растительного масла. Жировой компонент растительных консервов с мясом представлен растительными маслами, чаще всего кукурузным, соевым или смесью растительных масел, обеспечивающими обогащение консервов незаменимыми полиненасыщенными жирными кислотами (линолевой и линоленовой).

Из уровня техники известен способ хроматографического определения летучих аминов и нитрозаминов в пищевых продуктах (Авт. св. СССР №1259187), включающий экстракцию их, отгонку растворителя, растворение остатка в соляной кислоте, деление на нескольких аликвотных частей, при этом обрабатывают их, кроме одной, щелочью до рН 8-14, упаривают досуха и растворяют с последующим использованием раствора необработанной части в качестве анализируемого, а растворов щелочных частей - в качестве стандартных после добавления к ним стандартных соединений.

Однако, при упаривании пробы возможны потери нитрозаминов, т.к. они являются высоколетучими соединениями, что существенно будет влиять на надежность и точность получаемого результата.

Кроме того, указанным способом невозможно определить N-дифенилнитрозамин.

В статье (http://www.medved.kiev.ua/arh_nutr/art_2004/n04_2_12.htm) «К вопросу об определении n-нитрозаминов в пищевых продуктах», авторы: О.С. Зульфигаров, В.В. Юрченко и др., Институт экогигиены и токсикологии им. Л.И. Медведя, Киев, Украина, также указано на то, что первым этапом определения нитрозаминов является их выделение из анализируемых продуктов. Невысокие температуры кипения (меньше 200°С) и достаточная термическая стабильность нитрозаминов обусловили возможность применения для их выделения отгонки с водяным паром. Простота в исполнении, универсальность по отношению к самым разным пищевым продуктам, в том числе, и мясным, полнота извлечения обусловили наиболее широкое применение этого подхода. Затем из водных отгонов нитрозамины выделяют методом экстракции, наилучшим экстрагентом для этого оказался хлористый метилен, который и находит наибольшее применение. Данная схема выделения эффективна как для жидких проб, так и для твердых. Далее рекомендуется проводить дериватизацию соответствующих вторичных аминов 4-нитрофенилдиазонием. Полученные при этом производные достаточно гидрофобны и легко могут быть сконцентрированы, а затем разделены методом обращено-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Сущность данного известного метода заключается в том, что неподвижная фаза - это неполярная (гидрофобные силикагели с привитыми группами С4, С8, С18 и др.) фаза; подвижная фаза - полярная (смеси воды и полярных растворителей: ацетонитрила, метанола, тетрагидрофурана и др.) фаза. Удерживание веществ растет с увеличением их гидрофобности (неполярности). Чем больше содержание органического растворителя, тем выше элюирующая способность подвижной фазы.) Поскольку нитрофенилтриазены хорошо окрашены, чувствительность их детектирования на обычных, наиболее распространенных фотометрических детекторах, достаточно высока и составляет 2⋅10-7 моль/л.

Это позволяет определять нитрозамины в пищевых продуктах при их содержании на порядок ниже ПДК.

Важным обстоятельством является возможность применения данной известной методики для определения соответствующих вторичных аминов. Однако и этот способ не лишен недостатков, т.к.

1. много операций подготовки пробы к химическому анализу - перегонка с водяным паром затем экстракция органическим растворителем и получение производных нитрозаминов (дериватизация). Возможны большие потери целевых аналитов на этапах пробоподготовки, если нитрозамины в пробе содержатся в ультрамикроконцентрациях. Как результат, достаточно сложно получить достоверные данные по количественному содержанию нитрозаминов в пробе.

2. длительность проведения в серийных исследованиях, соэкстрагирование большого количества мешающих веществ, невысокая эффективность извлечения.

3. нет упоминания о том, что этим способом можно определить количество N-дифенилнитрозамина.

Госкомсанэпиднадзором России в 1993 г. была утверждена методика МУК 4.4.1.011-93 «Определение летучих N-нитрозаминов в продовольственном сырье и пищевых продуктах. Методические указания по методам контроля. - М.: Информационно-издательский центр Госкомсанэпиднадзора России, 1993. - 16 с, согласно которой проводят пробоподготовку, при этом к пробе (в т.ч. мясной) добавляют сульфат натрия и сульфат алюминия в массовом соотношении 1:1, далее подкисляют до рН 3 сульфаминовой и серной кислотой, добавляют гексановый раствор нитрозодипропиламина, далее производят дистилляцию путем перегонки с помощью водяного пара с получением дистиллята пробы. Дистиллят переносят в делительную воронку и нитрозамины экстрагируют свежеперегнанным хлористым метиленом 4-5 раз по 15 мл. Объединенные хлорметиленовые экстракты высушивают прокаленным сульфатом магния, отфильтровывают, осушитель промывают небольшим объемом хлористого метилена, объединенные фильтраты помещают в круглодонную колбу на 100-150 мл, снабжают дефлегматором (или воздушным холодильником), помещают в водяную баню и упаривают хлористый метилен до 5-7 мл выдерживанием при температуре бани 55-65°С. Выполняют определение N-нитрозаминов с помощью газохроматографического анализа.

Однако указанная Методика МУК 4.4.1.011-93. позволяет выполнять либо полуколичественный анализ (флуориметрический метод), либо количественное определение модифицированных нитрозаминов с помощью хемилюминисцентного (термоэнергетического) детектора. При выполнении процедуры дериватизации возможны потери целевых аналитов, если матрица обладает сорбционными свойствами, что существенно будет влиять на надежность и точность определения.

Кроме того, эта известная Методика отличается многостадийностью их хроматографического разделения и при этом обеспечивается лишь полуколичественное определение нитрозаминов, нижний предел определения составляет 1 мкг/кг продукта.

Кроме того, в ней нет упоминания о том, что этим способом можно определить N-дифенилнитрозамин.

Таким образом, из уровня техники не выявлены известные источники информации, в которых было бы описание способа количественного определения N-дифенилнитрозамина в мясных продуктах методом хромато-масс-спектрометрии, потому выбрать наиболее близкий аналог не представляется возможным.

Технический результат, достигаемый предлагаемым способом заключается в обеспечении точности и достоверности количественного определения N-дифенилнитрозамина методом хромато-масс-спектрометрии, за счет высокой полноты его извлечения из пробы и за счет применение в последующем системы твердофазной экстракции на этапе пробоподготовки.

Поставленный технический результат достигается предлагаемым Способом количественного определения N-дифенилнитрозамина в мясных пробах пищевой продукции методом хромато-масс-спектрометрии, согласно которому осуществляют пробоподготовку, согласно которой к 5 г мясной пробы добавляют 10 мл метилата калия, причем метилат калия получают предварительно путем смешивания гидроокиси калия с метанолом в массовом соотношении 1:4,9 соответственно; производят последующий нагрев смеси пробы с метилатом калия при температуре 60-70°С в течение 2 часов, затем смешивают ее с 10 мл гексана и подвергают центрифугированию в течение 20 минут при 4500 об/мин, далее отделяют нижний слой и добавляют в него при интенсивном перемешивании воду до объема 45 мл; смесь оставляют на выдержку при температуре 5-7°С в течение 12 часов и затем вновь центрифугируют в течение 20 минут при 4500 об/мин; отделившийся при центрифугировании водный слой подвергают твердофазной экстракции (ТФЭ) на приборе ТФЭ, содержащем угольный картридж, при которой вначале производят промывку хлористым метиленом картриджа прибора ТФЭ, пропускают через него этилацетат с его задержкой в течение 30 сек, далее производят промывку водой; затем загружают ранее полученный водный слой, производят сушку картриджа в течение 20 минут, осуществляют элюирование водного слоя с картриджа хлористым метиленом, затем полученные элюенты анализируют методом хромато-масс-спектрометрии и с помощью градуировочного графика в режиме селективного ионного мониторинга определяют количество N-дифенилнитрозамина в мясной пробе.

При хромато-масс-спектрометрии используют капиллярную колонку серии HP-FFAP 30 m ⋅ 0,250 mm ⋅ 0,250 μm длиной 30 метров, внутренним диаметром 0,250 мм и толщиной пленки неподвижной фазы 0,250 μm.

Указанный технический результат достигается за счет следующего.

Известные приемы и способы пробоподготовки такие как - экстракция пробы мясной пищевой продукции органическим растворителем, дистилляция с перегретым водяным паром, статический и динамический анализ равновесной паровой фазы не позволяют достичь высокой полноты извлечения, а, следовательно, - необходимой точности определений для реальной оценки содержания N-дифенилнитрозамина в пищевых продуктах на уровне гигиенического норматива, указанного в СанПиН 2.3.2. 560-96 на пищевые продукты питания. Вместе с этим следует указать, что даже норматив на N-дифенилнитрозамин отсутствует.

Для устранения влияния матричных эффектов на результаты хромато-масс-спектрометрического определения N-дифенилнитрозамина в предлагаемом способе при пробоподготовке выполняют очистку образцов мясной пищевой продукции от мешающих компонентов и жира реакцией переэтерификации путем алкоголиза (добавление одноатомного алканола - метанола в условиях щелочного катализа в присутствии гидроокиси калия для получения метилата калия), что обеспечивало увеличение полноты и селективности экстракционного извлечения аналита из образца.

Последующий нагрев вышеуказанной смеси пробы и метилата калия при температуре 60-70°С в течение 2 часов и добавление гексана выполняется с целью удаления из мясной пробы эфиров жирных кислот. Следующие операции предлагаемого способа приводят к следующему сценарию:

- нагрев в течение 120 минут при температуре 60-70°С обеспечивает перевод жирных кислот в метиловый эфир;

- добавление гексана, перемешивание и центрифугирование выполняется с целью разделения верхнего гексанового слоя, содержащего эфиры жирных кислот, и нижнего слоя, содержащего N-дифенилнитрозамин, глицерин, метанол.

- добавление воды в нижний слой, содержащий N-дифенилнитрозамин, глицерин, метанол, и выдержка в течение 12 часов необходимы с целью извлечения из смеси N-дифенилнитрозамина в водный слой, а выдержка в холодильнике при температуре 5-7°С необходима для того, что при этих температурах жир застывает и легко отделяется от водного слоя.

- по истечении 12 часов пробирку со смесью центрифугировали при 4500 об/мин в течение 20 минут, с целью удаления остатков мясной пробы из смеси, и водный слой пропускали через угольный картридж автоматической системы твердофазной экстракции.

Благодаря использованию в предлагаемом способе операции твердофазной экстракции (далее - ТФЭ) при заявленных режимах и используемых реагентах также была обеспечена полнота извлечения N-дифенилнитрозамина из мясной пробы.

С целью активации картриджа системы ТФЭ выполняется кондиционирование органическим растворителем - хлористым метиленом, затем осуществляется загрузка жидкого образца на картридж с помощью азота. Во время этого, на сорбенте адсорбируются аналиты, а матрица идет в слив. На этой стадии сорбент удерживает целевые соединения до этапа элюирования. Мешающие компоненты пробы полностью удаляются на следующей стадии промывки картриджа органическим растворителем - хлористым метиленом.

Предлагаемый способ реализуется следующим образом по трем этапам:

- пробоподготовка,

- выполнение ТФЭ,

- анализ полученных элюатов хромато-масс-спектрометрическим методом по градуировочному графику в режиме селективного ионного мониторинга.

1. Пробоподготовка.

При открытии, например, мясных консервов берут пробу мясопродукта в количестве 5 г (если мясная проба кусковая, то ее подвергают измельчению).

Указанную пробу смешивают с 10 мл метилата калия. Для получения последнего 6,5 г гидроокиси калия смешивают с 40 мл метанола.

Смесь пробы и метилата калия нагревают при температуре 60-70°С в течение 2 часов. По истечении 2 часов образуется метиловый эфир.

После этого нагрева смесь помещают в центрифужную пробирку объемом 50 мл добавляют 10 мл гексана, перемешивают и центрифугируют при 4500 об/мин в течение 20 минут.

Затем верхний гексановый слой, содержащий эфиры жирных кислот, удаляют дозатором. А в оставшийся нижний водный слой, содержащий N-дифенилнитрозамин, глицерин, метанол, добавляют воду до объема 45 мл, интенсивно встряхивают в течение 10 минут, и смесь оставляют на выдержку при температуре 5-7°С в течение 12 часов.

По истечении 12 часов пробирку со смесью центрифугируют при 4500 об/мин в течение 20 минут и водный слой, который будет верхним (а остатки мясной пробы в нижнем слое), пропускают через угольный картридж Coconut 6 см3 автоматической системы твердофазной экстракции.

2. Выполнение ТФЭ.

Вначале производят стадию кондиционирования - активацию угольного картриджа, для чего его промывают хлористым метиленом объемом 2 см3.

Затем через картридж пропускают растворитель - этилацетат, объемом 2,5 см3 с задержкой растворителя в течение 30 сек.

Для удаления остаточных количеств растворителей угольный картридж промывают водой объемом 2 см3.

Далее загружают ранее полученный дистиллят пробы - водный слой, объемом 70 см3 и производят сушку картриджа в течение 20 минут.

Осуществляют элюирование дистиллята пробы с картриджа хлористым метиленом объемом 4 см3.

3. Анализ полученных элюатов хромато-масс-спектрометрическим методом.

Полученные элюаты анализируют известным хромато-масс-спектрометрическим методом, устанавливая по хроматограммам количественное содержание N-дифенилнитрозамина.

Отработка оптимальных хромато-масс-спектрометрических параметров определения N-дифенилнитрозамина в образцах мясной пробы осуществлялась с использованием газовой хроматографии и масс-спектрометрии (далее - ГХ/МС) на газовом хроматографе Agilent 7890А (производство США) с масс-селективным детектором 5975С и квадрупольным масс-анализатором. Режим ионизации электронным ударом при 70 эВ.

Для количественного определения содержания N-дифенилнитрозамина выполняли хромато-масс-спектрометрический анализ стандартных растворов и на основе результатов измерений строили градуировочную зависимость в режиме селективного ионного детектирования (SIM) по характеристичным ионам соединения в диапазоне концентраций 0,002-0,016 мг/кг. Для этого в хромато-масс-спектрометрическом анализе в режиме селективного ионного мониторинга строится градуировочный график по выбранным ионам вещества и выполняется количественный анализ в режиме регистрации индивидуальных ионов (Agilent GC/MSD ChemStation - Agilent Technologies: H4043A, том 2, Учебное пособие).

В процессе экспериментальных исследований были изучены следующие капиллярные колонки различной длины и толщины пленки неподвижной фазы: DB-624, HP-FFAP, HP-Plot/U, HP-VOC.

Качественное разделение N-дифенилнитрозоамина с другими N-нитрозоаминами (N-диметилнитрозамин, N-метилэтилнитрозоамин, N-диэтилнитрозоамин, N-пирролидиннитрозоамин, N-морфолиннитрозоамин, N-дибутилнитрозоамин, N-дипропилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамин) с близкими физико-химическими свойствами было достигнуто на капиллярной колонке серии HP-FFAP 30 m ⋅ 0,250 mm ⋅ 0,250 μm длиной 30 метров, внутренним диаметром 0,250 мм и толщиной пленки неподвижной фазы 0,250 μm. Режимы хромато-масс-спектрометрических параметров представлены в таблице 1.

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, что в режимах 2 и 3 не наблюдалось достаточно эффективного разделения летучих N-нитрозаминов (такие результаты показала хроматограмма). Качественное разделение было достигнуто в режиме 1, который и был выбран для дальнейшей работы.

В качестве доказательства оптимальности этого режима, на рис. 1 приведена хроматограмма стандартного раствора разделения N-дифенилнитрозамина с другими N-нитрозаминами при оптимально подобранных условиях хромато-масс-спектрометрического анализа (режим 1 таблица 1), зарегистрированная по полному ионному току. Аббревиатры, указанные на рис. 1, означают следующее:

N-ДМНА-N - диметилнитрозамин

N-МЕНА - N-метилэтилнитрозамин

N-ДЕНА - N-диэтилнитрозамин

N-ДПНА - N-нитрозо-ди-N-пропиламин

N-ДБНА - N-нитрозо-ди-N-бутиламин

N-ПИПНА - N-нитрозопиперидин

N-ПИРНА - N-нитрозопирролидин

N-MOPHA - N-нитрозоморфолин

N-ДФНА - N-дифенилнитрозамин.

Для выбора оптимальных режимов и используемых реагентов предлагаемого способа были проведены лабораторные исследования по установлению необходимых марок картриджей в приборе ТФЭ, отработаны условия схем элюирования ТФЭ и дистилляции на стандартных образцах N-дифенилнитрозамина, полученных путем построения градуировочной зависимости.

Для построения градуировочной характеристики готовили серию растворов. Для этого применяли стандартные образцы.

1. Исходный раствор N-дифенилнитрозоамина готовят из смеси N-нитрозоаминов (в эту смесь входят все вышеперечисленные нитрозоамины включая нитрозодифениламин, т.е. всего 9 нитрозоаминов). В мерную колбу вместимостью 25 см3 дозатором добавляют метиловый спирт в объеме 10 см3, вводят микрошприцем 2 мм3 смеси N-нитрозоаминов (С=2 мг/см3). Массовая концентрация N-нитрозоаминов в исходном растворе составляет 0,16 мкг/см3. Срок хранения исходного раствора 5 часов.

2. Приготовление градуировочных растворов.

В навеску образца мясных консервов массой 5 г добавляют исходный раствор для градуировки в соответствии с таблицей 2.

3. Построение градуировочной характеристики

Градуировочные характеристики устанавливают на градуировочных растворах N-дифенилнитрозамина методом абсолютной градуировки. Приготовленные растворы хроматографируют на капиллярной колонке. На полученной хроматограмме определяют площади пиков молекулярных ионов компонентов и по средним результатам измерений по 5 концентрациям для градуировки строят градуировочную характеристику. Она выражает зависимость площади пика молекулярного иона N-дифенилнитрозоамина на хроматограмме (мВ - при автоматическом обсчете с использованием программно-аппаратного комплекса) от содержания (нг).

Для получения экстрактов необходимой чистоты для хромато-масс-спектрометрического анализа и установления достаточной степени концентрирования N-дифенилнитрозоамина, были апробированы сменные картриджи прибора ТФЭ, заполненные различными сорбентами, органические растворители для элюирования N-дифенилнитрозоамина с картриджей и изучены условия оптимальной схемы элюирования. Селективность проведения процесса ТФЭ достигнута подбором картриджа с соответствующей фазой.

Для этого апробированы следующие типы картриджей: угольный Coconut 6 мл; заполненные октадецилом Chromabond С18 на 100 и 500 мг; картриджы на полимерной основе Strata на 200 мг. Анализ полученных результатов показал, что на угольном картридже Coconut 6 мл при использовании экспериментальной схемы элюирования (режим 1 таблица 1) полнота извлечения для N-нитрозаминов: N-пирролидиннитрозамина и N-морфолиннитрозамина 100%, полнота извлечения N-дифенилнитрозамина составила 61,17%.

На следующем этапе были проведены исследования по отработке оптимальных условий процесса элюирования N-дифенилнитрозамина с угольного картриджа Coconut 6 мл автоматической системы твердофазной экстракции с применением различных растворителей. Для этого варьировали параметрами: объемами растворителей на стадии кондиционирования, объемами образца на стадии загрузки, временем сушки картриджа, объемом слива.

Отработанная оптимальная схема селективного элюирования включала несколько стадий и характеризуется следующими параметрами:

1. Стадия кондиционирования - активация картриджа хлористым метиленом объемом 2 мл, затем этилацетатом объемом 2,5 мл с задержкой растворителя в течение 30 сек. Для удаления остаточных количеств растворителей картридж промывали водой объемом 2 мл;

2. Стадия адсорбции целевых компонентов на картридже при загрузке пробы объемом 70 мл;

3. Сушка картриджа в течение 20 минут для удаления остаточных количеств образца;

4. Заключительная стадия - элюирование целевых аналитов с картриджа хлористым метиленом объемом 4 мл и продувка автоматической системы азотом в течение 2 минут.

Стандартный образец (объемом 70 см3) пропускали через картридж Coconut 6 см3 системы твердофазной экстракции по оптимальной схеме элюирования (режим 1 таблица 1).

Следующий этап исследований заключался в экспериментальной отработке условий и параметров подготовки образцов мясной пищевой продукции (например, консервы из мяса, мясорастительные) к химическому анализу N-дифенилнитрозамина.

Для увеличения полноты и селективности экстракционного извлечения N-нитрозодифениламина необходимо удаление жирового компонента. Для этого выполняли реакцию переэтерификации жиров биологического происхождения в метиловые эфиры путем алкоголиза (добавление одноатомного алканола в условиях щелочного катализа) и концентрирования N-нитрозодифениламина на картриджах автоматической системы твердофазной экстракции (ТФЭ).

Экспериментально отработаны условия и подобраны параметры подготовки проб пищевой продукции (консервы из мяса) для хромато-масс-спектрометрического анализа N-нитрозодифениламина. Результаты полноты извлечения N-нитрозодифениламина из образца мясных консервов при добавлении метилата калия объемом 6 и 10 мл представлены в таблицах 3 и 4 соответственно.

В результате щелочного катализа при добавлении к анализируемой пробе мясных консервов 10 мл метилата калия, полнота извлечения N-дифенилнитрозамина составила 99,94%. Потому это количество и рекомендовано при реализации предлагаемого способа.

Исследования стандартных образцов и проб мясной продукции (например, консервы из мяса, мясорастительные продукты) различных производителей на содержание N-дифенилнитрозамина выполняли методом хромато-масс-спектрометрии: газовый хроматограф Agilent 7890А (USA) с масс-селективным детектором 5975С и квадрупольным масс-анализатором. Режим ионизации электронным ударом при 70 эВ. Для исследований использовали капиллярную колонку серии HP-FFAP 30 m ⋅ 0,250 mm ⋅ 0,250 μm длиной 30 метров, внутренним диаметром 0,250 мм и толщиной пленки неподвижной фазы 0,250 μm.

Таким образом, предлагаемый способ имеет следующие преимущества:

- обеспечивает практически полное извлечение N-дифенилнитрозамина из исследуемой пробы (99,94%), что свидетельствует о точности и достоверности предлагаемого способа;

- позволяет значительно снизить нижний предел определения N-дифенилнитрозамина (до 0,002 мг/кг продукта), в то время как в известных способах этот показатель вообще не определялся.

1. Способ количественного определения N-дифенилнитрозамина в мясных пробах пищевой продукции методом хромато-масс-спектрометрии, характеризующийся тем, что осуществляют пробоподготовку, согласно которой к 5 г мясной пробы добавляют 10 мл метилата калия, причем метилат калия получают предварительно путем смешивания гидроокиси калия с метанолом в массовом соотношении 1:4,9 соответственно; производят последующий нагрев смеси пробы с метилатом калия при температуре 60-70°С в течение 2 ч, затем смешивают ее с 10 мл гексана и подвергают центрифугированию в течение 20 мин при 4500 об/мин, далее отделяют нижний слой и добавляют в него при интенсивном перемешивании воду до объема 45 мл; смесь оставляют на выдержку при температуре 5-7°С в течение 12 ч и затем вновь центрифугируют в течение 20 мин при 4500 об/мин; отделившийся при центрифугировании водный слой подвергают твердофазной экстракции (ТФЭ) на приборе ТФЭ, содержащем угольный картридж, при которой вначале производят промывку хлористым метиленом картриджа прибора ТФЭ, пропускают через него этилацетат с его задержкой в течение 30 с, далее производят промывку водой; затем загружают ранее полученный водный слой, производят сушку картриджа в течение 20 мин, осуществляют элюирование водного слоя с картриджа хлористым метиленом, затем полученные элюенты анализируют методом хромато-масс-спектрометрии и с помощью градуировочного графика в режиме селективного ионного мониторинга определяют количество N-дифенилнитрозамина в мясной пробе.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при хромато-масс-спектрометрии используют капиллярную колонку серии HP-FFAP 30 m⋅0,250 mm⋅0,250 μm длиной 30 м, внутренним диаметром 0,250 мм и толщиной пленки неподвижной фазы 0,250 μm.



 

Похожие патенты:
Группа изобретений относится к пищевой промышленности и может быть использована для определения свежести упакованного сырого мясного продукта в виде однородной массы без костей.
Изобретение относится к области прикладной биотехнологии. Способ гистологической оценки степени созревания мяса заключается в фиксации проб в формалине, получении микроскопических препаратов и их оценки по структуре миофибрилл.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения качества мяса птицы. Для этого осуществляют подготовку образца, получение цветового изображения с поверхности исследуемого образца, обработку цветовых характеристик изображения на компьютере и получение численных значений оптических характеристик, по которым судят о показателях качества мяса.

Изобретение относится к области ветеринарно-санитарной экспертизы и может быть использовано для исследования мясного сырья на трихинеллез в условиях убойных пунктов, специализированных лабораторий или охотничьих хозяйств.
Изобретение относится к микробиологии и касается способа окраски гистологических срезов при диагностике трихинеллеза. Сущность способа заключается в окрашивании гистологических срезов гематоксилином Эрлиха, для этого добавляют 2-3 капли 10% диметилсульфоксида, промывают в воде до посинения среза.

Изобретение относится к области мясной промышленности и предназначено для исследования мяса по показателю структуроформирования. Способ предусматривает измерение предельного напряжения сдвига θo, модуля упругости на сдвиг G и определение безразмерного показателя структуроформирования К как частного от деления предельного напряжения θo на сдвиг к модулю упругости на сдвиг G измельченного мяса говядины при переработке.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения остаточных количеств трифенилметановых красителей в мышечной ткани рыб. Сущность способа заключается в том, что производят извлечение аналитов из ткани смесью ацетонитрила и буфера с получением экстракта в результате центрифугирования, введение дихлорметана в полученный экстракт и перевод органической части экстракта в слой дихлорметана при перемешивании и центрифугировании с отделением надосадочного раствора.

Изобретение относится к рыбоводству, а именно к способу забора крови у рыб небольшой массы для последующего проведения физиолого-биохимических анализов. Для этого применяют дополнительные меры, основанные на стимулирующем воздействии на систему кровотока рыбы.

Изобретение относится к областям животноводства, экологии и ветеринарии, предлагается для использования в качестве прижизненного неинвазивного теста оценки степени содержания меди в мышечной ткани рыб.

Изобретение относится к области пищевой промышленности и предназначено для экспресс-контроля качества мяса и для классификации мяса и мясного сырья по группам PSE, DFD и NOR.

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно, к определению анатомо-морфологических дефектов зерна или семян зерновых культур с помощью рентгенографии.

Изобретение относится к области исследования и анализа технологических сыпучих материалов, в т.ч. пищевых, характеризующихся насыпной плотностью.

Изобретение относится к пищевой промышленности хлебобулочных и кондитерских изделий. Способ предусматривает использование детектирующего устройства «электронный нос» на основе массива из 8 пьезосенсоров с базовой частотой колебаний 10-15 МГц, электроды которых модифицируют покрытиями, чувствительными к спиртам, углекислому газу, для чего на электроды наносят пленки из ацетоновых и толуольных растворов, а также из хлороформной суспензии углеродных нанотрубок с общей массой каждого покрытия после удаления растворителя 4–10 мкг; регистрируют в режиме реального времени сигналы массива пьезосенсоров в виде площади «визуального отпечатка» (S(τ)); для этого взвешивают 2 пробы сухих пекарных дрожжей, переносят анализируемые пробы в пробоотборники, добавляют предварительно нагретую до 37 °С дистиллированную воду и перемешивают получившиеся растворы, далее измерения проводят следующим образом: через 5 мин газовым шприцем отбирают равновесную газовую фазу над одной пробой водной суспензии дрожжей, вкалывают в ячейку детектирования и фиксируют в течение 1 мин сигналы пьезосенсоров и S1(5), после очистки ячейки детектирования и пьезосенсоров в течение 1-2 мин повторно через 5, 10 и 15 мин отбирают по 1 см3 РГФ и фиксируют S1(10), S1(15), S1(20), через 10 минут от момента перемешивания проб во второй пробоотборник с водной суспензией дрожжей вводят раствор сахарозы, через 5 и 10 мин отбирают 1 см3 РГФ над пробой, фиксируют сигналы массива сенсоров и S2(15), S2(20) и рассчитывают изменения площадей «визуальных отпечатков» сигналов массива сенсоров для 15-й и 20-й минуты измерения (∆S(15) = S2(15) – S1(15), ∆S(20) = S2(20) – S1(20)), отражающие различия в общем содержании летучих веществ в РГФ над пробами при активации сухих дрожжей водой и сахарозой; для оценки качества сухих дрожжей рассчитывают показатель качества дрожжей (ПКД) как разность площадей «визуальных отпечатков» на 20-й и 15-й минуте измерения (ПКД = ∆S(20) - ∆S(15)), отражающий изменение содержания легколетучих веществ в РГФ над пробой дрожжей в процессе активации их сахарозой, если ПКД меньше 0 ± 50, делают вывод о низком качестве дрожжей.

Группа изобретений относится к области контроля качества, а именно к применению анализа изображений для контроля общего качества при динамическом производстве. Способ мониторинга качества множества перемещающихся пищевых продуктов в системе динамического производства, основан на оценке окраски пищевого продукта.

Изобретение относится к медицинской токсикологии, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в детских кашах как молочных, так и простых.

Изобретение относится к области контроля в пищевой промышленности и может быть использовано при отбраковке сельскохозяйственной продукции. Для этого определяют электрофизические параметры (например, электропроводность) или содержание ионов (например, ионов водорода, нитрат-ионов) с использованием универсального электролитического ключа, сотоящего из двух разовых стерильных шприцов со стандартными электродами, заполненных насыщенным раствором хлорида калия и соединенных с иглами, втыкаемыми в исследуемые объекты.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к области гигиенической безопасности объектов пищевого назначения. Предложен способ определения безопасности пищевых ингредиентов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека.
Изобретение относится к технологии контроля качества консервированных продуктов. Способ предусматривает осмотр, санитарную обработку, проверку герметичности и деление консервов на две части, одну из которых термостатируют при температуре -18±2°С в течение 1-2 часов, а оставшуюся часть термостатируют при температуре 70±5°С в течение 5 минут.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для изучения физико-механических свойств корнеклубнеплодов и определения уровня повреждаемости клубней картофеля при оптимизации работы картофелеуборочных машин, а также для оценки механических повреждений при селекции сортов картофеля, предназначенных для механизированного возделывания.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения синтетического пищевого красителя кармуазина (азорубина, Ε 122) в соках. Для этого определяют количество кармуазина в соках методом микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии с многоканальным УФ-спектрофотометрическим детектированием.

Изобретение относится к оперативному контролю скрытой и явной зараженности насекомыми зерновой насыпи и может быть использовано при исследовании качества партий продовольственного зерна, предназначенных для хранения в зерноперерабатывающей промышленности и семеноводстве. Над поверхностью зерновой массы на расстоянии от 5 до 50 см от поверхности под углом не более 20 градусов устанавливают тепловизионное устройство с чувствительностью ±0,1°С и длиной волны 2-12 мкм с возможностью осуществления макросъемки. Затем измеряют температуру поверхности зерновой массы, которая далее облучается волнами высокой частоты с частотой излучения 2450±50 МГц. После чего осуществляют повторную тепловизионную съемку поверхности зерновой массы. Полученные термографические данные передают на компьютер, обрабатывают и анализируют при помощи программного обеспечения, позволяющего установить расположение минимальной и максимальной температуры на поверхности зерновой массы. При разности температур поверхности зерновой массы и тел насекомых-вредителей не менее 0,5°С и по величине разности указанных температур определяют место и степень зараженности насекомыми-вредителями. Обеспечивается повышение точности, надежности и достоверности оперативного контроля зараженности насекомыми-вредителями партий зерновой массы. 2 ил.

Изобретение относится к области пищевой промышленности и предназначено для определения N-дифенилнитрозамина в мясной продукции. Способ количественного определения N-дифенилнитрозамина в мясных пробах пищевой продукции методом хромато-масс-спектрометрии характеризуюется тем, что осуществляют пробоподготовку. К 5 г мясной пробы добавляют 10 мл метилата калия. Метилат калия получают предварительно путем смешивания гидроокиси калия с метанолом в массовом соотношении 1:4,9 соответственно. Производят последующий нагрев смеси пробы с метилатом калия при температуре 60-70°С в течение 2 ч. Затем смешивают ее с 10 мл гексана и подвергают центрифугированию в течение 20 мин при 4500 обмин. Далее отделяют нижний слой и добавляют в него при интенсивном перемешивании воду до объема 45 мл. Смесь оставляют на выдержку при температуре 5-7°С в течение 12 ч и затем вновь центрифугируют в течение 20 мин при 4500 обмин. Отделившийся при центрифугировании водный слой подвергают твердофазной экстракции на приборе ТФЭ, содержащем угольный картридж, при которой вначале производят промывку хлористым метиленом картриджа прибора ТФЭ, пропускают через него этилацетат с его задержкой в течение 30 с. Далее производят промывку водой. Затем загружают ранее полученный водный слой. Производят сушку картриджа в течение 20 мин. Осуществляют элюирование водного слоя с картриджа хлористым метиленом. Затем полученные элюенты анализируют методом хромато-масс-спектрометрии и с помощью градуировочного графика в режиме селективного ионного мониторинга определяют количество N-дифенилнитрозамина в мясной пробе. Заявленный способ позволяет быстро и точно определить N-дифенилнитрозамин в мясной продукции. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 1 пр.

Наверх