Способ регенерации нервных волокон кровеносных сосудов

Авторы патента:

Андреев Сергей Александрович (RU)

Челышев Юрий Александрович (RU)

Саматошенков Игорь Валерьевич (RU)

C12N15/861 - аденовирусные векторы

A61P9/10 - для лечения ишемических или атеросклеротических заболеваний, например антиангинозные средства, коронарные вазодилататоры, средства для лечения инфаркта миокарда, ретинопатии, цереброваскулярной недостаточности почечного артериосклероза

A61K48/00 - Лекарственные препараты, содержащие генетический материал, который включен в клетки живого организма для лечения генетических заболеваний; для генной терапии

Владельцы патента RU 2682160:

Саматошенков Игорь Валерьевич (RU)

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ регенерации нервных волокон кровеносных сосудов генным стимулированием ангиогенеза. В дистальную часть икроножной мышцы крысы в область ишемии вводят в 60 мкл NaCl комбинацию Ad-VEGF + ANG + GDNF с количеством вирусных частиц 2⋅10¹⁰. Изобретение обеспечивает эффективное лечение хронической ишемии нижних конечностей, диабетической ангиопатии, полинейропатии различного генеза.

Изобретение относится к медицине, касается стимулирования ангиогенеза и может быть использовано в сердечно-сосудистой хирургии для лечения ишемии нижних конечностей с использованием комбинации генов, кодирующих синтез проангиогенных и нейротрофических факторов.

В настоящее время ишемия, в частности хроническая ишемия нижних конечностей, лечится медикаментозным и оперативным путем, однако ни один из применяемых в практической медицине методов в полной мере не устраняет основную причину и не приводит к полному восстановлению микроциркуляции пораженной ткани.

Известно, что при сахарном диабете поражаются сосуды различного калибра, тем самым усиливая процессы атеросклероза, так как часто эти процессы имеют место у одного и того же пациента. В многочисленных исследованиях описано состояние нервных волокон и капилляров в области ишемии при диабете первого типа. В последнее время по данным научной литературы и статей значительная роль в ангиогенезе отводится нейротрофическим факторам, и, в частности, GDNF. В исследовании [Cen et al., " Denervation in femoral artery-ligated hindlimbs diminishes ischemic recovery primarily via impaired arteriogenesis" 2016 Chinese Medical Journal, February 5, 2016, Volume 129, P. 313-319] было выявлена роль денервации в ангиогенезе. Денервация лигированной бедренной артерии в задней конечности ухудшает постишемическое восстановление кровотока из-за нарушения перфузии. Возможными механизмами нарушенной перфузии являются более низкое число коллатералей, более низкая плотность капилляров и, скорее всего, более узкий просвет. Это исследование иллюстрирует важную роль периферических нервов в артериогенезе с использованием моделированной комбинированной ишемии с денервацией в задней конечности. В исследовании [Diao et al.,"Effects of denervation on angiogenesis and skeletal muscle fiber remodeling of ischemic limbs" Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2015 Mar 3; 95 (8): P. 601-605] животные были разделены на 3 группы: контроль, ишемия задней конечности, ишемия+денервация. Оцененные на 28 сутки результаты выявили, что ишемические повреждения, заключающиеся в уменьшении индекса пролиферации эндотелиальных клеток, капиллярной плотности, увеличение индекса секреции NGF, увеличения индекса секреции VEGF были более выраженные в группе ишемия + денервация по сравнению с группой ишемии, что свидетельствует о роли нервных волокон при ишемии.

Таким образом, была показана важная роль нервных волокон в процессе постишемического восстановления кровотока, что утверждает во мнении о необходимости регенерации нервных волокон для более эффективного стимулирования ангиогенеза.

В процессе изучения патентной информации были найдены изобретения, касающиеся проблем ангиогенеза и восстановления нервной ткани. Известен патент РФ на изобретение №2517117 "Способ стимулирования регенерации нерва с помощью наноконструктурированного матрикса и генетических конструкций", однако указанное изобретение относится к регенерации исключительно нерва, и не имеет отношения к росту сосудов.

Известны также изобретения "Способ получения индуцированных стволовых клеток, перепрограммированных из клеток, не являющихся нервными с использованием HMGA2 [см. патент РФ №2646099,опубл. 01.03.2018, БИ №7, МПК C12N 5/0797] и "Система и способ определения места расположения и идентификации функциональных нервов, иннервирующих стенки артерий" [см. патент РФ №2638438, опуб.13.12.2017, БИ №36, МПК А61В 18/14].

Однако эти изобретения прямо не связаны с регенерацией нервных волокон кровеносных сосудов.

Известны также "Композиция и способ для регуляции развития сосудов" [см. патент РФ №2365382, опуб. 27.08.2009, БИ №24, МПК А61К 39/395, А61Р 35/00, 17/00], предусматривающий введение индивидууму антагониста EGFL7-антагониста фактора роста клеток эндотелия сосудов VEGF. Однако данный способ используется для подавления ангиогенеза, а не его стимулирования. Таким образом, более близких аналогов предлагаемого изобретения обнаружено не было.

Задачей предлагаемого изобретения является создание способа, который бы помимо стимулирования ангиогенеза путем добавления ангиогенных факторов (VEGF+ANG), так же оказывал свое действие путем регенерации нервных волокон кровеносных сосудов (nervi vasorum), эффективно стимулируя ангиогенез и создавая устойчивые функциональные кровеносные сосуды.

Поставленная задача решается способом регенерации нервных волокон кровеносных сосудов генным стимулированием ангиогенеза, заключающийся во введении в область ишемии комбинации генов, кодируемых аденовирусом (Ad) Ad-VEGF + ANG + GDNF, причем в дистальную часть икроножной мышцы вводят 60 мкл. NACl, содержащего комбинацию Ad-VEGF + ANG + GDNF, с количеством вирусных частиц 2*10¹⁰.

Заявляемый способ иллюстрируется следующими исследованиями: исследование проведено на 60 крысах-самцах линии Wistar массой 220-280 г. Все вмешательства соответствовали правилам, утвержденным локальным этическим комитетом Казанского медицинского университета. В экспериментах использовали аденовирусный вектор (Ad) с встроенной экспрессионной конструкцией, несущей комбинацию генов сосудистого эндотелиального фактора роста 165 (VEGF 165) + ангиогенин (ANG) + глиальный нейротрофический фактор (GDNF) - Ad-VEGF + ANG + GDNF. Крыс наркотизировали путем внутрибрюшинной инъекции хлоралгидрата (80 мг/мл, 0,4 мл на 100 г, Sigma). Ишемию задней конечности создавали путем наложения на бедренную артерию, непосредственно у места отхождения от подвздошной артерии, двух лигатур. Участок между лигатурами рассекали. После операции животные получали инъекцию по 1 мл разведенного в физиологическом растворе цефтриаксона в мышцу бедра на контралатеральной конечности. Срок ожидания хронической ишемии составил 14 дней с момента операции. Спустя 14 дней крысы были разделены на 3 группы. Животным первой группы (n=20) вводили Ad-VEGF + ANG без добавления GDNF в 60 мкл. NaCl в дистальную часть икроножной мышцы. Животным второй группы (n=20) вводили 60 мкл. NaCl с комбинацией генов Ad-VEGF + ANG + GDNF, в том же объеме и в те же точки. Животным третьей, контрольной, группы (n=20) инъецировали физиологический раствор в том же объеме и в те же точки. Забор биоматериала осуществляли на 14 сутки после введения генного материала. Для оценки результата были произведены следующие исследования: иммуногистохимическое исследование биоматериала для оценки количества кровеносных сосудов, имеющих иммунопозитивное окрашивание против CD31, С034-антигенов.

Результаты ИГХ следующие: по количеству иммунопозитивных клеток на CD 31 группа Ad-VEGF + ANG + GDNF показала в 3,3 увеличение количества сосудов по сравнению с группой Ad-VEGF + ANG, и в 4,1 раз по сравнению с контролем, в 3,6 раза по количеству иммунопозитивных клеток на CD 34 группа Ad-VEGF + ANG + GDNF больше по сравнению с группой Ad-VEGF+ANG и в 4,7 больше по сравнению с группой контроля.

По сравнению с терапией, предполагающей введение комбинации из двух генов (VEGF+ANG), введение GDNF стимулирует ангиогенез, создавая дополнительные функциональные сосуды и тем самым значительно усиливая перфузию ишемизированной ткани. Данный способ технически прост, доступен и может быть воспроизведен в иной лаборатории. Результаты данного изобретения при широком внедрении в практическую медицину позволят эффективнее лечить такие заболевания как хроническая ишемия нижних конечностей, диабетическая ангиопатия, также полинейропатия различного генеза.

Способ регенерации нервных волокон кровеносных сосудов генным стимулированием ангиогенеза, заключающийся в введении в область ишемии комбинации генов, кодируемых аденовирусом (Ad) Ad-VEGF + ANG + GDNF, причем в дистальную часть икроножной мышцы крысы вводят в 60 мкл NaCl комбинацию Ad-VEGF + ANG + GDNF с количеством вирусных частиц 2⋅10¹⁰.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы доставки защитной изоформы ApoE и кодирующей ее нуклеиновой кислоты в центральную нервную систему млекопитающего.

Векторы, кодирующие фактор жизнеспособности колбочек, полученный из палочек // 2664673

Группа изобретений относится к области медицины. Предложена нуклеиновая кислота, способствующая выживаемости фоторецепторов, содержащая последовательность нуклеотидов, которая кодирует белок RdCVF человека, и вторую последовательность нуклеотидов, которая кодирует сигнальную последовательность Igk, функционально связанную с последовательностью нуклеотидов, кодирующей белок RdCVF человека, где последовательность, кодирующая RdCVF человека, содержит перекодированную последовательность нуклеотидов.

Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины // 2663470

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ стимулирования ангиогенеза, в котором в область ишемии вводят трансдуцированные комбинацией Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарные клетки крови пуповины.

Векторы для экспрессии простатоассоциированных антигенов // 2650860

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению вектора экспрессии, содержащего (а) нуклеотидную последовательность С68 и (б) мультиантигенную конструкцию ДНК, кодирующую иммуногенные полипептиды простатоассоциированных антигенов (РАА), что может быть использовано в медицине.

Условно реплицирующий аденовирус // 2642293

Предложенное изобретение относится к области биотехнологии. Предложен рекомбинантный аденовирус для обнаружения раковых клеток или диагностики рака, содержащий репликативную кассету, маркерную кассету, ген, который кодирует связывающий CD46 фибриллярный белок.

Условно реплицирующий аденовирус // 2642293

Генная терапия нейродегенеративных нарушений // 2603740

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан самокомплементарный аденоассоциированный вирусный вектор для лечения нарушений двигательных нейронов, таких как спинальная мышечная атрофия, боковой амиотрофический склероз, спинобульбарная мышечная атрофия, спиноцеребеллярная атаксия, первичный латеральный склероз и травматическое повреждение спинного мозга.

Улучшенные способы очистки векторов на основе рекомбинантного aav // 2588387

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан способ очистки векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV).

Модификация рекомбинантного аденовируса иммуногенными эпитопами белка circumsporozoite плазмодия // 2585228

Настоящее изобретение относится к модификациям белков аденовирусов с целью усиления иммунного ответа на трансген рекомбинантного аденовируса и преодоления предсуществующего иммунитета к аденовирусам.

Новая постоянная линия клеток человека // 2569181

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложен способ получения постоянной линии клеток-амниоцитов человека, включающий трансфекцию зародышевых клеток-амниоцитов человека молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую продукты генов аденовирусов Е1А и Е1В, причем указанную последовательность нуклеиновой кислоты получают из серотипа 5 аденовируса человека, и последующую трансфекцию постоянной линии клеток-амниоцитов человека, полученной на первом этапе, молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую большой SV40 Т-антиген.

Способ стимуляции неоваскулогенеза у больных с субкритической ишемией конечности на фоне хронических облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей с окклюзией дистального русла // 2681511

Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии. Определяют пальпаторно локализацию медиального мыщелка большеберцовой кости.

Аналоги гамма-аминомасляной кислоты (гамк) для лечения боли и других заболеваний // 2679407

Изобретение относится к новому соединению формулы (1) и его энантиомеру. Соединение обладает свойствами аффинного связывания с субъединицами α2δ потенциально-зависимых кальциевых каналов и может быть использовано при лечении нейропатической боли, в частности головной боли и мигрени, в лечении заболеваний центральной нервной системы и/или периферической нервной системы, например, выбранных из эпилепсии, ишемического цереброваскулярного заболевания, инсульта, церебральных новообразований, болезни Альцгеймера, болезни Пика, болезни Хантингтона, деменции, болезни Паркинсона и других.В формуле (1) R1 представляет собой С1-4 алкильную группу,R2 представляет собой или иR3 представляет собой водород или С1-4 алкильную группу.

Способ реабилитации больных с ишемической болезнью сердца // 2679405

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, физиотерапии и курортологии, и может быть использовано для восстановительного лечения больных с ишемической болезнью сердца (ИБС).

Способ лечения больных атеросклерозом сосудов шеи и сосудов органов средостения // 2678967

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лимфологии, и может быть использовано для лечения больных атеросклерозом сосудов шеи и сосудов органов средостения.

Способ реабилитации больных с ишемической болезнью сердца // 2678579

Внутренние соли тиазола, способы их получения и их применение // 2678306

Изобретение относится к соединению формулы I , где n равен 1. Соединение формулы I получают путем растворения внутренней соли 3-метилкарбонилокси-4-метилтиазола в метаноле, затем по каплям добавляя этилацетат и оставляя смесь стоять для получения монокристаллов.

Композиции на основе метилциклодекстринов для лечения и/или предупреждения заболеваний путем повышения уровня hdl-холестерина // 2677889

Группа изобретений относится к фармацевтическим композициям, которые обеспечивают возможность повышения уровня HDL-холестерина у индивида. Фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере один метилциклодекстрин со степенью молярного замещения от 0,05 до 1,5 для лечения или предупреждения заболеваний, которые можно лечить или предупреждать с помощью повышения уровня HDL-холестерина.

Средство, обладающее апоптоз-ингибирующей активностью // 2677877

Изобретение относится к области медицины и биологии и представляет собой новое средство, обладающее апоптоз-ингибирующей (антиапоптотической) активностью. Средство может быть использовано для коррекции состояний, связанных с повышением уровня апоптоза клеток (окислительный стресс, ишемические повреждения), а также в качестве ингибитора апоптоза в культурах клеток in vitro.

Средство для сдерживания гибели нейронов при ишемическом инсульте головного мозга и способ клеточно-опосредованной генной терапии ишемического инсульта головного мозга средством сдерживания гибели нейронов при ишемическом инсульте головного мозга // 2676701

Изобретение относится к области медицины и предназначено для клеточно-опосредованной генной терапии ишемического инсульта. Терапевтическую эффективную дозу генетического материала, состоящего из гена сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF, гена глиального нейротрофического фактора GDNF и гена нейрональной молекулы адгезии NCAM, непосредственно вводят путем интратекальной инъекции в течение 4-х часов после наступления ишемического инсульта головного мозга.

Кристаллическая форма азолбензольного производного // 2675854

Изобретение относится к кристаллу 2-[4-(2,2-диметилпропокси)-3-(1H-1,2,3,4-тетразол-1-ил)фенил]-4-метил-1,3-тиазол-5-карбоновой кислоты (кристаллическая форма A), характеризующемуся по меньшей мере одним из (i)-(iii): (i) его спектр порошковой рентгеновской дифракции имеет характерные пики с дифракционными углами 2θ (±0,5°) = 7,2°, 11,3°, 15,9°, 17,9°, 20,8°, 22,3°, 23,1°, 23,8°, 24,3° и 28,6°; (ii) его спектр порошковой рентгеновской дифракции имеет структуру, изображенную на фиг.

Терапевтический агент, применяемый при пневмофиброзе // 2678968

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу уменьшения продуцирующих внеклеточный матрикс клеток в легких или подавления увеличения продуцирующих внеклеточный матрикс клеток в легких (варианты) и к композиции для уменьшения продуцирующих внеклеточный матрикс клеток в легких или подавления увеличения продуцирующих внеклеточный матрикс клеток в легких.