Способ микродиализа
Союз Советских
Социалистических
Республик
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ п>775695 (61) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 210878 (21) 2669602/28-13 с присоединением заявки Мо (23) Приоритет—
Опубликовано 301080. Бюллетень Йо 40 (51)М. Кл 3
G 01 N 33/48
Государственный комитет
СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 66. 068 (088. 8) Дата опубликования описания 301080 (72) Авторы изобретения
В. П. Демушкин и Н. M. Шалина (71) Заявитель Московский оРдена Ленина и оРдена ТРУдового Красного
Знамени государственный университет им. М.В.ЛомонОсова (54) СПОСОБ МИКРОДИАЛИЗА
Изобретение относится к способам химического разделения веществ и может быть применено в химии, биохимии, медицине, физиологии.
Известен способ микродиализа путем помещения диализуемой жидкости в емкость иэ пористого материала с последующей инкубацией.
Однако известный способ является трудоемким и обладает недостаточной воспроиэводимостью.
Целью изобретения является упрощение способа. а
Эта цель достигается тем, что в 15 качестве пористого материала используют 10 — 20%-ный полиакриламидный гель, содержащий акриламид и бисакриламид в соотношении 40 — 81:1 — 2,5, который инкубируют в диалиэуемом бу- 20 фере в течение 2 — 12 ч, а затем проводят инкубацию диалиэуемой жидкости в течение 2 — 6 ч.
Пример 1. Готовят раствор
1, для этого берут 40,8 r акриламида и 1,1 г бисакриламида, растворяют в 200 мл 20%-ного раствора сахаровы.
Готовят раствор 2. Берут 0,8 M
Трис-НС1 буфер РИ 7,0 на 20%-ном растворе сахаровы. 30
Готовят раствор 3. 2,2 мл исходного раствора ТЕМЕЛа растворяют в
20 мл 20%-ного раствора са:арозы.
Готовят раствор 4. 1%-ный раствор персульфата натрия на 20%-ном растворе сахарозы.
Готовят 10%-ный гель путем смешивания 1,47 мл раствора 1, 1,47 мл раствора 2, 0,03 мл раствора 3 и
0,03 мл раствора 4.
Смесь быстро вакуумируют в течение 1,5 — 2,0 мин, разливают по
100 мкл в лунки серологической пластины и сверху заливают по 100 мкл метилцеллюлоэы. Полимеризация геля проходит 15 мин. Гель вынимают из лунок пластины, промывают водой в те чение 2 ч в стакане, периодически меняя воду, затем промывают буфером и оставляют в нем на 12 ч. После инкубации гранул геля в буфере каждый гель обезвоживают фильтровальной бумагой, взвешивают, помещают в ячейки серологической пластины и прибавляют равный по весу объем водного раствора С-валина или
1тС-тубокурарина. Пластину закрывают пленкой "Ларафилм". Пробы выдерживают при 1 — 20 С и через определенные промежутки -,.Ремени иэ вод775695 воляет работать с большим количеством проб, так как не требуется отделения геля от диалиэующего раствора, и дает возможность проводить микродиалиэ в объеме менее 100 мкл раст5
Формула изобретения!
О
Пример 3. Для приготовления
20%-ного геля готовят раствор 1 путем смешения 81,6 г акриламида и
2,2 г бисакриламида и растворяют их в 200 мл 20%-ной сахароэы. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1.
Составитель С. Малютина
Редактор Г. Прусова Техред Н.Ковалева Корректор И. Муска
Заказ 7736/60 тираж 1019 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35> Раушская наб.,д. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ной фазы отбирают пробы по 50 мкл, наносят на бумажные фильтры и считают в толуольном сцинтилляторе на счетчике Марк-2.
Пример 2. Для приготовления
15%-ного геля готовят раствор 1 путем смешения 61,5 г акриламида и
1,6 г бисакриламида. и растворяют в 200 мл 20%-ной сахарсэы. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1.
Предлагаемый способ позволяет получать равномерно набухающий гель с высокой однородностью пор проще, поэСпособ микродиализа путем помещения диалиэуемой жидкости в емкость иэ пористого материала с последующей инкубацией, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве пористого материала используют 10-20%-ный полиакриламидный гель, содержащий акриламид и бисакриламид в соотношении
40 — 81 : 1 — 2,5, который инкубируют в диализуемом буфере в течение
2 — 12 ч, а затем проводят инкубацмю диалиэуемой жидкости в течение
6 ч.
