Способ получения 11 -гидроксистероидов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Сеаетскии

Социалистических

Республик

«t876059

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 250179 (2т) 2715602/23-04 (51)М. Кл з

С 07 J 5/00//

A 61 К 31/56 (32) 2 5.0 1.7 8

19.12.7 8 (33) ФРГ (23) ПриоритетГосударственный комитет

СССР по делам изобретений

M открмтий (31) Р2803661.5;

Р2855465.6

Опубликовано 23,1081рюллетень Йо 39 (53) УДК 547.689. .6.07(088.8) Дата опубликования описания 231081 (72) Авторы изобретению

Иностранцы

Эрнст Шеттле, Альфред Вебер, Марио Кение

Хельмут Даль, Йоахим-Фридрих Капп, Ханс

Клаус Аннен, Хенри Лаурент и Рудольф Вих (ФРГ ) Иностранная фирма

"Шеринг АГ" (ФРГ) (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1 1 Р-ГИДРОКСИСТЕРОИДОВ 0 Я

СΠ— — одиар, I

JF».(О

» з»А !

СΠ— ОС Ой

I.

3

Изобретение относится к способу получения 11$-гидроксистероидов общей формулы

3 где Х вЂ” водород, фтор, хлор или метил;

W — метиленовая, этилиденовая или винилиденовая группа, 20

R - алкил с 1-8 атомами углеро. 1 да)

R — водород или алкил с 1-4 атомами углерода, й4 - водород или гидроксил, 25 обладающих фармакологической активностью, Известен способ получения 11я-17d,—

-ацилоксистероидов прегнанового ряда, заключающийся в том, что 17А-ацилок- 30 систероид гидроксилируют в 119-положение с помощью гибковой культуры семейства,Снгчн1аri а.

Использование известного способа гидроксилирования стероидов в 11Р-положение позволяет получать новые фармакологические активные 11 ф-гидроксистероиды общей формулы f1).

Цель изобретения - получение новых 111о-гидроксистероидов общей формулы Г.

%.

Поставленная цель достигается способом получения 11ф-гидроксистероидов общей формулы I., заключающимся в ,том, что 11-дезоксистероид общей формулы

876059 где Х, W, R< и Rg имеют указанные

1 значения, R< — водород, гидроксил или алканоилокснгруппа с 1-6 атомами углерода, ферментируют грибковой куяьтурой семейства "Curvul riа и полученное соединение в случае необходимости дегидрируют в положении 1, 2 с 5 последующим выделением целевых продуктов известными методами.

Пригодными для гидроксилирования грибками семейства Curvulагiа являются Cu rvularia dunata NRRL 2380, NRRL fO

2434, АТСС 12017 или 1FO..(6286), Curvu1arià fa1cuta 0М-102 Н, Curvulагiа

genticu1ata 1FO (6284) или Curvularia

maculaus 1FO (6292), При условиях, обычно применяемых для этих микроорганизмов, культуры выращивают в пригодной питательной среде при аэрнрованни. Затем к культурам добавляют субстрат, растворенный в пригодном растворителе, преимущест- 20 венно в эмульгированной форме и ферментлруют, пока не достигается максимальное превращение субстрата.

Пригодными растворителями для субстрата являются, например, метанол, этанол, гликольмонометиловый эфир, ди-2 метилформамид или диметилсульфоксид..

Для эмульгирования субстрата,в микронизированную форму его или раствор в смещивающемся с водой растворителе (метанол, этанол, ацетон, гликольмо- 30 нометиловый эфир, диметилформамид или диметилсульфоксид) при сильном турбулентном перемешивании вдувают в преимущественно декальцинированную воду, содержащую обычные способствую- З щие эмульгированию средства. Такими средствами являются неионогенные эмульгаторы, например аддукты этиленоксида или эфиры жирных кислот полигликолей. 40

Дегидрирование насыщенных в первой позиции Ь4 -стерои)цов общей фор мулы Т осуществляют как с помощью микробиологических методов, так и с помощью химических методов.

Так Ь -cTepoHzga при обычных условиях могут быть дегидрированы .в пер" вой позиции культурами бактерий семейства Васillus (например, Вас!11us

Lentus или В ассi1us sphaericus) или

Arthrobacter (например, АгеЬгобасйе r

Simp)ex), Ь" -дегидрирование проводят также нагреванием а4-стероидов в инертных растворителях с обычными для этой реакции окислителями, например диокси- H дом селена или 2,3-дихлор-5,6-дицианобенэохиноном.

Соединения общей формулы 1 при локальном применении проявляют высо-— кую противовоспалительную активность 4О в сочетании с низким системным побочным действием.

Пример 1. а) 21,63 г Зф,21-диацетокси-17с1;гидрокси-5-прегнен-20-она растворяют в 150 мл безводного метиленхлорида и 100 мл безводного формальдегиддиметилацеталя. Затем раствор охлаждают водой и в не-!

ro вносят смесь 21,6 r полупятиокиси фосфора и 43 г кизельгура и переме-. шивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь фильтруют и остаток промывают метиленхлоридом, к фильтрату добавляют триэтиламин, пока рН не достигнет 9, и сгущают в вакууме. Остаток перекристаллизовывают иэ смеси, метанол-метиленхлорид и получают 22,68 r

Зр,21-диацетокси-17 -метоксиметокси-5-прегнен-20-она с температурой плавления 182-184 С. в) В двухлитровой колбе Эрленмейера с 1 л стерильного питательного раствора, содержащего 0,3% дрожжевого экстракта, O,ЗЪ Cornsteep

1.iqour и 0,2% крахмального сахара, установленного на рН 7,0, засевают сухую культуру Flavobaicterium dehydrogenans ATCC 13930 и при 30 С встряхивают в течение 2 дней (175 об./мин), В поллитровой колбе Эрленмейера с 85 мл равной питательной среды прививают 10 мл выраженной культуры

Flavobacterium dehydrogehans и при

30 С встряхивают в течение 7 ч (175 об./мин) . Затем к культуре добавляют 5 мл стерильного раствора

0,5 г 39,21-диацетокси-17d.-метоксиметокси-5-прегнен-20-она в диметилформамиде и встряхивают при 30 С в течение 65 ч (175 об./мин). После ферментации культуру дважды экстрагируют 100 мл этиленхлорида, экстракт сгущают в вакууме, остаток очищают с помощью хроматографии через оксид алюминия и получают 402 мг 21-гидрокси-17d-ìåòoêñèìåòoêñè-4-прегнен-3,20-диона е температурой плавления 152153 С. с) В двухлитровой колбе Эрленмейера с 1 л стерильного питательного раствора, содержащего 2% глюкозы и 2%

Cornsteep Liqour, установленного на рН 6,5, прививают с промывкой сухой культуры Curvularia Lunata NRRL 2380 и при 30 С встряхивают в течение 60 ч (175 об./мин) .

В поллитровой колбе Эрленмейера с

90 мл стерильной питательной среды, содержащей 1,03 Cornsteep 1.1qour и

1,25% соевой пудры и установленной на рН 6,2, прививают 10 мл выращанной культуры Curvu!агlа t,unatа и при

30 С встряхивают в течение 7 ч (175 об./мин). Затем к культуре добавляют стерильный раствор 30 мг 21-гид" рокси-17al-метоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона в диметилформамиде и ферментируют в течение 65 ч.

Перерабатывают культуру ферментации, как описано в примере 1в, и получают 27 мг 1115,21-дигидрокси-171,-метоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 180-182 С.

876059

Пример 2 ° а) 50 r 39,21-ди- чают 17d.— (1 -этоксиэтокси) -119,21ацетокси-17d,-гидрокси-5-прегнен-20- -дигидрокси-4-прегнен-3,20-дион.

-она смешивают с 50 мг безводной Пример 5. а) 10 г 21-ацеп-толуолсульфокнслоты и 350 мл без- токси-17 -гидрокси-4-прегнен-.З, 20водного метиленхлорида, охлаждают -диона обрабатывают 4 г изобутилвидо 0 С и после добавления 10 г метил- нилового. эфира при условиях примео винилового эфира перемешивают при ра За и получают 13,5 r 21- ацетокси0 С в течение 4 ч. Затем добавляют -17 -(1 -изобутилоксиэтокси) -4-прег-: триэтиламин, пока рН не достигнет. 9, нен-3,20-диона в виде масляной диасы концентрируют в вакууме. Получают тереомерной смеси.

58 г 39,21-диацетокси-17Ы" (1- меток- О в) Раствор 0 1 г смеси 21-ацетоксиэтокси) -5-прегнен-20-она в виде JI< си-173,— (1 -изобутилоксиэтокси) -4астереомерной смеси с температурой -прегнен-3,20-диона в 2 мл диметилплавления 80-118 С (перекристалли- формамида гидроксилируют Curvuiaria зованная из метанола проба плавится Lunata NRRL 2380 при условиях примео при 132-134 С) . ра 1с и получают 11$,21-дигидроксив) При условиях примера 1 в Р>- 15 -17d (1-изобутилоксиэтокси) -4-прег. створ 600 мг ЗР,21-диацетокси-17d,— нен-3,20-дион, — (1 -метоксиэтокси) -5-прегнен-20-она в виде диастереомерной смеси в 5 мл диметилформамида обрабатывают куль- -диона смешивают с э мг безводной турой Г1ачобасйе гало и dehydrogenan8 20 п-толуолсульфокислоты, 25 мл безводАТСС 13930 и получают 394 мг 21-гидрокси-17d;(1 -метоксиэтокси) -4-прегпропана и перемешивают при комнатной нен-3,20-диона B виде диастереомер- температуре в течение 13 ч. Реакцион ной смеси с температурой плавления

166-17 оС ную смесь перерабатывают, как опи166-178 С. с) Раствор 100 мг диастереомерной 21-ацетокси-17cL-(2 -тетрагидропирасмеси 21-гидроокиси-.17с -(1-метокси-диона в виде этокси) -4-прегнен-3,20 диона в 2 мл диастереомерной смеси с температ ой емпературо диметилформамида при условиях приме- плавления 185-200 С. ра 1с ферментируют культурой Curvula- в) Раствор 0,1 г смеси 21-ацетокria Lunata NRRL 2380 и получают 105 мг си-170L-(2 -тетрагидропиранилокси)11й,21-дигидрокси-17d.—.(1 -MBToKcH3ToK -4-прегнен-3,20 "диона в 2 мл диметилси) -4-прегнен-3,20-диона в виде масля формамида гидроксилируют Сu rvu l a r i a ной диастереомерной смеси.. Lunata NRRL 2380 цри условиях приме. ра 1с и получают 115,21-дигидроксиt

II р и м е р 3. а) 10 r 21-ацеток- -170 (2 -тетРагидРопиРанилокси) -4- си -1 7d,-гидро к си -4-пре гне н -3, 20 -диона -прегнен-3,20-дион. смешивают с 13 мг безводной и-толу- Пример 7. а) 50 r 21-ацетоколсульфокислоты и 130 мл безводного си-17 -гидрокси-бс -метил-4-прегненметиленхлорида, охлаждают до О С и -3,20-диона при условиях примера За после добавления 2,3 г метилвинило- 40 обрабатывают 13,9 г метилвинилового вого эфира перемешивают при ООC при- эфира и получают 59 г 21-ацетоксимерно 7 ч, Реакционную смесь обраба- -17cL-(1 -метоксиэтокси) -бс(-метил-4i тывают, как описано в примере 2а, и -прегнен-3,20-диона в виде аморфной получают 11,6 r 21-ацетокси-17еЬ- (1 — массы.

-метоксиэтокси) -4-прегнен-3,20-диона 45 в) Раствор 200 мг 21-ацетокси-17сЕс температурой плавления 135-150аg. †(1 -метоксиэтокси) -бс .-метил-4-прегв) Раствор 0,1 г диастереомерной нен-3,20-диона в 0,4 мл диметилформасмеси 21-ацетокси-17d (1 -метокси- -мида гидроксилируют Curvulàri a l.unata

=этокси) -4-прегнен-3,20-диона в 2 мл NRRL 2380 при описанных в примере диметилформамиде при описанных в при- 50 ic условиях и получают 111,21-дигидмере 1с условиях ферментируют куль- рокси-17d; (1 -метоксиэтокси) -6cL-метилтурой Curvu1аri а Ьunata NRRL 2380 и -4-прегнен-3,20-дион. получают 11th, 21-дигидрокси-17d,- (1 —, -метоксиэтокси) -4-прегнен-3, 20-дион. Пример 8. а) 2 г 21-ацетокПример 4. а) 10 г 21-ацеток- си-17*-гидрокси-161-метил-4-прегненси-17 -гидрокси-4-прегнен-3,20-диона -3,20-диона смешивают с 5 мг безводпри. условиях примера Ça обрабатывают ной п-толуолсульфокислоты и 25 мл без2,5 г этилвинилового эфира и получа- водного метиленхлорида и охлаждают до ют 12,5 г 21-ацетокси-17+- (1 -эток- О С. Эатем при перемешивании к смеси сиэтокси) -4-прегнен-3,20-диона в ви- добавляют О, 5 г метилвинилового эфира, де масляной диастереомерной смеси. 59 перемешивают при 0 C в течение 5 ч в) Раствор 0,1 г смеси 21-ацеток- и еше в течение 12 ч при комнатной си-17о - (1 -этоксиэтокси) -4-прегнен- температуре. Перерабатывают реакцион-3,20-диона в 2 мл диметилформамкда ную смесь, как описано в примере За, гидроксилируют Curvulariа Ьunata NRRL и получают 2,1 r 21-ацетокси-17cL2380 при условиях примера 1с и полу- 65 †(1 -метоксиэтокси) -16Р-метил-4-прег876059 нен-3,20-диона в виде масляной диастереомерной смеси. в) Раствор 50 мг смеси 21-ацетокси-17d. †(1 -метоксизтокси) -1614-метил-4-прегйен-3„20-Èèîíà в 1 мл диметилформамида гидроксилируют. Curvularia

i,unata NRRL 2380 при описанных в примере 1с условиях и получают 11ф,21-дигидрокси-174, †(1 -метоксиэтокси)-16Д-метил-4-прегнен-3,20-дион.

Пример. 9. а) 50 г 17Ж-гидрокси-4-прегнен-3,20-диона при условиях О примера За обрабатывают 15 г метил" винилового. эфира и получают 51,2 г

174L- (1 -метоксиэтокси) 4-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 115152 С. 15 в) Раствор 0,1 r 17А- (1-метокси этокси) -4-прегнен-3,20-диона в 1 мл диметилформамиде ферментируют культурой Curvuiaria L unata NRRL 2380. при описанных в примере 1с условиях ф и получают 11Р-гидрокси-174, (1 -метоксиэтокси) -4-прегнен-3,20-дион с температурой плавления 85-1034С.

Пример 10. а) 5, г 3,21-диацетокси-17CL-гидрокси-5-прегяен-2,-она при описанных в примере 1а условиях в 150 мл метиленхлорида об- рабатывают 380 r ацеталя формальдегид-бис-гликольмонометилового эфира, 50 r полупятиокиси фосфора и 100 r кизельгура и получают 45,8 г 39,21-диацетокси-17 -(2 -метоксиэтоксиметокси) -5-прегнен-20-она с температурой плавления 160-1614С. в) При условиях примера 1в 0,5г

3 9, 21-диацетокси-171 - (2 -метоксиэток- З5 си-метокси) -5-прегнен-20-ояа обрабатывают культурой Fl avobacterium de"

hyd rogen ans ATCC 13930 и получают

390 мг 21-гидрокси-17 -(2 -метоксиэтоксиметокси) -4-прегнен-3,20-диона 4Q в виде стекловидной массы. с) При условиях примера 1с 30 мг

21-гидрокси-17d; (2 -метоксиэтокси-метокси) -4-прегнея-3,20-диона обрабатывают культурой Cu rvu 1аriа unatа 4

NRRL 2380 и получают 24 мг 1.1g,21-дигидрокси -17cL- (2 -метоксиэтокси

-метокси) -4.-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 143-147 С.

-Пример 11. В двухлитровой колбе Эрленмейера с 500 мп питатель- О ного раствора, содержащего 0,1% дрожжевого экстракта, 0>5%Cornsteep l.iquor и 0,1% крахмального сахара и установленного на рН .7,0, прививают с промывкой сухой культуры Arthrobac- 55

ter s imp lex ATCC 6946 и при 30 С в течение 48 ч встряхивают (190 об./мин)

В 0,5 литровой колбе Эрленмейера с 90 мл питательной среды прививают с 10 мл выращенной культуры Arthro" О

bacter simplex и при 30 С в течение б ч встряхивают (165 об./мин) . Затем к культуре добавляют 1 мл стерильного раствора 50 мг 111,21-дигидрокси-.

-17йметоксиметокси-4-прегнен-3,20диона в диметилформамиде и фермен тируют в течение, 42 ч.

Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 1в, и получают 44,5 мг 111э,21-дигидрокси-17е6-

-метоксиметокси-1,4-прегнадиен-3,20диона с температурой плавления 2292314Ñ, Пример 12. В двухлитровой колбе Эрленмейера с 500 мп питательного раствора, содержащего 1% дрожжевого экстракта (bifco); 0,45% динатрийгидрофосфата, 0,34% калийгидрофосфата и 0,2% Tween 80 и установленного на рН 6,7, прививают с промывкой сухой культуры Носаrdia globerula

ATCC 9356 и при 30 С в течение 72 ч, встряхивают (190 об./мин) .

В.двухлитровой колбе Эрленмейера с 950 мл питательного раствора, содержащего 2,0% Cornsteep i.iс1нîr, .

0,3% диаммонийгидрофосфата и 0,$5%

Tween 80 и установленного на рй 6,5, прививают с 50 мл выраженной культуры Nocardiа globerulа и при 30 С в течение 24 ч встряхивают (190 об./мин) .

Затем в культуру добавляют 5 мл стерильного раст вора 0,25 r 11,-21-дигидрокси-17с6- (1 -метоксиэтокси) -6

-метил-4-прегнен-3,20-диона в диметилформамиде и ферментируют в течение- 72 ч. Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 1в, и получают 0,21 г 111,21-дигидрокси-17cL-(1 -метоксиэтокси) -64(-метил-1,4-прегнадиен-3,20-диона с точкой плавления 1734С

Пример 13. а) 50 r 21-ацетокси-17с -гидрокси-4«прегнен-3,20-диона суспендируют в 600 мл формальцегиддиэтилацеталя и 600 мл метиленхлорида и охлаждает до (-30) — (-40) С.

При перемешивании вносят смесь 75 г полупятиокиси фосфора и 150 г кизельгура и перемешивают в течение 30 ч при -304С. Раствор фильтруют и нейтрализуют триэтиламином. После отгонки растворителя перегоняют с метанолом и остаток перекристаллизовывают из метанола. Получают 35,9 г 21-ацетокси-174-этоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона, который после повторной перекристаллизации плавится,при 137-1394С. в) В двухлитровой колбе Эрленмейера с 1 л питательного раствора, содержащего 1% Cornsteep 1iquor и 1,25% соевой пудры и установленного на рН

6,2, прививают с проьювной сухой культуры Curvulàriа 1,unata NRRL 2380 и при 304С в течение 72 ч встряхивают (175 об./мия) .

В 50-литровом ферментаторе с 23 л стерильной питательной среды прививают

1 л выращенной культуры Curvuiarià

Lunate и при 304С в течение 24 ч при аэрации с 2 м /ч культивируют.

s 50-литровом ферментаторе с 36 л питательного раствора, как описано выше, прививают 4 л предварительно фер876569

10 ментированной культуры Си rvu1аг а ..unata и при 30 С в течение 10 ч культивируют при аэрации 2. м /ч .и перемешивании 220 o6;/Mèí . Затем к куль« туре добавляют 10 г 21-ацетокси-17е -этоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона

B 200 мл монометилового эфира этиленгликоля. С десятого часа рН держится между 6,5 и 7,0 ° Через 4 ч добавляют 10 г 21-ацетокси-17aL-этоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона в 200 мп моноэтилового эфира эткленгликоля и ферментируют 23 ч при указанных условиях, Культуру ферментации трижды экстрагируют 10 л этиленхлорида и затем перерабатывают дальше так, как.описа- 15 но в примере 1в. Получают 13,8. г

11,21-дигидрокси-174этоксиметокси-4-прегнен-3 20-диона с температурой плавления 153-154 С.

Пример 14. а) 25 r 21-.àöå- Щ токси:-17Ыгидрокси-4-прегнен-3,20-диона суспендируют в 200 мл формальдегиддипропилацеталя и 320 мл метиленхлорида и охлаждают до -20ОС. При перемешивании вносят смесь из 49,3 г полупя-2 тиокиси фосфора и 97 г кизельгура и перемешивают в .течение 22 ч при "20 С.

Раствор фильтруют и нейтрализуют триэтиламином. Метиленхлорид отгоняют в вакууме и формальдегидципропилацетапьную фазу сливают с высадившегося масла. После отгонки растворителя в вакууме выкристаллизовываются .19 r

21-ацетокси-174пропоксиметокси-4- .

- регнен-3,20-диона с температурой плавления 145-147аС. . . . 35 в) 10 г 21-,ацетокси-17 -пропоксиметокси-4-прегнен-3 20-диона перемалывают с 1 г Tween 80 и трехкратном количеством воды в Оупо-мельнице типа

KDL (Fa. Bachofen, Ваве!).. Зту измель- О ченную массу стерилизуют с 1Ъ-ной

Н О минимум 4 ч.

Curvutaria .iunata NRRL 2380, как описано в примере 13 в, выращивают в колбе для встряхивания и предфермен-45 таторе и затем прививают в главном ферментаторе. Этот ферментатор устанавливают так же, как описано в при«мере 13в, и выращивают в течение 10ч при условиях примера 13в. Затем к .культуре прибавляют измельченную Mic-

cy 21-ацетокси-17Ы-пропоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона .и .Ферментиру- . ют в течение 44 ч при рН 6,4-6,7.

Культуру ферментации, как описано в, примере 13в, перерабатывают и получают 6,5 r 11,21-дигидрокси-174-про». поксиметокси-4-.прегнен-3 20-диона с

О температурой плавления 134/135-136 С.

Hp и м е р 15. а) 50 г 21.-ацетокси-17 -гндрокси-4-прегнен-3,20 - . ф)

-диона суспендируют с 500 мл формальдегидцибутилацеталя и 500 мл метиленхлорида и охлаждают до -35аС. При перемешивании вносят смесь из 74 г полупятиокиаи фосфора и 150 r кизель- 65 гура и перемешивают в течение 30 ч при -35aC. Раствор фильтруют и нейтрализуют триэтиламином. Метиленхлорид отгоняют в вакууме и формальдегиддибутилацетальную фазу сливают с высадившегося масла.. После отгонки растворителя в вакууме выкристаллизовываются 38,7 г 21-ацетокси-17е(;бутоксиметокси-4-прегнен-3 20-диона ь с температурой плавления 123,5-124,5 С. в): 8 г 21-ацетокси-27aL-бутоксиметокси-4-прегнен-3 20-диона перемалывают с 0,8 г Tween 80, как описано в примере 14в. Curvularlà tiunata NRRL

2380 выращивают и ферментируют в колбе для встряхивания в.качестве культуры для выращивания, в предферметаторе и основном ферментаторе, как описано в примере 13в. Через 10 ч в основной ферментатор .добавляют

1 вещество и ферментируют 50 ч.

Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 13в, и получают 3,7 r 11<,21-дигидрокси-1И-бутоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 79-81 С.

Пример 16. а) 10,6 г 21-ацетокси-6d-фтор-174-гидрокси-4-прегнен-3,20-диона растворяют в

265 мл метиленхлорида и 47,7 мл формаль егиддиметилацеталя, добавляют смесь из 7,95.г полупятиокиси фос" фора и 15,9 r кизельгура и в течение

90 мин под азотом перемешивают при комнатной температуре. Раствор фильтруют и смешивают с 2,1 мл триэтиламина. Растворитель отгоняют и остаток выкристаллизовывается из метанола, получают 7,6 г 21-ацетокси-бА-фтор-17 -метоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 161-167 С. в) Curvu )art а Ь unata MRRL 2380 выращивают, как описано в примере 13в, в колбе для встряхивания, предварительном и основном ферментаторе. Через 10 ч в основной фрементатор добавляют 5 r 21-ацетокси-бб.-фтор-17 -метоксиметокси»4-прегнен-3,20-диона .в 100 мя.моиометилового эфира этиленгликоля..К этому времени рН составляет 6,5-7,0. Через 14 ч добавляют 5 г

21-ацетокси-бйфтор-17cL-метокси-4-прегнеи-3,20-диона s 100 мл монометилового эфира этиленгликоля н ферменткруют 26 ч.

Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 13в, и получают 4,2 г 119,21-дигидрокси-бсср-фтор-17А-метоксжметокси-4-прегнен-3,20- диона с температурой плавления 190192 С.

Пример 17. а) 43 r.Çô,21-диацетокси-17а,-гядрокси-1б-метил-5-прегнеи-20-она растворяют в 800 мл формальдегиддиметилацеталя и охлаждают до -15 С. Порциями вносят смесь

43 r полупятиокиси фосфора и 86 r кизельгура и перемешивают при ;15 С

876059

12 в течение 15 ч. Раствор.фильтруют, нейтрализуют триэтиламином и растворитель отгоняют в вакууме. Остаток выкристаллизовынается из получают 31,5 r 3Ф,21-диацетокси-17ck—

-метоксиметокси-16р метил-5-прегнен-20-она с температурой планления 1175

118 С. в) Fl avobacte r l um dehydrogenans

ATCC 13930 выращивают и ферментируют, как описано в примере 1в. Через б ч к культуре добавляют 4 мл стерильного раствора О, 2 r 3,21-диацетокси-17 -метоксиметокси-16/Ь-метил-5-прег" нен-20-она в диметилформамиде и встряхивают еще 65 ч.

После прошедшей ферментации куль- 15 туру перерабатывают, как описано в примере 1н, и получают 163 мг 21-гидрокси-17 -метоксиметокси-16Р-метил-прегнен-3,20-диона с температурбй плавления 126/128-129оС 20 с) Curvularia l.una.ta NRRL 2380 ныращивают и ферментируют как описано в примере 1с. Через 6 ч к культуре добавляют раствор 50 мг 21-гидрокси-17d-метокси-16 -метил-4-прегнен-3,20- 5

-диона в диметилформамиде и ферментируют 65 ч. Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере

1в, и получают 34,5 мг 11Р,21-дигидро4 кси-17d -метоксиметокси-16Р-метил-4-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 204/205-2060С.

Пример 18. а) 29,1 г 21-ацетокси-б-хлор-17ct-гидрокси-4,б-крегнадиен-3,20-диона растворяют в 730 мл метиленхлорида и 131 мл формальдегид- З5 диметилацеталя добавляют смесь из

22,12 r полупятиокиси фосфора и 44 г кизельгура и смесь перемешивают под азотом в течение 2 5 ч при комнатной темпе— ратуре. Раствор фильтруют и смешива- 4Q ют с 5,8 мл триэтиламина. Растворитель отгоняют и остаток перекристаллизовывают из метанола при добавлении активированного.угля и .1Ъ триэтиламина, Получают 15,6 r 21-ацвтокси-б"

-хлор-17cL-метоксиметокси-4,б-прегнадиен-3,20-диона с температурой планле" ния 183-186 С. в) Cu rvu I aria t unata NRRL 2380, как в примере 13в, выращивают в колбе для встряхивания, предварительном и основном ферментаторе. Через 9 ч . в основной ферментатор добавляют 3 r

21-ацетокси-б-хлор-17d.-метоксиметокси-4,б-прегнадиен-3,20-диона в 60 мл монометилового эфира этиленгликоля.

При рН 6,4-6,7 ферментируют 20 ч.

Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 13в, и получают

1,8 г 11,12-дигидрокси-б-хлор-17å -метоксиметокси-4,б-прегнадиен-3,20" 60

-диона с температурой плавления 234/

/235 23бос..

Пример 19. а) 38,85 r 21-ацетокси-174-гидрокси-4-прегнен-3, 20-диона перемешивают с 235 мд формаль- 65 дегиддиизопропилацеталя и 500 мл ме тиленхлорида и охлаждают до -20 С.

При перемешивании вносят смесь из

75 г полупятиокиси фосфора и 150 r кизельгура и перемешивают при -20 С . в течение 20 ч. Смесь фильтруют, промывают метиленхлоридом и триэтиламином, доводят до рН 9. Растворитель отгоняют в вакууме и остаток экстрагируют метиленхлоридом. Раствоо промывают полунасышенным раствором хлооиаа натрия. с лаат сульфатом натоия, обоабатывают активиоованным углом. отсасывают через кизельгур и концентрируют в вакууме. Остаток хроматогоафиоуют на силикагеле смесью толуолуксусный эфир, получают 35,8 г 21-ацетокси-17 -изопропоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона, который после кристаллизации с пентаном имеет температуру плавления 111-117 C. в) Сцгче!аг!а Ьunata NRRL 2380 выращивают, как описано в примере 13н, в колбе для нстряхивания, предварительном и основном ферментаторе. Через 9 ч в основной ферментатор добавляют 12 r 21-ацетокси-17cL-изопропоксиметокси-4-прегыен-3,20-диона в

240 мл этиленгликольмонометилового эфира при рН 6,5-7,0 и ферментируют в течение 15 ч, Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 13в, и получают 8,4 r 119,21-дигидрокси-17aL-изопропоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 71/73-78 С. с) Arth robacte r simplex ATCC 6946 выращивают, как описано в-примере 11, в колбах для выращивания и ферментации. Через 5 ч в колбу для ферментации добавляют 1 мл стерильного раствора 50 мг 119,21-дигидрокси-171; изопропоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона в этиленгликольмонометиловом эфире и ферментируют в течение 42 ч.

Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 1в, и получают

32 мг 11Р,.21-дигидрокси-17d-изопропок симетокси-1,4-прегнадиен-3,20-диона с температурой плавления 58/63-65 С.

Пример 20. а). Р!ачобасйег(ив

dehydrogenaus ATCC 13930 выращивают в колбе для встряхивания, предварительном и основном ферментаторе. Через 24 ч в основной ферментатор добавляют 19,5 г 16-метилен-3$,21-диацетокси-171.-метоксиметокси-5-прегнен-20-она в 500 мп диметилформамида и ферментируют в течение 28 ч. Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 13в, и получают

15,5 г 16-метилен-21-гидрокси-17 ;

-метоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 147/150151 С. в) Curvularla Lunata NRRL 2380 выращинают, как описано в примере 13в, в колбе для встряхивания, преднарительном и основном ферментаторе. Че13

876059

14!

30 су щ„

СО

Составитель Т. Левашова

Редактор Г. Кацалап Техрад М.l îëèíêà КорректоР С, Щомак

Заказ 9397/88 Тираж 400 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва,. Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 рез 9 ч в основной ферментатор добавляют 20 r 16-метилен-21-гидрокси-174-метоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона в 400 мп этиленгликольмонометилового . эфира при РН 6,4-6,7 и ферментируют

8 ч.

Культуру ферментации перерабатывают, как описано в примере 13в, и получают 11 г 16-метилен-119,21-дигидрокси-17 -метоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона с температурой плавления 205/

20 6-2 08 С .

Пример 21. Arthrobacter simplex АТСС 6946 выращивают, как описа- но в примере 11, в колбах для выращивания и ферментации. Через 5 ч в колбы для ферментации добавляют 1 мп сте 15 рильного раствора 50 мг 11й,21-дигидрокси-174,-пропоксиметокси-4-прегнен-3,20-диона в этиленглккольмонометиловом эфире и ферментируют в течение

42 ч. Культуру Ферментации перераба Щ тывают, как описано в примере 1s, и

"получают 41 мг 11,21-дигидрокси-17d.

-пропоксиметокси-1,4-прегиадиен-3,20-диона с температурой плавления 121/, /125-127 С.

Формула изобретения

Способ получения 11@-гидроксистероидов общей Формулы l где Х вЂ” водород, Фтор, хлор или метил, W — метиленовая, этилиденовая или винилиденовая группа, алкил с 1-8 атомами углерода, — водород или алкил с 1-4 ато-. мами углерода, R4 ВОДОРОД или гидрОксилр пунктирная линия .означает возможную двойную связь, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что 11-дезоксистероид общей формулы Н де X., W ) R и Rg имеют укаэанные знаМенияФ К4 — водороду гидроксил или алканоилокснгруппа с 1-6 атомами уг-.. лерода, ферментируют грибковой культурой семейства Со ча1аг!а и полученное соединение в случае необходимости дегидрируют в положении 1,2 с последующим выделением целевых продуктов

Приоритет по признакам:

25.01.78 Х - атом водорода, фтора или метил, Й - алкил С „-С6;

19.12 .78 -, Х вЂ” атом хлора, R *- алкил С>-С8.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент ФРГ М 1618599, кл. С 072 5/00, 1966.