Способ определения гликпротеинов в сыворотке крови

 

Социалистическмк

< 960624

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6! ) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заявлено 0 1.12.77 (21) 2549326(28 13 с присоединением заявки.% (23) Приоритет

Опубликовано 23.09.82. Бюллетень № 35 (51)М. Кл.

С„01N 33/48 ф3оудэрстьеииый комитет (53) УДК 612.13 (088.8) ао делам изобретений и открытий

Дата опубликования описания 29.09.82

А, Н. Галушкин (72) Автор изобретения

Ленинградский филиал Всесоюзного научно-иссле института медицинского приборостроения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКПРОТЕИНОВ

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Изобретение относится к медицинской лабораторной технике, а именно, к биохимическим исследованиям сыворотки крови.

Известен способ определения гликпротеинов в сыворотке крови путем добавле5 ния к пробе сыворотки четвертичного аммониевого соединения с последующим измерением оптической плотности реакциснной смеси. При осуществлении известного способа в качестве четверти тного аммони.lo евого соединения используют цетилтриметиламмоний бромистый, а для стабилизации результатов в реакционную смесь вводят глицерин уже после образования комплекса (). j, 15

Однако известный способ не позволяет осуществить тонкую дифференциацию гликпротеинов и избирательно выцелить

cL„-ãëèêïðîòåèíû. Плохая растворимость цетилтриметиламмония бромистого в воце >0 вызывает необходимость цополнительного введения этилового спирта и ацетона, которые влияют на устойчивость белков и могут привести к выпацению их в осацок.

Кроме того, после разбавления водой раствор из-за плохой растворимости цетил-.. триметиламмония бромистого становится мутным, что значительно затрудняет работу с ним. Известный способ не обладает цостаточной стабильностью результатов во времени, результаты сохраняют стабильные значения не более 1 ч. Кроме тс го, спссоб отличается низкой воспроиэводимостью результатов„ коэффициент вариации находится в пределах 15-20%, на это влияет большая зависимость результатов от колебаний температуры: при снижении температуры с 37 до 28 С резуо льтаты увеличиваются почти в три раза.

Белью изобретения является обеспечение избират ельного определения с(-гликпротеинов, повышение стабильности и воспроизводимости способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения гпикпротеинов в сыворотке крови путем добавления к пробе сыворотки четвертичного аммониевого соединения с последующим иэ3 960624 4 мерением оптической плотности реакциан- вносят в пробирку и пробирку помещают ной смеси, в качестве четвертичного ам-, в водяную баню с температурой 37оС. мониевого соединения используют цетил- Затем в раствор вносят 0,1 мп сыворотпиридинийхлорид в этиленгликольвопной ки крови. Содержимое пробирки перемешисреде, причем содержание,Волы в среде > вают путем встряхивания и пробирку осберут в пределах 30-40%. тавляют при 370С в течение 30 мин;

Способ осуществляют следующим обрн- По истечении 30 мни мутность раствора определяют на спектрофотомет ре ипи фотоко

В качестве реактива используют цетип- лориметре при W 600 10 нм в кювете пиридинийхлорид, .а реакцию взаимодейст- 0 с длиной хода луча 10 мп против раствия цетиппиридинийхлорида с гликпротеи- вора цетиппиридинийхпорида. нами сыворотки крови проводят в этипен- Предлагаемый способ по сравнению с гпикопьводной среде. Содержание воды в известным, позволяет проводить бопее этиленгликольводной смеси берут в пре- тонкую дифференциацию гпикпротеинов, т.е, делах 30=40%. 1з избирательно определять голько о — -.

Цетилпиридииийхлорид в отличие от гликпротеины. Идентификация связанных цетиптриметипаммония бромистого хоро- с цетиппиридинийхпоридом гпикпротеинов ,:шо растворяется в этиленгликоле (лучше, проводится путем эпектрофореза на бумачем в воде) и не вызывает допопнитепь- . ге s вероналовой буфере с рН 8,6 и окной мутности раствора. Этиленгликоль >0 раске реактивом; Шиффа. Связанные с цене влияет на белки сыворотки крови тилпиридинийхпоридом гпикпротеины идени позволяет направлено изменять сте- тифицируются как el -гпикпротеины. пень взаимодействия цетиппиридинийхло- Результаты реакции остаются стабипьрида с гпикпротеинами сыворотки крови. ными в течение 24 ч и бопее.

При небольшом объеме воды в смеси эти- 2 Воспроизводимость результатов увепиленгпикольвода между цетилпиридинийхпо- чивается более чем в пять раз, коэффици- ридом и:гликпротеинами образуется не- ент вариации способа не превышает 3%. устойчивый комплекс, мутность которого В предлагаемом способе отсутствует растет во времени. При слишком. бопь- впияние температуры на результаты исспе шом объеме воды также образуется неус- дования (в пределах 30-40оС).

30 тойчивый комплекс, мутность которого Раствор цетиппиридинийхпорида хранитуменьшается во времени. Установлено, - ся при комнатной температуре без измечто стабильные и хорошо воспроизводи- нений в течение 2,5 пет. .мые резупьтаты достигаются, когда содеРжание воды в этиленгпикопьводной сме- ф о р м у л а и з о б р е т е н и я си находится в пределах 30-40%.

При этом концентрация цетиппириди- - Способ определения гпикпротеинов в нийхпорида в зависимости от объема сы- сыворотке крови путем добавления к проворотки крови подбирается эксперимен- бе сыворотки четвертичного аммониевого тапьно. Критерием оценки при этом спу- соединения с последующим измер нием

40 е жит оптическая, плотность мутности раст оптической плотности реакционной смеси, вора, удобная для работы на фотоэпектри- о т и и ч а ю ш и и с я тем, что, с цеческом приборе (фотоэпектрокопориметре лью избирательного определения cL -гпик.или спектрофотометре). Например, при протеинов, повышения стабильности и вос объеме сыворотки крови 0,1 мм удобная производимости способа, в качестве четдля работы оптическая плотность (0,07- вертичного аммониевого соединения ис4$ 0,3 ед. для доноров и выше 0,3 ед. дпя пользуют цетилпиридинийхлорид в этипен 6ольных) ольных) получается при 0,244 концент- гпикопьводной среде, причем содержание о рации цетилпиридинийхлорида. воды в среде берут в пределах 30-40%.

Пример. Готовят 0,24%-ный раст- Источники информации, Вор цетилпиридинийхпорида на этиленгли50 принятые во внимание при экспертизе ,кольводной смеси, например с 40/-ным 1."Я1ойо<р0 0%i òèñ îå", 1957, М 15, содержанием воды, 5 мл этого раствора р.р. 675-682.

ВНИИПИ Заказ 7252/49 Тираж 887 . Подписное

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4