Средство,обладающее ингибирующим действием на пируватдегидрогеназу
Оп ИСАНИЕ
ИЗОВЕЕтЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Совет сккк
Социалистических
Республик
Опубликовано 07.02.83. Бюллетень М 5 (51)М. Кл. А 61 Р 31/51 Гавударстееннмй квинтет СССР (53) УДК615. .779.94 (088.8) не аелам нзеврнтеннй н втнрапий Дата опубликования описания 07.02.83 (72) Авторы изобретения Т. И. Зиматкина, Ю. М. Островский и Д. А. парии ;ъ й,,, тдел регуляции обмена вешеств AH БелорусскЪй-&QP, (7I) Заявитель О (54) СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИНГИБИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ НА ПИРУВАТДЕГИДРОГЕНАЗУ Изобретение относится к биологии и может быть применено для ицгибирования активности пируватдегидрогеназы в тканях животных.. Известно применение окситиамина пиритиамина в качестве средств, обладаюших ингибируюшим действием на пируватдегидрогеназу (1 3 ° Однако их применение приводит к угнетению активности всех тиаминдифосфач т0 зависимых ферментов в организме животных. Известно применение тиохромдифосфата, имеющего антикоферментным действием, и качестве средства обладающего инги I5 бируюшим действием на пируватдегидрогиназу (2) . 11ель изобретения — создание избирательного ингибирования активности пируватдегидрогеназы в тканях животных, а также расширение арсенала средств воздействия на живой организм. Пель достигаегся применением тиохромтрифосфата l3 каче< тве средства, обладаю2 щего ингибируюшим действием на пируват дегидрогеназу. Изучение антивитаминной активности тиохромтрифосфата проводили на белых мышах-самках массой 24-26 г. Живот ным подкожно вводили по 0,2 мл водного раствора препарата при физиологическом значении рН в дозе 10 мг/кг в виде однократных подкожных иньекций. Для сравнительной оценки антикоферментного действия тиохромтрифосфата в тех же условиях и дозах испытывали сильнейшие антивитаминные аналоги тиамина — окситиа»мин, а также тиохром, его моно- и дифосфорные эфиры в различных дозах. Определение активности пируватдегидрогеназы в тканях животных проводили по методу, сушнос.i ь которот заключается в том, что при окислении пирувата гомогенатами исследуемых тканей происходит восстановление феррицианида калия в ферроцианид. Контроль вели Во убыли оптической плотности раствора на A =417 нм. 3 99396 И контрольные пробирки вносили все компоненты кроме субстрата (пирувата натрия), вместо которого добавляли равный объем КС0. В опытные — все компоненты и субстрат. Реакция начиналась с момента прибавлении гомогената. Состав инкубационной смеси: 75 мкмоль, Ala-Кфосфатного буфера (0,5 мл), 20 мкмоль М S О (0,1 мл), 6 мкмоль АТФ-натриевой соли (0,1 мл), 2 мкмоль этилендиа-10 минтетрауксусной кислоты (0,1 мл), 20 мкмоль пирувата натрия (0,1 мл), 255 мкмоль КСР (17 мл), 4,66 мкмоль К > (Pe(CN )6) (0,7 мл), гомогенат тканей (О, 4 мл). Пробы хорошо перемеши->> вали и ставили на 20 мин на водяную баню при 25 С. По истечении времени о инкубащии в каждую пробирку добавляли по О,Э мл 50% раствора трихлопуксчсной кислоты для осаждения белков. Пробы 2й центрифугировали 15 мин при 1500 об/мин . в центрифугатах, определяли на спектрофотометре оптическую плотность раствора. Количество восстановленного феррицианида определяли по калибровочной кривой. 25 Активность фермента выражали в мкмоль 0 4 восстановленного К у gFe (CH )6 ) на 1 r белка в течение 20 мин при 25оС. Тиохромтрифосфат, выделенный из смеси тиохромтрифосфатов, вводили в виде однократной подкожной иньекции белым мышам в дозе 10 мг/кг при физио- . логическом значении рН водного раствора. Через 3 ч после инъекции в срок максимального падения активности пируватдегидрогенаэы при применении различных уже известных антивитаминов В, животных забивали методом декапитации. Исследуемые ткани печени и сердца гомогениэировали жа холоду с 0,15 М раствором КС9 . В приготовленных гомогенатах определяли активность пируватдегидрогеназы, степень угнетения которой является одним из принятых критериев при оценке глубины авитаминоза В, В таблице представлены абсолютные значения активности пируватдегидрогенаэы после введения тиохромтрифосфата и сравниваемых препаратов. Символом Р обозначена достоверность различий по отношению к контрольной группе животных. Величины P j (0,05 приняты эа достоверные Я (:3 ° -( о v ф о л (О С3 и. 61 CD л! +(л о о о v о о о v о СЧ ("Ф и: 3 .,t0 о l(3 о М (О о и. I(3 о л ((3 о л ((3 о л -о С4 -993960 1 о СЧ +! о о о < 3.t Ч О1 +! о С ) л(СЧ л ((3 л(С ) ;(! Я ((O л л Ф Ф СЧ +(С4 CD о С4 С4 Ф Ф CD (О СЧ с4 Ф CD CD +! Ф о Щ С4 л ° "1 3 +I с(03 (О. л( с4 N .Ф l(3 +! 0) л1 3 Ф сО л(03 +(03 о ° -( (Ч с 3 03 ((3 +( ((3 С4 с 3 СЧ С4 (О Ч +! Ф с 3 (Ч Ф л. Ф +! 03 (Ф 1 (Ч 7 9939 Результаты проведенного исследования показали, что тиохромтрифосфат в отличие от самого тиохрома и его моно- и дифосфориъ|х эфиров значительно угнетает активносчь пируватдегидрогенаэы печени и сердца животных и обладает гораздо более сильным антивитаминиым действием в отношении названного фермента в сравнении с биологически неактивными в этой дозе окситиамином и пиритиамином. Активность транскетолазы печени, серд ца, крови при введении тиохромтрифосфата в тех же условиях опыта не изменялась. Использование предлагаемого средства в качестве антогониста тиамина в отличие от широко используемых s экспериментальной витаминопогической практике окситиамина и пиритиамина дает воэможность избирательно ингибировать актив60 8 ность одного из тиаминдифосфатзависимых ферментов (пируватдегидрогеназы) в тканях животных, что имеет важное значение три постановке различных моделей авитаминоза Ву. Формула изобретения Применение тиохромтрифосфата в качестве средства, обладающего ингибируюшим действием на пируватдегидрогеназу. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Биохимия витаминов и антивитаминов, М„Колос, 1972, с. 112. 2. ЬсЪеИепЪогч ег А., мбМег к,, 6 НОЪиег 61аЮ . 4. p%3sid,ц,,п, 1966, Ч 346, р, 123. Составитель С, Малютина Редактор Е. Хейфиц Техред С.Мигунова Корректор Ю. Макаренко Заказ 693/3 Тираж 711 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
