Способ получения 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфатов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

° CoIo3 Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕп ТУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено, 280479 (21) 7 8944/ 3-04 (23) Приоритет 240278 (32) 24. 02.77 (54)М. Кл.з

С 07 F 9/09

A 61 К 31/66

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (31) 771778 (33) С@ 1

Опубликовано 23.0183. бюллетень Йо 3 (53) УДЫ 547.26 118. . 07 (088. 8) Дата опубликования описания 23.01.83

Иностранец

Ховард Джон Шаффер (Ci6A) (72) Автор изобретения

Иностранная фирма Дзе Велкам Фаундейшн Лимитед (Великобритания) (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 9- (2-ОКСИЭТОКСИИЕТИЛ) ГУЛНИНФОСФАТОВ

Изобретение относится к химин Фосфорорганических соединений, а именно к способу получения новых 9-. (2-оксиэтокснметил) гуанинфосфатов обшей формулы. 5

ОН

О

К

1 ) I 02 (1 (В-СН,ОСНЗСН ОР 1О с

О М где -W 7, — одинаковые -нлн разные н представляют собой водород или катион натрия, калия, лития или аммония, которые обладают противовнрусной актив-15 ностью и могут быть использованы для лечения вирусных заболеваний у млекопитающих;

Известно, что 9-(2-оксиэтокси)метильные производные пуринов обладают 2О антивирусньзе действием против вирусов простого и опоясывающего лишая и ветряной оспы у млекопитающих, которые вызывают такие заболевания, как герпетический кератит у кроликов и 25 герпетический энцефалит у мышей (1) °

Известен способ получения гуанознн"

-5 -фосфата путем. Фосфорилирования

1 гуанозина хлорокисью фосфора в среде ,пиридина при (-40) — (-10) С (21

Известно также, что 9-(p -0-арабйнофуранозил) -аденин-5 -фосфат получают путем взаимодействия 9-(P -D-араби+ нофуранозил) аденина с хлорокисью фосфора в среде ледяной уксусной кисло- ты в присутствии третичного амина (3) .

Известен способ получения первичных аминов аммонолизом соответствующих хлоридов в спиртовой среде в зам кнутой системе при нагревании до тем пературы выше 100 С (4) .

Однако 9- (2-оксиэтоксиметил) гуанинФосфаты формулы 1 известными способами получены не были.

Целью изобретения является разра» ботка способа получения новых 9-(2-оксиэтоксиметил)гуанинфосфатов.

Поставленная цель достигается описанным способом получения 9-(2-окси-. этоксиметил)гуанинфосфатов формулы 1, который основан на известной реакции аммонолиза (4), и заключается в том, что соединение общей формулы .ОН

Ф.А, и он (z) Я К М- СН ОСН ОНд ОР ) ОН

991 951 где G — галоид, подвергают взаимодействию с аммиаком в спиртбвой среде с последующим выделением целевого продукта в виде кислоты или ее соли.

Пример l. Получение 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфата.

0,03 мл хлорокиси фосфора добавляют к перемешиваемой суспензии 20 мг 2-хлор-9(2-оксизтоксиметил)гипоксантина в

0,3 мл триэтилфосфата при -8 С. 3ао тем в течение 30 мии температуре дают ,подняться до 0 С. Далев реакционную1 о смесь перемешивают при 0 С в течение

40 мин и при 5 г . в течение 50 мин. Реакционную смесь выливают. иа лед и рН смеси доводят до 7 с помощью 2 н. рас тв ора r идроок ис и к алия, По луче н ный раствор дважды экстрагируют хлороформом (2х2 мл) . pH водной фазы доводят до 8-8,5 с помощью 2 н. раствора гидроокиси и добавляют 105 мг ацетата бария. Образовавшийся осадок фосфата бария отфильтровывают. Фильтр обраба- . тывают большим избытком этанола, при 25 этом выпадает сырой 2-хлор-9 (2-оксиэтоксиметил)-гипоксантинбарийфосфат.

Твердое вещество отфильтровывают и еуспендируют в этаноле. Этанольную суспензию нагревают на паровой бане в течение нескольких минут, охлаждают и фильтруют. Полученный осадок промывают безводным эфиром и сушат. Получают 26 мг 2-хлор-9(2-оксиэтоксиметил) гипоксантинбарийфосфата.

К перемешиваемой суспензии 7 мг

2-хлор-9 (2-оксиэтохсиметил) гипоксантинбарийфосфата в 0,5 мл воды добавляют 3,96 мг сульфата аммония. Смесь перемешивают при комнатной температу-40 ре в течение 15 мин, затем охлаждают на ледя ной ба не . Выпавший осадок сульфата бария отделяют фильтрованием и промывают 1 мл воды и 10 мл метанола. Соединенные фильтрат и промыв-45 ные воды выпаривают при пониженном давлении, Образовавшийся при этом остаток растворяют в 3 мл метанола. Метанольный раствор переносят s футерованную тефлоном бомбу ив нержавеющей стали. В бомбу также загружают 8 мл метанола, насыщенного газообразным аммиаком при температуре ледяной бани. Закрытую бомбу помещают на 4 ч в печь при 122 С, затем ее охлаждают и о открывают. Растворитель отгоняют до минимального объема. Оставшуюся реакционную смесь каплями наносят на целлюлозные листы для тонкослойной хроматографии И отмен Хроматограм, которые затем проявляют в смеси пропа- бО нолг вода {70г30 по объему). Полосы при Rg 0,16 и 0,34 вырезают, суспендируют в 0,6 мл буферного раствора

Трис при рН 8 и целлюлозу удаляют ,фильтрованием.

R (A) R (В) R<продукта реакции

1 0,51 0,04 0,,51 и 0,65

2 0,68 0 97 0,67 и 0,97

3 0,51 0,71 0,51 и 0,71

Целевой продукт начинает разлагаться при 210 С.

Элементарный анализ.

Найдено, Ъг С 31.,23; Н 3,85;

И 23,00г Р 10,09.

Вычислено, Ъг С 31,49; Н 3.,69г

N 22,95 P 10 15.

Пример 2 ° Получение 9-{2-оксиэтоксиметил) гуанинаммонийфосфата.

0,28 г 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфата растворяют в 30 мл воды и рН раствора доводят до 6 с помощью б н. водного раствора соляной кислоты. Продукт сорбируют 14 мл уплотнен- . ного угля (фишер 5-690В, 50-200 меш, промытый кислотой и дезактивированный толуолом) Уголь xoppBLo промывают водой и элюйруют 70 мл 50%-ного водного этанола,содержащего 2Ъ концентрированного раствора гидроокиси аммония.Растворитель отгоняют при пониженном давлении и получают 0,048 г 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинаммонийфосфата.Выход 15В.Ry- =0,30 на целлюлозе Истмена в смеси пропанол:вода (70г30 по объему). Продукт начинает разлагаться при

210 С °

Пример 3. Таблетки.

9-(2-Оксиэтоксиметил) гуаниннатрийфосфат, мг 100

Лактоза, мг 200

Крахмал, мг 50

Поливинилпирролидон, мг 5

Стеарат магния, мг 4

Общий вес 359

В этих полосах содержится 9- {2-оксиэтоксиметнл) гуанинфосфат и 2-хлор-9- (2-оксиэтоксиметнл) гипоксантинфосфат, как зто показано энзимньвг дефосфорилированием щелочной фосфатазой до 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанина и 2-хлор-9-(2-оксиэтоксиметнл) гипоксантина соответственно.

К фильтрату добавляют 2 мкл щелочной фосфатазы из Е, coll и смесь нагревают при 32 С в течение 2 ч, Затем ее исследуют тонкослойной хроматографией на целлюлозных листах Истман

Хроматограм в трех смесях растворителей г

1) пропанол г вода (70 г 30 по объему)

2) вода

3) пропанол: концентрированный раствор гидроокиси аммония гвода (60г

30г10 по объему) .

Для каждой смеси имеется по два пятна, соответствующие 9-(2-оксиэтоксиметил)-гуанинфосфату (A) и 2-хлор° 9-(2-оксиэтоксиметил) гипоксантину (В) .

Смесь растворителей

991 951

ВИИИПИ Заказ 172/78 Тираж 385 Подписное .Филиал ППП "Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4

Пример 4. Офтальмологический раствор.

9-(2-0кснэтоксиметил). гуаниннатрийфосфат, r i,0

Хлористый натрий (аналитический), г 0,9

Тимеросал, r 0,001 дистиллированная вода, мл. рН

П ример цийе

Натрийфосфат 9-(2-окси- этоксиметил) гуаниннатрнйфосфат, 0,775

Стерильный, не содержащий пирогенов, фосфатный буфер с рН 7, мл До 25

Пример 6. Получение 9-(2;оксиэтоксиметил) гуаниндинатрийфосФата. 26

54 ил хлорокиси фосфора добавляют в течение 3 ч к переиешиваемой, охлажденной до {-30) - (-.20pC, смеси 25 r

9-(2- оксиэтоксиметил) гуанина н 250 мл; триэтилфосфата. Температуре реакцион- 25

° ной смеси дают подняться до 0 С в тео чение 45 мин и смесь держат при этой теилературе еще 45 мин, затем рН.cuecs проводят до 1 с помощьв 2 н. водного раствора гидроокиси натрия. 39

Полученный раствор экстрагирувт один раз хлороформом и один раз эфиром. рН оставшегося водного раствора доводят до 6,8 с помощьв 2 н. водного раствора натрия, затем до 7,3 с по- 35 мощьв 10 н.водного раствора гндроокиси натрия и получавт окончательный объем смеси — 2,5 л. Нейтрализованный раствор вносят в колонку с 2000 r

Довекс lх8, уравновешенный 50 моль

КНСО . Элюирование ведут при линейном градиенте 30 л 50- 500 моль КНСО с последующей промывкой 30 л 500 моль

Фракции, содержащие продукт, объединяют, большую часть КНСО> удаляют 45 добавлением Довекс 50-Н+ и удалением

СО2 в вакууме. Объем уменьшают до

2 л в вакууме и продукт высаживают при 4 С добавлением 10 л ацетона. ВЫ сушенный осадок в количестве 55 г вно-f9 сят в колонку Био-Гель P-2 10х110 си и элвирувт водой. Получают 22 r твердого вещества. Вещество перекристаллизовывавт при 4оС в виде кислой соли из раствора с рН 3 Большую i часть вещества получают из маточного раствора путеи кристаллизации из

20%-ного этанола при рН . 3. Кислую соль растворяют в минимальном объеме воды с рН - 8 5 (за счет добавления гидроокиси натрия) н осаждают 2 объег мами этанола при 4 С. Этот осадок .расДо 100

5,5-7,5

5. Раствор для нньек- гЕ творявт в 100 ил воды, осаждают 9 объе; ами этанола при 4 С и получают 15, 1 дигидрата дннатриевой соли 9-(2-оксиэто.-. кснметнл)гуанинфосфата. Выход 35%.

Чистоту продукта подтверждают элементным анализом, жидкостной хроматографией под давлением и ультрафиолетовыг спектром.

Элементный анализ.

Найдено, Ф : С 25,20г Н 3,631.

И 18,10г P 7,89.

СэН г N

Вычислено,Вг С 24,949g Н 3,66г

Н 18,19г P 8,04 °

УФ-спектр.

Растворитель 3 макс Е Э «»» Sh

0,1 Н HCg 254 12970 225 272 рН 7 209 14060 219 266

0,1 Н НаОН 255-264 11760 228

По жидкостной хроматографии под давлением чистота 994. Отношение основание s фосфат — 1,00:1,01. Размягчение продукта наблюдается пр« 175 С о с постепенньвг разложением и потемие о нием при температуре выае 250 С.

Формула изобретения

Способ получения 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфатов общей формула 4

ОИ

Е OX

ar

g® И20ЮН2СЕ20Р

ОЮ

« где 3f и 7; — одинаковые ияи разные и.представлявт собой водород или катион натрия, калия, лития или аммония, з а к л ю ч а в шийся в том, что соединение общей формулы Йг

ОИ

M (- 2 - 3СИ2()

ON где G - галонд, подвергают взаимодействию с амваюаком в спиртовой среде с последующим выделением целевого продукта в виде кнс лоты и ее соли.

Нсточники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Великобритании

9 1523865, кл. С 2 С, опублик. 1978.

2: Nichetson А.M. Todd A.R.

14ononucleotides derived from Adenosine, Yuanosine, СуСЫ1пе and Uridlne.

O . Chem, Бос., 1949, 2476-2486.

3. Патент.Бельгии В 756704, кл. С 07 d. опублик. 1971.

4. Вейганд-Хильгетаг Методы эксперимента в органической химии. М., . Химия ; 1968, с. 414.