Способ диагностики заболеваний сердца

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1058555

ЗШ А 61 В 10/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3250680/28-13 (22) 31.12.80 (46) 07. 12.83. Бюл. М 45 (72) В.М. Земсков, Г.Г. Иванов (НРБ), А.М. Борисова, В.A. Захаркин, М.N. Канлоена, М.Я. Руда и А.П. Зыско (71) Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР (53) 616.07(088.8) (56) 1. Макоева Л.Д. Аллергические реакции замеДленного и немедленного типа при различной степени активности ревматизма. Канд. дис. М., 1971.

2. Борисова A.Ì., Рачков С.М.

"Советская медицина", 1972, 9 9, c. .38-44.

3. Нестеров А.Л., БОрисова A.М.

Реакция торможения миграции лейкоцитов у больных ревматизмом. "ВОпросы ревматизма", 1973, Р 3, с. 1317. (54 ) (57 ) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОJIEBAHHA СЕРДЦА, заключающийся в проведении реакции торможения миграции лейкоцитов периферической крови при взаимодействии сенсибилизированных лимфоцитов с антигенами миокарда, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности способа, в качестве специфического антигена . используют препараты нативного сердечного миозина.

1058555

10

Изобретение относится к медицине, точнее к кардиологии и ревматологии, и может быть использовано для диагностики воспалительного процесса в сердечной мышце при инфаркте миокарда, при ревматизме, миокардитах неренматической этиологии, для изучения патогенеза заболевания и уточнения характера поражения сердечной мышцы,. а также для определения эффективности терапии.

Известен способ диагностики воспалительного процесса в сердечной мышце путем выявления противокардиальных антител реакцией пассивной геммоглютинации, с использованием нодносолевых экстрактов ткани сердца в качестве антигена Реакцию оценивают по выраженности . агглютинации эритроцитов f1) .

Однако эта реакция не является сгецифической ни для ревматизма, ни для миокардитов, ни для инфаркта миокарда, так как обнаруженные ею антитела имеются у всех обследуемых, в том.числе и у здоровых лиц.

Известен способ диагностики вос- палительного процесса в сердечной мышце с помощью клеточной реакции— бласттрансформации лимфоцитов, индуцируемая сердечными антигенами (2J

Известный способ основан на

1- том, что под влиянием специфических антигенов лимфациты обследуемых, сенсибилизированных к ним, трансформируются н бластные при инкубировании с этими антигенами.

Недостатками данного способа являются его трудоемкость, субъектив ность.при оценке результатов, вариабельность условий культивирования (температура, рН среды, концентрация антигена и лимфотитон, время культивирования и т.д.). Все это не позволяет широко использовать его для диагностики заболевания сердца.

Известен способ диагностики заболеваний сердца, заключающийся в проведении реакции торможения миграции лейкоцитов периферической крови при взаимодействии сенсибили-. зированных лимфоцитов с антигенами миокарда (3) .

Согласно способу, полученную н количестве 10-15 мл гепаринизиронанную кровь (25 ед, гепарина на 1 мл крови выдерживают под углом 45 при

37 C в течение 45 мин. Затем полуо чают плазму, для чего осторожно

TIB.ñòåðoâñêoé пипеткой отсасывают надосадочный слой вместе с ободком лейкоцитов, скопившихся на границе осадка и надосадочной части содержимого приборки. Плазму центри2 фугируют 5 мин при 1000 об/мин. Клеточный осадок содержит смесь эритроцитов, которые лизируют Осмотическим лизисом в 5 мл 0,35%-ного раствора NaCI затем для получения изотонического раствора NaCI добавляют 0,6 мл 5% раствора NaCI. Полу.ченный клеточный осадок трижды промывают в растворе Хенкса или в среде 199, при этом каждый раз центрифугируя по 5 мин при 1000 об/мин..

После троекратного промывания в растворе Хенкса клеточный осадок ресуспендируют в 0,1 мл среды 199 и защлняют им стеклянные капилляры с внутренним диаметром 0,7? мм и длиной 12 см. Капилляры эапаинают с одного конца и центрифугируют в течение 5 мин при 1000 об/мин. Затем часть капилляра, содержащую клетки, режут на отрезки длиной 4-5 мм и помещают в камеры, заполненные питательной средой Р 199, туда же добавляют сердечный антиген, представляющий собой водносолевой экстракт из сердечной ткани. Камеры герметически закрывают и оставляют на

20-24 ч при 37 С.

Полученные водносолевой экстракцией антигены содержат малое количество истинных антигенов миокарда, поскольку представляют собой смесь грубых белков и материал неантигенной природы. Выявить с помощью водносоленых экстрактов воспалительный процесс в сердечной мышце затрудни35 тельно, даже при активном ревматическом процессе и совершенно.невозможно при окрытом или вялотекущем воспалительном процессе.

Недостатком известного способа

40 является также неспецифичность иммунологиче"ких . реакций, развивающихся не только при воспалительных процессах, но и при дистрофиях миокарда, кардиопатиях, ишемической болезни сердца, кардиосклерозе. Применение в рекции торможения миграции . лейкоцитов водносолевых экстрактов не позволяет отдифференцировать воспалительный процесс в сердце от дистрофических изменений сердечной мышцы, следовательно, является неприемлемым с целью дифференциальной диагностики. Использование способа позволяет выянить воспалительиый

55 процесс в сердечной мышце только в 60% случаев, что не удовлетворяет требованиям клиники. Кроме того, при использовании водносоленых экстрактов н реакции торможения миграции лейкоцитов требуются большие

60 концентрации белка. Увеличение ди-. агностической чунствительности известного способа путем увеличения концентрации антигенов ненозможно из-за высоких белковых примесей, 65 следствием чего увеличивается еще

1058555 более неспецифичность иммунологических реакций, поэтому получаемые результаты иногда мало отличаются от контрольных.

Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики заболеваний сердца, эаключающемусй в проведении реакции тормо жения миграции лейкоцитов перифе. рической крови.при взаимодействии сенсибилизированных лимфоцитов с антигенами миокарда, в качестве специфического антигена используют препараты нативного сердечного миозина.

Способ осуществляют следующим образом.

У больных производят забор иэ . локтевой вены 10-15 мл крови. Добавляют 10-25 ед. гепарина на

1 мл крови и выдерживают в термостате при 37 С в течение 1 ч. Слой плазмы, обогащенный лейкоцитами,центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин. Эритроциты, содержащиеся .в плазме, .лизируют добав-, лением 0,35%-ного .раствора NaCI с последующим пипетированием в те- . чение 40-б0 с. Клеточный осадок троекратно промывают, вносят в стеклянные капилляры и центрифугируют при 1000 об/мин в течение .5 мин. Капилляры с лейкоцитами инкубируют в течение суток при 37ОC в йрисутствии препаратов сердечного миозина.

О наличии заболеваний сердца судят по индексу миграции лейкоцитов (ИМЛ), находящемся в интервале 30-70%.

Пример 1. Больной Г, 30 лет. Диагноз: ревматизм, II степень активности, возвратный, уме-, ренно выраженный ревмокардит, сочетанный порок сердца, недостаточ ность кровообращения 1 ст. непрерывно-рецидивирующее течение.

У больного берут иэ локтевой вены 10 мл крови и добавляют гепарин

15 ед. на 1 мл .крови. Пробу термостатируют при 37 С в наклонном положении под углом 45О в течение 1 ч, Слой плазмы, обогащенный лейкоцитами, отсасывают в центрифужные пробирки и центрифугируют при

1000 об/мин, в течение 5 мин. Супернтатант вливают, эритроциты, находящиеся в клеточном осадке, лиэируют добавлением 5 мл 0,35%-ного раствора NaCT B течение 45 с, а затем прибавляют 0,6 мл 5%-ного раствора NaCT.для получения изотонического раствора. Клеточный осадок троекратно промывают в 5 мл

10 лейкоцитов в камерах, заполненных

20 .средой 199 не содержащей антигена.

Для диагностики заболеваний сердца ставят параллельно по 4 камеры с антигеном и без антигена. Затем камеры закрывают покровными стеклами, предварительно. нанося по краю камеры слой стерильного вазелина., и инкубируют при 37ОС в течение суток. После инкубации зону миграции проецируют на негативную пленку с помощью микрофото ПО-5. Эоны миграции вырезают, взвешивают и ИМЛ вычисляют по формуле.

Средняя масса зоны миграции в прис татвии антигена средйяя масса зоны миграции в отсутствии антигена

50

65 среды 199. Суспенэию лейкоцитов вносят в стеклянные капилляры с внут= ренним диаметром 0,7 мм и длиной 12 см. Один конец капилляров запаивают .и капилляры центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5-мин.

Часть капилляра, содержащую клетки, разрезают на отрезки длиной

4 мм и фиксируют йри помощи стериль. ного вазелина на дне камер, представляющих собой стеклянные кольца размером: 20х10х2 мм, прикрепленные к предметным стеклам при помощи стерильной смеси. носка с парафинов в соотношении 1 .4. Камеры заполняют средой 199, содержащей 10 мкг/мл сердечного миоэина. Для определения контрольных показателей проводят реакцию торможения миграции

При поступлении больной в стационар ИМЛ с сердечным миозином составлял 49,1%. После комплексной гормонально-медикаментоэной терапии самочувствие больной улучшилось.

Исчезли явления кардита, нормализовались все лабораторные показатели. В этом случае ИМЛ был равен

95% и соответствовал показателю у, практически, здоровых людей.

- II р и м е р 2. Больной К, 35 лет. Диагноз: крупноочаговый инфаркт верхушки и передней стенки. левого желудочка.

Для проведения диагностики проводят реакцию торможения миграции лейкоцитов (PTMJI), как в примере 1.

При поступлении в стационар ИМЛ с сердечным миозином у данного больного составлял 54,2%. После проведенной кардиальной терапии состоя- ние больного улучшилосЬ. По ЭКГ от 4 мечалась положительная, динамика— признаки рубцевания миокарда, глубокий зубец Я, снижение сегмента

ST до изоэлектрической линии и, формирование коронарного зубца Т.

В этом случае ИМЛ был равен 110%

1058555

Количество больных

Индекс миграции лейкоцитов (ИМЛ), so

Выраженность ревмокардита

Разброс

ИМЛ

+ m

70,4ф3,3

46,6+3,7

33,6+2,6

40-33

23-66

31-39

0,001

Слабая умеренная

0,02

О, 001

Яркая

Составитель Н. Валеева

Редактор Г. Гербер Техред N.Íàäü Корректор И.Эрдейи

Заказ 9771/2 Тираж 713 Поцписное

BHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб. д. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. проектная, 4 и соответствовал показателю у, практически, здоровых людей, Пример 3. Проводили определение чувствительности предлагаемого способа у больных ревматизмом с различными степенями выраженности ревматического кардита.

Реакцию торможения миграции лейкоцитов проводят, как в примере 1.

Известно, что степень общей активности ревматизма не всегда соответ- 10 ствует степени выраженности ревматического кардита. Для выявления степени поражения самого миокарда йри ревматизме, т.е. для уточнения степени выраженности ревмокар- 15 дита были проведены исследования с применением очищенного миозина сердца у больных с различной выраженностью ревмокардита, результаты исследования приведены в таблице.

Результаты РТМЛ с сердечным миозином человека у больных ревматизмом в зависимости от степени выра женности кардита.

Как видно из таблицы, у больных со слабо выраженным ревмокардитом ИМЛ составлял 70,4+3,3Ú, с умеренным ревмокардитом — 46,7+3,7Ъ и ярко выраженным ревмокардитом33,6*2,6%.

Таким образом, при применении миозина сердца выявляется четкая зависимость показателей РТМЛ от выраженности ревмокардита, чем выражен нее кардит, тем больше торможение миграции лейкоцитов. Различия между средними величинами ИМЛ, полученными при постановке РТМЛ с сердечным миозином у больных с умеренно и слабо выраженным ревмокардитом, так же как у больных с ярко и слабо выраженным ревмокардитом были достоверными (р < 0,02 и р а 0,001).

Следовательно, РТМЛ с сердечным миозином человека (предлагаемый способ) у больных ревматизмом с различными степенями выраженности кардита четко коррелирует с выра= женностью ревмокардита, т.е. отражает степень поражения сердца у больных ревматизмом.

Технико-экономическая эффективность способа диагностики заболеваний сердца выражается в том, что его использование позволяет иск 1 лючить ошибки в диагностике заболеваний сердца, а также следить за течением заболевания и регулировать лечение. Использование способа в

2-2,5 раза повышает .эффективность диагностики заболеваний сердца.