Способ определения спектра жирных кислот в биологической жидкости

 

Изобретение относится к медицине, предназначено для определения состава жирных кислот в плазме крови больных ишемической болезнью сердца . Цель изобретения - повьшение чувствительности способа путем расширения спектра определения кислот. Для этого порцию плазмы крови экстрагируют с хлороформно-метанольной смесью (2:1) 3 мин. Нерастворимую фракцию белков отфильтровьтают через бумажный фильтр. Фильтр промьгвают 5-10 мл хлороформно-этанольной смеси (2:1). К объединенному фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично встряхивают и центрифугируют. Верхний водный слой отделяют и отбрасывают . Хлороформный слой высушивают, добавляют раствор едкого калия, инкубируют при 90-100°С, охлаждают до и подкисляют серной кислотой до рН 1. Свободные жирные кислоты экстрагируют тремя порциями до диэтилового эфира. Эфирные извлечения объединяют и эфир испаряют. К полученной смеси свободных жирных кислот добавляют 10%-ный бутанольный раствор гидроокиси тетрабутиламмония или 10%-ный раствор этанольного раствора гидроокиси тетраэтиламмон1-и, перемешивают и вводят в испаритель хроматогра фа с 330 с. Анализ кислот проводят на газовом хроматографе Биохром-1 с плазменно-ионизационным детектором на стеклянной капиллярной колонке с неподвижной фазой OV-101. Газ-носитель - азот, давление на входе 0,15 МПа, расход водорода 25 мл/мин, воздуха 300 мл/мин, t в детекторе и 330-350°С - в испарителе. Выход бутиловых эфиров 98%. И (Л с со N5 О СП О5

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (11) 51) 4 С 01 N 33/9 ф(»(3." ;э7 ъ q! I

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

И. эЛБ(, "j„. -;P

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3922948/28-14 (22) 03. 07. 85 (46) 30.06.87. Бюл. М- 24 (71) 1-й Московский медицинский институт им. И.M. Сеченова (72) А.Е. Зорин и Б.А. Руденко (53) 616.07(088.8) (56) Карлин И.П., Якушина Л.М., Кузьмин Н.М. Газохроматографический анализ жиров и масел растительного и животного происхождения. — Журнал аналитической химии, 1980, 35, K - 6, с. 1195-1200. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕКТРА ЖИРHbIX КИСЛОТ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ (57) Изобретение относится к медицине, предназначено для определения состава жирных кислот в плазме крови больных ишемической болезнью сердца. Цель изобретения — повышение чувствительности способа путем расширения спектра определения кислот.

Для этого порцию плазмы крови экстрагируют с хлороформно-метанольной смесью (2:1) 3 мин. Нерастворимую фракцию белков отфильтровывают через бумажный фильтр. Фильтр промывают

5- 10 мл хлороформно-этанольной смеси (2: 1) . К объединенному фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично встряхивают и центрифугируют. Верхний водный слой отделяют и отбрасывают. Хлороформный слой высушивают, добавляют раствор едкого калия, инкубируют при 90-100 С, охлаждают до 20 С и подкисляют серной кислотой до рН 1. Свободные жирные кислоты экстрагируют тремя порциями до диэтилового эфира. Эфирные извлечения объединяют и эфир испаряют. К полученной смеси свободных жирных кислот добавляют 10Х-ный бутанольный .раствор гидроокиси тетрабутиламмония или 10Х-ный раствор этанольного раствора гидроокиси тетраэтиламмония

» перемешивают и вводят в испаритель хроматографа с 330 С. Анализ кислот проводят на газовом хроматографе

"Биохром-1" с плазменно-ионизационным детектором на стеклянной капиллярной колонке с неподвижной фазой

0V-101. Газ-носитель — азот, давление на входе 0,15 МПа, расход водорода 25 мл/мин, воздуха 300 мл/мин, 300 С в детекторе и 330-350 С— в испарителе. Выход бутиловых эфиров 98Х.

Составитель Л.Конюхова

Техред М.Ходанич

Корректор В.Бутяга

Редактор Е.Копча

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 2655/49.Производственно-полиграфическое предприятие,. r, Ужгород, ул. Проектная, 4

1 t32075

Изобретение относится к медицине, в частности к определению состава жирньй кислот в плазме крови больных . ишемической болезнью сердца.

Цель изобретения — повышение чув- 5 ствительности способа за счет расширения спектра определения кислот.

П р и м е. р. 1 мл плазмы крови экстрагируют 20 мл хлороформно-метанольной смеси (2:1) 3 мин. Нерастворимую фракцию белков отфильтровывают через бумажный фильтр. Фильтр промывают 5 мл хлороформно-метанольной смеси (2:i). К объединенному фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично встряхивают 1 мин и центрифугируют.

Верхний водный слой отделяют и отбрасывают. Хлороформный слой упаривают до сухого остатка, добавляют 5мл раствора едкого калия (0,5 моль/л), нагревают в течение 5 мин на водяной бане при 90-100 С, затем охлаждают до 20 С и подкисляют серной кислотой (2,5 моль/л) до рН 1. Свободные жирные кислоты экстрагируют тремя пор25 циями диэтилового эфира по 1 мл в течение 1 мин. Эфирные извлечения объединяют в микропробирке, оттянутой на корпус, и эфир испаряют в токе воздуха или азота. К полученной смеси свободных жирных кислот добавляют 30 мкл 10 -ного бутанольного раствора гидроокиси тетрабутиламмония или 30 мкл 10 -ного этанольного раствора гидроокиси тетраэтиламмо- 35 ния, перемешивают и при помощи газохроматографического шприца вводят в количестве 5-10 мкл в испаритель хроматографа, нагретый до 330 С.

6 2

По известному способу на хроматограмме, регистрируются кислоты, начиная с лауриновой. Анализ проводят на газовом хроматографе "Биохром-1" с плазменно-ионизационным детектором . на стеклянной капиллярной колонке длиной 50 м и внутренним диаметром

0,2 мм с неподвижной фазой OV-101.

Газ-носитель — азот, давление на входе О, 15 МПа, расход водорода 25 мл/мин, расход воздуха 300 мл/мин, деление потока на входе 1:20, температура детектора поддерживалась на уровне

300 С, испарителя 330-350 С.

Температура колонки программировалась от 110 до 295 С со скоростью

4 град/мин, диапазон чувствительности усилителя 1,2-10 "А.

Выход этиловых эфиров составляет 98 . На хроматограмме в виде бутиловых эфиров регистрируются кислоты, начиная с гептановой. в виде этиловых эфиров — начиная с каприновой.

Формула изобретения

Способ определения спектра жирных кислот в биологической жидкости путем экстракции пробы, упаривания, этерификации промежуточных продуктов с последующим газохроматографическим анализом, отличающийся тем, что,,с целью повышения чувствительности способа за счет расширения спектра определения кислот, в качестве этерифицирующего агента используют тетраалкиламмониевые основания, а этерификацию проводят в испарителе хроматографа при температуре 330350 С.