Способ оценки антигипоксической активности химических соединений

 

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине, нейрохимии, авиационной и космической биологии и может быть использовано для оценки эффективности антигипоксического мероприятия в эксперименте. Целью изобретения является ускорение способа оценки эффективности антигипоксического мероприятия. Для этого экспериментальным животным создают гипоксические условия, берут мозг и определяют активности фермента углеводного обмена. Готовят гомогенат мозга,в котором определяют активность гексокиназы (ГК5, затем антигипоксическое мероприятие оценивают как эффективное при значении активности ГК на уровне нормы, антигипоксическое мероприятие оценивают как неэффективное при снижении активности ГК относительно нормы. Способ эффективен, достаточно прост по исполнению.3 табл, СЛ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„.SU„„455320 а1 g 4 G 01 N 33/68, С 12 Q 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 динения антигипоксической активности.

При снижении активности гексокиназы химическое соединение не является эффективным антигипоксантом.

Пример 1. При оценке антигипоксического действия гутимина и соединения Р 3 (спиро-2-тиоксо-5,6-тетраметилен-1,2,3,4-тетрагидропиримидин4, 1-циклогексана) были исследованы 3 крысы: 1 — контрольная, 2 — опытные) .

Первому опытному животному вводили внутрибрюшинно (в/бр) 1 мл стерильного раствора, содержащего 1 дозу; гутимина, равную 50 мг/кг. Второму опытному животному вводили в/бр 1 мп стерильного 1 раствора, содержащего 1 дозу соединения Ф З,равную 50 мг/кг.

Контрольному животному вводили 1 мл

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине, фармакологии, нейрохимии и может быть использовано для оценки эффективности антигипоксической активности химичес- 5 ких соединений, Цель изобретения — ускорение способа.

Способ осуществляется следующим образом. 10

Экспериментальным животным вводят исследуемое соединение, создают гиноксические условия, затем животных забивают, выделяют мозг и в гомогенате мозга определяют активность гексокина-15 зы. При отсутствии снижения активности гексокиназы относительно нормы определяют наличие у химического саеГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4070041/28-14 (22) 12. 05.86 (46) 30.01,89. Бюл. У 4 (71) Горьковский государственный медицинский институт им. С.М.Кирова ,(72) Е.M.Õâàòoâà и Ю,В.Зимин (53) 612.015(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 1168858, кл. G 01 N 33/48, 1985. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ АНТИГИПОКСИЧЕСКОЙ

АКТИВНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ (57) Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине, нейрохимии, авиационной и космической биологии и может быть использовано для оценки эффективности антигипоксического мероприятия в эксперименте.

Целью изобретения является ускорение способа оценки эффективности антигипоксического мероприятия. Для этого экспериментальным животным создают гипоксические условия, берут мозг и определяют активности фермента углеводного обмена. Готовят гомогенат мозга,в котором определяют активность гексокиназы (ГК), затем антигипоксическое мероприятие оценивают как эффективное при значении активности ГК на уровне нормы, антигипоксическое мероприятие оценивают как неэффективное при снижении активности ГК относительно нормы, Способ эффективен, а

® достаточно прост по исполнению.3 табл.

1455320 на 1 r ткани, 45 где терильного раствора (физиологичесогo) . Животных выдерживали в нормо сических условиях при комнатной температуре в течение 60 мин (экспоэи5 ция, необходимая для всасывания препарата и создания эффективной концентрации). Затем животных поместили в барокамеру проточного типа. РазрежеНие создавалось двумя вакуумными на- 1р осами PBH-20, производительность коорых достаточна для того, чтобы полостью исключить накопление двуокиси глерода в газовом пространстве баро амеры и стабильно поддерживать в те- 15

Йение длительного времени заданный овень разрежения ° Условия высоты одъема контролировали двумя прибораlm альтиметром и вакуумметром. Животных поднимали со скоростью 0,5 м/с 20 до высоты 12000 м, что соответствова1то разрежению 143,5 мм рт.ст. Данное аэрежение вызывает тяжелую гипоксию. ремя пребывания животных на "высоте" составило 30 мин. Сразу же после спус-25

Ка животных декапитировали. Для дальйейшего исследования брали головной озг и гомогенизировали его в среде

0,25 М сахарозы, трис-НС1, рН 7,4) на, Э . 1 r ткани +9 мп среды вьщеления.Полу- 30

t ченный гомогенат разводили средой выпеления в 10 раз и брали 0,05 мм для определения активности гексокиназы. ! Определение активности фермента проводилось в системе следующего сос- 35 тава: 60 мМ трис-НС1 рН 8,0, 2 мМ глюкозы, 2 мМ АТФ, 5 мМ МцС1 ; 1,5 мМ йАДФ, 0,4 ME/мп глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. Активность фермента рассчитывали по формуле: 40

1 йЕ V 1000мг

Активность= — — — вЂ,мкмоль НАДФН/мин

6,22 хТ

g Š— разница экстинкцнй;

V — конечный объем пробы;

6,22 — изменение оптической плотности при 340 нм в 1 см кюветы при окислении и вос- 5р становлении 1 мкмоль НАДФ, находящегося в 1 мп исследуемой системы, х — весовое количество ткани (мг), которому соответству- 55 ет объем тканевого гомогената, находящегося в кювете

Т вЂ” время (1 мин) .

Полученные результаты представлены в табл. 1, Таким образом, гутимин, введенный перед гипоксией, является эффективным антигипоксическим химическим соединением, а введение соединения М 3 неэффективно.

Пример 2. При оценке эффективности антигипоксического действия

ГОМК при ишемии мозга .быпи исследованы 2 крысы: контрольная и опытная.

Опытной крысе в/бр вводили 1 мл стериального раствора, содержащего 1 дозу ГОМК, равную 100 мг/кг, и проводили перевязку 2 общих сонных артерий. Контрольному животному в/бр вводили 1 мп стерильного физиологического раствора и проводили перевязку 2 общих сонных артерий под эфирным наркозом. Животных выдерживали в нормоксических условиях при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем животных декапитировали. Для дальнейшего исследования брали головной мозг гомогенизировали его в среде вьщеления и определяли активность гексокинаэы в гомогенате.

Полученные результаты представлены в табл.2.

Таким образом, предварительное введение ГОМК перед ишемией является эффективным антигипоксическим мероприятием.

В табл.3 представлены статистически обработанные данные по активности гексокинаэы мозга и выживаемости крыс при гипоксии, Предлагаемый способ прост в исполнении и может быть использован для массового исследования в научных лабораториях. Способ позволяет сократить время оценки антигипоксической активности до 15 мин (в известном способе 8 ч).

Формула изобретения

Способ оценки антигипоксической активности химических соединений путем введения экспериментальным животным исследуемого химического вещества, создания гипоксических условий и последующего биохимического анализа ткани мозга животных,. о т л и ч а юшийся тем, что, с целью ускорения способа, в гомогенатах мозга определяют активность гексокиназы и по предотвращению вызванного гипоксией

5 14553? О 6 снижения активности фермента относи- кую активность химическогО соединетельно нормы оценивают антигипоксичес- ни„.

Таблица!

Активность,мкмоль

НАДФН/мин на 1 г ткани

Условия эксперимента мы

100

Норма

Гипоксия

91,4

Гутимин + гппоксия

Соединение Р 3 +

+ гипоксия

24,6

3,01

Таблица 2

Условия эксперимента Активность,мкмоль Остаточная активНАДФН/мин на 1 г ность фермента, ткани относительно нормы

100

12, 038

Норма

Ишемия

1,56

75,1

9,30

ГОМК + ишемия

Таблица 3

ыживаемость, Условия эксперимента

Активность

100

100

Норма

13

Ишемия

Гипоксия

ГОМК +

+ ишемия

75,1

9,32+0, 152

p (0,05

Гутимин +

+ гипоксия

11,940 0,099 р (0,05

91,4

Соединение

М- 3 + ги3, 0774-0, 340 р <005

24, 79 поксия

II р и м е ч а н и е : р — достоверность контроля. гексокиназы, мкмол ь

НАДФН /ми н на 1 г ткани

12,4 12+ О, 254 р (0,05

1,67+0 0147 р (0,05

2,268+0,012 р (0,05

12,038

2,231

11, 146

Остаточная активность фермента, относитель но нормы

Остаточная активность фермента, относительно нор